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AECA在慢阻肺进展中的意义及其与VEGF、mirna-23a的关系

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AECA在慢阻肺进展中的意义及其与VEGF、miRNA-23a的关系

作者：薛会红遵义医科大学

学位级别：硕士

目的:本研究通过检测慢性阻塞性肺疾病(Chronic obstructive pulmonary disease,COPD,慢阻肺)患者及正常人群血浆中抗内皮细胞抗体(Anti-endothelial cell antibody,AECA)、血管内皮细胞生长因子(Vascular endothelial growth factor VEGF)、microRNA-23a(mirna-23a)的表达水平,以及动态随访其稳定期患者,探讨AECA在慢阻肺进展中的意义及其与VEGF、mirna-23a的相互关系,为临床上研究该病持续进展的发病机制提供理论依据。方法:选取2019年10月-2020年2月在贵州省人民医院住院或就诊的部分慢阻肺患者、健康体检者为研究对象;将其分为三组:慢阻肺稳定期组(93例)、急性加重期组(36例)、健康对照组(30例)。慢阻肺稳定期组可进一步分为一对亚组:AECA较高组和较低组,分组依据:以稳定期组中AECA中位数(386.17pg/mL)为界限,其中>386.17pg/mL为较高组,mirna-23a水平;同时使用肺功能仪对慢阻肺稳定期组患者进行肺功能检查,统计慢阻肺稳定期患者既往1年内急性加重次数及进行呼吸困难评分(mMRC评分)。2、对AECA较高组及较低组进行了间隔6个月、12个月的随访;随访检测指标包括AECA、VEGF、mirna-23a,且进一步完善肺功能检查(FEV1、FEV1/FVC、FEV1%pred),统计患者既往6月内、12月内急性加重次数及mMRC评分。结果:1、慢阻肺急性加重期组、稳定期组以及健康对照组间的AECA、VEGF、mirna-23a的比较(1)三组间AECA、VEGF水平比较:慢阻肺急性加重期组高于稳定期组、健康对照组,稳定期组高于健康对照组,差异均具有统计学意义(Pmirna-23a水平比较:慢阻肺稳定期组高于急性加重期组、健康对照组,急性加重期组高于健康对照组,差异均具有统计学意义(Pmirna-23a水平低于AECA较低组,差异具有统计学意义(Pmirna-23a水平的同期动态随访比较。3、慢阻肺稳定期组随访前后相关指标的整体比较(1)随访6月及12月后患者AECA、VEGF水平均高于随访前基线水平,12月后随访高于6月后随访;12月后随访mirna-23a水平低于随访前,差异具有统计学意义(P239,P=0.006),与mirna-23a呈负相关(rs=-0.367,Pmirna-

关键词：慢阻肺疾病抗内皮细胞抗体血管内皮细胞因子 mirna-23a 疾病进展

乳腺癌根治术患者mirna-23a表达水平与术后复发转移的关系

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中国实验诊断学 2018年第12期22卷 2049-2053页

作者：周永安赵德庆鄂东医疗集团黄石市中心医院(湖北理工学院附属医院)乳腺肿瘤外科湖北黄石435001 鄂东医疗集团黄石市中心医院(湖北理工学院附属医院)胸部肿瘤内科湖北黄石435001

目的探讨乳腺癌根治术患者mirna-23a表达水平与术后复发转移的关系。结果选取2013年3月至2016年3月本院收治的乳腺癌根治术患者160例,依据2年内复发转移情况分为复发组(n=50例)和未发组(n=110例),采用实时荧光定量聚合酶联反应法(RT-PCR... 详细信息

