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营养学报 2006年第6期28卷 I0018-I0022,I0026-I0032页

大鼠脊髓发育及损伤后NIDD mRNA表达的实验研究

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中国临床解剖学杂志 2007年第5期25卷 531-535,539页

作者：李欣程纯陈梦玲牛淑琼高尚峰沈爱国南通大学江苏省神经再生重点实验室南通大学医学院微生物与免疫学教研室江苏南通226001

目的：探讨在大鼠发育过程中及急性脊髓损伤后脊髓组织中NIDD （nnos-interacting DHHC domain-containing protein with dendritic mRNA）mRNA的表达变化及意义。方法：采用改良Allen＇s打击法，咬除T8-10椎板后，造成大鼠脊髓损伤模... 详细信息

目的：探讨在大鼠发育过程中及急性脊髓损伤后脊髓组织中NIDD （nnos-interacting DHHC domain-containing protein with dendritic mRNA）mRNA的表达变化及意义。方法：采用改良Allen＇s打击法，咬除T8-10椎板后，造成大鼠脊髓损伤模型，致伤量为10×10g·cm；借助实时荧光定量PCR、原位杂交与免疫荧光结合的方法，定量、定位研究发育过程中及脊髓损伤后早期大鼠脊髓组织中NIDD mRNA与nnos mRNA表达的时间和空间分布特征。结果：大鼠发育过程中，胚胎16d的大鼠脊髓中可见NIDD mRNA的高表达，在生后1d，与nnos共表达于尚未分化成熟的前角，在白质也见NIDD的阳性信号。成年后呈低表达；nnos mRNA于生后1～3d出现表达高峰；脊髓损伤后NIDD mRNA表达明显增多，在8h到达高峰，分布于脊髓前角、中间带、中央管周围及后角nnos阳性的神经元，7d恢复至正常水平；nnos mRNA在损伤后8h达到高峰，1d降低至正常水平。而且，在脊髓损伤后NIDD mRNA与nnos mRNA二者表达呈正相关。结论：胎鼠脊髓中，NIDD高表达于nnos阳性细胞，提示其在脊髓组织的发育成熟过程中的作用可能与nnos相关。脊髓损伤后脊髓组织中NIDD与nnos表达增多，提示在脊髓损伤的病理过程中，NIDD可能通过调节nnos的细胞亚定位及活性而发挥一定的生物学作用。

关键词： NIDD nnos 实时荧光定量聚合酶链反应原位杂交脊髓损伤发育

MrgC和肾上腺髓质素受体对DRG中IL-1β、nnos或pERK表达的作用研究

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MrgC和肾上腺髓质素受体对DRG中IL-1β、nNOS或pERK表达的作用研究

作者：曾娟福建师范大学

学位级别：硕士

Mrg受体(Mas-related gene receptors)属于G蛋白偶联受体,特异性的存在于三叉神经节(trigeminal ganglion, TG)和背根种经节(dorsal root ganglia, DRG)的中小型神经元上,因此又被称为感觉神经元特异性受体。肾上腺髓质素受体(Adrenomed... 详细信息

