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microrna-146a Promotes Embryonic Stem Cell Differentiation towards Vascular Smooth Muscle Cells through Regulation of Kruppel-like Factor 4

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Current Medical Science 2023年第2期43卷 223-231页

作者： Qing ZHANG Rong-rong PAN Yu-tao WU Yu-miao WEI Department of Cardiology Union HospitalTongji Medical CollegeHuazhong University of Science and TechnologyWuhan 430022China Hubei Key Laboratory of Biological Targeted Therapy Union HospitalTongji Medical CollegeHuazhong University of Science and TechnologyWuhan 430022China Hubei Provincial Engineering Research Center of Immunological Diagnosis and Therapy for Cardiovascular Diseases Union HospitalTongji Medical CollegeHuazhong University of Science and TechnologyWuhan 430022China Department of Cardiology Affiliated Cixi HospitalWenzhou Medical UniversityNingbo 315300China Department of Cardiology First Affiliated HospitalSchool of MedicineZhejiang UniversityHangzhou 310003China

Objective Vascular smooth muscle cell(VSMC)differentiation from stem cells is one source of the increasing number of VSMCs that are involved in vascular remodeling-related diseases such as hypertension,atherosclerosis,and ***-146a(miR-146a)has been proven to be involved in cell proliferation,migration,and tumor ***,little is known about the functional role of miR-146a in VSMC differentiation from embryonic stem cells(ESCs).This study aimed to determine the role of miR-146a in VSMC differentiation from *** Mouse ESCs were differentiated into VSMCs,and the cell extracts were analyzed by Western blotting and *** addition,luciferase reporter assays using ESCs transfected with miR-146a/mimic and plasmids were ***,C57BL/6J female mice were injected with mimic or miR-146a-overexpressing ESCs,and immunohistochemistry,Western blotting,and RT-qPCR assays were carried out on tissue samples from these *** miR-146a was significantly upregulated during VSMC differentiation,accompanied with the VSMC-specific marker genes smooth muscle-alpha-actin(SMαA),smooth muscle 22(SM22),smooth muscle myosin heavy chain(SMMHC),and ***,overexpression of miR-146a enhanced the differentiation process in vitro and in ***,the expression of Kruppel-like factor 4(KLF4),predicted as one of the top targets of miR-146a,was sharply decreased in miR-146a-overexpressing ***,inhibiting KLF4 expression enhanced the VSMC-specific gene expression induced by miR-146a overexpression in differentiating *** addition,miR-146a upregulated the mRNA expression levels and transcriptional activity of VSMC differentiation-related transcription factors,including serum response factor(SRF)and myocyte enhancer factor 2c(MEF-2c).Conclusion Our data support that miR-146a promotes ESC-VSMC differentiation through regulating KLF4 and modulating the transcription factor activity of VSMCs.

关键词： microrna-146a embryonic stem cells differentiation vascular smooth muscle cells Kruppel-like factor 4

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microrna-146a对牙龈卟啉单胞菌脂多糖刺激下淋巴细胞分泌细胞因子的调节作用

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华西口腔医学杂志 2021年第1期39卷 26-31页

作者：司雨婷宋金花方珍韩晓哲蒋少云天津医科大学口腔医院牙周科天津300070 北京大学深圳医院口腔医学中心牙周科深圳518036 美国哈佛大学牙学院Forsyth研究所美国剑桥02146

目的探讨microrna-146a(miR-146a)对牙龈卟啉单胞菌(***)脂多糖(LPS)刺激下淋巴细胞分泌细胞因子的作用。方法从小鼠脾脏收集淋巴细胞。实时定量聚合酶链反应和酶联免疫反应用于检测淋巴细胞在*** LPS、miR-146a模拟物或抑制剂处理后细... 详细信息

