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宫颈癌及CINⅢ组织mirna-34a表达及意义

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齐鲁医学杂志 2015年第4期30卷 457-458页

作者：袁汇赵淑萍戴红英青岛大学医学院附属医院妇科山东青岛266003

目的探讨mirna-34a(miR-34a)在宫颈上皮内瘤变(CINⅢ)及宫颈鳞癌组织和血清表达及其意义。方法选择41例宫颈鳞癌病人(宫颈癌组)、27例CINⅢ病人(CINⅢ组)和20例正常宫颈者(对照组),提取其血清及组织中的小分子RNA,采用实时荧光定量PCR... 详细信息

目的探讨mirna-34a(miR-34a)在宫颈上皮内瘤变(CINⅢ)及宫颈鳞癌组织和血清表达及其意义。方法选择41例宫颈鳞癌病人(宫颈癌组)、27例CINⅢ病人(CINⅢ组)和20例正常宫颈者(对照组),提取其血清及组织中的小分子RNA,采用实时荧光定量PCR方法检测miR-34a的表达。结果宫颈癌及CINⅢ组织中miR-34a相对表达水平明显低于对照组,差异有显著性(F=70.26,q=8.36、16.58,P34a相对表达量较CINⅢ组明显下降,差异有显著性(F=39.96,q=5.54,P34a相对表达量较对照组也明显下降,差异有显著性(q=7.08,P34a的表达呈正相关(r=0.886,P34a在CINⅢ及宫颈鳞癌病人组织及血清中异常表达,可能在宫颈癌的发生和发展过程中发挥重要作用,对宫颈癌的诊断具有一定临床价值。

关键词： mirna-34a 宫颈上皮内瘤样病变宫颈肿瘤聚合酶链反应

不同妊娠期HPV感染孕妇血清mirna-34a表达情况及与母婴结局的关系

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吉林医学 2021年第10期42卷 2394-2396页

作者：罗婕妤湛江市第二人民医院妇产科广东湛江524003

目的:探讨不同妊娠期人乳头瘤病毒(HPV)感染孕妇血清mirna-34a表达情况,并分析其与母婴结局的关系。方法:选取进行HPV筛查的320例孕妇作为研究对象,根据筛查结果将其分为HPV阳性组(n=120)和HPV阴性组(n=200);选取同期体检的50例健康非... 详细信息

目的:探讨不同妊娠期人乳头瘤病毒(HPV)感染孕妇血清mirna-34a表达情况,并分析其与母婴结局的关系。方法:选取进行HPV筛查的320例孕妇作为研究对象,根据筛查结果将其分为HPV阳性组(n=120)和HPV阴性组(n=200);选取同期体检的50例健康非孕女性作为健康对照组。采用实时荧光定量聚合酶链式反应(FQ-PCR)检测各组血清mirna-34a表达水平,并对其进行随访,记录孕妇妊娠不良结局及新生儿不良结局发生情况。结果:HPV阳性组、HPV阴性组和健康对照组三组血清mirna-34a比较差异有统计学意义(F=1744.049,P=0.000);HPV阳性组中早期妊娠、中期妊娠和晚期妊娠三者孕妇血清mirna-34a比较差异无统计学意义(F=0.246,P=0.782);HPV阳性组中剖宫产者、产后出血者、胎膜早破者和产褥感染者血清mirna-34a分别高于顺产者、产后未出血者、无胎膜早破者和无产褥感染者,且差异有统计学意义(t=9.349,P=0.000,t=4.621,P=0.000,t=5.657,P=0.000,t=5.224,P=0.000);HPV阳性组早产者和呼吸窘迫综合征者血清mirna-34a分别高于非早产者和非呼吸窘迫综合征者,且差异有统计学意义(t=6.829、P=0.000;t=5.829、P=0.000)。经多因素Logistic回归分析得知,HPV高危型、HPV高危型种数及血清mirna-34a是导致HPV感染孕妇妊娠不良结局发生的关键因素(P=0.014;P=0.001;P=0.000);HPV高危型种数和血清mirna-34a是导致HPV感染新生儿不良结局发生的关键因素(P=0.000;P=0.027)。结论:血清mirna-34a在HPV感染孕妇中明显升高,与妊娠期无明显关系,是导致HPV感染孕妇母婴不良结局发生的关键因素,有一定临床指导价值。