Mrg受体(Mas-related gene receptors)属于G蛋白偶联受体,特异性的存在于三叉神经节(trigeminal ganglion, TG)和背根种经节(dorsal root ganglia, DRG)的中小型神经元上,因此又被称为感觉神经元特异性受体。肾上腺髓质素受体(Adrenomedullin receptors, AM receptors)可被其拮抗剂AM22-52阻断。AM属于降钙素基因相关肽(calcitonin gene-related peptide, CGRP)家族,是新近证实的痛介质。参与病理性疼痛的发病。我们和其他实验室过去的研究表明,激活MrgC受体能抑制炎性疼痛和神经病理性痛,AM受体参与病理性痛的形成,但其机制尚不明确。本文检查Mrg C受体激动剂牛肾上腺髓质素8-22 (bovine adrenal medulla peptide 8-22, BAM8-22)和AM受体拮抗剂AM22-52对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)引起的DRG兴奋性分子增加所产生的作用,以探讨MrgC受体和AM受体抑制或参与疼痛发生的DRG中的细胞机制。本实验采用离体组织培养、蛋白质免疫印迹等方法研究：(1)BAM8-22对LPS诱发DRG中IL-1β及nnos表达的影响;(2)AM22-52对LPS/ATP引起的DRG中IL-1β及nnos表达的影响;(3)AM22-52对LPS/ATP激活的DRG中ERK信号通路的影响。结果显示：(1)LPS作用于离体培养的DRG 1 h后,DRG中IL-1β及nnos表达增加,BAM8-22印制LPS引起的DRG中IL-1β及nnos表达的增加;应用MrgC受体的抗体后,BAM8-22不再能改变LPS诱发的DRG中IL-1β及nnos增加。(2)给予AM22-52抑制LPS/ATP引起的DRG中nnos表达的增加,但对IL-1β增加没有作用;(3)AM22-52可抑制LPS/ATP引起的DRG中pERK表达增加。以上研究结果提示MrgC受体是通过抑制DRG中IL-1β和nnos的表达来其抑制炎性疼痛和神经病理性疼痛;AM受体促使DRG中nnos和ERK信号通路激活是其参与病理性疼痛发生神经学机制。

关键词：脂多糖背根神经节 MrgC受体 BAM8-22 AM22-52 nnos IL-1β

自发性高血压大鼠阴茎海绵体组织nnos变化的实验研究

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中国男科学杂志 2003年第2期17卷 89-90,99页

作者：程建利胡礼泉武汉大学中南医院泌尿外科武汉430071

目的　研究高血压对大鼠阴茎海绵体组织nnos神经纤维的影响。方法　自发性高血压大鼠 (SHR)和同系WKY鼠各 12只 ,都随机分为 4周观察组 (6只 )和 12周观察组 (6只 )。第 4周和第 12周末时 ,观察阴茎勃起功能 ,并检测阴茎组织nnos神经纤... 详细信息

目的　研究高血压对大鼠阴茎海绵体组织nnos神经纤维的影响。方法　自发性高血压大鼠 (SHR)和同系WKY鼠各 12只 ,都随机分为 4周观察组 (6只 )和 12周观察组 (6只 )。第 4周和第 12周末时 ,观察阴茎勃起功能 ,并检测阴茎组织nnos神经纤维数目。结果　 4周组和 12周组中 ,SHR和WKY鼠在阴茎勃起次数和阴茎组织nnos神经纤维数目上 ,都有显著差异 (P nnos神经纤维数目上 ,差异也有显著性 (P 0 .0 5 ) ,但有减少的趋势。结论　高血压使阴茎组织中nnos神经纤维数目减少 ,这可能是高血压引起勃起功能障碍的发病机理之一。

关键词：自发性高血压大鼠阴茎海绵体组织 nnos 实验神经纤维神经型一氧化氮合酶勃起功能障碍

捕食应激致大鼠海马NO释放增多及nnos表达增强

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中国行为医学科学 2002年第6期11卷 601-603页

作者：王庆松王正国朱佩芳蒋建新第三军医大学大坪医院野战外科研究所四室重庆400042

目的　探讨一氧化氮 (NO)在创伤后应激障碍 (PTSD)样行为异常大鼠的变化规律 ,以进一步揭示PTSD的神经生物学机制。方法　在大鼠捕食应激PTSD动物模型基础上 ,动态检测了大鼠海马、额叶皮层组织匀浆NO、一氧化氮合酶 (NOS)含量及神经元... 详细信息

目的　探讨一氧化氮 (NO)在创伤后应激障碍 (PTSD)样行为异常大鼠的变化规律 ,以进一步揭示PTSD的神经生物学机制。方法　在大鼠捕食应激PTSD动物模型基础上 ,动态检测了大鼠海马、额叶皮层组织匀浆NO、一氧化氮合酶 (NOS)含量及神经元型NOS(nnos)表达。结果　PTSD样行为异常大鼠海马NO含量于捕食应激后即刻明显升高 ,1 2h达高峰 ,2 4h时仍明显增多 ;海马nnos表达亦同步增高 ,而额叶皮层则无明显改变。结论　严重心理 /生理应激所致海马nnos持续性高表达与NO释放明显增多。