目的探讨乳腺癌根治术患者mirna-23a表达水平与术后复发转移的关系。结果选取2013年3月至2016年3月本院收治的乳腺癌根治术患者160例,依据2年内复发转移情况分为复发组(n=50例)和未发组(n=110例),采用实时荧光定量聚合酶联反应法(RT-PCR)检测mirna-23a表达水平,分析mirna-23a表达水平与术后复发转移的关系。结果单因素分析结果显示,复发组和未发组肿瘤类型、直径、TNM分期、淋巴结转移、雌激素受体(ER)和孕激素受体(PR)、mirna-23a表达水平比较,差异有统计学意义(Pmirna-23a表达水平是患者术后复发转移的独立影响因素(Pmirna-23a表达水平以mirna-23a表达水平与术后复发转移的关系密切,其低表达水平可能提示患者术后复发转移,检测其表达水平可作为评估患者术后复发转移的重要指标。

关键词：乳腺癌根治术 mirna-23a 复发转移

ABCG2、VEGF及mirna-23a与乳腺癌术后同侧锁骨上淋巴结转移的关系

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分子诊断与治疗杂志 2021年第11期13卷 1900-1904页

作者：刘平贤张浩王征李伟汉陆佳团河南省南阳市中心医院乳腺分泌腺外科河南南阳473009

目的研究ATP结合膜转运蛋白超家族G成员2(ABCG2)、血管内皮生长因子(VEGF)及微小RNA-23a(mirna-23a)与乳腺癌术后同侧锁骨上淋巴结转移的关系。方法选取本院2018年6月至2020年10月收治的79例乳腺癌行根治术患者设为研究组,其中伴同侧锁... 详细信息

目的研究ATP结合膜转运蛋白超家族G成员2(ABCG2)、血管内皮生长因子(VEGF)及微小RNA-23a(mirna-23a)与乳腺癌术后同侧锁骨上淋巴结转移的关系。方法选取本院2018年6月至2020年10月收治的79例乳腺癌行根治术患者设为研究组,其中伴同侧锁骨上淋巴结转移者43例(转移组),未伴同侧锁骨上淋巴结转移者36例(未转移组),另选取同期进行健康体检的49例健康人员作为对照组。分析各组ABCG2、VEGF及mirna-23a表达情况及上述因子与乳腺癌组织临床病理参数的关系,并绘制受试者工作特征曲线(ROC),分析ABCG2、VEGF及mirna-23a对乳腺癌术后同侧锁骨上淋巴结转移的预测价值。结果研究组ABCG2、VEGF阳性表达率明显高于对照组,mirna-23a水平明显低于对照组,差异均有统计学意义(Pmirna-23a水平明显低于未转移组,差异均有统计学意义(Pmirna-23a水平高于Ⅲ期者,差异均有统计学意义(Pmirna-23a三者联合预测乳腺癌术后同侧锁骨上淋巴结转移的ROC下曲线面积(AUC)为0.737,明显高于各项单独检测(Pmirna-23a表达下降对乳腺癌术后同侧锁骨上淋巴结转移有促进作用,推测上述因子可能是防止乳腺癌术后淋巴结转移的靶点。

关键词： ABCG2 VEGF mirna-23a 乳腺癌同侧锁骨上淋巴结转移

氟化钠染毒致大鼠骨组织形态计量学及微小RNA-23a表达的变化

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环境与职业医学 2019年第3期36卷 254-260页

作者：代佑罡韦艳陈宣好祁忠达张华贵州医科大学公共卫生学院职业卫生与环境卫生学系环境污染与疾病监控教育部重点实验室贵州贵阳550004

[目的]探讨氟化钠染毒致大鼠骨组织形态计量学变化及对微小RNA(miR NA)-23a表达的影响。[方法 ]将96只SD大鼠按体重随机分为对照组(0 mg/L)、低氟组(50 mg/L)、中氟组(150 mg/L)、高氟组(250 mg/L)。采取饮水染毒方式,染氟至2、4、6个... 详细信息