目的探讨microrna-146a(miR-146a)对牙龈卟啉单胞菌(***)脂多糖(LPS)刺激下淋巴细胞分泌细胞因子的作用。方法从小鼠脾脏收集淋巴细胞。实时定量聚合酶链反应和酶联免疫反应用于检测淋巴细胞在*** LPS、miR-146a模拟物或抑制剂处理后细胞因子的表达。结果与*** LPS未刺激组相比,*** LPS能促进白细胞介素(interleukin,IL)-1β、IL-6、细胞核因子κB受体活化因子配体(RANKL)和IL-10表达(P0.05)。与阴性对照组相比,*** LPS处理的淋巴细胞中miR-146a模拟物抑制IL-1β、IL-6和RANKL表达(P146a抑制剂对这些细胞因子产生相反的效果(P146a可通过抑制淋巴细胞IL-1β、IL-6和RANKL表达,促进IL-10和OPG表达,从而抑制*** LPS的炎性作用,为骨改建提供良好的成骨环境。

关键词：牙周炎 microrna-146a 细胞因子淋巴细胞脂多糖

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microrna-146a在脂多糖诱导的肺泡巨噬细胞中表达的动态变化

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中华急诊医学杂志 2011年第2期20卷 134-136页

作者：曾振国李勇刘芬丁成志邵强钱克俭南昌大学第一附属医院重症医学科南昌330006 南昌大学第一附属医院肿瘤科南昌330006

目的观察并分析microrna-146a（miR-146a）在脂多糖（LPS）刺激肺泡巨噬细胞中不同时间表达的变化,为探讨miR-146a对肺泡巨噬细胞炎症反应的调控作用及机制奠定基础.方法体外培养的肺泡巨噬细胞系NR8383分成LPS刺激组和磷酸盐缓冲液（... 详细信息

目的观察并分析microrna-146a（miR-146a）在脂多糖（LPS）刺激肺泡巨噬细胞中不同时间表达的变化,为探讨miR-146a对肺泡巨噬细胞炎症反应的调控作用及机制奠定基础.方法体外培养的肺泡巨噬细胞系NR8383分成LPS刺激组和磷酸盐缓冲液（PBS）对照组,1 μg/mL的LPS刺激3 h,6 h,12 h后采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测细胞上清液中TNF-α的表达水平,实时荧光定量PCR（Taqman探针法）检测细胞miR-146a的表达情况.运用SPSS13.0统计软件,采取单因素方差分析或t检验进行数据统计分析.结果 ①LPS刺激3 h,6 h,12 h,细胞上清液中TNF-α的表达比对照组明显升高（P＜0.01）;②LPS刺激6 h,12 h细胞中miR-146a表达增高（P＜0.01）,且呈持续增高趋势.结论 LPS刺激后,miR-146a在NR8383肺泡巨噬细胞中的表达上调,且随着刺激时间的延长,miR-146a的表达有增高的趋势,推测其可能参与了肺泡巨噬细胞的炎症反应调控.

关键词： microrna-146a 脂多糖肺泡巨噬细胞肿瘤坏死因子-α 炎症反应

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microrna-146a生物学作用的研究进展

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世界华人消化杂志 2019年第18期27卷 1155-1160页

作者：吴慧范恒刘星星华中科技大学同济医学院湖北省武汉市430030 华中科技大学同济医学院附属协和医院中西医结合科湖北省武汉市430022

microrna是一种内源性单链非编码小分子RNA,通过与靶mRNA的特异性结合,以降解mRNA或阻碍其翻译从而在转录后水平调节靶mRNA的表达.microrna-146a参与机体的多种生物学过程,具有多种生物学功能.本文将从其控制炎症反应,调节免疫,介导髓... 详细信息

microrna是一种内源性单链非编码小分子RNA,通过与靶mRNA的特异性结合,以降解mRNA或阻碍其翻译从而在转录后水平调节靶mRNA的表达.microrna-146a参与机体的多种生物学过程,具有多种生物学功能.本文将从其控制炎症反应,调节免疫,介导髓样细胞增殖以及肿瘤发生发展等几个方面进行综述.