关键词：捕食应激大鼠海马 NO释放 nnos 创伤后应激障碍

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MGE细胞的培养与移植用于nnos研究

MGE细胞的培养与移植用于nNOS研究

作者：袁红瑾南京医科大学

学位级别：硕士

皮层与海马的信息处理依赖于谷氨酸能兴奋性投射神经元与γ-氨基丁酸(GABA)能抑制性神经元之间复杂的相互作用。两种神经元之间协调的相互作用对于维持大脑兴奋与抑制信号之间微妙的平衡关系至关重要,这种平衡受到很多神经调节物质如不... 详细信息

皮层与海马的信息处理依赖于谷氨酸能兴奋性投射神经元与γ-氨基丁酸(GABA)能抑制性神经元之间复杂的相互作用。两种神经元之间协调的相互作用对于维持大脑兴奋与抑制信号之间微妙的平衡关系至关重要,这种平衡受到很多神经调节物质如不同的神经肽、一氧化氮(NO)等的动态调节。平衡的破坏会导致很多病理性的障碍如癫痫、自闭症、精神分裂症等。NO参与了神经传递、突触可塑性、血管舒张、炎症等很多生理过程,是一个非常重要的信号分子,NO产生或释放功能的缺陷会导致神经元死亡以及癫痫等疾病。NO由一氧化氮合酶(NOS)合成,根据最初被发现时所在的部位,NOS又可分为内皮型一氧化氮合酶(eNOS)、神经元型一氧化氮合酶(nnos)以及可诱导型一氧化氮合酶(iNOS)。在神经元中NO主要由nnos合成,在幼稚和成熟的海马与皮层中nnos主要表达在GABA能中间神经元上。GABA能中间神经元主要来源于三个不同部位:中间神经节隆起(MGE)、外侧/尾部神经节隆起(LGE/CGE)以及视前区(POA),每个神经上皮前体细胞部位都会产生不同的中间神经元亚型。通过在转基因鼠上运用遗传谱系追踪技术发现,皮层I型nnos主要来源于MGE,II型nnos则是MGE、LGE/CGE以及POA的混合来源,也就意味着皮层大部分的nnos来源于MGE。MGE细胞移植到成年鼠的脑内可以扩散、迁移并且分化成GABA—主要的抑制性神经递质。很多假说认为移植MGE的前体细胞可以增加局部的抑制,运用于临床治疗具有非常重要的意义。近几年来分离、移植MGE来源的中间神经元前体细胞方面研究有很多,皮质中间神经元的前体细胞移植到一系列的中枢神经系统组织后可以广泛的迁移并且与宿主神经元网络形成突触联系。MGE细胞移植后可以进行整合的能力被广泛运用到细胞疗法上,从而治疗一系列中枢神经系统疾病:癫痫、神经性疼痛、帕金森以及阿尔兹海默病等。因此运用MGE前体细胞进行的细胞移植在治疗神经和精神疾病中是一个非常有潜能的临床途径。恐惧是一种与适应能力相关的基本情绪,是面对外界可知或不可知的威胁时激发的学习能力。适度的恐惧反应能警示动物面对类似于先前经历的有害环境,及时评估潜在的危险并做出保护反应,而病理性恐惧记忆的产生将会导致创伤后应激综合征(posttraumatic stress disorder,PTSD)、惊恐障碍(panic disorder)、恐惧症(phobia)等恐惧相关疾病。基于巴甫洛夫条件反射原理建立的经典的条件性恐惧(Cued-fear conditioning)以及在此基础上发展出的背景关联恐惧(Contextual fear conditioning)是最常见研究恐惧相关疾病的动物模型,广泛应用于恐惧学习和记忆的神经、分子机制研究。海马是大脑边缘系统结构之一,在情感和认知功能中具有重要作用。既往研究表明,海马与PTSD发生、发展及治疗密切相关,海马DG区是认知功能和情绪调控的神经基础,包含DG区的海马三突触通路对于背景关联型恐惧记忆至关重要。由于目前对于nnos前体细胞来源鲜有报道,且大部分研究着眼于皮层nnos细胞。因此,我们希望能通过培养MGE细胞来研究nnos。本课题设计研究三部分内容:1)通过培养不同部位前体细胞来确证nnos细胞最主要的胚胎来源是MGE,并改进获取MGE的方法,从而获得状态较好的nnos细胞;2)对nnos细胞进行体外培养与鉴定,并尝试多种方法来提高其中nnos细胞的比例;3)将较高nnos比例的MGE前体细胞体外培养成神经球,并移植到海马DG区,研究nnos细胞以及GABA能中间神经元在小鼠恐惧记忆获得中发挥的作用。第一部分为了探究nnos的胚胎来源,结合已有的文献报导以及对不同时间点nnos阳性率的研究,我们选取了 E12.5的胎仔,在体视显微镜下取其整脑,并于多聚甲醛中固定24h,随后蔗糖梯度脱水6天后进行冠状冰冻切片,并于载玻片上贴片免疫组化,用免疫标记物PAX6、FOXG-1、Meis-2、Nkx2.1分别标记皮层、前脑、LGE和MGE,对E12.5天胚胎各个部位的形态及范围有个确切的认识。此后,我们就进行E12.5天胎仔的原代培养,在体视显微镜下,分离出同一只胎仔的皮层、POA、CGE、LGE和MGE,体外培养10天后,通过细胞免疫组化鉴定其中nnos细胞的比例,发现MGE部位nnos细胞比例最高,即确证了 MGE是nnos细胞主要的胚胎来源。由于MGE细胞获取方法以及分离的时间长短均会影响原代培养后细胞的状态,因此我们希望能够通过改进现有的MGE获取方法,使得原代培养后的细胞状态更好。综合对比多种方法后,我们尝试了琼脂糖凝胶包埋整脑后Chopper冠状切片、缓冲液中分离MGE的方法以及体视显微镜下于缓冲液中直接分离MGE的方法,后者无论是操作时长、细胞状态以及nnos细胞阳性率均优于前者。因此第一部分的实验,我们确定了 MGE是nnos细

