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micrna和siRNA基因调控技术研究进展

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牙体牙髓牙周病学杂志 2004年第9期14卷 528-531页

作者：曹寅梅陵宣安徽医科大学口腔医学院安徽合肥230032

micrna和siRNA基因调控技术不仅改变了基因的调控只有通过蛋白质与核酸的相互作用才能实现的认识 ,而且可以作为一种简单有效替代基因敲除的技术 ,在功能基因组研究、基因治疗等领域得到了越来越多的重视。本文就micrna和siRNA基因调控... 详细信息

micrna和siRNA基因调控技术不仅改变了基因的调控只有通过蛋白质与核酸的相互作用才能实现的认识 ,而且可以作为一种简单有效替代基因敲除的技术 ,在功能基因组研究、基因治疗等领域得到了越来越多的重视。本文就micrna和siRNA基因调控技术的概念、原理与方法、应用的最新进展等方面进行综述。

关键词： micrna siRNA 基因调控

micrna对帕金森病相关基因synuclein表达的调控

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MicRNA对帕金森病相关基因synuclein表达的调控

D-青霉胺诱导BN大鼠自身免疫疾病模型中micrna生物标志物的研究

山东省第三次中西医结合神经内科学术研讨会

作者：刘爽李雷山东大学附属济南市中心医院神经内科

目的 micrna对帕金森病相关基因synuclein表达的调控研究。方法通过对MircoRNA转染细胞的研究分析,检测目的基因转染细胞后α-synuclein蛋白的表达量,分析哪种MicroRNA在α-synuclein蛋白的表达中占主导主用,以及各种MircoRNA间有无协... 详细信息

目的 micrna对帕金森病相关基因synuclein表达的调控研究。方法通过对MircoRNA转染细胞的研究分析,检测目的基因转染细胞后α-synuclein蛋白的表达量,分析哪种MicroRNA在α-synuclein蛋白的表达中占主导主用,以及各种MircoRNA间有无协同或者拮抗作用,并研究通过转录后调控能否阻断α-synuclein蛋白的过度表达。结果 MircoRNA-7、MircoRNA-153、MircoRNA-433均能够降低α-synuclein蛋白的表达水平,并且研究发现MircoRNA-7与MircoRNA-153在降低α-synuclein蛋白的表达水平中能够起到协同作用。结论 micrna能够对帕金森病相关基因synuclein表达进行负调控,从而降低α-synuclein蛋白的表达水平,且不同micrna间有协同作用。

关键词：帕金森病 micrna synuclein

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D-青霉胺诱导BN大鼠自身免疫疾病模型中micRNA生物标志物的研究

肺泡灌洗液中micrna表达谱分析在重症肺炎中的应用

中国畜牧兽医学会兽医病理学分会第二十四次学术研讨会、中国病理生理学会动物病理生理学专业委员会第二十三次学术研讨会、中国实验动物学会实验病理学专业委员会第三次学术研讨会、中国兽医病理学家第三次学术研讨会

作者：林志高锡强黄瑛吕建军屈哲霍桂桃张頔杨艳伟张硕王雪李波中国食品药品检定研究院食品药品安全评价研究所

目的:通过检测D-青霉胺诱发BN大鼠自身免疫病模型中脾脏和血液microRNA的表达变化情况,以及外周血和脾脏CD3+CD4+T细胞表面自身免疫应答分子LFA(CD11a)和ICOS(CD278)表达变化,探讨microRNA在调控D-青霉胺诱导的药物自身免疫反应中T细胞... 详细信息

目的:通过检测D-青霉胺诱发BN大鼠自身免疫病模型中脾脏和血液microRNA的表达变化情况,以及外周血和脾脏CD3+CD4+T细胞表面自身免疫应答分子LFA(CD11a)和ICOS(CD278)表达变化,探讨microRNA在调控D-青霉胺诱导的药物自身免疫反应中T细胞活化与其作用机制的关系,为microRNA成为新型生物标记物用以早期评估、预测和诊断药物的自身免疫毒性提供依据和参考。方法:实验共采用70只雄性BN大鼠,大鼠分为5个实验组:去离子水对照组、D-青霉胺低剂量组(150mg/kg)、

关键词：青霉胺免疫疾病 micrna 生物标志物

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宁夏医学杂志 2017年第5期39卷 392-394,I0001页

作者：王昭君刘勤富王晓红王妍柏张珺周文杰杨晓军宁夏医科大学总医院重症医学科宁夏银川750004 宁夏医科大学总医院脑脊液研究室宁夏银川750004

目的探讨ICU中重症肺炎患者肺泡灌洗液中微小RNA(micrna)表达与重症肺炎的关系。方法采用micrna芯片技术对5例重症肺炎患者和5例非呼吸道感染术后患者的肺泡灌洗液micrna进行筛选,最终筛选出其中上调表达、下调表达的micrna;再通过RT-PC... 详细信息

