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mir-615-5p通过IGF2/pI3K/AKT信号通路调控胃腺癌发生发展的作用机制

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医学研究生学报 2022年第1期35卷 23-29页

作者：王雪君王亚东王慧敏步雪峰江苏大学附属人民医院普外科镇江212000 江苏大学附属人民医院呼吸科镇江212000

目的微小RNA-615-5p(mir-615-5p)已被报道在多种癌症中发挥重要作用,但对mir-615-5p在胃腺癌中的作用机制尚不完整。文章旨在探讨mir-615-5p在胃腺癌中的临床意义及功能相关性。方法利用qRT-pCR技术检测mir-615-5p在临床胃腺癌组织及细... 详细信息

目的微小RNA-615-5p(mir-615-5p)已被报道在多种癌症中发挥重要作用,但对mir-615-5p在胃腺癌中的作用机制尚不完整。文章旨在探讨mir-615-5p在胃腺癌中的临床意义及功能相关性。方法利用qRT-pCR技术检测mir-615-5p在临床胃腺癌组织及细胞株中的表达情况;将细胞分组:过表达对照组(转染control mimics)和mir-615-5p过表达组(转染mir-615-5p mimics)、低表达对照组(转染control inhibitor)和mir-615-5p低表达组(转染mir-615-5p inhibitor),选择表达mir-615-5p最低的HGC细胞进行过表达,表达mir-615-5p相对较高的MGC细胞进行敲减,qRT-pCR技术检测干预效率。利用细胞克隆形成实验、平板划痕实验、Transwell迁移实验等检测胃癌细胞功能的改变,蛋白质印迹法用来检测mir-615-5p对目的蛋白IGF2(IGF2)的影响以及pI3K/AKT信号通路相关蛋白的水平。结果mir-615-5p在人胃腺癌组织中表达水平明显低于癌旁正常组织[(0.42±0.22)%vs(1.31±0.85)%,pmir-615-5p在胃腺癌细胞株(BGC、HGC、MGC)中的表达水平低于人胃黏膜上皮细胞株(GES)(p5);在HGC细胞中,过表达mir-615-5p后,其细胞克隆形成率、细胞迁移率[(5.33±1.04)%、(47.33±2.08)%]明显低于阴性对照组[(24.33±4.04)%、(83.33±4.72)%],差异有统计学意义(pmir-615-5p后,其细胞克隆形成率、细胞迁移率[(58.37±3.56)%、(79.80±3.86)%]明显高于阴性对照组[(31.43±2.97)%、(32.17±4.80)%],差异有统计学意义(pmir-615-5p后IGF2、pI3K、AKT、mTOR蛋白的表达减少;敲减mir-615-5p后IGF2、pI3K、AKT、mTOR蛋白的表达增加,但在敲减IGF2后,以上作用均受到了明显抑制(pmir-615-5p通过直接靶向IGF2使pI3K/AKT/mTOR信号通路失活而抑制胃腺癌的发生发展。因此,mir-615-5p可能是治疗胃腺癌的新靶点。

关键词： mir-615-5p 胃腺癌细胞增殖细胞迁移 pI3K/AKT/mTOR信号通路胰岛素样生长因子2

mir-615-5p在高血压患者血清中表达及其调控Akt/eNOS信号通路的机制

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中国老年学杂志 2022年第17期42卷 4279-4284页

作者：娄满高春燕王宏业哈励逊国际和平医院老年病一科河北衡水053000 哈励逊国际和平医院中医科河北衡水053000

目的探讨mir-615-5p在高血压患者血清中表达及其潜在的调控机制。方法100例患有至少10年高血压患者为观察组和100例非高血压患者(骨质疏松18例、前列腺增生10例、慢性肠炎15例、胃食管反流12例、甲状腺结节23例、轻度贫血8例、胃炎胃溃... 详细信息