[目的]探讨氟化钠染毒致大鼠骨组织形态计量学变化及对微小RNA(miR NA)-23a表达的影响。[方法 ]将96只SD大鼠按体重随机分为对照组(0 mg/L)、低氟组(50 mg/L)、中氟组(150 mg/L)、高氟组(250 mg/L)。采取饮水染毒方式,染氟至2、4、6个月时分别处死每组8只SD大鼠,收集大鼠左下肢及牙齿,采用灰化-氟离子电极法测定大鼠骨氟、牙氟含量;取大鼠股骨干骺端固定后脱钙,进行苏木精-伊红染色,光镜观察骨组织骨小梁、骺板、成骨细胞的形态学改变;取左前肢,剔除多余结缔组织,用液氮反复研磨成骨粉,使用RNAiso Plus提取骨粉总RNA,采用实时荧光定量PCR法测定mirna-23a基因表达水平。[结果 ]除2个月时的低氟组外,不同时间各染毒组大鼠氟斑牙检出率均高于对照组(P mirna-23a表达量均高于对照组(P mirna-23a表达量均较2个月和4个月时升高,呈上升趋势。[结论 ]过量、长期的氟摄入会影响骨的形成和发育,推测mirna-23a参与了氟中毒致大鼠体内骨转换异常的过程,提示mirna-23a与氟致全身性危害具有潜在的关联性,但其参与机制尚未明确,有待进一步研究。

关键词：氟化钠氟中毒骨形态计量学 mirna-23a

MicroRNA-23a在自身免疫性肺气肿模型大鼠肺泡隔细胞凋亡中的作用

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海南医学院学报 2024年第23期30卷 1769-1775页

作者：程贵容卢江桃张程遵义医科大学贵州遵义563000 贵州医科大学贵州贵阳550001 贵州省人民医院贵州贵阳550002 国家卫生健康委员会肺脏免疫性疾病重点实验室贵州贵阳550000

目的:研究微小RNA-23a(microRNA-23a,mirna-23a)对自身免疫性肺气肿模型大鼠肺泡隔细胞凋亡的影响。方法:随机将24只雄性SD大鼠分为肺气肿组、正常对照组和mirna-23a模拟物(mirna-23a agomir)干预组。肺气肿组经腹腔注射人脐静脉内皮细... 详细信息

目的:研究微小RNA-23a(microRNA-23a,mirna-23a)对自身免疫性肺气肿模型大鼠肺泡隔细胞凋亡的影响。方法:随机将24只雄性SD大鼠分为肺气肿组、正常对照组和mirna-23a模拟物(mirna-23a agomir)干预组。肺气肿组经腹腔注射人脐静脉内皮细胞与完全弗氏佐剂的混合物造模+同mirna-23a agomir干预组同日尾静脉注射同体积生理盐水;mirna-23a agomir干预组:同日同肺气肿组方法造模+造模后第1、7、14、21天分别经尾静脉注射mirna-23a agomir(25μmol/L);正常对照组同日腹腔注射同剂量完全弗氏佐剂+同mirna-23a agomir干预组同日经尾静脉注射同体积生理盐水。造模21 d后,取各组大鼠右下肺行苏木精-伊红染色,观察病理学变化,测量平均肺泡数(mean alveolar number,MAN)和平均内衬间隔(mean linear interce-pt,MLI)右上肺经实时定量聚合酶链反应检测mirna-23a表达水平,通过脱氧核糖核酸末端转移酶介导的缺口末端标记法检测凋亡肺泡隔细胞并计算凋亡指数(Apoptotic index,AI)。血清检测抗血管内皮细胞抗体(Antiendothelial Cell Antibodies,AECA)的浓度。结果:(1)各组肺气肿病理改变程度:正常对照组mirna-23a agomir干预组mirna-23a agomir干预组>肺气肿组,各组差异有统计学意义(Pmirna-23a agomir干预组mirna-23a agomir干预组mirna-23a定量表达比较:正常对照组>mirna-23a agomir干预组>肺气肿组,各组差异有统计学意义(Pmirna-23a agomir干预组mirna-23a表达水平下调可能参与了肺气肿模型大鼠肺泡隔细胞的凋亡,mirna-23a agomir可减少肺气肿中的肺泡隔细胞凋亡,从而延缓自身免疫性肺气肿疾病进展。