目的探讨ICU中重症肺炎患者肺泡灌洗液中微小RNA(micrna)表达与重症肺炎的关系。方法采用micrna芯片技术对5例重症肺炎患者和5例非呼吸道感染术后患者的肺泡灌洗液micrna进行筛选,最终筛选出其中上调表达、下调表达的micrna;再通过RT-PCR的方法,验证上述芯片检测的结果。结果建立重症肺炎患者肺泡灌洗液的micrna异常表达谱,从中筛选出40个上调表达的micrna和113个下调表达的micrna。通过与非呼吸道感染患者对比,重症肺炎组上调表达基因miR-3686、miR-4455及下调表达基因miR-1323、miR-127-5p差异有统计学意义(P<0.05)。结论 miR-3686、miR-4455、miR-1323、miR-127-5p在重症肺炎患者的肺泡灌洗液中明显表达,提示其与重症肺炎的发生有一定的相关性。

关键词：重症肺炎肺泡灌洗液 micrna

micrnas表达失调与鼻咽癌预后及临床特征关系的Meta分析

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MicRNAs表达失调与鼻咽癌预后及临床特征关系的Meta分析

作者：李建民兰州大学

学位级别：硕士

目的:本研究旨在探究micrnas对鼻咽癌的预后评估价值及其与临床特征的关系,从而为临床预后判断提供新思路。方法:根据研究主题,确定中、英文检索词,制定检索策略,计算机检索CNKI、CBM、维普、万方、Cochrane library、PubMed、Embase和W... 详细信息

目的:本研究旨在探究micrnas对鼻咽癌的预后评估价值及其与临床特征的关系,从而为临床预后判断提供新思路。方法:根据研究主题,确定中、英文检索词,制定检索策略,计算机检索CNKI、CBM、维普、万方、Cochrane library、PubMed、Embase和Web of Science等医学数据库,检索时间为建库时间至2020年1月19日,并辅以手工补充检索。2名研究者分别按照纳入和排除标准筛选文献,采用NOS评价文献质量,提取数据后使用RenMan 5.3软件合并效应量,漏斗图、Egger法和Begg法分析文献发表偏倚,剔除法进行敏感性分析。结果:1.通过全面检索、严格筛选纳入相关文献28篇,共有4215例病例,包含36种micrnas,其中24种表达上调,12种表达下调。***分析结果表明:micrnas表达失调与鼻咽癌患者总生存期、无病生存期和无复发生存期缩短相关（P＜0.05）,亚组分析显示:miR-103、miR-17-5p、miR-3182、miR-451a、miR-483–5p、miR-92a、miR-141、miR-183、miR-214-3p表达上调和miR-451、miR-204、miR-185-3p、miR-143、miR-3188表达下调提示生存期更短。***表达失调与鼻咽癌原发肿瘤（T）分期和临床TNM分期明显相关（P＜0.05）,T3-T4期和Ⅲ-Ⅳ期患者micrnas表达失调较T1-T2期和Ⅰ-Ⅱ期患者更明显。***表达与性别、年龄、区域淋巴结受累及远处转移情况无明显相关性（P＞0.05）。5.发表偏倚分析各研究漏斗图分布对称,Egger检验及Begg检验P值均大于0.05,说明可认为纳入文献不存在发表偏倚。结论:***表达失调对鼻咽癌具有潜在预后评估价值,miR-103、miR-17-5p、miR-3182、miR-451a、miR-483–5p、miR-92a、miR-141、miR-183、miR-214-3p表达上调和miR-451、miR-204、miR-185-3p、miR-143、miR-3188表达下调提示患者生存期缩短。***表达失调与肿瘤大小、临床分期关系密切,但不是肿瘤远处转移的敏感指标,与区域淋巴结受累情况的关系需更多临床实验数据支持。***表达失调与患者性别、年龄无明显相关性。

关键词：鼻咽癌 micrna 预后临床特征 Meta分析

巨噬细胞ABCG1对HDL的影响及机制研究

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巨噬细胞ABCG1对HDL的影响及机制研究

作者：刘平原北京协和医学院

学位级别：硕士

研究背景及目的动脉粥样硬化(AS)以管腔狭窄为特征,严重威胁人类健康。巨噬细胞ABCG1及HDL参与胆固醇的逆转运,与AS关系密切。miRNA是一组长度为22-25核苷酸的非编码RNA,影响AS的发生发展。本课题组前期临床研究提示ABCG1可能具有促AS... 详细信息