关键词： microrna-146a 生物学作用综述

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microrna-146a在2型糖尿病周围神经病变患者血清中的表达及其临床意义

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中国慢性病预防与控制 2019年第1期27卷 28-31页

作者：王征李艳芳北京市门头沟区中医医院糖尿病科北京102300 北京大学第三医院中心实验室

目的探讨2型糖尿病周围神经病变(DPN)患者血清中microrna-146a(miR-146a)的表达及其临床意义,为DPN的诊断提供依据。方法选取2015年1月至2017年10月在北京市门头沟区中医医院内分泌科确诊的131例2型糖尿病患者为研究对象,根据是否并发... 详细信息

目的探讨2型糖尿病周围神经病变(DPN)患者血清中microrna-146a(miR-146a)的表达及其临床意义,为DPN的诊断提供依据。方法选取2015年1月至2017年10月在北京市门头沟区中医医院内分泌科确诊的131例2型糖尿病患者为研究对象,根据是否并发周围神经病变分为无并发症组(NDPN组)46例和周围神经病变组85例(DPN组),另选同期39例健康体检者为对照组(NC组)。测定研究对象的外周血miR-146a水平,高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、糖化血红蛋白、空腹血糖、空腹C肽、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素1β(IL-1β)水平,测定踝肱指数,测定研究对象运动神经传导速度(MNCV)、感觉神经传导速度(SNCV)。采用SPSS 13.0软件进行方差分析、Kruskal-Wallis H检验和χ2检验;相关性分析采用Pearson相关分析;DPN患病的影响因素采用logistic多元逐步回归分析,绘制受试者工作特征(ROC)曲线。结果 DPN组和NDPN组的血清miR-146a水平明显低于对照组,DPN组低于NDPN组,差异均有统计学意义(P146a水平与病程、MNCV、SNCV、IL-1β、TNF-α呈负相关,均有统计学意义(r值分别为-0.413、-0.122、-0.153、-0.416和-0.251)。多元logistic回归分析结果显示,miR-146a(OR=0.789,95%CI:0.769～0.948)是DPN的保护因素,IL-1β(OR=24.754,95%CI:3.757～176.462)、TNF-α水平(OR=5.894,95%CI:1.683～22.367)是DPN的独立危险因素(P146a的曲线下面积为0.764(95%CI:0.585～0.799),灵敏度和特异度分别为74.1%和63.6%。结论 miR-46a在DPN患者血清中的含量显著降低,与DPN的发生密切相关,该指标可作为诊断DPN的标志物。

关键词： microrna-146a 糖尿病周围神经病变糖尿病,2型

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microrna-146a对急性胰腺炎胰腺腺泡细胞增殖及凋亡的影响及其机制研究

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中国现代医学杂志 2022年第12期32卷 14-19页

作者：王宝友潘宏年王修中王凤汪发勇六安市人民医院消化内科安徽六安237005

目的探讨microrna-146a(miR-146a)对急性胰腺炎胰腺腺泡细胞增殖及凋亡的影响,并分析相关机制。方法体外诱导并培养急性胰腺炎MPC-83细胞,将急性胰腺炎MPC-83细胞分为阴性对照组(mimics-NC组)、过表达miR-146a组(miR-146a-mimics组),另... 详细信息

目的探讨microrna-146a(miR-146a)对急性胰腺炎胰腺腺泡细胞增殖及凋亡的影响,并分析相关机制。方法体外诱导并培养急性胰腺炎MPC-83细胞,将急性胰腺炎MPC-83细胞分为阴性对照组(mimics-NC组)、过表达miR-146a组(miR-146a-mimics组),另以未经诱导处理的MPC-83细胞为空白对照组(NG组)。采用实时荧光定量聚合酶链反应检测各组MPC-83细胞miR-146a,MTT法检测细胞增殖情况,流式细胞仪检测细胞凋亡情况,酶联免疫吸附试验检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6),Western blotting检测增殖细胞核抗原(PCNA)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、B淋巴细胞瘤2(Bcl-2)、核转录因子-κB p65(NF-кB p65)蛋白的表达。结果急性胰腺炎细胞模型建立成功,成功转染后,与NG组、mimicsNC组比较,miR-146a-mimics组细胞凋亡率,TNF-α、IL-6、Bax和NF-κB p65蛋白相对表达量降低(P146a可抑制急性胰腺炎MPC-83细胞凋亡并促进细胞增殖,其作用可能通过抑制NF-кB通路活化来实现。