关键词： mirna-34a 孕妇 HPV感染妊娠期母婴结局

mirna-24、mirna-34a和mirna-375抑制小鼠胰岛β细胞系MIN6细胞中Neurod1／BETA2的蛋白表达

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医学分子生物学杂志 2015年第4期12卷 197-201页

作者：张许朱云霞韩晓南京医科大学江苏省人类功能基因组学重点实验室南京市210029

目的在小鼠胰岛β细胞系MIN6细胞中分析mirna-24、mirna-34a和mirna-375对Neurod1／BETA2的表达调控以及作用方式。方法设计并合成针对小鼠Neurod1基因3’非翻译区（3’untranslated region,3’UTR）序列的引物，克隆于pMIR-REPORT^TM荧光素酶报告基因载体中；用miranda软件预测可能调控Neurod1表达的mirnas，挑选在B细胞中有相关功能研究的mirnas并委托公司合成pre—mirnas；脂质体法转染至MIN6细胞中。荧光素酶报告基因技术分析这些mirna对Neurod1的作用；定量***分析Neurod1的mRNA水平；Western印迹检测Neurod1的蛋白表达水平；GSIS检测干扰Neurod1后MIN6细胞的功能。结果成功制备小鼠Neurod1基因的3’UTR荧光素酶报告基因载体；选取了预测在Neurod1的3’UTR有互补结合位点的3个mirnas（mirna-24、miR-34a和miR．375），并挑选一个没有互补结合位点的mirna（miR-29a）作为阴性对照；在MIN6细胞中过表达pre-mirna-24、pre-miR-34a和pre-miR-375能够抑制Neurod1基因3’UTR荧光素酶报告基因的活性，而过表达阴性对照mirna-29a则不能抑制其活性；pre—mirna-24、pre-miR-34a和pre-miR-375还可以不同程度抑制Neumd1的蛋白表达；在MIN6细胞中干扰Neurod1蛋白表达能够降低细胞的GSIS功能。结论mirna-24、miR-34a和miR-375能够抑制小鼠胰岛B细胞系MIN6细胞中Neurod1的蛋白表达。

关键词： mirna-24 mirna-34a mirna-375 Neurod1 3’非翻译区胰岛β细胞

mirna-21和mirna-34a在环孢素A致大鼠肾损伤肾脏中的表达

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miRNA-21和miRNA-34a在环孢素A致大鼠肾损伤肾脏中的表达

MicroRNA-34a调控细胞衰老的研究

2015年（第五届）药物毒理学年会

作者：甄滢滢姚广涛金若敏徐婷婷上海中医药大学中药产学研合作中心药物安全评价研究中心

目的采用环孢素A制备大鼠肾损伤模型,结合传统肾功能指标尿素氮（BUN）、肌酐（CR）和组织病理学变化,探讨mirna-21和mirna-34a对环孢素A致肾损伤变化意义的诊断价值。方法取Wistar雄性大鼠随机分为正常对照组和环孢素A组,每组16只,每... 详细信息