关键词：自身免疫性肺气肿 mirna-23a 肺泡隔细胞凋亡

miR-23a靶向CELF1调控水牛颗粒细胞凋亡的研究

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miR-23a靶向CELF1调控水牛颗粒细胞凋亡的研究

作者：汪浩鑫广西大学

学位级别：硕士

本研究根据课题组前期对水牛GV/MII期卵母细胞对应卵丘细胞的micro RNA（mirna）高通量测序结果,在MII期卵丘细胞显著上调的24条差异表达mirnas中选择了一条可能与颗粒细胞（Granulosa Cells,GCs）凋亡相关的miR-23a进行研究。初步探讨... 详细信息

本研究根据课题组前期对水牛GV/MII期卵母细胞对应卵丘细胞的micro RNA（mirna）高通量测序结果,在MII期卵丘细胞显著上调的24条差异表达mirnas中选择了一条可能与颗粒细胞（Granulosa Cells,GCs）凋亡相关的miR-23a进行研究。初步探讨了miR-23a及其靶基因对水牛GCs体外培养过程中细胞凋亡的调控作用及其分子机制,为提高水牛卵母细胞体外成熟效率提供理论基础。研究取得如下主要结果:***-23a预测靶基因CELF1的筛选及靶向关系验证。本研究对miR-23a预测的1237个靶基因进行GO富集和KEGG分析,发现靶基因主要参与核糖体等信号通路,这些通路主要集中在对细胞的增殖、凋亡、物质代谢等调控,并筛选出关键靶基因CELF1。RT-q PCR分析miR-23a在水牛不同组织的表达情况,结果发现miR-23a在卵巢中高表达,在睾丸和附睾中微表达。为进一步验证miR-23a与CELF1的靶向关系,RT-q PCR检测结果发现水牛GCs中添加miR-23a mimic显著降低GCs中CELF1的m RNA表达（P＜0.05）;进而双荧光素酶试验亦证明miR-23a与CELF1存在靶向关系。2.探讨了miR-23a靶向CELF1对水牛颗粒细胞凋亡的影响。为了研究miR-23a对水牛GCs凋亡和增殖的影响,在体外培养的水牛GCs中添加miR-23a mimic/inhibitor,采用流式细胞仪技术检测细胞凋亡情况,结果发现miR-23a mimic能显著促进水牛GCs的凋亡（P＜0.05）;Ed U染色结果显示,miR-23a mimic抑制细胞的增殖（P＜0.05）,而miR-23a inhibitor则相反。其次,构建了pc-DNA3.1-CELF1过表达载体,瞬时转染到体外培养的水牛GCs中,结果发现CELF1可以显著促进水牛GCs增殖,抑制细胞凋亡（P＜0.05）,过表达CELF1同miR-23a inhibitor结果一致。而且,通过RT-q PCR、Western blot技术检测细胞凋亡相关基因和蛋白的相对表达量,发现miR-23a mimic促进水牛GCs中凋亡相关基因BAX、caspase3和P53的m RNA和蛋白表达,抑制抗凋亡基因Bcl2 m RNA和蛋白表达;而CELF1同miR-23a mimic结果相反。进而将miR-23a和CELF1共同转入水牛GCs时,结果发现CELF1可逆转miR-23a对水牛GCs凋亡的作用。ELISA试验检测miR-23a和CELF1对水牛GCs类固醇激素分泌的影响,结果显示,miR-23a mimic使雌二醇（E2）分泌显著下降（P＜0.05）,孕酮（P4）的分泌显著升高（P＜0.05）;过表达CELF1的结果和miR-23a mimic相反;而miR-23a和CELF1共转后CELF1可逆转miR-23a对GCs分泌E2的抑制作用。此外,采用RT-q PCR检测PI3K/AKT通路相关基因表达的变化,以进一步验证miR-23a通过靶向CELF1调控细胞凋亡的分子机理,结果显示,miR-23a下调PI3K（P＜0.05）和AKT（P＞0.05）的基因表达,上调通路基因PTEN的表达（P＜0.05）;miR-23a和CELF1共转后可以解除miR-23a对PI3K和AKT基因的抑制表达作用（P＜0.05）,抑制miR-23a对PTEN基因的促进表达作用（P＜0.05）。以上结果表明:（1）miR-23a在水牛卵巢中高表达,miR-23a与CELF1存在靶向关系;（2）miR-23a促进体外培养的水牛GCs凋亡,降低E2分泌而促进P4的分泌;相反,CELF1促进体外培养的水牛GCs增殖,提高E2分泌但降低P4的分泌;miR-23a通过靶向CELF1能够降低水牛GCs凋亡、促进细胞增殖和E2激素分泌;（3）miR-23a靶向CELF1可能通过抑制细胞中PI3K/AKT信号通路进而调控水牛GCs的凋亡。