关键词：急性胰腺炎胰腺腺泡细胞 microrna-146a 核因子-κB通路增殖凋亡

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microrna-146a在脓毒症髓源抑制细胞中的表达及其意义

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军事医学 2016年第3期40卷 217-220,225页

作者：赵建立艾芬李占飞华中科技大学同济医学院附属武汉市中心医院急诊科武汉430000 华中科技大学同济医学院附属同济医院创伤外科武汉430030

目的比较脓毒症3和7 d的髓源抑制细胞(MDSC)表型差异,了解其与MDSC增殖活性及免疫功能变化间的关系,通过检测MDSC中微小RNA-146a(microrna-146a,miR-146a)的表达,探讨miR-146a对脓毒症MDSC免疫抑制活性的影响。方法采用盲肠穿孔结扎技... 详细信息

目的比较脓毒症3和7 d的髓源抑制细胞(MDSC)表型差异,了解其与MDSC增殖活性及免疫功能变化间的关系,通过检测MDSC中微小RNA-146a(microrna-146a,miR-146a)的表达,探讨miR-146a对脓毒症MDSC免疫抑制活性的影响。方法采用盲肠穿孔结扎技术制备C57BL/6J小鼠脓毒症模型,运用磁珠分选方法收集分离CLP后3和7 d时小鼠骨髓MDSC(CD11b+Gr1+细胞),然后进行体外培养并给予脂多糖(LPS)刺激,收集细胞培养上清液,并检测3和7 d时分泌的细胞因子(TNF-α、TGF-β、IL-6、IL-10)和精氨酸酶活性,以及检测对T细胞的抑制作用与miR-146a的表达。结果 CLP后3 d时MDSC以分泌促炎因子(TNF-α、IL-6)为主,CLP后7 d时以分泌抗炎因子(IL-10、TGF-β)为主。CLP后7 d比3 d时表现出更强的T细胞免疫抑制活性。qRT-PCR检测小鼠骨髓MDSC中miR-146a表达,发现CLP 7 d时比3 d时的miR-146a表达量显著升高(P146a表达上调可能是脓毒症后期MDSC免疫抑制活性增强的重要机制。

关键词：髓源抑制细胞 microrna-146a 脓毒症免疫抑制细胞因子类

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microrna-146a与寻常型银屑病(血热型)严重性指数的相关性研究及竹黄颗粒的临床干预作用

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中华中医药杂志 2015年第9期30卷 3385-3387页

作者：梁育王丹许斌杨志波湖南中医药大学长沙410005 江西中医药大学南昌330006

目的:研究micro RNA-146a与寻常型银屑病(血热型)皮损面积和严重性指数(PASI)指数的相关性以及竹黄颗粒的临床干预作用。方法:以64例寻常型银屑病(血热型)的患者为研究对象,检测其外周血中mi RNA-146a的表达水平,对治疗前患者外周血中mi... 详细信息

目的:研究micro RNA-146a与寻常型银屑病(血热型)皮损面积和严重性指数(PASI)指数的相关性以及竹黄颗粒的临床干预作用。方法:以64例寻常型银屑病(血热型)的患者为研究对象,检测其外周血中mi RNA-146a的表达水平,对治疗前患者外周血中mi RNA-146a的表达水平与其PASI指数作直线相关分析。再将这些患者随机分成两组,各32例。治疗组予以竹黄颗粒口服、对照组口服复方青黛丸,4周为1个疗程,共2个疗程。并观察两组治疗前后PASI指数的下降程度,以此来反映竹黄颗粒的临床疗效。结果:外周血mi RNA-146a的表达和PASI指数经过直线相关性分析有正相关关系(r=0.92,P146a与PASI指数呈正相关,说明血清中mi RNA-146a的表达水平可以反映疾病的严重程度;竹黄颗粒对治疗寻常型银屑病(血热型)疗效显著。

关键词： microrna-146a 银屑病严重性指数竹黄颗粒

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microrna-146a在HIV-1慢性感染中与耗竭标志物相关性及其抑制细胞免疫功能的研究

MicroRNA-146a在HIV-1慢性感染中与耗竭标志物相关性及其抑制细胞...