研究背景及目的动脉粥样硬化(AS)以管腔狭窄为特征,严重威胁人类健康。巨噬细胞ABCG1及HDL参与胆固醇的逆转运,与AS关系密切。miRNA是一组长度为22-25核苷酸的非编码RNA,影响AS的发生发展。本课题组前期临床研究提示ABCG1可能具有促AS作用。为了探讨其可能机制,我们构建ABCG1敲低及过表达细胞模型并从micrna的角度研究其对HDL的影响及机制。研究方法利用慢病毒载体感染THP-1细胞,经嘌呤霉素筛选出稳转株并进行验证;利用高通量测序筛选不同ABCG1表达巨噬细胞差异micrna;利用不同ABCG1表达巨噬细胞与HepG2细胞共培养,测定HepG2细胞apoA-1,SAA,LCAT表达水平,并利用生物信息学方法预测影响apoA-1,SAA,LCAT的差异micrna。研究结果稳定敲低ABCG1的THP-1细胞株ABCG1表达下降,过表达细胞株ABCG1水平提高。通过小RNA高通量测序分析不同ABCG1表达巨噬细胞,共筛选到138条差异表达micrna。相对于对照组,细胞共培养后ABCG1低表达组HepG2细胞APOA1及LCAT表达上调,SAA1表达下调;通过生物信息学分析,筛选出5个可能与apoA-1,SAA,LCAT 相关的 micrna,分别为 hsa-miR-301b-3p、hsa-miR-2682-5p、hsa-miR-223-5p、hsa-miR-129-5p、hsa-miR-942-5p。研究结论成功构建ABCG1稳定敲低及过表达的THP-1细胞株。获得了不同ABCG1表达巨噬细胞micrna差异表达谱。巨噬细胞ABCG1低表达影响apoA-1,SAA,LCAT表达。

关键词： ABCG1 micrna HDL

LncRNA-AK058003在肝癌增殖侵袭转移中的机制研究

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LncRNA-AK058003在肝癌增殖侵袭转移中的机制研究

作者：何晓琴武汉大学

学位级别：硕士

目的:肝细胞肝癌是世界范围内最常见的恶性肿瘤之一,但其发病机制至今没有完全阐述清楚,大量研究表明lncRNA与肝癌的发生发展密切相关。为了进一步明确lncRNA在肝癌细胞中的生物学功能及调控机制,从新的角度阐明肝癌的发生机制,为临床... 详细信息

目的:肝细胞肝癌是世界范围内最常见的恶性肿瘤之一,但其发病机制至今没有完全阐述清楚,大量研究表明lncRNA与肝癌的发生发展密切相关。为了进一步明确lncRNA在肝癌细胞中的生物学功能及调控机制,从新的角度阐明肝癌的发生机制,为临床诊断和靶向治疗提供理论依据。方法:1.利用lncRNA表达谱芯片和生物信息学软件,从表达水平、lncRNA序列完整性等方面筛选与肝癌相关的差异表达的lncRNA,利用实时定量PCR（q RT-PCR）在肝癌组织中验证部分差异表达的lncRNA,最后确定lncRNA-AK058003 研究对象。2.收集50例行肝癌切除术患者的肝癌组织和癌旁组织,采用qRT-PCR方法检测lncRNA-AK058003表达,并分析lncRNA-AK058003表达与患者临床病理特征及预后的关系。3.运用体外实验和体内实验分析lncRNA-AK058003在肝癌增殖、侵袭和迁移中的作用机制。4.运用生物信息学软件预测靶基因,运用RNA-Pull Down,Western blotting,qRT-PCR等技术验证lncRNA-AK058003与靶基因的关系。5.采用FISH试验检测lncRNA-AK058003的位置,进一步探索lncRNA--AK058003与靶基因之间的具体调控方式。结果:1.肝癌组织qRT-PCR检测提示lncRNA-AK058003在肝癌中低表达,并发现lncRNA-AK058003与患者复发转移有关;2.选取HepG2和SK-Hepl肝癌细胞系分别上调和下调lncRNA-AK058003;CCK-8,EdU结果表明,上调lncRNA-AK058003显著抑制肝癌细胞增殖能力,下调lncRNA-AK058003后肝癌细胞增殖能力较对照组增强;细胞周期结果表示,上调lncRNA-AK058003表达出现G1/S期阻滞;Transwell迁移和侵袭实验结果表明lncRNA-AK058003明显抑制肝癌细胞迁移和侵袭的能力。Western blot结果显示:lncRNA-AK058003 明显抑制 CDK4,CDK6,CyclinD1,MMP9 的表达,增加E-cadherin的表达。3.裸鼠皮下荷瘤模型和尾静脉注射转移模型中发现:lncRNA-AK058003能显著抑制肝癌的生长和转移能力。4.运用生物信息学软件及RNA-pull down实验发现lncRNA-AK058003能与SNCG结合。可通过与mRNA稳定蛋白HuR结合,影响SNCG的稳定性从而减少SNCG蛋白的表达;lncRNA-AK058003也可作为miR15a的前体物质,抑制SNCG的mRNA转录,进而抑制其蛋白表达。结论:研究发现lncRNA-AK058003与肝癌的发生、发展及转移密切相关,通过影响HuR稳定蛋白以及充当miR15a的前体抑制SNCG的表达从而抑制了肿瘤的增殖,侵袭和转移。为明确肝癌的发病机制,早期诊断和预后判断提供新的候选标志物,并为临床肝癌患者的个性化治疗提供新的思路和潜在的作用靶点。

