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mirna-330-3p调控CTNNB1在颞下颌关节骨关节炎软骨退变中的作用研究

miRNA-330-3p调控CTNNB1在颞下颌关节骨关节炎软骨退变中的作用研...

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作者：王楚瑶青岛大学

学位级别：硕士

目的:探索mirna-330-3p在颞下颌关节骨关节炎(TMJOA)软骨退变中的表达变化、及其对软骨代谢的影响和下游靶点的调控。方法:1.对大鼠进行TMJOA建模,通过实时荧光定量pCR检测mirna-330-3p在软骨组织中的表达。对小鼠软骨细胞系ATDC5进行... 详细信息

目的:探索mirna-330-3p在颞下颌关节骨关节炎(TMJOA)软骨退变中的表达变化、及其对软骨代谢的影响和下游靶点的调控。方法:1.对大鼠进行TMJOA建模,通过实时荧光定量pCR检测mirna-330-3p在软骨组织中的表达。对小鼠软骨细胞系ATDC5进行炎症以及应力刺激,通过实时荧光定量pCR检测mirna-330-3p的表达变化。2.对ATDC5及人软骨细胞系SW1353进行转染mirna-330-3p的模拟物或抑制剂后,通过荧光染色以及免疫印迹实验探索mirna-330-3p对软骨细胞增殖及代谢的影响。对大鼠进行TMJOA建模,关节腔注射mirna-330-3p后,通过HE及免疫组化实验检测软骨细胞数量及代谢的变化,探索mirna-330-3p在TMJOA发生中的作用。3.生物信息学分析预测并筛选mirna-330-3p可能调控的下游靶点。在对人SW1353软骨细胞系进行炎症/应力刺激以及建立大鼠TMJOA模型后,通过蛋白免疫印迹及免疫组化实验检测软骨细胞及组织中下游靶点的表达变化。针对靶点进行过表达及抑制后,通过蛋白免疫印迹研究其对软骨细胞代谢的影响。通过转染和实时荧光定量pCR检测以及双荧光素酶实验研究mirna-330-3p与下游靶点之间的表达以及调控关系。结果:***大鼠软骨组织中mirna-330-3p表达下降约3.7倍(p=0.035)。炎症以及应力刺激下,小鼠ATDC5软骨细胞中mirna-330-3p表达显著下降(p=0.001,p=0.000028)。2.过表达mirna-330-3p能够促进ATDC5软骨细胞的增殖,并且促进ATDC5及SW1353软骨细胞中重要合成代谢分子标志物SOX9蛋白的增加以及分解代谢分子标志物MMp13蛋白的表达降低。抑制mirna-330-3p则表现为相反的结果。大鼠TMJOA建模后,髁突HE及免疫组化染色结果显示关节腔注射mirna-330-3p agomir组相较于仅注射agomir NC组软骨细胞数量增加,SOX9表达升高,MMp13及MMp3表达降低,软骨破坏减轻。3.4个预测网站共同预测到388个人mirna-330-3p下游靶基因,KEGG通路分析显示多个预测靶点参与WNT通路,其中CTNNB1是该通路中的经典参与分子。炎症/应力刺激下,SW1353软骨细胞中CTNNB1表达升高,TMJOA大鼠的软骨组织中,CTNNB1表达同样升高。SW1353软骨细胞中过表达CTNNB1后,SOX9蛋白下降且MMp13蛋白上升,而抑制CTNNB1后结果相反。SW1353软骨细胞中过表达mirna-330-3p后,CTNNB1在mRNA及蛋白水平上均有明显下降(pmirna-330-3p后,CTNNB1的表达则上升(pmirna-330-3p与CTNNB1之间无直接结合关系,mirna-330-3p对CTNNB1的调控机制尚需进一步研究。结论:***-330-3p在TMJOA软骨中的表达显著下降。***-330-3p促进软骨细胞表达SOX9,抑制MMp13的表达。在大鼠关节腔内注射mirna-330-3p可以缓解TMJOA软骨的破坏。***1是mirna-330-3p的下游靶点,抑制软骨细胞的合成并促进分解代谢,其表达受到mirna-330-3p的调控,但非直接结合关系,具体调控途径尚需进一步研究。

关键词：颞下颌关节骨关节炎 mirna-330-3p CTNNB1 软骨退变

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