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Regulation role of miR-204 on SIRT1/VEGF in metabolic memory induced by high glucose in human retinal pigment epithelial cells

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International Journal of Ophthalmology(English edition) 2024年第7期17卷 1232-1237页

作者： Qiao-Ling Lai Ting Xie Wei-Dong Zheng Yan Huang Department of Ophthalmology Renmin Hospital of Wuhan UniversityWuhan 460060Hubei ProvinceChina Department of Ophthalmology The First Affiliated Hospital of Fujian Medical UniversityFuzhou 350004Fujian ProvinceChina Department of Ophthalmology&Optometry Fujian Medical UniversityFuzhou 350004Fujian ProvinceChina

AIM:To examine the regulatory role of microrna-204(miR-204)on silent information regulator 1(SIRT1)and vascular endothelial growth factor(VEGF)under highglucose-induced metabolic memory in human retinal pigment epithelial(hRPE)cells.METHODS:Cells were cultured with either normal(5 mmol/L)or high D-glucose(25 mmol/L)concentrations for 8d to establish control and high-glucose groups,respectively.To induce metabolic memory,cells were cultured with 25 mmol/L D-glucose for 4d followed by culture with 5 mmol/L D-glucose for 4d.In addition,exposed in 25 mmol/L D-glucose for 4d and then transfected with 100 nmol/L miR-204 control,miR-204 inhibitor or miR-204 mimic in 5 mmol/L D-glucose for 4d.Quantitative reverse transcription-polymerase chain reaction(RT-qPCR)was used to detect miR-204 mRNA levels.SIRT1 and VEGF protein levels were assessed by immunohistochemical and Western blot.Flow cytometry was used to investigate apoptosis rate.RESULTS:It was found that high glucose promoted miR-204 and VEGF expression,and inhibited SIRT1 activity,even after the return to normal glucose culture conditions.Upregulation of miR-204 promoted apoptosis inhibiting SIRT1 and increasing VEGF expression.However,downregulation of miR-204 produced the opposite effects.CONCLUSION:The study identifies that miR-204 is the upstream target of SIRT1and VEGF,and that miR-204 can protect hRPE cells from the damage caused by metabolic memory through increasing SIRT1 and inhibiting VEGF expression.

关键词： human retinal pigment epithelial metabolic memory microrna-204 silent information regulator 1 vascular endothelial growth factor high-glucose

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Serum microrna-204 levels are associated with long-term cardiovascular disease risk based on the Framingham risk score in patients with type 2 diabetes: results from an observational study

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Journal of Geriatric Cardiology 2020年第6期17卷 330-337页

作者： Rui WANG Yao-Dong DING Wen GAO Yu-Qiang PEI Jia-Xin YANG Ying-Xin ZHAO Xiao-Li LIU Hua SHEN Shuo ZHANG Lei YU Hai-Long GE Department of Cardiology Beijing Anzhen HospitalCapital Medical UniversityBeijingChina Department of Cardiology Bayannaoer City HospitalInner MongoliaChina Department of Gynecology and Obstetrics Beijing Tiantan HospitalCapital Medical UniversityBeijingChina Department of Cardiology the Third Hospital of JinanShandongChina

Background Previous studies have demonstrated that micro RNA-204(mi R-204) is involved in atherosclerosis and vascular calcification. However, the value of mi R-204 as the predictive biomarker for cardiovascular disease(CVD) remains unclear. We aimed to evaluate the association between the circulating mi R-204 level and ten-year CVD risk based on the Framingham risk score(FRS). Methods In this retrospective study, we enrolled 194 consecutive patients with type 2 diabetes mellitus(T2DM) without CVD in Beijing Anzhen Hospital between January 2015 and September 2016. We used the FRS to evaluate the risk of CVD for each patient. Circulating mi R-204 levels were measured by quantitative real-time polymerase chain reaction. Results Circulating mi R-204 levels were significantly lower in the group of patients(0.49 ± 0.13) at high risk of CVD(FRS > 20%) than in the low(FRS 204 levels(r =-0.421, P 204 level was independently associated with an increased risk of CVD after adjusting for conventional risk factors(OR = 0.876, 95% CI: 0.807–0.950, P = 0.001). Receiver-operating characteristic curve analysis showed that the circulating mi R-204 level can predict the high risk of CVD with higher specificity than the traditional risk factor of high systolic blood pressure or the protective factor of high-density lipoprotein cholesterol. Conclusions Our study demonstrated that patients with lower circulating mi R-204 levels were at high risk for CVD. After adjustment for potential confounders, mi R-204 was independently associated with CVD in patients with T2DM.