目的探讨mir-615-5p在高血压患者血清中表达及其潜在的调控机制。方法100例患有至少10年高血压患者为观察组和100例非高血压患者(骨质疏松18例、前列腺增生10例、慢性肠炎15例、胃食管反流12例、甲状腺结节23例、轻度贫血8例、胃炎胃溃疡14例)为正常组。运用定量实时逆转录聚合酶链反应(qRT-pCR)检测mRNA表达。HMEC-1细胞用于体外模型,再转染mir-615-5p和simir-615-5p调控mir-615-5p表达和细胞活性。结果与正常组比较,mir-615-5p在高血压患者血清中的表达被上调,mir-615-5p与右心室收缩压(RVSp)及右心室肥厚指数RV/(LV+S):正相关。上调mir-615-5p抑制血管内皮细胞增殖,增加5-乙炔基-2′脱氧尿嘧啶核苷(Edu)细胞比例。下调mir-615-5p促进血管内皮细胞增殖,减少Edu细胞比例。上调mir-615-5p激活caspase-3/9活性表达水平,下调mir-615-5p抑制caspase-3/9活性表达水平。蛋白激酶B(Akt)是mir-615-5p调节血管内皮细胞的靶点,上调mir-615-5p抑制p-Akt和p-内皮型一氧化氮合酶(eNOS)蛋白表达量。Akt激动剂抑制mir-615-5p调节血管内皮细胞的作用。结论mir-615-5p在高血压患者血清中的表达上调,mir-615-5p通过抑制Akt/eNOS信号通路,阻止血管内皮细胞增殖,提示mir-615-5p可作为预测高血压的良好分子标志物。

关键词：高血压 mir-615-5p 蛋白激酶B(Akt) 内皮型一氧化氮合酶(eNOS)

mir-615-5p通过靶向调节癌基因TRAF4抑制非小细胞肺癌细胞的增殖

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中国生物化学与分子生物学报 2016年第2期32卷 184-190页

作者：陈刚王国栋王乃辉解放军第四二五医院呼吸内科海南三亚572000

已知mi R-615-5p可抑制癌细胞的增殖,然而其具体分子机制尚不明确。本研究证明,mi R-615-5p通过负调节癌基因TRAF4,从而抑制NSCLC细胞的增殖。运用实时定量pCR检测NSCLC患者癌组织和癌旁正常组织、正常人肺支气管上皮细胞系HBE和3种人源... 详细信息

已知mi R-615-5p可抑制癌细胞的增殖,然而其具体分子机制尚不明确。本研究证明,mi R-615-5p通过负调节癌基因TRAF4,从而抑制NSCLC细胞的增殖。运用实时定量pCR检测NSCLC患者癌组织和癌旁正常组织、正常人肺支气管上皮细胞系HBE和3种人源NSCLC细胞系中mir-615-5p的表达,发现与正常的组织和细胞相比,mir-615-5p在NSCLC癌组织和癌细胞中表达水平显著降低;运用Western印迹检测HBE细胞和NSCLC细胞系中TRAF4蛋白的表达,发现TRAF4在NSCLC细胞中表达显著升高;MTT和CCK-8分析结果显示,转染mir-615-5p mimic可显著降低NSCLC细胞的增殖能力;生物学信息分析和萤光素酶报告基因检测结果显示,mir-615-5p可靶定结合TRAF4 m RNA,并下调TRAF4蛋白的水平;pc DNA-TRAF4转染后细胞增殖检测结果显示,过表达TRAF4能够消除mir-615-5p引起的细胞增殖抑制作用。综上所述,mir-615-5p通过靶定结合癌基因TRAF4的m RNA,下调TRAF4蛋白的水平,从而抑制NSCLC细胞的增殖。

关键词：非小细胞肺癌 mir-615-5p 肿瘤坏死因子受体相关蛋白因子4 细胞增殖

mir-615-5p缓解Aβ25-35诱导的ApOE4＋/-型海马细胞的凋亡和变性

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中风与神经疾病杂志 2016年第6期33卷 540-544页

