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Surgical recovery of sperm in non-obstructive azoospermia

Asian Journal of Andrology 2012年第1期14卷 109-115,178页

作者： Tomomoto Ishikawa Department of Urology Ishikawa Hospital Himeji 6710221 Japan

The development of intracytoplasmic sperm injection （ICSI） opened a new era in the field of assisted reproduction and revolutionized the assisted reproductive technology protocols for couples with male factor infertility. Fertilisation and pregnancies can be achieved with spermatozoa recovered not only from the ejaculate but also from the seminiferous tubules. The most common methods for retrieving testicular sperm in non-obstructive azoospermia （NOA） are testicular sperm aspiration （TESA： needle/fine needle aspiration） and open testicular biopsy （testicular sperm extraction： tese）. The optimal technique for sperm extraction should be minimally invasive and avoid destruction of testicular function, without compromising the chance to retrieve adequate numbers of spermatozoa to perform ICSh microdissection tese （micro-tese）, performed with an operative microscope, is widely considered to be the best method for sperm retrieval in NOA, as larger and opaque tubules, presumably with active spermatogenesis, can be directly identified, resulting in higher spermatozoa retrieval rates with minimal tissue loss and low postoperative complications. micro-tese, in combination with ICSI, is applicable in all cases of NOA, including Klinefelter syndrome （KS）. The outcomes of surgical sperm retrieval, primarily in NOA patients with elevated serum follicle-stimulating hormone （FSH）（NOA including KS patients）, are reviewed along with the phenotypic features. The predictive factors for surgical sperm retrieval and outcomes of treatment were analysed. Finally, the short- and long-term complications in micro-tese in both 46XY males with NOA and KS patients are considered.

关键词： azoospermia micro-tese sperm retrieval tese

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精浆游离mRNA用于诊断非梗阻性无精子症减数分裂阻滞的研究

精浆游离mRNA用于诊断非梗阻性无精子症减数分裂阻滞的研究

引用

作者：戴豫宛华中科技大学

学位级别：硕士

第一部分NOA减数分裂阻滞患者精浆游离mRNAs差异表达的筛选与鉴定【目的】通过比较NOA患者睾丸病理诊断为减数分裂阻滞(meiosis arrest,MA)和非减数分裂阻滞(non-MA)精浆游离mRNAs(cfs-mRNAs)的差异,筛选用于无创性诊断NOA患者MA的cfs-m... 详细信息

第一部分NOA减数分裂阻滞患者精浆游离mRNAs差异表达的筛选与鉴定【目的】通过比较NOA患者睾丸病理诊断为减数分裂阻滞(meiosis arrest,MA)和非减数分裂阻滞(non-MA)精浆游离mRNAs(cfs-mRNAs)的差异,筛选用于无创性诊断NOA患者MA的cfs-mRNAs。【方法】(1)依据NOA患者的纳入标准,收集NOA患者睾丸病理结果显示为MA和non-MA患者的精液标本各9例,分离精浆后提取总RNA,用表达谱芯片(Affymetrix HTA2.0 Array)检测,比较以上两组患者cfs-mRNAs的差异;(2)在差异明显cfs-mRNAs中随机筛选8个基因在同批样本中进行相对定量qPCR来验证芯片检测的结果;(3)筛选相对于non-MA患者,在MA患者中表达明显降低,睾丸特异表达且与减数分裂相关的cfs-mRNAs作为候选基因;(4)对筛选到的cfs-mRNAs进行基因主要器官来源筛选:用相对定量qPCR的方法在精液参数正常男性、梗阻性无精子症(OA)和完全性唯支持细胞综合征(SCOS)患者的精浆中进行cfs-mRNAs器官来源的筛选,以保证所筛选的cfs-mRNA来源于睾丸并且由生精细胞分泌,减少其他器官来源的液体的干扰;(5)采用巢式绝对定量qPCR的方法在同类型53例MA和27例non-MA患者中,比较候选cfs-mRNAs的差异,用ROC曲线确定诊断MA的RT-qPCR的切点值。【结果】通过对MA和non-MA两组cfs-mRNAs的表达谱芯片的比较,我们一共检测了67529个mRNAs,与non-MA组相比,MA组cfs-mRNAs上调175个,下调16258个(差异倍数>2,p1.5倍,pmicro-tese取精结果[36-41]。因此我们也把这三个基因作为候选基因。(4)在精液参数正常男性、OA和SCOS的cfs-mRNAs中相对定量RT-qPCR,比较cfs-mRNAs在三组之间表达的差异。共筛选出8个相对于正常人,在OA以及SCOS中不表达,或者表达下调两倍以上的cfs-mRNAs,作为候选cfs-mRNAs进行后续进一步筛选。(5)建立巢式RT-qPCR的方法在同类型的样本,MA和NON-MA的病人精浆中进行cfs-mRNA进一步比较,以候选基因相对表达量=候选基因拷贝数/ACTIN拷贝数的方式,计算候选基因表达量。比较MA组和non-MA组的表达差异。筛选出BOLL(pmicro-tese取精结局的cfs-mRNAs筛选【目的】利用第一部分建立的巢式RT-qPCR的方法,分析候选基因在预测micro-tese取精成功可能性的作用。对同一个患者的睾丸组织和精浆基因表达量进行关联性分析。对手术micro-T

关键词：基因芯片非梗阻性无精子症 ROC曲线减数分裂阻滞精浆游离RNA 巢式RT-qPCR 睾丸组织 micro-tese 临床特征

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