关键词： Cardiovascular disease Framingham risk score microrna-204 Type 2 diabetes mellitus

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三七叶总皂苷调控miR-204对癫痫大鼠海马神经元的保护作用

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武汉大学学报（医学版） 2024年第4期45卷 391-397页

作者：许可张菁华李鑫杨立顺天津市北辰区中医医院脑病科天津300400 天津市北辰区中医医院检验科天津300400

目的:探究三七叶总皂苷(TSPNL)对癫痫(EP)大鼠miRNA-204和海马神经元损伤的影响。方法:将75只SD大鼠随机分为空白对照组、EP组、TSPNL组、TSPNL+Antagomir-NC组、TSPNL+Antagomir-miR-204组,每组15只。采用锂-毛果芸香碱制备EP大鼠模型... 详细信息

目的:探究三七叶总皂苷(TSPNL)对癫痫(EP)大鼠miRNA-204和海马神经元损伤的影响。方法:将75只SD大鼠随机分为空白对照组、EP组、TSPNL组、TSPNL+Antagomir-NC组、TSPNL+Antagomir-miR-204组,每组15只。采用锂-毛果芸香碱制备EP大鼠模型。给予相应的干预后,观察大鼠行为学变化;使用脑电图(EEG)监测大鼠脑电图改变情况;RT-qPCR检测海马组织miR-204、原肌球蛋白相关激酶B(TrkB)、白细胞介素(IL)1β、IL-6的mRNA表达;HE染色检测海马组织病理学变化;免疫荧光法(IF)检测海马组织神经元特异核蛋白(NeuN)阳性细胞数;流式细胞仪检测海马神经元细胞凋亡率;Western Blot检测海马组织凋亡相关蛋白B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、半胱天冬氨酸蛋白酶3(Caspase-3)表达。结果:与EP组比,TSPNL组和TSPNL+Antagomir-NC组大鼠的Racine评分、90 min内癫痫发作次数和持续时间、棘慢波数目、海马组织TrkB mRNA、IL-1βmRNA和IL-6 mRNA表达、神经元细胞凋亡率、Bax和Caspase-3表达降低(P204表达、海马CA1、CA3区NeuN阳性细胞数、Bcl-2表达升高(P204的拮抗剂可明显加重海马神经元损伤,逆转TSPNL的抗EP作用。结论:TSPNL可能通过上调miR-204的表达,保护EP大鼠海马神经元损伤。

关键词：三七叶总皂苷癫痫海马神经元凋亡 microrna-204

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microrna-204在鼻咽癌中的表达及生物学意义研究

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中国免疫学杂志 2015年第6期31卷 822-826页

作者：蒋成义汪洪涛周蕾江涛许亚佳蚌埠医学院第一附属医院蚌埠233004 蚌埠医学院免疫学教研室蚌埠233030

目的:研究微小RNA 204(microrna-204,miR-204)在鼻咽癌(Nasopharyngeal carcinoma,NPC)中的表达情况及生物学意义。方法:收集2012年3月至2014年3月间于我院耳鼻喉头颈外科行组织病理活检的NPC组织及对应癌旁鼻黏膜组织共43例,运用q RT-... 详细信息

目的:研究微小RNA 204(microrna-204,miR-204)在鼻咽癌(Nasopharyngeal carcinoma,NPC)中的表达情况及生物学意义。方法:收集2012年3月至2014年3月间于我院耳鼻喉头颈外科行组织病理活检的NPC组织及对应癌旁鼻黏膜组织共43例,运用q RT-PCR技术检测miR-204在NPC组织及癌旁组织中的表达水平,统计分析miR-204表达水平与患者临床病理资料间的相关性;免疫组化检测鼻咽癌组织中miR-204下游潜在靶点Bcl-2及SIRT1蛋白的表达水平,统计分析Bcl-2及SIRT1蛋白与miR-204表达间的相关性;采用人工合成的miR-204模拟物(miR-204 mimics)转染人鼻咽癌CNE-2细胞,分别采用q RT-PCR及Western blot检测转染后Bcl-2及SIRT1 mRNA和蛋白的表达变化。结果:miR-204在NPC组织中表达水平显著低于对应癌旁鼻黏膜组织(P204低表达与肿瘤淋巴结转移(P204与其下游潜在靶点Bcl-2及SIRT1的表达呈显著负相关关系(P204转染人鼻咽癌CNE-2细胞后可显著降低细胞内Bcl-2及SIRT1 mRNA和蛋白的表达水平(P204在鼻咽癌组织中表达下调并与肿瘤恶性临床病理特征有关,miR-204可能通过下调Bcl-2及SIRT1的表达来抑制鼻咽癌的发生、发展过程。