关键词： MGE nnos 中间神经元恐惧记忆获得

单眼形觉剥夺大鼠反缝治疗前后视中枢nnos的表达

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单眼形觉剥夺大鼠反缝治疗前后视中枢nNOS的表达

作者：张亚娟河北医科大学

学位级别：硕士

目的：本课题运用NOS Ⅰ型(神经型一氧化氮合酶，nnos)抗体，通过nnos在单眼形觉剥夺大鼠背外侧膝状体(dLGN)和视皮层17区反缝治疗前后的表达变化，探讨关键期内剥夺性弱视治疗前后视中枢神经元功能状态的改变。进一步论证NO在视觉发育... 详细信息

目的：本课题运用NOS Ⅰ型(神经型一氧化氮合酶，nnos)抗体，通过nnos在单眼形觉剥夺大鼠背外侧膝状体(dLGN)和视皮层17区反缝治疗前后的表达变化，探讨关键期内剥夺性弱视治疗前后视中枢神经元功能状态的改变。进一步论证NO在视觉发育可塑性及剥夺性弱视发病机制中的作用，以助于在分子水平阐明弱视的发病机理，为弱视的预防和治疗提供一条新的途径。方法：1、动物模型的建立与分组：14日龄健康雄性SD大鼠接受左眼眼睑缝合手术造成剥夺性弱视模型，术后2周打开左眼并行对侧眼(右眼)眼睑缝合进行遮盖治疗。动物分为三组：剥夺组(Monocular Deprivation，MD)12只，于14日龄时缝合左眼眼睑，再分为Ⅰ、Ⅱ2个小组，MD(Ⅰ)于术后2周(28日龄)、MD(Ⅱ)于术后4周(42日龄)处死;治疗组(Reverse Suture，RS)6只，42日龄时处死;正常对照组(Normal Control，NC)12只，分为2小组，NC(Ⅰ)6只于28日龄时处死、NC(Ⅱ)6只于42日龄时处死。 2、标本获取与制备：4％多聚甲醛经快速左心室升主动脉插管灌注固定后开颅取出脑组织，冰冻切片机上冠状切片，贯穿整个dLGN与视皮层17区，厚度40μm。视皮层17区每个标本每隔3张切片取一张行Nissl染色。