作者：姚婕马巧亚阎丽萍张红梅姬文涛西安交通大学第二附属医院干部病房一病区(老年神经科) 陕西西安710004

目的探讨mir-615-5p对人海马细胞的凋亡和变性的影响及潜在机制。方法运用实时定量pCR检测正常、家族性AD和散发性AD老年人血液中mir-615-5p的表达水平,以及ApOE4+/-型人胚海马细胞和Aβ诱导的ApOE4+/-海马细胞中mir-615-5p的表达水平;... 详细信息

目的探讨mir-615-5p对人海马细胞的凋亡和变性的影响及潜在机制。方法运用实时定量pCR检测正常、家族性AD和散发性AD老年人血液中mir-615-5p的表达水平,以及ApOE4+/-型人胚海马细胞和Aβ诱导的ApOE4+/-海马细胞中mir-615-5p的表达水平;在Aβ预处理的ApOE4+/-型海马细胞中分别转染mir-615-5p mimic和inhibitor后检测细胞凋亡、氧化应激标志物含量和突触生长标志蛋白的表达水平;运用生物学信息分析和荧光素酶报告基因技术预测并验证mir-615-5p对ApOE基因的靶定调控关系。结果散发性AD患者和细胞模型中mir-615-5p的表达水平显著下调;过表达mir-615-5p显著抑制海马细胞的凋亡和细胞内氧化应激,并促进细胞内突触生长蛋白的表达,而沉默mir-615-5p则作用相反;mir-615-5p可靶定结合ApOE mRNA,并下调ApOE4+/-海马细胞中ApOE4蛋白的表达。结论 mir-615-5p通过靶向调节ApOE,缓解Aβ25-35诱导的ApOE4+/-型海马细胞的凋亡和变性。

关键词： mir-615-5p 阿尔茨海默病载脂蛋白4 细胞凋亡氧化应激

mir-615-5p靶向AKT1调控骨肉瘤细胞增殖、侵袭和迁移的机制研究

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MiR-615-5p靶向AKT1调控骨肉瘤细胞增殖、侵袭和迁移的机制研究

作者：范人杰中国人民解放军海军军医大学

学位级别：硕士

背景:骨肉瘤(Osteosarcoma,OS)是一种侵袭性骨癌,目前骨肉瘤的治疗方法主要为基于相关指南的标准治疗方案,包括手术切除、化疗、靶向治疗以及放疗等。骨肉瘤患者的5年生存率大约为60～70%;局部进展期、转移或者复发患者的五年生存率仅为... 详细信息