目的采用环孢素A制备大鼠肾损伤模型,结合传统肾功能指标尿素氮（BUN）、肌酐（CR）和组织病理学变化,探讨mirna-21和mirna-34a对环孢素A致肾损伤变化意义的诊断价值。方法取Wistar雄性大鼠随机分为正常对照组和环孢素A组,每组16只,每天分别皮下注射给予0.1 ml/100 g橄榄油和20 mg/kg环孢素A,连续10 d。于试验第6、11 d两组各麻醉8只大鼠,腹主动脉采血,4℃5000 rpm离心15 min后收集血清,以日立7080全自动生化分析仪测定血清BUN、CR,并摘取肾脏,计算肾脏指数,HE染色观察肾组织病理学变化。采用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）方法检测大鼠肾脏mirna-21和mirna-34a的表达水平。通过Logistic回归建立回归模型,采用ROC曲线分析给药后第6、1 1 d mirna-21、mirna-34a和BUN、CR在环孢素A致肾损伤时的变化。结果试验期间各组动物均无死亡,给药组动物于给药3 d后体重增长缓慢,活动减少、毛色枯燥无光泽。与相应时间点对照组相比,给药后第6、11d环孢素A组大鼠血清BUN明显升高（P＜0.01）,第11 d血清CR明显性升高（P＜0.01）;第6、11 d肾脏指数明显升高（P＜0.01）;病理观察可见第6 d肾脏结构无明显异常,第11 d给药组动物肾脏均出现不同程度的肾小管嗜碱性变。经qRT-PCR检测,第6、11 d肾脏mirna-21和mirna-34a均显著性升高（P＜0.05或P＜0.01）。经ROC曲线分析计算,血清BUN、CR的ROC曲线下面积（AUC）分别为0.735、0.621,mirna-21、mirna-34a的ROC曲线下面积分别为0.933、0.962,提示microRNAs的检验效能高于传统肾功能指标。将两两指标联合检测:BUN+CR的AUC为0.840,mirna-21+mirna-34a的AUC为0.990,高于各自对应的各单项指标。对4个指标BUN+CR+mirna-21+mirna-34a联合检测,其AUC为0.992,高于联合检测BUN+CR或mirna-2 1+mirna-34a。同时通过mirwalk在线预测软件对mirna-2 1和mirna-34a进行靶基因预测,将预测的靶基因通过David数据库进行pathway分析,发现mirna-21调控的通路主要集中于MAPK通路、JAK-STAT通路等;mirna-34a调控的通路主要集中于MAPK通路、p53通路及Notch信号通路等。其中MAPK通路参与细胞分裂、增殖、迁移、凋亡等多种生理过程;JAK-STAT通路是由细胞因子刺激的信号转导通路,参与细胞的增殖、分化、凋亡以及免疫调节等生物学过程;P53信号通路参与细胞分化、衰老的调节、抑制血管生成等过程。有文献报道显示在药物致肾损伤发生时MAPK通路、P53通路、JAK-STAT通路被激活,表明这2个mirna不仅在肾损伤时较为敏感,而且具有生物学意义。结论 mirna-21和mirna-34a在环孢素A致肾损伤模型中表达量显著升高,且与BUN、CR联合检测时对环孢素A致肾损伤有较高的诊断价值。

关键词：环孢素A 肾损伤 mirna-21 mirna-34a ROC曲线

来源： cnki会议评论

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四川大学学报（医学版） 2013年第1期44卷 1-5页

作者：杨鸣鸣范雪娇杜文婷任鹏亮刘戟四川大学华西基础医学与法医学院生物化学与分子生物学教研室成都610041

目的探讨微RNA-34a(mirna-34a)对细胞通过调控沉默交配型信息调节因子2同源蛋白1(SIRT1)的表达,从而引起细胞衰老的作用。方法构建pre-mirna-34a表达载体,并将其和一个不针对任何基因的微小RNA-1792(mirna-1792)表达载体(其他实验室赠送... 详细信息

目的探讨微RNA-34a(mirna-34a)对细胞通过调控沉默交配型信息调节因子2同源蛋白1(SIRT1)的表达,从而引起细胞衰老的作用。方法构建pre-mirna-34a表达载体,并将其和一个不针对任何基因的微小RNA-1792(mirna-1792)表达载体(其他实验室赠送)分别转染至HEK293和HUVEC细胞内,用RT-PCR、Western blot检测各细胞组SIRT1mRNA与蛋白表达水平,以未转染的细胞为对照;将HUVEC细胞分为转染不同质粒、未转染质粒和用SIRT1激活剂白藜芦醇(终浓度1μmol/L,作用2h)处理HUVEC细胞(HUVEC-Res)组,中性彗星电泳分析H2O2作用2h后4组HUVEC细胞的双链损伤情况;用阿霉素处理上述4组HUVEC细胞2h,β-半乳糖甘酶(SA-β-gal)染色检测各细胞不同时间点的衰老情况。结果测序结果表明pre-mirna-34a表达载体构建成功;RT-PCR、Western blot显示HEK293-pre-mirna-34a和HUVEC-pre-mirna-34a中SIRT1mRNA和蛋白质表达的水平明显下降(Pmirna-34a组DNA损伤程度最为严重;SA-β-gal染色显示DNA损伤后HUVEC-mirna-34a衰老程度较其它3组严重,而HUVEC-Res组的衰老程度最为轻微。结论 mirna-34a通过抑制SIRT1表达调控细胞衰老。

