检索结果-南通市图书馆

作者：张健中国人民解放军第四军医大学

学位级别：硕士

人ndrg2基因(N-myc downstream-regulated gene 2)是本课题组于2000年从正常成人全脑cDNA文库中发现和获得的新序列。其全长为2,024bp，经BLAST相似性分析证明所得序列为一新基因(GenBank检索号：AF159092)。ndrg2基因含有16个外显子和1... 详细信息

人ndrg2基因(N-myc downstream-regulated gene 2)是本课题组于2000年从正常成人全脑cDNA文库中发现和获得的新序列。其全长为2,024bp，经BLAST相似性分析证明所得序列为一新基因(GenBank检索号：AF159092)。ndrg2基因含有16个外显子和15个内含子，定位于染色体14q11.2，编码一个含有357个氨基酸残基、分子量约为40kDa的蛋白质。初步研究显示，该基因可表达于多种组织中，并且是正常脑组织和胶质瘤的差异表达基第四军医大学硕士学位论文因。目前己报道该家族共有四个成员：ndrgl、ndrgZ、ndrg3禾 ndrg4，其中nd侣4又分为三个亚型：叫＊个B、n巾叶庄“『和叩r＊＊H。珐家族各成员厂的氨基酸残基序列同源性很高，但在各组织间的表达水平有明显差异。己知有多种因素可以影响 ndrg的表达水平，在施加同型半脐氨酸、致 DNA损伤性物质、地衣霉素hunicamycin＼应激刺激（缺氧、Niy等＼抑癌基因p53等因素的条件下，ndrgl 的表达上调;而雄激素、N－myc、C－myc 等因素可下调 ndrg 的表达。己有文献报道，在细胞的增箔分化、细胞氧化还原电势平衡的维持、阻抑肿瘤细胞扩散等过程中，ndrg和 ndrgZ发挥着重要作用［’””］。由于目前对于 ndrg家族的结构和功能性认识尚不全面，因此，克隆和表达n山g家族各成员并制备相应的特异性抗体则成为迫切而重要的基础性工作，有利于从总体上研究该家族各成员的生理功能。根据上述事实，本实验按如下方案展厂： ***家族成员的cDNA克隆。提取人胎脑组织的总RNA，经反转录制备cDNA。依据GenBanLk登录的ndrg家族各成员序列分别合成了针对 ndfgl、ndrg3和 ndfg4B的引物，然后进行 PCR反应以扩增 DNA，回收和纯化PCR产物并将其插入到pMD 181载体中进行克隆后测序分析，用 BLAST 程序验证测序结果。 ***家族成员的原核表达。将测序下确的片段插入到pRSETA。 pGEX＊T、pPpoEX卫Tb等表达载体中，分别用 IPTG诱导表达，发现 pPROEX－HTbndygl所编码的ndrgI蛋白有高效可溶性表达。 *** 蛋白的二级结构分析。融合表达的*** 蛋白经 NiNTA偶联的琼脂糖珠纯化后，进行圆h色性分析。发现在该分于中，几种蛋白质二级结构所占比列如下：。螺旋：23石9入p片层：18石％，转角： 25．7％，无规则卷曲：32刀％，这与计算机程序预测的结果相近。 4．抗人 ndrg家族的多克隆抗体制备。用可溶性的 6HIS－ndrg蛋白 4 第四军医大学硕士学位论文免疫家兔获得了高效价的兔抗人 ndrg多克隆抗血清，利用固定于硝酸纤维素膜上的ndrgI抗原进行亲和吸附，以纯化抗血清，提高了ndrgI多克隆抗体的特异性，并用此纯化的抗体进行了免疫组化和 Western捡测。出于＊＊＊G家族各成员间氨基酸组成有很高的同源性，此抗体在识别＊D＊GI。 ndrgZ、ndrg3和 ndrg4时存在交叉，表明己获得抗人ndrg家族的多芜隆抗体。 5．抗人ndrg家族寡肽的多克隆抗体制备。山于抗人ndrg家族的多是隆抗体不能很好地区分ndrg1、ndrgZ、ndrg3和ndrg4，按各亚型分于氦基酸残基序列中特异的肽段合成的寡肽作为半抗原，与KLH偶联后兔疫家兔，以制备特异性的抗寡肽抗体。B前免疫家兔的抗体滴度约为1：3 200，继续加强免疫，可望获得具有高度特异性的抗体，以特异地识别ndrgI。 ndrgZ、ndrg3和 ndrg4各亚型分子。