背景:骨肉瘤(Osteosarcoma,OS)是一种侵袭性骨癌,目前骨肉瘤的治疗方法主要为基于相关指南的标准治疗方案,包括手术切除、化疗、靶向治疗以及放疗等。骨肉瘤患者的5年生存率大约为60～70%;局部进展期、转移或者复发患者的五年生存率仅为20%。令人遗憾的是,尽管放化疗、靶向治疗以及其他多种辅助治疗的方法已经在大多数患者中应用,但是骨肉瘤患者的术后生存时间并未发生显著延长。传统治疗方法在骨肉瘤的治疗方面受到了限制。通过寻找基于肿瘤患者遗传学或表观遗传学的异常改变的治疗靶点,为提高骨肉瘤治疗效果,改善患者预后提供了可能。这其中,Micro RNAs(mi RNAs)已经得到了广泛的研究,mi RNAs在肿瘤的发生和发展中既可能发挥促癌作用,又可能发挥抑癌功能。当某种mi RNAs是促癌基因时,其过表达将促进肿瘤的发展;相反,如果某种mi RNAs是抑癌基因,则其过表达将抑制肿瘤的发展。例如,mi R-135b、mi R-150、mi R-542-5p和mi R-652等已被证实在骨肉瘤细胞中异常表达。mi R-615-5p在肝癌、淋巴瘤和恶性胶质瘤等多种肿瘤组织中的表达水平下调,且这种异常表达与肿瘤细胞的增殖、侵袭和迁移等存在直接或间接关系。mi R-615-5p的靶目标包括AKT、IGF1/IGF2等。AKT1基因的生理功能为编码丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,有研究认为,AKT1的上调促进了骨肉瘤的肺转移,AKT1的下调能够明显抑制MAT1介导的骨肉瘤细胞体外迁移和侵袭的促进作用,抑制异种移植裸鼠的肿瘤生长,减少转移性肺肿瘤的数量。因此,mi R-615-5p在多数肿瘤中具有显著的抑癌作用,AKT1信号通路在肿瘤的发生和发展过程中具有重要的作用,其在包括骨肉瘤在内的多种肿瘤的作用得到了确认,并且多种AKT1的调控因子已经被发现,但具体mi R-615-5p和AKT1在骨肉瘤中功能,以及两者相互作用关系仍有待进一步研究。目的:拟通过分子生物学实验探讨mi R-615-5p/AKT1调控轴在骨肉瘤中的表达水平,以及对骨肉瘤细胞生物学功能的影响。方法:收集29例2018年6月至2019年6月在我科手术治疗的骨肉瘤患者的癌变组织及癌旁正常组织。经中国科学院细胞研究所购买并培养骨肉瘤细胞(U2OS)及人正常成骨细胞(h FOB)。(1)q RT-pCR法检测癌变组织及癌旁正常组织、U2OS细胞及h FOB细胞中mi R-615-5p表达水平。(2)将U2OS细胞分为对照组、过表达组及无义对照组,分别用脂质体将mi R-615-5p模拟物及无义RNA转染至骨肉瘤U2OS细胞中,q RT-pCR检测细胞中mi R-615-5p表达水平,考察转染效率。(3)CCK-8法检测各组细胞活力及增殖情况。(4)划痕实验检测各组细胞侵袭能力。(5)Transwell实验检测各组细胞体外迁移能力。(6)通过生物信息学软件Targetscan7.2获取mi R-615-5p及AKT1的序列信息,考察二者序列是否具有片段性互补序列,分析二者可能存在的结合位点。(7)Western blot法检测三组细胞AKT1蛋白表达水平。(8)双荧光素酶报告实验检测mi R-615-5p和AKT1的结合关系。结果:(1)骨肉瘤对mi R-615-5p表达水平影响。(1)骨肉瘤组织中mi R-615-5p的相对表达水平低于癌旁正常组织,差异有统计学意义(p5)。(2)U2OS细胞中mi R-615-5p的相对表达水平低于h FOB细胞,差异有统计学意义(p5)。(2)mi R-615-5p过表达对骨肉瘤细胞生物学行为的影响。(1)过表达组mi R-615-5p的相对表达水平高于对照组,差异有统计学意义(p5)。(2)mi R-615-5p过表达后,U2OS细胞的细胞活力和增殖能力显著抑制,差异有统计学意义(p5)。(3)mi R-615-5p过表达后,U2OS细胞组的划痕愈合程度远低于对照组,差异有统计学意义(p5)。(4)mi R-615-5p过表达后,U2OS细胞组的穿过小室细胞数量低于对照组,差异有统计学意义(p5)。(3)考察mi R-615-5p通过AKT1影响U2OS细胞生物学行为的相关机制。(1)序列对比结果显示,mi R-615-5p与AKT1 3’-UTR存在结合位点。(2)mi R-615-5p过表达后,U2OS细胞AKT1蛋白表达水平降低,差异有统计学意义(p5)。(3)双荧光素酶报告基因分析mi R-615-5p与AKT1表达相互作用结果显示,与Control组比较,在转染mi R-615-5p的细胞中,AKT1 3’-UTR WT的荧光素酶活性下降,差异有统计学意义(p5)。结论:(1)mi R-615-5p在骨肉瘤组织和骨肉瘤细胞系U2OS中低表达。(2)mi R-615-5p