关键词： mirna-34a SIRT1细胞衰老DNA损伤

miR-34a表达水平与结直肠癌根治术后复发转移的关系

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中华胃肠外科杂志 2013年第1期16卷 60-65页

作者：李珊李艳艳高静沈琳北京大学肿瘤医院暨北京市肿瘤防治研究所消化内科 100142 恶性肿瘤发病机制及转化研究教育部重点实验室

目的研究miR-34a在Ⅱ-Ⅲ期结直肠癌组织中的表达及其与结直肠癌根治术后复发转移的关系．方法收集根治术后3年内复发转移与未复发的Ⅱ～Ⅲ期结直肠癌新鲜手术标本各40例．采用反转录实时定量PCR方法检测miR-34a的表达水平，并分析其与... 详细信息

目的研究miR-34a在Ⅱ-Ⅲ期结直肠癌组织中的表达及其与结直肠癌根治术后复发转移的关系．方法收集根治术后3年内复发转移与未复发的Ⅱ～Ⅲ期结直肠癌新鲜手术标本各40例．采用反转录实时定量PCR方法检测miR-34a的表达水平，并分析其与结直肠癌根治术后复发转移的关系。结果肿瘤组织中miR-34a的表达水平与患者性别、年龄、肿瘤部位、浸润深度、有无淋巴结转移、脉管癌栓和病理分化程度无关（P〉0．05）。有复发转移患者miR-34a的表达水平低于无复发者（P=0．039）。单因素生存分析显示，miR-34a低表达与患者根治术后无病生存时间缩短有关（P=0．010），且在Ⅲ期患者中这种趋势更加明显（P=0．003）。40例复发患者中，miR-34a低表达者（14例）中位无病生存时间为13．4个月，低于高表达者（26例）的18．4个月（P=0．037）。Cox模型多因素分析miR-34a低表达是影响结直肠癌根治术后无病生存时间的独立因素（RR=0．397．95％CI=0．205～0．768．P=0．006）。结论miR-34a表达水平下降与结直肠癌患者术后无病生存时间缩短有关．miR-34a可作为预测结盲肠痛根治术后复发转移的一个分子指标．

关键词： mirna-34a 结直肠肿瘤根治性手术肿瘤复发

肾透明细胞癌mirnas、Notch1和Hes1的表达及意义

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肾透明细胞癌miRNAs、Notch1和Hes1的表达及意义

作者：杨阳南昌大学

学位级别：硕士

第一部分：mirnas在肾透明细胞癌组织中的表达及意义目的：通过检测候选mirnas在肾透明细胞癌患者癌组织和癌旁组织中的表达情况，并分析其与肿瘤分期、病理分级等临床病理参数之间的关系，探讨mirnas在肾透明细胞癌发生、发展过程中... 详细信息

