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猪myostatin基因敲除及转录调控的研究

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猪Myostatin基因敲除及转录调控的研究

作者：高飞吉林大学

学位级别：硕士

myostatin基因是肿瘤生长因子-β（TGF-β）超家族成员之一，是一种负向调节骨骼肌发育的分泌型蛋白。myostatin基因自然突变的牛会出现肌肉量的显著增加，表现为“双肌”表型。利用基因打靶的方法破坏小鼠的myostatin基因会引起小鼠肌... 详细信息

myostatin基因是肿瘤生长因子-β（TGF-β）超家族成员之一，是一种负向调节骨骼肌发育的分泌型蛋白。myostatin基因自然突变的牛会出现肌肉量的显著增加，表现为“双肌”表型。利用基因打靶的方法破坏小鼠的myostatin基因会引起小鼠肌肉的肥大和增生进而导致肌肉量的显著增加。我国生猪饲养量、猪肉产量位居世界第一，猪是我国肉品供应的第一来源，同时由于猪与人在生理特征、基因结构上更为接近，可作为非常理想的研究人类疾病的动物模型，因此采用基因打靶的方法生产myostatin基因缺失猪，不但有助于在畜牧业生产上改良育种，提高胴体瘦肉率，也可以作为实验动物模型进行肌肉萎缩等相关疾病的研究。本实验首先构建了猪myostatin基因敲除载体pFlexible-DT-MSTN-SA-LA，在猪myostatin基因的第三外显子处定点引入突变，经核移植和胚胎移植，获得了5头myostatin基因敲除的转基因猪。实时荧光定量PCR与western blot证实myostatin基因的表达在myostatin基因敲除猪与野生型猪上，差异并不显著在对猪myostatin基因转录调控模式的进一步研究发现，人与鼠的启动子区的序列特征较为接近，牛与羊的启动子区的序列特征最为相似，猪的myostatin启动子与牛、羊较为接近，与人、鼠略远，都存在FoxO1、SMAD2、MyoD转录因子的结合位点，但不存在牛羊特有的cdxA转录因子结合位点，经实时荧光定量PCR检测转录因子FoxO1、SMAD2、MyoD在myostatin基因敲除猪和野生型猪上的表达，结果表明myostatin基因敲除猪和野生型猪相比，其转录因子的表达量并没有显著差异，因此推测myostatin基因敲除猪与野生型猪无显著差异，可能由于单侧基因的失活并没有反馈抑制转录因子表达的降低，而是转录因子的正常表达对另一条染色体上的myostatin基因的表达起到了剂量补偿的效应。本实验结果为今后进一步研究myostatin基因调控、演化机制奠定了基础。

关键词：猪 myostatin 基因敲除转录因子

1. 小鼠坐骨神经缺损后腓肠肌myostatin的表达变化 2. myostatin siRNA干扰效率的验证

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1. 小鼠坐骨神经缺损后腓肠肌Myostatin的表达变化 2. Myostatin ...

作者：邵晨昕南通大学

学位级别：硕士

目的分析myostatin在腓肠肌失神经萎缩过程中的表达变化，探讨myostatin在神经缺损引起肌萎缩过程中的作用。方法以坐骨神经横断术制备小鼠腓肠肌失神经支配模型，采用实时荧光定量PCR和Western Blot分别检测失神经支配不同时间腓肠肌My... 详细信息

目的分析myostatin在腓肠肌失神经萎缩过程中的表达变化，探讨myostatin在神经缺损引起肌萎缩过程中的作用。方法以坐骨神经横断术制备小鼠腓肠肌失神经支配模型，采用实时荧光定量PCR和Western Blot分别检测失神经支配不同时间腓肠肌myostatin及其mRNA，Smad2、磷酸化Smad2的变化，同时对肌肉湿重比、肌纤维横截面积(CSA)及形态学特征进行了分析比较。结果失神经支配早期，腓肠肌myostatin mRNA和相应蛋白水平迅速上升，分别在3天和7天达到高峰，随后逐渐下降;在此过程中腓肠肌磷酸化Smad2蛋白表达水平与myostatin mRNA类似，而腓肠肌失神经支配后，湿重比、肌横截面积相应减少。结论腓肠肌失神经肌萎缩过程中，myostatin基因及蛋白表达均有变化，提示myostatin在其中扮演重要角色，并且通过TGF-β／Smad通路介导信号传递。目的制备小鼠myostatin RNAi质粒，研究myostatin干扰质粒在小鼠骨骼肌成肌细胞系C2C12细胞中的沉默作用。方法根据myostatin mRNA序列，选择3个19nts的靶序列，设计并合成包含各正反义靶序列的互补DNA链以及1个无干扰作用DNA链，退火后插入pSilencer2.0-U6表达载体，构建3个RNAi阳性质粒：M1／pSilencer、M2／pSilencer、M3／pSilencer及一个阴性质粒Mc／pSilencer并转染C2C12细胞，然后采用Western blot观察RNAi对C2C12细胞中myostatin表达的抑制作用。结果酶切鉴定和测序结果证实，4个RNAi质粒构建正确，其中M1／pSilencer质粒能降低C2C12细胞中myostatin表达量，有统计学差异，表达量约降低40％。结论构建的阳性RNAi质粒能抑制目的基因myostatin在C2C12细胞中的表达。