关键词：水牛颗粒细胞 mirna-23a CELF1 细胞凋亡细胞增殖

MicroRNA-23a在香烟诱导的小鼠肺气肿模型中的作用

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MicroRNA-23a在香烟诱导的小鼠肺气肿模型中的作用

作者：田阳遵义医科大学

学位级别：硕士

目的:本研究以香烟烟雾提取物（Cigarette smoke extract,CSE）腹腔注射联合烟熏（Cigarette smoke,CS）建立肺气肿小鼠模型,并检测Micro RNA-23a（mi RNA-23a）的表达水平、肿瘤坏死因子-α（Tumor necrosis factor-α,TNF-α）的浓度以及肺泡隔细胞凋亡的指数,旨在探讨mi RNA-23a在小鼠肺气肿中的作用及其与肺泡隔细胞凋亡、TNF-α之间的关系,为临床上研究肺气肿的发病机制及寻求新的治疗提供理论依据。方法:将23只雄性C57BL/6J小鼠编号,然后按编号随机分为肺气肿4周组、肺气肿8周组、正常对照组;其中肺气肿4周组和8周组每组各8只,正常对照组7只。肺气肿4周组通过（CSE+磷酸盐缓冲液（Phosphate Buffered Solution,PBS）腹腔注射（第3、14、25天）+CS暴露（4周））,肺气肿8周组通过（CSE+PBS腹腔注射（第3、14、25天）+CS暴露（8周））,正常对照组腹腔注射PBS（第3、14、25天）。烟雾暴露结束24小时候后,采集三组小鼠的血液、肺组织及左肺肺泡灌洗液（Bronchoalveolar Lavage Fluid,BALF）,正常对照组与肺气肿8周组在同一天采集,并及时完成下列检测:（1）通过实时荧光定量法（Quantitative Real-time PCR,q RT-PCR）检测mi RNA-23a在肺组织中的表达水平。（2）观察并计算苏木精-伊红（Hematoxylin-eosin,HE）染色后的肺组织病理变化并计算肺泡平均内衬间隔（Mean Linear Intercept,MLI）和平均肺泡数（Mean alveolar Numbers,MAN）。（3）用酶联免疫吸附法（Enzyme Linked Immunosorbent Assay,ELISA）检测BALF中TNF-α浓度,应用Nexcelom Cellometer细胞计数仪、进行BALF细胞沉渣染色制片并分类（白细胞、中性粒细胞、巨噬细胞等炎症细胞）计数。（4）脱氧核糖核酸末端转移酶介导的缺口末端标记（Terminal deoxynucleotidyl trans ferasemediated d UTP nick end labeling,TUNEL）法检测肺泡隔细胞凋亡。