第一部分：mirnas在肾透明细胞癌组织中的表达及意义目的：通过检测候选mirnas在肾透明细胞癌患者癌组织和癌旁组织中的表达情况，并分析其与肿瘤分期、病理分级等临床病理参数之间的关系，探讨mirnas在肾透明细胞癌发生、发展过程中的作用及其在肾透明细胞癌诊断、治疗、预后判断等方面的意义。方法：收集自2009年9月～2011年1月在南昌大学第一附属医院泌尿外科行肾癌切除术患者的组织块（癌组织和其癌旁组织）保存于液氮中。取术后病理切片证明病理分型为肾透明细胞癌的病理组织共计20例。采用实时荧光定量PCR技术检测肾透明细胞癌患者癌组织与癌旁组织中mirna-20b、-21、-34a、-210、-141、-200c、200b、-514、-532-5p的表达变化。数据采用2-△△CT法进行分析，实验数据用均数±标准差表示，采用SPSS17.0统计软件对实验结果进行配对样本t检验和两样本t检验，P＜0.05为差异有统计学意义。结果：mirna-142-5p在癌组织与癌旁组织中均无扩增;与癌旁组织相比，肾透明细胞癌患者癌组织中mirna-21、-34a、-210呈高表达(P＜0.05)，mirna-141、-200c呈低表达(P＜0.05)，mirna-20b、-200b、-514、-532-5p则无差异。mirna-34a随着肾癌病理分级的增高而增高。结论：在肾透明细胞癌中，存在差异表达的mirnas，其中mirna-21、-34a、-210高表达，mirna-141、-200c低表达，提示差异表达的mirna在肾透明细胞癌中具有重要的作用。目的：采用生物信息学的方法，对差异表达的mirna进行靶基因预测分析，探讨差异表达的mirna通过其靶基因在肾透明细胞癌发生发展过程中的可能作用。方法：采用targetScan（http://***）、PicTar（http://***）、 miRanda（http://***）miRDB (http://***/miRDB)4个软件在线预测差异表达mirnas靶基因，并将在肾癌中出现的靶基因结合genbank数据库进行分析。结果：靶基因预测分析的结果显示，mirnas调节的靶基因范围非常广泛，涉及细胞周期、信号转导，细胞增殖、细胞凋亡、细胞分化等各个方面。其中与肾癌相关的靶基因:mirna-21(4个)，mirna-34a(8个)，mirna-210（1个），mirna-141（4个），mirna-200c(6个)，共11个靶基因。其中TGFBR1、ITGB3、VHL、VEGFA、GSTM3和CYP1B1为两个及以上mirna的靶基因。结论：生物信息学分析表明，差异表达的mirna可能通过其靶基因在肾癌发生发展过程中起重要作用。目的：通过检测mirna-34a、Notch1和Hes1在肾透明细胞癌患者癌组织和癌旁组织中的表达情况，并分析其与肿瘤分期、病理分级等临床病理参数之间的关系，探讨其与肾癌发生发展的关系及可能的临床意义。方法：收集自2009年9月～2011年1月在南昌大学第一附属医院泌尿外科行肾癌切除术患者的组织块（癌组织和其癌旁组织）保存于液氮中。取术后病理切片证明病理分型为肾透明细胞癌的病理组织共计48例。运用实时荧光定量PCR技术检测mirna-34a、Notch1和Hes1在肾透明细胞癌癌组织及其癌旁组织的表达;并分析其与临床病理特征的关系。数据采用2-△△CT法进行分析，实验数据用均数±标准差表示，采用SPSS17.0统计软件对实验结果进行配对样本t检验和两样本t检验，各指标间关系采用Spearman等级相关分析，P＜0.05为差异有统计学意义。结果：48例肾癌标本中，mirna-34a有33例高表达，8例低表达，7例无差别;Notch1有36例低表达，3例高表达，9例无差别;Hes1有31例低表达，9例高表达，8例无差别。与癌旁组织相比，mirna-34a、Notch1、Hes1总的表达变化倍数分别为：4.093±3.661;0.497±0.724;0.498±0.872。结果均有统计学意义(P＜0.05)。mirna-34a随着肾癌病理分级的增高而增高，Notch1的表达则随着肾癌病理分级的增高而降低(P＜0.05)。mirna-34a和Notch1的表达水平还与年龄有关,年龄＜50岁的患者mirna-34a的表达更高、Notch1的表达更低(P＜0.05)。两者的表达水平在不同的性别、肿瘤大小和临床分期的病例中无显著差异。Hes1的表达与肾癌临床病理参数间的关系差异无统计学意义(P＞0.05)。结论：在肾透明细胞癌中，mirna-34a、

关键词： mirna 肾透明细胞癌实时荧光定量PCR 肾癌靶基因预测分析 mirna-34a Notch1 Hes1

微小RNA-34a调控SIRT6基因影响皮肤鳞状细胞癌的作用研究

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微小RNA-34a调控SIRT6基因影响皮肤鳞状细胞癌的作用研究

作者：王佳荣内蒙古医科大学

学位级别：硕士

目的:探讨微小RNA-34a对皮肤鳞状细胞癌A431细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响,以及其与沉默信号调节蛋白6(Sirtuin6,SIRT6)的关联情况。方法:常规培养皮肤鳞癌细胞株A431和正常人角质形成细胞株HaCaT后,采用QPCR(Quantitative Real-tim... 详细信息