关键词： myostatin 失神经支配 Smad2 小鼠

Differential Expression of Mature MicroRNAs Involved in Muscle Maintenance of Hibernating Little Brown Bats, Myotis lucifugus: A Model of Muscle Atrophy Resistance

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Genomics, Proteomics & Bioinformatics 2012年第5期10卷 295-301页

作者： Samantha F.Kornfeld Kyle K.Biggar Kenneth B.Storey Institute of Biochemistry&Department of Biology Carleton University

Muscle wasting is common in mammals during extended periods of immobility. However, many small hibernating mammals manage to avoid muscle atrophy despite remaining stationary for long periods during hibernation. Recent research has highlighted roles for short non-coding microRNAs （miRNAs） in the regulation of stress tolerance. We proposed that they could also play an important role in muscle maintenance during hibernation. To explore this possibility, a group of 10 miRNAs known to be normally expressed in skeletal muscle of non-hibernating mammals were analyzed by RT-PCR in hibernating little brown bats, Myotis lucifugus. We then compared the expression of these miRNAs in euthermic control bats and bats in torpor. Our results showed that compared to euthermic controls, sig- nificant, albeit modest （1.2-1.6 fold）, increases in transcript expression were observed for eight mature miRNAs, including miR-la-1, miR-29b, miR-181b, miR-15a, miR-20a, miR-206 and miR-128-1, in the pectoral muscle of torpid bats. Conversely, expression of miR-21 decreased by 80% during torpor, while expression of miR-107 remained unaffected. Interestingly, these miRNAs have been either validated or predicted to affect multiple muscle-specific factors, including myostatin, FoxO3a, HDAC4 and SMADT, and are likely involved in the preservation of pectoral muscle mass and functionality during bat hibernation.

关键词： MlicroRNA Hibernation Metabolic rate depression Atrophy Dicer myostatin

myostatin干扰质粒的构建及在C2C12细胞中的效果验证

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南通大学学报（医学版） 2007年第6期27卷 461-464页

作者：吴欣邵晨昕顾芸丁斐刘梅南通大学神经再生重点实验室南通226001

目的:研究myostatin干扰质粒在小鼠骨骼肌成肌细胞系C2C12细胞中的沉默作用。方法:根据Myo-statin mRNA序列,选择3个19nts的靶序列,设计并合成包含各正反义靶序列的互补DNA链以及1个无干扰作用DNA链,退火后插入pSilencer2.1-U6表达载体... 详细信息

目的:研究myostatin干扰质粒在小鼠骨骼肌成肌细胞系C2C12细胞中的沉默作用。方法:根据Myo-statin mRNA序列,选择3个19nts的靶序列,设计并合成包含各正反义靶序列的互补DNA链以及1个无干扰作用DNA链,退火后插入pSilencer2.1-U6表达载体,构建3个RNAi阳性质粒:M1/pSilencer、M2/pSilencer、M3/pSilencer及一个阴性质粒Mc/pSilencer并转染C2C12细胞,采用实时荧光定量PCR和Western blot观察RNAi对C2C12细胞中myostatinmRNA和蛋白表达的下调作用。结果:构建的3个阳性干扰质粒中M1/pSilencer能显著降低C2C12细胞中myostatin表达量,随着M1/pSilencer干扰质粒剂量的增加,myostatin表达量逐渐降低。结论:成功构建myostatin RNAi质粒,该质粒能下调目的基因myostatin在C2C12细胞中的表达量。

关键词： myostatin RNA干扰 C2C12

myostatin在小鼠腓肠肌失神经支配萎缩过程中的表达

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Myostatin在小鼠腓肠肌失神经支配萎缩过程中的表达

myostatin基因单核苷酸多态性与京海黄鸡体重的相关性分析

中国神经科学学会第六届学术会议暨学会成立十周年庆祝大会

作者：丁斐邵晨昕刘梅南通大学江苏省神经再生重点实验室南通大学江苏省神经再生重点实验室南通大学江苏省神经再生重点实验室

＜正＞目的:myostatin（MSTN）是转化生长因子β（TGF-β）超家族的新成员,对骨骼肌生长具有重要调节作用。本研究通过分析MSTN在腓肠肌失神经萎缩过程中的表达变化,初步探讨其在神经离断引起肌萎缩过程中的生物学作用。方法:通过坐骨... 详细信息

＜正＞目的:myostatin（MSTN）是转化生长因子β（TGF-β）超家族的新成员,对骨骼肌生长具有重要调节作用。本研究通过分析MSTN在腓肠肌失神经萎缩过程中的表达变化,初步探讨其在神经离断引起肌萎缩过程中的生物学作用。方法:通过坐骨神经横断术制备小鼠腓肠肌失神经支配模型。采用肌肉湿重比、肌纤维横截面积等指标,观察坐骨神经离断后腓肠肌在萎缩过程中形态学的变化。分别采用实时荧光定量PCR和Western Blot,动态分析失神经支配后MSTN mRNA及其蛋白在腓