结果:（1）三组小鼠日常情况比较:正常对照组小鼠活动矫健,饮食基本正常。肺气肿模型组在烟雾暴露后逐渐出现毛发易脱落、呼吸短促、口腔分泌物增多、挠鼻动作增多、反应迟钝。（2）三组小鼠肺组织中mi RNA-23a比较:肺气肿8周组＞肺气肿4周组＞正常对照组,两种模型组与正常对照组之间差异有统计学意义（p＜0.05）。（3）三组小鼠肺组织MLI比较:正常对照组＜肺气肿4周组＜肺气肿8周组,各组之间差异均有统计学意义（p＜0.05）;三组小鼠肺组织MAN比较:正常对照组＞肺气肿4周组＞肺气肿8周组,各组之间差异有统计学意义（p＜0.05）。（4）三组小鼠BALF中白细胞数、中性粒细胞数和巨噬细胞数计数比较,均为肺气肿8周组＞肺气肿4周组＞正常对照组,各组之间差异有统计学意义（p＜0.05）,三组小鼠BALF中TNF-α浓度比较,肺气肿8周组＞肺气肿4周组＞正常对照组,其中两种模型组与正常对照组差异有意义（p＜0.05）;（5）各组肺泡隔细胞凋亡指数比较:肺气肿8周组＞肺气肿4周组＞正常对照组,各组之间差异有统计学意义（p＜0.05）。（6）肺气肿4周组小鼠肺组织mi RNA-23a水平与肺泡隔细胞凋亡指数呈正相关（r=0.806,P＜0.05）,BALF中TNF-α浓度与肺泡隔细胞凋亡指数呈正相关（r=0.73,P＜0.05）,肺组织mi RNA-23a水平与BALF中TNF-α浓度呈正相关（r=0.85,P＜0.05）。（7）肺气肿8周组小鼠肺组织mi RNA-23a水平与肺泡隔细胞凋亡指数呈正相关（r=0.743,P＜0.05）,BALF中TNF-α浓度与肺泡隔细胞凋亡指数呈正相关（r=0.89,P＜0.05）,肺组织mi RNA-23a水平与BALF中TNF-α浓度呈正相关（r=0.74,P＜0.05）。结论:（1）腹腔注射CSE联合烟熏可诱发小鼠肺泡隔细胞凋亡及肺气肿的产生;（2）mi RNA-23a表达和TNF-α浓度、肺泡隔细胞凋亡呈正相关,TNF-α浓度和肺泡隔细胞凋亡呈正相关;推测:mi RNA-23a可能通过调控TNF-α功能诱发肺泡隔细胞凋亡参与肺气肿的形成;（3）随着烟熏时间延长,气道炎症及肺泡隔细胞凋亡可能进一步增加。

关键词：小鼠肺气肿 mirna-23a 肿瘤坏死因子-α 肺泡隔细胞凋亡

信号转导与转录激活因子5A（STAT5A）的丢失对肝癌糖代谢的影响及其机制探究

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信号转导与转录激活因子5A（STAT5A）的丢失对肝癌糖代谢的影响及...