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作者：余婷武汉大学

学位级别：硕士

目的:随着HAART治疗的广泛应用,HIV-1感染者的病毒载量基本能获得有效的控制,但无法彻底清除病毒。造成病毒难以清除的根本原因在于机体免疫系统的功能紊乱,不能有效清除病毒,而免疫耗竭就在其中扮演了重要角色。如何通过去改善细胞的... 详细信息

目的:随着HAART治疗的广泛应用,HIV-1感染者的病毒载量基本能获得有效的控制,但无法彻底清除病毒。造成病毒难以清除的根本原因在于机体免疫系统的功能紊乱,不能有效清除病毒,而免疫耗竭就在其中扮演了重要角色。如何通过去改善细胞的耗竭状态来增强HIV-1患者免疫系统的功能,达到更好地去清除病毒的目的是我们一直关注的核心问题。鉴于miR-146a在免疫负调控中发挥的重要作用,本研究探讨miR-146a在慢性HIV患者CD8+T细胞反应功能障碍中的作用及可能的机制。方法:首先通过定量逆转录聚合酶链反应(RT-qPCR)比较109例慢性HIV-1感染患者和35例性别和年龄与之匹配的HIV-1血清阴性健康供体的PBMCs中miR-146a的表达水平的差异。然后检测耗竭标志物如细胞毒性T淋巴细胞相关蛋白4(CTLA-4)、T细胞免疫球蛋白和含黏液域的分子-3(TIM-3)、淋巴细胞活化基因3(LAG-3)和效应功能相关基因如颗粒酶B(GZMB)和穿孔蛋白(Perforin)以及CD107a的表达水平,并对miR-146a水平和耗竭标志物之间的相关性进行了分析。接着为了研究miR-146a对CD8+T细胞功能的作用和对PBMCs的作用是否一致,用miR-146a mimics或miR-146a inhibitors转染CD8+T细胞后采用RT-qPCR和酶联免疫吸附法(ELISA)检测其抗病毒细胞因子的分泌情况和细胞毒功能。最后对慢性HIV-1患者的PBMCs体外进行miR-146a阻断,去恢复这些患者抗病毒细胞因子分泌以及缓解免疫耗竭状态。结果:慢性HIV-1感染者的PBMCs中miR-146a水平高于对照组(p146a的相对水平呈正相关(P146a会降低CD8+T细胞抗病毒细胞因子的产生,抑制其细胞毒功能。慢性HIV-1患者PBMCs中miR-146a的阻断增加了抗病毒细胞因子的产生及GZMB和Perforin的表达,与此同时也降低了程序性细胞死亡因子1(PD-1)、CTLA-4、TIM-3和LAG-3等抑制受体的表达。结论:慢性HIV-1感染者miR-146a表达量的升高抑制了细胞的免疫功能,在一定程度上促进了细胞的耗竭。因此,miR-146a可能被视作一种能够评估艾滋患者细胞免疫功能的潜在预测分子。

关键词：慢性HIV-1感染免疫耗竭抑制受体 microrna-146a

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microrna-146a rs2910164位点单核苷酸多态性与肺癌易感性的关系研究

microRNA-146a rs2910164位点单核苷酸多态性与肺癌易感性的关系...

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作者：郝霞中国医科大学

学位级别：硕士

目的:癌症是世界上多数国家和地区的重大公共卫生问题,严重影响着人类的生命和健康。多年研究表明,癌症多数是因多种环境致癌因素和个体遗传因素长时间相互作用、相互影响而导致的。吸烟暴露因素是多种癌症发生的环境危险因素。MicroRN... 详细信息