关键词：骨肉瘤 mir-615-5p AKT1 增殖侵袭迁移

mir-615-5p对肝癌细胞转移调控作用机制的研究

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MiR-615-5p对肝癌细胞转移调控作用机制的研究

作者：陈铮天津医科大学

学位级别：硕士

[目的]MicroRNAs(mirNAs)是一类长度约22nt的非编码单链小分子RNA,它们可以通过与靶mRNA分子的特异性序列互补结合来调节基因的表达。mirNAs对细胞的生长、增殖、迁移、侵袭、粘附及血管形成等有重要的调节作用。异常的mirNAs表达与人... 详细信息

[目的]MicroRNAs(mirNAs)是一类长度约22nt的非编码单链小分子RNA,它们可以通过与靶mRNA分子的特异性序列互补结合来调节基因的表达。mirNAs对细胞的生长、增殖、迁移、侵袭、粘附及血管形成等有重要的调节作用。异常的mirNAs表达与人类某些疾病包括肿瘤的发生发展都密切相关,它能够通过负性调节其靶基因的表达水平,间接地起到癌基因或抑癌基因的作用。同时,越来越多的研究表明某些mirNA在肿瘤中的下调可能与其启动子区域的高度甲基化有关。肝癌在世界范围内是最常见的五大实体肿瘤之一,其死亡率仅次于胃癌、食管癌,位居第三。近年来有研究表明,在肝癌发生发展的过程中许多基因的表达及活性都发生了明显的改变,其中就包括mirNA。本实验研究mir-615-5p对肝癌细胞生物学行为的影响同时检测其靶基因对肝癌细胞表型的影响,并深入探讨mir-615-5p发挥作用的具体分子机制及其可能的表达调控途径,为肿瘤的治疗研究提供理论基础和治疗靶位。[方法]首先我们通过实时定量pCR技术和亚硫酸氢盐测序的方法确定在肝癌细胞中mir-615-5p启动子区域的甲基化程度,然后我们通过过表达或封闭mir-615-5p的表达,利用体外划痕实验和血管形成拟态试验检测mir-615-5p对QGY-7703细胞体外迁移及血管形成能力的影响;随后,我们又将转染ASO-mir-615-5p的细胞注射入裸鼠脾内建立肝癌转移模型,进而研究mir-615-5p在体内对肝癌转移的影响。之后应用RNA干扰技术将靶基因的表达沉默后,通过体外划痕实验和血管形成拟态试验检测细胞体外迁移及血管形成能力的变化,接着通过一系列表型的挽救实验进一步验证mir-615-5p对其靶基因的直接调控及是否通过该靶基因发挥作用;最后,通过检测与EMT过程和粘附过程相关的分子变化,更进一步探讨了 mir-615-5p对肝癌转移和粘附的调控机制。【结果】亚硫酸氢盐测序方法检测发现,加5-Aza-CdR处理后的QGY-7703细胞中mir-615-5p启动子区域的甲基化程度与对照组相比有所降低。在QGY-7703细胞中,过表达mir-615-5p增强其功能后细胞的体外迁移能力及血管形成能力都明显降低。当封闭mir-615-5p后细胞的体外迁移能力及血管形成能力都明显升高。在体内实验中,封闭mir-615-5p可使肝内的转移灶明显增多。将Rab24基因沉默以后,细胞的体外迁移能力及血管形成能力都明显升高。Western blot还发现了过表达mir-615-5p或敲降Rab24的表达能够上调上皮细胞标志物E-Cadherin同时下调间皮细胞标志物Vimentin及ICAM-1的表达,此外,mir-615-5p的表达上调与Rab24的表达下调可使介导细胞-基质粘附的分子β 1-integrin表达降低。【结论】肝癌细胞QGY-7703中,mir-615-5p的表达水平受其启动子区域DNA甲基化的调控。过表达mir-615-5p可以直接调控靶基因Rab24的表达水平而抑制肝癌细胞的体外迁移能力及血管形成能力,起到抑癌基因的作用。mir-615-5p可抑制EMT过程从而抑制肝癌细胞的移动,还可通过调控β1-integrin的表达而影响肝癌细胞粘附能力。通过阐明mir-615-5p在肝癌中的具体作用机制及其靶基因的研究有利于我们对肝癌的发生发展进行深入的理解,同时也可能会为开发肝癌新的诊断和治疗手段提供新的理论依据和实验基础。