作者：蒋亚波中国人民解放军海军军医大学

学位级别：硕士

【研究背景和目的】信号转导与转录激活因子5(Signal Transducer and Activator Of Transcription 5,STAT5)在人体内有着广泛的生理病理功能。STAT5能被多种细胞因子(cytokines)如催乳激素(prolactin,Prl)、红细胞生长素(erythropoietin)、生长激素(growth hormone,GH)和上皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)等激活并能反馈的调控多种细胞因子。在肝脏中,有研究发现GH-STAT5信号通路在控制脂代谢途径上发挥着重要的作用:肝脏特异性敲除STAT5后,增加了CD36和PPAR(Peroxisome Proliferator Activated Receptor)的表达,导致实验小鼠出现明显的脂肪肝、葡萄糖耐受不良、胰岛素抵抗和肝脏再生能力受损。此外STAT5在肝脏的缺失,还会引起TGF-β和STAT3的表达增加,加速了肝脏的纤维化和肿瘤的形成。另外,肝特异性的敲除STAT5A后,调控了NOX4(reactive oxygen species(ROS)-generating enzyme NOX4)的表达,导致凋亡蛋白PUMA和BIM的表达下降,从而促进了肝癌细胞增殖。STAT5包含了STAT5A和STAT5B两个亚型,二个亚型均由人类17号染色体上衔接的连锁基因所编码,并在DNA结构上有95%的相似性,但是由于蛋白结构上的反式激活区域存在着一定的差异,STAT5A和STAT5B在生理病理过程中都有着特异的生物学功能。本课题旨在探究STAT5A亚型在肝癌进展中的作用,尤其是对肝癌糖代谢的影响。同时,希望能从抑制糖代谢的角度寻找新的潜在的治疗靶点。【研究方法】首先,利用病人组织芯片,分析并明确STAT5A在肝癌病人肿瘤组织中的表达情况。Kaplan-Meier方法分析STAT5A的表达与预后的关系以及进行多因素的生存分析。在生物学功能方面,首先构建STAT5A过表达的稳转Huh7肝癌细胞系,利用CCK8、流式分析及裸鼠皮下荷瘤实验探索STAT5A对于肝癌细胞增殖和细胞周期的影响。然后,利用Kit检测STAT5A的表达对于细胞葡萄糖消耗,乳酸代谢的影响。更进一步凭借GC-MS技术,具体的分析糖酵解和TCA循环上各代谢产物的变化。在机制方面,利用q-PCR技术和Wectern blot技术分析验证STAT5A可能的作用通路以及作用的糖代谢靶点。【研究结果】(一)STAT5A的表达与患者预后的关系1.根据148例病人的组织芯片结果分析发现,与配对癌旁组织相比,STAT5A在肝癌肿瘤组织中的表达明显降低。用Kaplan-Meier生存分析方法分析发现,肿瘤中STAT5A低表达组OS较高表达组明显降低。多因素生存分析也有类似的结果:STAT5A的表达与是否有包膜、AFP的表达和肿瘤大小可以作为影响RFS和OS的独立风险因素。(二)STAT5A在体内外对肝癌细胞增殖能力、细胞周期的影响1.检测STAT5A在常用肝癌细胞系中的表达,挑选Huh7构建了稳转的过表达细胞系,而敲除STAT5A的细胞系则用相对应的si RNA,并用WB对STAT5A的表达进行验证。***8增殖实验发现,过表达STAT5A后肝癌细胞的增殖明显被抑制,而敲除STAT5A之后细胞的增殖能力明显增强。裸鼠皮下荷瘤实验也证实了STAT5A能抑制肝癌细胞的增殖。流式技术分析还发现,STAT5A过表达可以抑制肝癌细胞的周期进展,使肝癌细胞更多的停滞在G0/G1期,减少了细胞的有丝分裂。3.关于糖代谢方面,首先利用相关kit检测培养基葡萄糖和乳酸,发现STAT5A过表达可以明显的减少肝癌细胞葡萄糖的消耗和乳酸的产生。进一步的针对具体代谢产物的分析提示,STAT5A过表达可以降低糖酵解和TCA循环上的主要产物。(三)STAT5A机制探究1.在通路方面,发现STAT5A可以明显的调控AKT的磷酸化,而反过来抑制AKT之后STAT5A的磷酸化也会增加。配对病人的组织芯片结果也证实,STAT5A的表达与p-AKT的表达呈负性相关。2.利用knock-down和过表达的细胞进行q PCR检测发现STAT5A在转录水平能影响多种基因的表达,在病人组织的RNA水平上也有类似的结果。进一步的WB实验发现,STAT5A会明显的影响HK2的蛋白水平的表达。加入AKT抑制剂之后能逆转HK1的蛋白表达证实,AKT通路在STAT5A-HK2的调控过程中有着重要的作用。3.发现了mi RNA-23a可以负调控STAT5A的表达。4.此外,我们还证实了,STAT5A对另一个重要的转录因子HNF4α有着明显的正调控,并且,HNF4α可以直接作用于PI3K。【研究结论】本课题首先明确了