关键词： microrna-204 鼻咽癌 Bcl-2 SIRT1

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microrna-204在非小细胞肺癌患者组织中的表达及对癌细胞增殖和凋亡的影响

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中国现代医学杂志 2018年第4期28卷 57-61页

作者：许有忠田作春李才海南省第三人民医院心胸外科海南三亚572000

目的观察microrna-204(miR-204)在非小细胞肺癌(NSCLC)患者体内的表达水平及对癌细胞增殖的影响,探讨miR-204在非小细胞肺癌中的临床意义及可能分子机制。方法实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miR-204在肺癌及癌旁组织中的表达情... 详细信息

目的观察microrna-204(miR-204)在非小细胞肺癌(NSCLC)患者体内的表达水平及对癌细胞增殖的影响,探讨miR-204在非小细胞肺癌中的临床意义及可能分子机制。方法实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miR-204在肺癌及癌旁组织中的表达情况;用化学合成的miR-204模拟物和抑制物转染人非小细胞肺癌A-549肺癌细胞,CCK-8法检测细胞增殖的情况,流式检测细胞凋亡情况,qRT-PCR、Western blot法分别检测Bcl-2的mRNA和蛋白表达。结果 miR-204在肺癌组织中表达水平与对应癌旁组织比较,差异有统计学意义(P204低表达与分期、肿瘤大小、肿瘤淋巴结转移相关(P204可抑制A-549细胞的增殖,促进细胞凋亡,并下调Bcl-2的mRNA与蛋白表达水平。结论 miR-204在非小细胞肺癌组织中表达下调并与肺癌恶性临床病理特征有关,miR-204可能通过调节Bcl-2的表达从而影响非小细胞肺癌细胞的增殖及凋亡。

关键词：非小细胞肺癌 microrna-204 细胞增殖细胞凋亡 Bcl-2

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探讨microrna-204调控胶原海绵及骨髓基质细胞向成骨分化后修复牙槽嵴裂的疗效

探讨microRNA-204调控胶原海绵及骨髓基质细胞向成骨分化后修复牙...

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第十四次中国口腔颌面外科学术会议

作者：谢福平吴烨林李嵩牛刚刘欢欢陈嘉民福建医科大学附属口腔医院口腔颌面外科福建医科大学附属第一医院口腔颌面外科

研究目的:探讨microrna-204调控胶原海绵及骨髓基质细胞向成骨分化后修复牙槽嵴裂的疗效。研究方法:建立大鼠牙槽嵴裂动物模型后,取大鼠骨髓基质细胞培养,观察microrna-204体外调控骨髓基质细胞向成骨细胞分化的能力及质量。待细胞实验... 详细信息

研究目的:探讨microrna-204调控胶原海绵及骨髓基质细胞向成骨分化后修复牙槽嵴裂的疗效。研究方法:建立大鼠牙槽嵴裂动物模型后,取大鼠骨髓基质细胞培养,观察microrna-204体外调控骨髓基质细胞向成骨细胞分化的能力及质量。待细胞实验完成后,培养microrna-204调控胶原海绵骨髓基质细胞复合物,将其修复牙槽突裂缺损,观察新骨形成的质量。研究结果:microrna-204调控骨髓基质细胞向成骨细胞分化,促进其增殖,胶原海绵复合物修复牙槽嵴裂后新骨形成质量高。研究结论:microrna-204调控胶原海绵及骨髓基质细胞复合物可用来修复牙槽嵴裂。

关键词： microrna-204 牙槽嵴裂骨髓基质细胞胶原海绵

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NDV7793-HN慢病毒过表达载体的构建及其对诱导人肺腺癌A549细胞凋亡机制的初步探索

NDV7793-HN慢病毒过表达载体的构建及其对诱导人肺腺癌A549细胞凋...

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作者：林宇宁广西医科大学

学位级别：硕士

研究背景及目的新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)属于禽类病毒,可引起禽类爆发性感染,给家禽业造成严重的经济损失,被列为必须报告的A类传染病之一;同时NDV还是一种溶瘤病毒,对人类基本不致病,是很有潜力的肿瘤生物治疗候选病... 详细信息