关键词： mirNA DNA 甲基化 mir-615-5p 肝癌 Rab24 转移

DNA甲基化异常对mir-615-5p在胰腺癌细胞株中表达影响的研究

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DNA甲基化异常对miR-615-5p在胰腺癌细胞株中表达影响的研究

作者：朱墨南京医科大学

学位级别：硕士

目的描述胰腺癌细胞株中DNA异常高甲基化对mir-615-5p表达抑制所起的作用。观察DNA甲基转移酶抑制剂对mir-615-5p在胰腺癌细胞株中甲基化状态和表达的影响。方法甲基化芯片筛选出在胰腺癌细胞株pANC-1中存在异常甲基化的5个mirNA(mir-61... 详细信息

目的描述胰腺癌细胞株中DNA异常高甲基化对mir-615-5p表达抑制所起的作用。观察DNA甲基转移酶抑制剂对mir-615-5p在胰腺癌细胞株中甲基化状态和表达的影响。方法甲基化芯片筛选出在胰腺癌细胞株pANC-1中存在异常甲基化的5个mirNA(mir-615-5p、mir-663、mir-663b、mir-675和mir-1826)。在对mir-615-5p的进一步研究中证实了它在胰腺癌细胞株及胰腺组织标本中的作用。通过甲基化特异性聚合酶链反应和重亚硫酸盐测序聚合酶链反应检测了mir-615-5p的表达与启动子区甲基化状态的相关性。采用去甲基化药物5-氮杂胞苷(5-aza-2-adeoxycytidine, 5-Aza-CdR)处理体外培养的胰腺癌细胞株pANC-1、SW1990、BXpC-3和CFpAC-1。运用RT-pCR定量检测用药前后mir-615-5p表达量的差异。结果mir-615-5p的甲基化水平在胰腺癌细胞株pANC-1、SW1990和CFpAC-1中明显高于胰腺癌细胞株BXpC-3中的水平。通过甲基化特异性聚合酶链反应和重亚硫酸盐测序聚合酶链反应的检测发现mir-615-5p的表达与其启动子区甲基化水平呈负向关系。用去甲基化药物5-Aza-CdR处理胰腺癌细胞株pANC-1、SW1990和CFpAC-1可以发现mir-615-5p甲基化水平的降低同时伴随着表达的重新激活。结论本研究证实了mir-615-5p启动子区的异常甲基化与其在胰腺癌细胞株中的表达沉默密切相关,同时对胰腺癌的诊断和治疗提供新的靶点。

关键词：胰腺癌 DNA甲基化 mir-615-5p 胰腺癌 5-Aza-CdR

microRNA-615-5p在胃腺癌中的表达及作用机制

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microRNA-615-5p在胃腺癌中的表达及作用机制

作者：王雪君江苏大学

学位级别：硕士

研究背景及目的:胃腺癌是最常见的消化道恶性肿瘤,目前其发病率在人体恶性肿瘤中排名第五,死亡率更是高居第三。Micro RNA(mirNA)是一类内源性非编码RNA,长度约为20-24个核苷酸。mirNA在胃腺癌的发生和发展中起着至关重要的作用。据报道... 详细信息