目的:癌症是世界上多数国家和地区的重大公共卫生问题,严重影响着人类的生命和健康。多年研究表明,癌症多数是因多种环境致癌因素和个体遗传因素长时间相互作用、相互影响而导致的。吸烟暴露因素是多种癌症发生的环境危险因素。microrna为非编码小分子RNA,其异常表达与癌症的发生发展有关。在癌症中,microrna可作为促癌基因或癌症抑制因子发挥作用,参与细胞分化代谢、增殖等过程。大量研究表明遗传变异在肿瘤的发生发展过程中发挥重要作用,其中最常见的遗传变异为单核苷酸多态性(Single Nucleotide Polymorphisms,SNPs),多数研究发现,microrna的单核苷酸多态性通过影响其表达,从而改变肿瘤易感性。microrna-146a位于人类5号染色体的LOC285628基因上,在20多个组织器官中均有表达。Rs2910164位于Pre-microrna-146a茎环结构内该位点的SNP通过干扰microrna-146a成熟体的表达,从而导致microrna-146a表达失调,进而引起癌症等疾病的发生和发展。基于上述背景,本研究拟通过探究microrna-146a rs2910164位点SNP与癌症易感性之间的关系来研究microrna-146a在癌症中的作用,为未来我国进行癌症的防治工作提供一定的理论基础。研究方法:本研究通过Meta分析的方法,筛选出发病风险与microrna-146a rs2910164位点SNP有关的癌种,采用病例对照研究的方法,探究在我国东北地区吸烟人群中,该位点的多态性对癌症发病风险的影响。***分析的研究方法通过使用检索策略,在PubMed数据库中检索相关文献,收录符合纳入排除标准的病例对照研究进行Meta分析。通过合并效应统计量相对危险(Odds ratio,OR)值及其95%的置信区间来反映microrna-146a rs2910164位点SNP与癌症易感性之间的联系强度。通过对癌症类型、种族和对照组人群来源分层而进行亚组分析。敏感性分析、Egger’s回归检验和Begg’s漏斗图用以评估结果的稳定性。2.病例对照研究的方法通过Meta分析筛选出拟研究癌种,设计病例对照研究的方案,获取中国医科大学伦理委员会的审批,且与每一位研究对象签定知情同意书。通过收集研究对象的基本资料和临床信息,同时采集静脉血,提取DNA,进行基因分型,采用logistic回归计算各基因型与拟研究癌种发病风险间的相对危险度OR值及95%置信区间,来评价microrna-146a rs2910164位点的SNP与中国东北地区吸烟人群拟癌种发病风险之间的关系。结果:***分析的结果本研究最终纳入的38项独立的病例对照研究共有34905人,其中病例14670例和对照20235例。microrna-146a rs2910164 C/G位点的SNP可以分为五种比较方式,包括纯合子遗传模型(CC vs GG),杂合子遗传模型(CG vs GG),显性遗传模型(CC+CG vs GG),隐性遗传模型(CC vs CG+GG)和等位基因遗传模型(C vs G)。所有遗传模型中microrna-146a rs2910164 SNP与纳入研究的癌症易感性不相关。但在亚组分析中,microrna-146a rs2910164位点SNP与肺癌、鼻咽癌的易感性有关,与肝细胞癌和胃癌无关。在种族和对照组来源的亚组分析中,未发现统计学意义上的关联。2.病例对照研究的结果本研究通过Meta分析筛选后确立研究癌种为肺癌,并获得的研究对象有710人,其中病例组348人,对照组362人。microrna-146a rs2910164 C/G位点基因型在病例组中分布频率为:GG 19.54%,CG 51.44%,CC 29.02%。在对照组中基因型分布的频率为:GG 20.17%,CG 50.83%,CC 29.00%,且各基因型的分布频率均符合HWE平衡(P=0.640)。该位点的SNP与东北地区吸烟人群肺癌发病风险之间无明显关联。但在亚组分析中,该位点的多态性与肺腺癌易感性相关(OR:1.69,95%CI:1.01.81,P=0.044),C等位基因可能为肺腺癌发病的危险因素。结论:Meta分析得出microrna-146a rs2910164 C/G位点的SNP与肺癌和鼻咽癌的易感性有关。病例对照研究得出在吸烟暴露的高危人群中,该位点的多态性可能与肺腺癌的发病风险相关,C等位基因可能是吸烟人群肺腺癌发生的危险因素。

关键词： microrna-146a rs2910164 单核苷酸多态性癌症易感性

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