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中国实验动物学报 2004年第2期12卷 76-80页

作者：曲玉秀汤家铭连安刘铁铮成国祥上海转基因研究中心上海201203 江苏省农业科学院南京210014

目的　建立清洁级neor 转基因小鼠纯合子品系。方法　通过胚胎移植生物净化方法获得 1 0只清洁级neorF1 小鼠 ,按孟德尔遗传法则交配 ,用PCr、Southernblot杂交和交配实验检测相结合的方法筛选纯合子。结果　选育出 4只纯合子 ,并建系... 详细信息

目的　建立清洁级neor 转基因小鼠纯合子品系。方法　通过胚胎移植生物净化方法获得 1 0只清洁级neorF1 小鼠 ,按孟德尔遗传法则交配 ,用PCr、Southernblot杂交和交配实验检测相结合的方法筛选纯合子。结果　选育出 4只纯合子 ,并建系。该纯合转基因小鼠与野生型小鼠交配制备的胎儿成纤维细胞具有G4 1 8抗性 ,可作为ES细胞基因打靶培养中的饲养层细胞。结论　通过微生物学和遗传学上对neor 转基因小鼠进行质量控制 ,使neor 转基因小鼠达到了清洁级 ,并建立纯合子品系。

关键词：纯合子 neo^r 转基因小鼠品系生物净化聚合酶链反应

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Toward genetic transformation of mitochondria in mammalian cells using a recoded drug-resistant selection marker

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Journal of Genetics and Genomics 2011年第4期38卷 173-179页

作者： Young Geol Yoon Michael Duane Koob Mitochondria Hub regulation Center and Department of Anatomy and Cell Biology Dong-A University College of Medicine 3-1 Dongdaesin-dongSeo-gu Busan 602-714 Republic of Korea Department of Laboratory Medicine and Pathology and Institute of Human Genetics University of Minnesota Medical School 420 Delaware St. S.E.Minneapolis MN 55455 USA

Due to technical difficulties,the genetic transformation of mitochondria in mammalian cells is still a *** this report,we described our attempts to transform mammalian mitochondria with an engineered mitochondrial genome based on selection using a drug resistance *** the standard drug-resistant neomycin phosphotransferase confers resistance to high concentrations of G418 when targeted to the mitochondria,we generated a recoded neomycin resistance gene that uses the mammalian mitochondrial genetic code to direct the synthesis of this protein in the mitochondria,but not in the nucleus（mitochondrial version）.We also generated a universal version of the recoded neomycin resistance gene that allows synthesis of the drug-resistant proteins both in the mitochondria and *** we transfected these recoded neomycin resistance genes that were incorporated into the mouse mitochondrial genome clones into mouse tissue culture cells by electroporation,no DNA constructs were delivered into the *** found that the universal version of the recoded neomycin resistance gene was expressed in the nucleus and thus conferred drug resistance to G418 selection,while the synthetic mitochondrial version of the gene produced no background drug-resistant cells from nuclear *** recoded synthetic drug-resistant genes could be a useful tool for selecting mitochondrial genetic transformants as a precise technology for mitochondrial transformation is developed.

关键词： Mitochondrial codon recode Mitochondrial transformation Selection marker G418 neo^r

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核酸疫苗双表达载体的构建及表达

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微生物学杂志 2006年第5期26卷 37-39页

作者：赵大鹏吴晓娟戚凤春冷梅张岩汪春义张雪梅陈云波何伟任清付学奇长春生物制品研究所吉林长春130062 长春工业大学生物工程学院吉林长春130012 吉林大学生命科学学院吉林长春130021

将微小病毒内部核糖体进入位点(IrES)基因克隆到质粒pVAXI载体多克隆位点,构建出核酸疫苗双表达载体pVI。将绿色荧光蛋白(EGFP)基因和新霉素磷酸转移酶(neor)基因作为报告基因,连接到pVI载体IrES基因的前后两处多克隆位点,构建出表达载... 详细信息

将微小病毒内部核糖体进入位点(IrES)基因克隆到质粒pVAXI载体多克隆位点,构建出核酸疫苗双表达载体pVI。将绿色荧光蛋白(EGFP)基因和新霉素磷酸转移酶(neor)基因作为报告基因,连接到pVI载体IrES基因的前后两处多克隆位点,构建出表达载体pEIN。通过脂质体介导的方法将该载体转染COS-7细胞,筛选到同时表达绿色荧光蛋白和新霉素磷酸转移酶的表达株,表明成功地构建了核酸疫苗双表达载体,为构建多价核酸疫苗及带有分子佐剂的核酸疫苗打下了基础。

关键词： IrES EGFP neo^r 转染

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