关键词： ndrg家族 N-myc 同源性反转录 PCR 克隆序列测定验证原核表达可溶性 Ni-NTA 亲和纯化圆二色性分析 α/β水解酶多克隆抗体制备抗血清特异性效价鉴定寡肽合成 KLH 载体蛋白转染

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癌相关基因ndrg家族的研究进展

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中国优生与遗传杂志 2014年第7期22卷 1-4页

作者：张顺今刘巍李委佳潘文婧谭文华哈尔滨医科大学附属第二医院妇产科 150086

研究证实,ndrg家族在肿瘤的生物进程和发病起源方面起到重要作用,在很多肿瘤细胞系和肿瘤类型中,这些基因表达下降或缺失,说明它可能起到抑癌基因的作用,从这个角度出发,对其现有的研究进行归纳,包括分子构成,细胞和组织分布,生物学功... 详细信息

研究证实,ndrg家族在肿瘤的生物进程和发病起源方面起到重要作用,在很多肿瘤细胞系和肿瘤类型中,这些基因表达下降或缺失,说明它可能起到抑癌基因的作用,从这个角度出发,对其现有的研究进行归纳,包括分子构成,细胞和组织分布,生物学功能和在肿瘤方面的作用,试图阐述它们在研究疾病及其治疗方面的潜在意义。

关键词： ndrg家族 wnt通路肿瘤

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ndrg2在结肠癌细胞中的表达及其功能的初步研究

NDRG2在结肠癌细胞中的表达及其功能的初步研究

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作者：徐春盛第四军医大学

学位级别：硕士

人ndrg2基因(N-myc downstream-regulated gene 2)是本课题组于2000年用消减杂交法从正常成人全脑cDNA文库中发现和获得的新序列。其全长为2,024 bp。ndrg2基因含有16个外显子和15个内含子,定位于染色体14q11.2,编码一个含有357个氨基... 详细信息

人ndrg2基因(N-myc downstream-regulated gene 2)是本课题组于2000年用消减杂交法从正常成人全脑cDNA文库中发现和获得的新序列。其全长为2,024 bp。ndrg2基因含有16个外显子和15个内含子,定位于染色体14q11.2,编码一个含有357个氨基酸残基、分子量约为40 kDa的蛋白质。已报道该家族共有四个成员:ndrg1、ndrg2、ndrg3和ndrg4,其中ndrg4又分为三个亚型:ndrg4-B、ndrg4-Bvar和ndrg4-H。该家族各成员间的氨基酸残基序列同源性很高,但在各组织间的表达水平有明显差异。目前,人ndrg2的具体功能还不是很清楚,本课题组初步研究结果显示,该基因在多种正常组织中高表达,而在某些肿瘤组织和肿瘤细胞系中低表达或无表达;ndrg2可诱导树突状细胞的分化,这些结果提示:ndrg2基因与肿瘤细胞分化、增殖密切相关。为了深入研究ndrg2基因的功能,阐明其在体内的作用机制,弄清具体的信号传导通路及其如何与其它分子相互作用。本实验分两个部分,第一部分,我们首先运用Real time RT-PCR和Western-blot法,检测丁酸钠诱导结肠癌细胞分化后ndrg2的差异表达情况。结果发现随着诱导时间的延长,ndrg2 mRNA和蛋白水平逐渐升高,提示ndrg2与结肠癌细胞的分化密切相关,但是其机制还不是很清楚,需要进一步研究。第二部分,用腺病毒介导NGRG2(Ad-ndrg2)转染低表达ndrg2的人结肠癌细胞HT-29 ,western blot及RT-PCR方法检测外源性ndrg2基因的表达,借助MTT、流式细胞仪检测对ndrg2转染前后人结肠癌细胞HT-29的生物学行为进行检测。结果发现ndrg2过表达后,明显抑制结肠癌细胞的生长,提示ndrg2具有抑制肿瘤生长的功能。结论: 1.结肠癌细胞系经丁酸钠诱导分化后ndrg2的表达随着分化进程升高,说明ndrg2与结肠癌细胞的分化密切相关。 2. Ad-ndrg2转染HT29 72h后可明显抑制HT29细胞的增殖速度,并出现了G1期阻滞,说明ndrg2过表达可以抑制结肠癌细胞的生长。

关键词： ndrg家族分化结肠癌腺病毒转染

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