关键词： nnos 单眼剥夺反缝治疗外侧膝状体视皮层17区

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本校近期发表的SCI论文摘要(英文)

南京医科大学学报(自然科学版) 2009年第2期29卷 146-146页

AQP4 knockout impairs proliferation, migration and neuronal differentiation of adult neural stem cells

关键词： NMDAR nnos AQP 英文 NSCs 论文摘要 RNAi FGFR SCI

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铅对海马区长时程增强影响机制的研究新进展

中华预防医学杂志 2003年第4期37卷 70-72页

作者：金亚平张军徐威辽宁中医学院职业技术学院中国医科大学公共卫生学院劳动卫生教研室中国医科大学公共卫生学院劳动卫生教研室 110001沈阳

长时程增强(10ng-term potentiation，LTP)现象是指当给予兴奋性传导通路以短暂的连续高频刺激时，就能记录到兴奋性突触后电位(EPSP)斜率的持久性上升，即引起突触传递效率的持续增加。目前普遍认为，海马区LTP现象是突触可塑性的一种... 详细信息

长时程增强(10ng-term potentiation，LTP)现象是指当给予兴奋性传导通路以短暂的连续高频刺激时，就能记录到兴奋性突触后电位(EPSP)斜率的持久性上升，即引起突触传递效率的持续增加。目前普遍认为，海马区LTP现象是突触可塑性的一种模式，是学习和记忆过程中细胞水平的可能机制。铅是环境中广泛存在的重金属元素。目前，低水平铅中毒对儿童智力发育的影响受到各方面的广泛关注。我国城市儿童中约半数以上处于无症状的亚临床铅中毒状态～([1])。动物研究结果表明~([2，3])，铅中毒可增加诱导LTP的阈值，使诱导产生的LTP幅度下降和持续时间缩短。铅对LTP的影响目前被认为是铅对儿童智力损伤的可能机制。

关键词：海马区 LTP 长时程增强突触前膜 NMDAR 仔鼠铅接触逆行信使 nnos 铅暴露影响机制

大负荷训练大鼠海马一氧化氮合酶阳性神经元观察

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中国运动医学杂志 2006年第1期25卷 98-100页

作者：刘鸿宇王艳红侯宏花巫国贵中北大学运动人体科学实验中心山西太原030051 中北大学电子信息工程系

目的:观察大负荷训练对大鼠海马各区神经元型一氧化氮合酶(nnos)表达的影响,探讨海马NOS与疲劳应激的关系。方法:采用ABC免疫组织化学方法对4周大负荷游泳训练后安静状态下大鼠海马CA1区、CA2区和CA3区等部位的nnos阳性神经元进行观察,... 详细信息

目的:观察大负荷训练对大鼠海马各区神经元型一氧化氮合酶(nnos)表达的影响,探讨海马NOS与疲劳应激的关系。方法:采用ABC免疫组织化学方法对4周大负荷游泳训练后安静状态下大鼠海马CA1区、CA2区和CA3区等部位的nnos阳性神经元进行观察,用半定量图像处理法对nnos阳性神经元的数量、面积和灰度进行分析。结果:训练组大鼠CA1区、CA1区、CA3区nnos阳性神经元数量、面积和灰度均显著大于对照组,提示大负荷训练可使大鼠海马各区神经元型nnos表达上调,海马nnos神经元可能参与了运动性疲劳的形成及调控。

关键词：大负荷训练海马神经元型一氧化氮合酶 nnos 大鼠