研究背景及目的:胃腺癌是最常见的消化道恶性肿瘤,目前其发病率在人体恶性肿瘤中排名第五,死亡率更是高居第三。Micro RNA(mirNA)是一类内源性非编码RNA,长度约为20-24个核苷酸。mirNA在胃腺癌的发生和发展中起着至关重要的作用。据报道,微小RNA-615-5p(micro RNA-615-5p,mir-615-5p)在多种癌症中发挥着重要作用,然而,在现有的文献中,胃腺癌中mir-615-5p的作用机制的研究还较少。本文的目的是为了探讨mir-615-5p在胃腺癌中的表达及作用机制。研究方法:1.选取48例胃腺癌组织样本及其相应癌旁组织样本,采用q RT-pCR法检测组织中mir-615-5p表达,分析mir-615-5p表达与胃腺癌临床特征的相关性。2.将人胃腺癌细胞系(BGC细胞、HGC细胞和MGC细胞)和人正常胃粘膜细胞(GES细胞)作为细胞水平的研究对象,q RT-pCR检测胃腺癌细胞系中mir-615-5p及IGF2 m RNA的表达情况。3.通过mir-615-5p在不同胃腺癌细胞中的表达情况,选取HGC细胞为过表达研宄对象,分为过表达对照组(转染control mimics)和mir-615-5p过表达组(转染mir-615-5p mimics),选取MGC细胞为敲减研宄对象,分为低表达对照组(转染control inhibitor)和mir-615-5p低表达组(转染mir-615-5p inhibitor)。4.采用平板克隆形成实验、细胞划痕实验、Transwell迁移和侵袭实验验证过表达或敲减mir-615-5p对胃腺癌细胞增殖、迁移、侵袭的影响。5.通过生物信息学预测mir-615-5p可能结合的靶基因。6.通过蛋白免疫印迹实验检测转染mir-615-5p mimics及inhibitor后的目的基因IGF2(insulin-like growth factor-2,IGF2)的表达水平以及pI3K/AKT信号通路相关蛋白的水平。7.采取平板克隆形成实验、细胞划痕实验、Transwell迁移和侵袭实验以及蛋白免疫印迹实验检测共转染mir-615-5p inhibitor及IGF2的小干扰RNA后,胃腺癌细胞增殖、迁移、侵袭的影响。8.共转染mir-615-5p inhibitor及IGF2的小干扰RNA后,通过蛋白免疫印迹实验检测pI3K/AKT信号通路相关蛋白的水平。研究结果:1.胃腺癌组织中mir-615-5p表达水平显著低于正常癌旁组织(pmir-615-5p表达水平与胃腺癌肿瘤的大小及淋巴结转移有关(pmir-615-5p表达水平显著低于正常胃黏膜上皮细胞GES(pmir-615-5p后可抑制胃腺癌细胞的增殖、迁移、侵袭;敲减mir-615-5p后可促进胃腺癌细胞的增殖、迁移、侵袭。4.通过生物信息学预测到IGF2是mir-615-5p的潜在靶基因,低水平的IGF2可以使得胃癌病人的生存时间增加。在敲减mir-615-5p的基础上,沉默IGF2可逆转敲减mir-615-5p对胃腺癌细胞发展的促进作用。5.过表达mir-615-5p后,IGF2、pI3K、AKT、m TOR蛋白的表达明显低于mir-615-5p NC组;敲减mir-615-5p后,IGF2、pI3K、AKT、m TOR蛋白的表达明显高于mir-615-5p NC组。共转染mir-615-5p inhibitor及si-IGF2后,IGF2、pI3K、AKT、m TOR蛋白的表达水平均可被逆转。研究结论:mir-615-5p在胃腺癌组织、细胞中的表达显著下调。过表达mir-615-5p可以抑制胃腺癌细胞的增殖、迁移、侵袭。此外,mir-615-5p可以通过直接靶向IGF2使pI3K/AKT/m TOR信号通路失活,从而抑制胃腺癌的发生发展。mir-615-5p可能为胃腺癌的诊断、预后及治疗的新靶点。