关键词： STAT5A 肝细胞癌糖代谢 HNF4α AKT mirna-23a

S-腺苷甲硫氨酸对小鼠戒烟肺气肿模型肺泡隔细胞凋亡及MicroRNA-23a的影响

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S-腺苷甲硫氨酸对小鼠戒烟肺气肿模型肺泡隔细胞凋亡及MicroRNA-2...

作者：张艳梅遵义医科大学

学位级别：硕士

目的:研究S-腺苷甲硫氨酸(SAM)对小鼠肺气肿模型戒烟后肺泡隔细胞凋亡及Micro RNA-23a的影响,为探索肺气肿及慢性阻塞性肺疾病(COPD)戒烟后持续进展的机制以及新的治疗方案提供进一步的研究证据。方法:48只C57BL/6J小鼠随机分为健康对... 详细信息

目的:研究S-腺苷甲硫氨酸(SAM)对小鼠肺气肿模型戒烟后肺泡隔细胞凋亡及Micro RNA-23a的影响,为探索肺气肿及慢性阻塞性肺疾病(COPD)戒烟后持续进展的机制以及新的治疗方案提供进一步的研究证据。方法:48只C57BL/6J小鼠随机分为健康对照组、肺气肿组、戒烟组(戒烟4、8周组)、戒烟后SAM干预组(SAM干预4周、8周组)。使用烟草烟雾提取物(CSE)联合香烟烟雾(CS)暴露构建肺气肿小鼠模型,肺气肿模型构建成功后开始停止香烟暴露。戒烟后SAM干预组小鼠腹腔注射SAM100mg/(kg.d)。苏木精-伊红(HE)染色右肺组织病理切片,测定平均肺泡数(MAN)及平均内衬间隔(MLI),分析肺气肿。左肺行肺泡灌洗,以分光光度仪检测肺泡灌洗液中的丙二醛(MDA)浓度、超氧化物歧化酶(SOD)及谷胱甘肽(GSH)浓度。ELISA法检测血清中抗血管内皮细胞抗体(AECA)浓度。通过免疫组化法测定小鼠肺组织血管内皮生长因子(VEGF)的表达。利用脱氧核糖核酸末端转移酶介导的d UTP缺口末端标记(TUNEL)技术检测肺泡隔细胞调亡并计算凋亡指数(AI)。利用实时荧光定量PCR法(q RT-PCR)检测mirna-23a在小鼠肺组织的相对表达水平。结果:1.肺气肿组、戒烟组、戒烟后SAM干预组与健康对照组比较,戒烟组与肺气肿组比较,戒烟8周组与戒烟4周组比较,MLI升高、MAN降低。戒烟后SAM干预组与同期戒烟组比较,MLI降低、MAN升高。以上P均mirna-23a表达降低。戒烟后SAM干预组与同期戒烟组比较,VEGF及mirna-23a表达升高。P均mirna-23a间相关性分析:AECA与AI呈正相关(r=0.902,Pmirna-23a与AI、AECA呈负相关(r分别为-0.712,—0.773,P23a、AECA、VEGF表达异常可能参与被动吸烟小鼠肺气肿的发生,且戒烟后表达异常持续进展。3.小鼠被动吸烟模型中,mirna-23a的低表达以及AECA的升高可能诱发肺泡隔细胞凋亡诱导肺气肿形成。***能延缓戒烟后肺气肿的进展,其机制可能是抑制mirna-23a的表达的持续降低,减少氧化应激,抑制肺泡隔细胞凋亡有关。

关键词：香烟烟雾肺气肿细胞凋亡 mirna-23a 氧化应激 S-腺苷甲硫氨酸