研究背景及目的新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)属于禽类病毒,可引起禽类爆发性感染,给家禽业造成严重的经济损失,被列为必须报告的A类传染病之一;同时NDV还是一种溶瘤病毒,对人类基本不致病,是很有潜力的肿瘤生物治疗候选病毒株。NDV能感染肿瘤细胞,直接诱导肿瘤细胞膜融合,引起肿瘤细胞坏死及凋亡,是该病毒抗肿瘤的主要机制之一。血凝素神经氨酸酶(hemagglutinin-neuraminidase,HN)位于病毒包膜上,是NDV主要的抗肿瘤蛋白。慢病毒(lentivirus)为二倍体RNA逆转录病毒,其载体以慢病毒的基因组为基础,去除多个与病毒致病性相关的基因序列,然后在载体基因组中插入实验所需目的基因片段。因转染效率高,慢病毒载体可感染细胞种类多,而且能容纳较大目的基因片段,因此该载体在研究上应用较广。Micro RNA是一由20-24个核苷酸组成的小RNA,在肿瘤的发展进程中具有重要作用,研究表明micro RNA-204与肺癌细胞凋亡有关;Bcl-2是一种癌基因,具有抑制凋亡的作用,与肺癌细胞凋亡有关。研究发现,转染有NDV-HN基因的肝癌细胞株细胞凋亡与NDV-HN有关,表明NDV可通过HN致肝癌细胞凋亡而起抗癌作用。本实验拟通过构建过表达HN蛋白的人肺腺癌A549细胞株,研究HN诱导肺腺癌A549细胞的凋亡情况,以及细胞micro RNA-204的表达和抗凋亡基因Bcl-2的表达,为NDV7793-HN用于抗肿瘤生物治疗的基础研究提供理论依据。方法1.由本实验室保存的带有NDV7793-HN基因全长的质粒pc DNA3.1-HN,送公司构建sf GFP-HN载体,测序鉴定NDV7793-HN。2.将sf GFP-HN质粒和辅助质粒PH1、PH2共转染于293V细胞进行慢病毒包装,收集上清液,浓缩病毒颗粒,将实验组慢病毒命名为Lv-sf GFP-HN;同时设置质粒空载对照组,同样的方法进行空载组慢病毒包装和浓缩,将空载组慢病毒命名为Lv-sf GFP。3.将所得慢病毒颗粒10倍梯度稀释,感染293V细胞,于荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)表达情况,同时利用嘌呤霉素(Puromycin)进行慢病毒滴度测定,同时进行药物筛选,挑选出稳定转染的单克隆细胞株293V-sf GFP-HN和293V-sf GFP。4.将所得慢病毒颗粒感染人肺腺癌A549细胞,感染72 h后于荧光显微镜下观察GFP表达,并更换含有Puromycin的筛选培养基进行药筛,挑选稳定转染的A549-sf GFP-HN细胞和A549-sf GFP细胞单克隆细胞株。5.流式细胞仪检测293V-sf GFP-HN细胞、293V-sf GFP细胞、A549-sf GFP-HN细胞和A549-sf GFP细胞的转染率。6.RT-PCR检测293V-sf GFP-HN细胞、293V-sf GFP细胞、293V细胞、A549-sf GFP-HN细胞和A549-sf GFP细胞转染人A549细胞后HN的m RNA的表达。7.Western blot检测A549-sf GFP-HN细胞、A549-sf GFP细胞和A549细胞HN蛋白的表达。8.RT-PCR检测A549-sf GFP-HN细胞、A549-sf GFP细胞和A549细胞micro RNA-204的表达。9.RT-PCR和Western blot检测A549-sf GFP-HN细胞、A549-sf GFP细胞和A549细胞中Bcl-2的表达。10.Western blot检测A549-sf GFP-HN细胞、A549-sf GFP细胞和A549细胞中Bcl-2蛋白的表达。11.流式细胞仪检测A549-sf GFP-HN细胞和A549细胞的凋亡及其在加顺铂后的凋亡情况。结果1.测序显示,本实验成功构建载体质粒sf GFP-HN,与实验室保存的pc DNA3.1-HN序列一致。2.sf GFP-HN转染293V细胞48 h后,荧光显微镜下观察到细胞有GFP表达,表明质粒共转染成功。3.sf GFP-HN转染293V细胞72 h后,荧光显微镜下观察到细胞有GFP表达,表明慢病毒包装成功,Puromycin滴度测定显示Lv-sf GFP-HN浓缩病毒滴度为1×10 TU/ml,Lv-sf GFP浓缩病毒滴度为1×10 TU/ml。4.sf GFP-HN转染人A549细胞72 h后,荧光显微镜下观察到人A549细胞有GFP表达,表明慢病毒成功转染人A549,用Puromycin筛选出稳定转染的A549-sf GFP-HN细胞株和A549-sf GFP细胞株。5.流式细胞仪检测293V-sf GFP-HN细胞、293V-sf GFP细胞、A549-sf GFP-HN细胞和A549-sf GFP细胞的转染率,转染效率都达到90%

关键词： NDV 血凝素神经氨酸酶(HN) A549 慢病毒过表达载体 microrna-204 Bcl-2

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