目的:探讨微小RNA-34a对皮肤鳞状细胞癌A431细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响,以及其与沉默信号调节蛋白6(Sirtuin6,SIRT6)的关联情况。方法:常规培养皮肤鳞癌细胞株A431和正常人角质形成细胞株HaCaT后,采用QPCR(Quantitative Real-time PCR,实时荧光定量PCR)测定A431及HaCaT中miR-34a的表达水平。对A431细胞进行转染并分组:对照组(无转染,control组)、增强组(转染miR-34a mimic)及其阴性对照组(转染miR-34a mimic NC)、抑制转染组(转染miR-34a inhibitor)及其阴性对照组(转染miR-34a inhibitor NC)。miR-34a的转染效率使用QPCR进行验证,随后执行进一步的细胞功能实验。CCK-8检测细胞增殖能力;Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力;流式细胞术检测细胞凋亡率。通过Star Base程序在线预测miR-34a的靶基因,选取与肿瘤相关的靶基因SIRT6,采用QPCR及Western Blot分别检测HaCaT细胞、A431细胞中的SIRT6的表达情况;Western Blot测定转染后各组细胞SIRT6的水平。miR-34a与SIRT6的靶向关系由双荧光素酶报告实验验证。使用SPSS 24.0软件进行统计分析。结果:(1)QPCR结果显示,与HaCaT细胞相比,miR-34a在A431细胞中表达显著降低(P34a在miR-34a mimic组中的水平显著升高(P34a inhibitor组的水平显著下降(P34a mimic组的细胞增殖活力显著下调(P34a inhibitor组则显著上调(P34a mimic组的细胞迁移能力显著下降(P34a inhibitor组则显著升高(P34a mimic组的细胞侵袭能力均显著下降(P34a inhibitor组则显著升高(P34a mimic组的细胞凋亡率显著升高(P34a inhibitor组则显著降低(P34a mimic组的SIRT6表达显著下调(P34a inhibitor组显著上调(P34a mimic分别和携带SIRT6野生型、突变型3’端非翻译区(3’UTR)质粒共转染,前者的荧光素酶活性显著下降(P0.05)。结论:CSCC细胞A431中miR-34a低表达,而SIRT6高表达;上调miR-34a水平可抑制CSCC细胞增殖、迁移及侵袭,并可以诱导凋亡,可能通过负向调控其靶基因SIRT6来发挥抑癌作用,为CSCC靶向治疗提供了一个新的切入点。

关键词：皮肤鳞状细胞癌 mirna-34a 侵袭迁移 SIRT6

癫痫患者脑脊液和血清P53 mRNA、微小RNA-34a表达情况及其与认知功能的相关性

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广西医学 2021年第14期43卷 1686-1690页

作者：蒋月丽解龙昌何超明庞明武梁冬海南省三亚中心医院/海南省第三人民医院老年医学科三亚市572000 广州医科大学附属第二医院神经内科广东省广州市510260 三亚中心医院/海南省第三人民医院神经内科海南省三亚市572000

目的探讨癫痫患者脑脊液和血清中P53 mRNA、微小RNA(mirna)-34a的表达水平及其与认知功能的相关性。方法选取79例癫痫患者作为癫痫组,73例有头痛症状但非癫痫患者作为对照组。检测两组脑脊液和血清中P53 mRNA、mirna-34a的表达水平并评... 详细信息

目的探讨癫痫患者脑脊液和血清中P53 mRNA、微小RNA(mirna)-34a的表达水平及其与认知功能的相关性。方法选取79例癫痫患者作为癫痫组,73例有头痛症状但非癫痫患者作为对照组。检测两组脑脊液和血清中P53 mRNA、mirna-34a的表达水平并评估患者的认知功能,分析癫痫患者脑脊液和血清P53 mRNA与mirna-34a表达水平的相关性,以及脑脊液和血清P53 mRNA、mirna-34a相对表达水平与认知功能的相关性。结果癫痫组脑脊液P53 mRNA、mirna-34a相对表达水平、血清P53 mRNA相对表达水平均高于对照组,血清mirna-34a相对表达水平低于对照组(均Pmirna-34a相对表达水平呈正相关,血清P53 mRNA相对表达水平与mirna-34a相对表达水平呈负相关(Pmirna-34a及血清P53 mRNA相对表达水平呈负相关,与血清mirna-34a相对表达水平呈正相关(Pmirna-34a及血清P53 mRNA相对表达水平呈正相关,与血清mirna-34a相对表达水平呈负相关(Pmirna-34a在脑脊液中呈高表达而在血清中呈低表达,二者均与癫痫患者认知功能相关。

关键词：癫痫脑脊液血清 P53 mirna-34a 认知功能诊断