关键词： myostatin 失神经肌萎缩小鼠

来源： cnki会议评论

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上海畜牧兽医通讯 2007年第5期 15-17页

作者：颜文锦李宁川于佳惠王丽云卞良勇王金玉扬州大学动物科学与技术学院 225009 扬州大学体育学院 225009

本研究以京海黄鸡为研究对象,采用PCR-SSCP和PCR产物直接测序法检测了myostatin基因的单核苷酸多态性,并以此为依据,对京海黄鸡进行了群体遗传学分析,将myostatin基因单核苷酸多态性与京海黄鸡群体的各周龄体重进行了相关性分析。结果表... 详细信息

本研究以京海黄鸡为研究对象,采用PCR-SSCP和PCR产物直接测序法检测了myostatin基因的单核苷酸多态性,并以此为依据,对京海黄鸡进行了群体遗传学分析,将myostatin基因单核苷酸多态性与京海黄鸡群体的各周龄体重进行了相关性分析。结果表明:引物P1位点基因型(AA、AB和BB型)对实验记录的各周龄体重有影响(P<0.05),BB型体重显著高于AB型(P<0.05)。引物P3位点基因型(CC、CD和DD型)对所记录的各周龄体重有影响(P<0.05),DD型体重显著高于CC型和CD型(P<0.05),研究表明:Myonstatin基因的功能对鸡的各周龄体重具有重要影响。

关键词： myostatin SNPs 鸡

myostatin在杜氏肌营养不良疾病中的研究进展

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国际儿科学杂志 2019年第5期46卷 356-359页

作者：韩双双(综述) 徐登球江振洲张陆勇(审校) 中国药科大学江苏省新药筛选中心重点实验室南京210009

杜氏肌营养不良(Duchenne muscular dystrophy,DMD)是一种严重的遗传性肌肉疾病,是由编码抗肌萎缩蛋白(dystrophin)的基因突变引起的。临床主要表现为肌肉进行性萎缩。myostatin作为骨骼肌生长发育的负性调控因子,近年来其在肌肉萎缩性... 详细信息

杜氏肌营养不良(Duchenne muscular dystrophy,DMD)是一种严重的遗传性肌肉疾病,是由编码抗肌萎缩蛋白(dystrophin)的基因突变引起的。临床主要表现为肌肉进行性萎缩。myostatin作为骨骼肌生长发育的负性调控因子,近年来其在肌肉萎缩性疾病中受到了广泛关注。该文就myostatin结构、活性及其在骨骼肌生长发育中作用并对其抑制剂在DMD疾病中研究进展进行综述。

关键词：杜氏肌营养不良 myostatin 骨骼肌抗肌萎缩蛋白

myostatin Signaling is Mediated by MAPKs and Calcineurin

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Myostatin Signaling is Mediated by MAPKs and Calcineurin

运动锻炼对myostatin影响的研究进展

中国细胞生物学学会第八届会员代表大会暨学术大会

作者： YANG Wei WANG Kun CHEN Yan ZHANG Yong ZHUDahai (Molecular and cellular developmental biology laboratory, Harbin Institute of Technology, Harbin, 150001, China. Department of Biochemistry and National Laboratory of Medical Molecular Biology, Peking Union Medical School, Beijing 100005, China.

The transforming growth factors-βs (TGF-βs) control growth/differentiation andapoptosis of cells. The newly discovered myostatin is a TGF-βsuperfamily memberand functions as a muscle specific regulator by inhibiting proliferation anddifferentiation of myoblasts. However, the molecular mechanism of myostatinfunction and signaling transduction of myostatin are largely unknown. Herein wereport the possible involvement of Erk1/2 MAPK cascade and calcineurin function in

关键词： myostatin MAP Kinase Calcineurin Myogenesis

来源： cnki会议评论

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湖北体育科技 2015年第8期34卷 690-693页

作者：刘秀娟宋施思南京体育学院运动健康科学系江苏南京210014

骨骼肌作为机体运动的重要器官,其发育程度对机体的运动能力具有极其重要的作用。一般来讲,骨骼肌越发达,机体的运动能力越强。myostatin(MSTN)是调控肌肉生长的因子之一,可以抑制骨骼肌的生长发育,运动对MSTN的表达又有重要影响。因此... 详细信息

骨骼肌作为机体运动的重要器官,其发育程度对机体的运动能力具有极其重要的作用。一般来讲,骨骼肌越发达,机体的运动能力越强。myostatin(MSTN)是调控肌肉生长的因子之一,可以抑制骨骼肌的生长发育,运动对MSTN的表达又有重要影响。因此,研究运动锻炼对MSTN表达的影响对调控骨骼肌的发育,甚至改变机体的运动能力具有重要意义。

关键词：运动骨骼肌 myostatin