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中国肿瘤生物治疗杂志 2014年第3期21卷 298-302页

作者：连海峰李明刘成霞李锟李丹滨州医学院附属医院消化内科山东滨州256603 滨州医学院护理学院内科护理学教研室山东滨州256603

目的:预测并鉴定mirna-486-5p在人胃癌细胞SGC7901中的靶基因及其表达。方法:采用生物信息学技术预测mirna-486-5p的作用靶点,构建mirna-486-5p过表达质粒(GV214-miR)并转染入SGC7901细胞(SGC7901-miR)中,以空质粒转染SGC7901细胞(SGC7901-miR-NC)为阴性对照,以SGC7901细胞为空白对照。Real-time pCR检测转染细胞中mirna-486-5p及其靶基因神经纤毛蛋白2(neuropilin-2,NRp2)mRNA的表达,Western blotting检测NRp2的表达,双荧光素酶实验验证mirna-486-5p对NRp2基因的调控机制。结果:经生物信息学预测,选择与胃癌生物学行为密切相关的NRp2作为mirna-486-5p的靶基因。与空白组相比,GV214-miR转染后的SGC7901细胞mirna-486-5p表达显著上调[(8.21±1.18)vs(1.02+0.26),pp2 mRNA表达无明显变化(p>0.05),而NRp2蛋白表达则明显下调[(0.36±0.06)vs(0.76±0.05),p5],双荧光素酶实验证实mirna-486-5p可与NRp2 mRNA 3'-UTR直接结合,从而发挥对NRp2转录后翻译的抑制作用。结论:mirna-486-5p在胃癌细胞SGC7901中可直接作用于NRp2 mRNA 3'UTR,从而抑制其表达。

关键词： mirna-486-5p 胃癌生物信息学技术神经纤毛蛋白2 转染

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microRNA-486-5p通过下调neuropilin-2的表达抑制结肠癌的生长及淋巴结转移

microRNA-486-5p通过下调neuropilin-2的表达抑制结肠癌的生长及...

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作者：张冉冉滨州医学院

学位级别：硕士

目的:既往体外细胞实验证明mirna-486-5p可以抑制结肠癌细胞SW620的增殖、迁移能力并加速其凋亡。本实验旨在通过体内实验进一步证明mirna-486-5p对人结肠癌细胞系SW620裸鼠皮下移植瘤生长及微淋巴管生成的影响并探讨其可能的作用机制... 详细信息

目的:既往体外细胞实验证明mirna-486-5p可以抑制结肠癌细胞SW620的增殖、迁移能力并加速其凋亡。本实验旨在通过体内实验进一步证明mirna-486-5p对人结肠癌细胞系SW620裸鼠皮下移植瘤生长及微淋巴管生成的影响并探讨其可能的作用机制。方法:将15只裸鼠按简单随机法分为3组,实验组(mirna-486-5p组)、阴性对照组(NC组)、空白对照组(Blank组),每组5只,分别于皮下接种SW620细胞,待成瘤后mirna-486-5p组、NC组、Blank组每3天分别于瘤周注射mirna-486-5p过表达质粒、空白质粒载体及等量pBS缓冲液。观察裸鼠一般情况及比较各组裸鼠皮下瘤体的体积及重量。接种21天后取出皮下瘤组织,用免疫组织化学染色法比较各组移植瘤中Neuropilin-2 (NRp2)蛋白的分布及微淋巴管生成情况。用Western-blot法分析比较NRp2的表达情况。结果:mirna-486-5p组瘤体生长速度明显低于NC组与Blank组;取材时mirna-486-5p组裸鼠皮下种植瘤的体积为(0.32±0.12) cm3, NC组为(0.77±0.31) cm3, Blank 组为(0.82 ±0.18) cm3;mirna-486-5p 组瘤体体积显著小于其他两组瘤体体积(p = 0.006 5 );mirna-486-5p组瘤体质量为(0.40 ± 0.08 )g,明显低于 NC 组(0.75 ±0.18)g 及 Blank 组(0.79 ±0.18) g (p= 0.008 5)。mirna-486-5p组的抑瘤率为75.95 %。免疫组化结果显示与NC组及Blank组相比,mirna-486-5p组中的微淋巴管数量明显减少,为(1.80±0.84)明显低于NC 组(6.90 ± 0.70)及 Blank 组(7.20 ± 0.84),mirna-486-5p 组移植瘤中 NRp2的表达量较另外两组下降(p=0.0005),而NC组与Blank组相比结果差异无统计学意义。结论:注射mirna-486-5p过表达质粒后结肠癌细胞SW620裸鼠皮下移植瘤的生长速度及重量可明显受到抑制,微淋巴管密度明显较少,其作用可能是通过下调NRp2的表达实现的,mirna-486-5p有望成为结肠癌治疗的新靶点。

关键词： mirna-486-5p 结肠癌 neuropilin-2 肿瘤生长淋巴管

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结肠癌中相关mirna对NRp2调控的预测及鉴定

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世界华人消化杂志 2014年第5期22卷 624-629页

作者：李明连海峰刘成霞马锋振谢书阳滨州医学院附属医院消化内科山东省滨州市256603 滨州医学院肿瘤分子生物学重点实验室山东省烟台市264003

目的:预测可能调控神经纤毛蛋白2(neuropilin-2,NRp2)的微小RNA(microRNA,mirna),鉴定其对NRp2的调控作用及可能的调控机制.方法:使用生物信息学软件预测可能调控NRp2的mirna,选择可能性最大的mirna-486-5p进一步研究,构建mirna-486-5p... 详细信息

目的:预测可能调控神经纤毛蛋白2(neuropilin-2,NRp2)的微小RNA(microRNA,mirna),鉴定其对NRp2的调控作用及可能的调控机制.方法:使用生物信息学软件预测可能调控NRp2的mirna,选择可能性最大的mirna-486-5p进一步研究,构建mirna-486-5p过表达质粒,采用脂质体法将质粒转染入人结肠癌细胞株SW620,实时定量pCR(qRT-pCR)验证mirna-486-5p的表达丰度,Western blot检测NRp2的表达,双荧光素酶实验验证mirna-486-5p对NRp2的调控机制.结果:生物信息学技术预测共有25条mirna可能调控NRp2的表达,结合文献选择miR-486-5p进一步研究;miR-486-5p过表达质粒转染SW620细胞后,表达丰度升高,NRp2蛋白表达明显下调,双荧光素酶实验证实mirna-486-5p可与NRp2 mRNA 3'非转录区(3'untranslated region,3'UTR)直接结合,从而发挥对NRp2转录后翻译的抑制作用.结论:mirna-486-5p可调控的NRp2的表达,其作用机制是通过结合NRp2 3'UTR而抑制NRp2 mRNA的正常翻译.

关键词： NRp2 mirna-486-5p 转染生物信息学技术

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