关键词：肝癌 lncRNA micrna 增殖转移

HIF-1α与Wnt/β-catenin的相互关系并经该通路对缺氧胃癌细胞增殖与侵袭的影响

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HIF-1α与Wnt/β-catenin的相互关系并经该通路对缺氧胃癌细胞增...

作者：刘洪兰重庆医科大学

学位级别：硕士

目的：构建β-catenin micrna表达载体，研究HIF-1α与Wnt/β-catenin信号通路的关系，探讨HIF-1α经过该信号通路对胃癌细胞株SGC-7901增殖及侵袭的作用。方法：构建β-catenin micrna表达载体转染SGC-7901，建立靶向干扰β-catenin的... 详细信息

目的：构建β-catenin micrna表达载体，研究HIF-1α与Wnt/β-catenin信号通路的关系，探讨HIF-1α经过该信号通路对胃癌细胞株SGC-7901增殖及侵袭的作用。方法：构建β-catenin micrna表达载体转染SGC-7901，建立靶向干扰β-catenin的稳定转染细胞株。RT-PCR检测稳定转染细胞株的干扰效果。采用倍增时间、平板克隆及侵袭实验观察对照组、脂质体组、阴性对照组、缺氧组、及缺氧干扰组中细胞增殖和侵袭能力的生物学效应的不同。采用Western blot及RT-PCR检测对照组、缺氧组、双重缺氧组及干扰组、缺氧干扰组、双重缺氧干扰组中HIF-1α、β-catenin、CyclinD1、MMP-7在各组中蛋白及mRNA的表达水平。结果：靶向干扰β-catenin的稳定转染细胞株建立成功。对照组与脂质体组、阴性对照组比较没有统计学意义。与对照组比较，缺氧组细胞的倍增时间缩短、平板克隆形成数增多、细胞穿膜数增多侵袭能力增强;RNAi技术靶向干扰β-catenin后缺氧干扰组与缺氧组比较，细胞平板克隆形成数减少、倍增时间延长，细胞穿膜数减少。缺氧及双重缺氧状态下HIF-1α、β-catenin、CyclinD1、MMP-7蛋白及mRNA表达升高;采用RNAi技术靶向干扰β-catenin后，干扰组、缺氧干扰组及双重缺氧干扰组的HIF-1α、β-catenin、CyclinD1、MMP-7蛋白及mRNA表达显著降低。双重缺氧干扰组-缺氧干扰组与缺氧干扰组-干扰组比较，CyclinD1和MMP-7的mRNA及蛋白表达水平增高。结论：1）成功建立靶向干扰β-catenin的稳定转染细胞株SGC-7901。2)缺氧环境下β-catenin同时存在于HIF-1α的上下游并能够相互调控。3）HIF-1α调控β-catenin刺激Wnt/β-catenin信号通路激活，影响下游基因CyclinD1和MMP-7，促进缺氧胃癌的增殖及侵袭。

关键词：缺氧诱导因子-1α β-连环蛋白 micrna 细胞周期蛋白D1 基质金属蛋白酶-7

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miRNA在前列腺癌骨转移中的研究进展

国际泌尿系统杂志 2021年第4期41卷 720-723页

作者：唐流彪柳长坤姚凯(综述) 周广臣(审校) 大连医科大学研究生院大连116044 江苏省苏北人民医院泌尿外科扬州225001

骨转移是前列腺癌(PCa)最常见的远处转移位点之一,近年来对于PCa骨转移方面的临床诊断以及治疗的研究已经取得了巨大的成果,但其仍是影响PCa患者生活质量的重大因素之一,同时也给患者带来了巨大的经济负担。近年来,MicroRNA(miRNA)已成... 详细信息

骨转移是前列腺癌(PCa)最常见的远处转移位点之一,近年来对于PCa骨转移方面的临床诊断以及治疗的研究已经取得了巨大的成果,但其仍是影响PCa患者生活质量的重大因素之一,同时也给患者带来了巨大的经济负担。近年来,MicroRNA(miRNA)已成为肿瘤扣关研究的热点,越來越多的证据表明其在调控基因表达中起到重要作用,是肿瘤发生和发展的关键参与者本文就近年来miRNA在PCa骨转移相关领域的研究进展作一综述。

关键词：前列腺肿瘤 micrna 肿瘤转移骨