关键词： mir-615-5p 胃腺癌 IGF2 pI3K/AKT/mTOR信号通路

circRNA-Zfp609对C2C12成肌细胞增殖和分化的影响

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中国畜牧兽医 2022年第12期49卷 1435-1444页

作者：刘壮何茹月曹洋李村院张云峰胡圣伟省部共建绵羊遗传改良与健康养殖国家重点实验室石河子832003 石河子大学生命科学学院石河子832003

【目的】试验旨在探究circRNA-Zfp609调节C2C12成肌细胞增殖和分化的潜在分子机制。【方法】利用RT-pCR和测序分析小鼠骨骼肌组织和C2C12成肌细胞中circRNA-Zfp609的表达,实时荧光定量pCR检测小鼠心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、胃、小... 详细信息

【目的】试验旨在探究circRNA-Zfp609调节C2C12成肌细胞增殖和分化的潜在分子机制。【方法】利用RT-pCR和测序分析小鼠骨骼肌组织和C2C12成肌细胞中circRNA-Zfp609的表达,实时荧光定量pCR检测小鼠心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、胃、小肠、骨骼肌组织及增殖12、24、36、48 h和分化0、1、3、5 d的C2C12成肌细胞中circRNA-Zfp609的相对表达量;实时荧光定量pCR检测分化0、1、3、5 d的C2C12成肌细胞中肌细胞生成素(MyoG)和肌球蛋白重链(MyHC)的相对表达量。用circRNA-Zfp609的干扰表达载体(siRNA)干扰细胞,通过CCK-8测定siRNA对C2C12成肌细胞增殖率的影响;用实时荧光定量pCR检测siRNA干扰对circRNA-Zfp609、MyoG和MyHC相对表达量的影响。通过TargetScan 7.0和mirDB软件预测circRNA-Zfp609上与肌肉分化相关的mirNA位点,将筛选的mirNAs的过表达载体转染HEK293T细胞,利用双荧光素酶报告试验验证circRNA-Zfp609与mirNA的互作关系。根据mirNAs对circRNA-Zfp609的互作,构建circRNA-Zfp609的野生型和突变型载体并转染HEK293T细胞,利用双荧光素酶报告试验验证circRNA-Zfp609对mirNA的靶向关系。【结果】pCR和测序结果表明,小鼠骨骼肌中可表达circRNA-Zfp609;circRNA-Zfp609在小鼠骨骼肌中表达水平最高,在其他组织中的表达量由高到低依次是肾脏、肺脏、心脏、肝脏、胃、脾脏和小肠。与12 h相比,在C2C12成肌细胞增殖的36和48 h circRNA-Zfp609的相对表达量显著增加(p5);与分化第0天相比,在C2C12成肌细胞分化的第1、3和5天circRNA-Zfp609的相对表达量均显著增加(p5),MyoG、MyHC的相对表达量均极显著增加(pp609相对表达量均极显著降低(pp5)。circRNA-Zfp609上有mir-150-5p、mir-327、mir-344g-3p和mir-615-5p 4种与肌肉分化相关的mirNAs。circRNA-Zfp609与mir-615-5p的吸附能力最强,具有靶向结合作用。circRNA-Zfp609可以作为分子海绵与调控肌肉分化相关的mir-615-5p相互作用。【结论】circRNA-Zfp609在小鼠的组织中广泛表达,在骨骼肌中表达水平最高;circRNA-Zfp609在C2C12成肌细胞增殖和分化的不同时期差异表达,circRNA-Zfp609上有4个与肌肉分化相关的mirNAs,其中mir-615-5p与circRNA-Zfp609具有靶向关系。本研究结果可为与家畜骨骼肌生长发育相关的研究提供参考。

关键词： circRNA-Zfp609 C2C12成肌细胞细胞增殖细胞分化 mir-615-5p