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mirna-204在鼻咽癌中的表达及临床意义

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临床耳鼻咽喉头颈外科杂志 2014年第22期28卷 1780-1782页

作者：彭涛周绪红胡敏吴婷婷武汉大学中南医院耳鼻咽喉科武汉430070

目的:探讨mirna-204在鼻咽癌(NPC)组织中的表达与临床病理特征及预后的关系。方法:收集50例NPC患者和40例鼻咽慢性炎症患者活检组织标本,采用RT-PCR方法检测mirna-204的相对表达量,并分析其与临床病理资料和预后的相关性。结果:与鼻咽... 详细信息

目的:探讨mirna-204在鼻咽癌(NPC)组织中的表达与临床病理特征及预后的关系。方法:收集50例NPC患者和40例鼻咽慢性炎症患者活检组织标本,采用RT-PCR方法检测mirna-204的相对表达量,并分析其与临床病理资料和预后的相关性。结果:与鼻咽慢性炎症患者比较,mirna-204在NPC患者血清中表达下调,其表达与NPC患者的EBV感染、分化程度、淋巴结转移和TNM分期明显相关(Pmirna-204低表达者生存时间明显低于高表达者(Pmirna-204的表达下调与病情进展明显相关,mirna-204可能作为NPC治疗的一个新靶点。

关键词：鼻咽癌 mirna-204 预后

葛根素对成骨细胞中mirna-204的调控及其与Runx2基因表达的关系

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中国骨质疏松杂志 2016年第6期22卷 677-682页

作者：张莹莹周建斌赵凤鸣詹秀琴南京中医药大学基础医学院生物教研室江苏南京210023

目的研究葛根素作用于成骨细胞MC3T3-E1后mirna表达的变化以及与Runx2基因表达的关系。方法 RT-PCR和western blot法检测Runx2的mRNA表达水平和蛋白表达水平;mirna表达谱检测葛根素作用于成骨细胞后可能靶向Runx2的mirna;Target Scan、P... 详细信息

目的研究葛根素作用于成骨细胞MC3T3-E1后mirna表达的变化以及与Runx2基因表达的关系。方法 RT-PCR和western blot法检测Runx2的mRNA表达水平和蛋白表达水平;mirna表达谱检测葛根素作用于成骨细胞后可能靶向Runx2的mirna;Target Scan、Pic Tar等靶点预测软件预测靶向Runx2的mirna;RT-PCR测定mirna-204表达量;构建Runx23’UTR/突变型Runx2 3’UTR重组质粒、合成mirna-204mimics和mirna-204NC共转染MC3T3-E1细胞,双荧光素酶报告基因系统验证靶基因;mirna-204mimics和mirna-204inhibitor转染MC3T3-E1细胞,RT-PCR和western blot检测转染前后Runx2的mRNA表达量和蛋白表达量的变化。结果与空白组比较葛根素作用后Runx2的mirna和蛋白表达均上升;mirna-204表达水平下降;表达谱和靶点预测软件预测靶向Runx2的mirna共同有miR-204、miR-3072-3p等;过表达mirna-204后Runx2的蛋白表达水平下降,干扰mirna-204表达后Runx2的蛋白水平上升。结论葛根素在成骨细胞中可通过调节靶向Runx2基因的mirna-204来促进细胞增值分化。

关键词：成骨细胞葛根素 Runx2 mirna-204 靶基因转染过表达干扰

葛根素对成骨细胞mirna-204的调控及其与Runx2基因表达的关系

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葛根素对成骨细胞miRNA-204的调控及其与Runx2基因表达的关系

作者：张莹莹南京中医药大学

学位级别：硕士

目的：研究葛根素对成骨细胞MC3T3-E1增殖能力、分化能力、mirna表达的影响以及其与Runx2基因表达的关系。方法：***法检测葛根素作用于MC3T3-E1细胞后成骨细胞的增殖能力,用终浓度为0.01mg/ml的葛根素处理,并设一个空白对照组,加入等... 详细信息

目的：研究葛根素对成骨细胞MC3T3-E1增殖能力、分化能力、mirna表达的影响以及其与Runx2基因表达的关系。方法：***法检测葛根素作用于MC3T3-E1细胞后成骨细胞的增殖能力,用终浓度为0.01mg/ml的葛根素处理,并设一个空白对照组,加入等体积的α-MEM培养液,每组设6个复孔分别继续培养24h、48h、72h后检测OD值。2.碱性磷酸酶活性检测葛根素对成骨细胞分化能力的影响,传代培养成骨细胞后,进行细胞爬片,等待细胞爬片成功后,弃掉培养液,用PBS清洗3次,依据ALP染色试剂盒说明书的方法,给细胞染色。3.葛根素作用于成骨细胞后,分别提取RNA和蛋白质,采用RT-PCR法检测Runx2的mRNA表达水平和和用western blot法检测Runx2蛋白表达水平。4.采用PicTar、Target Scan、等靶点预测软件预测靶向Runx2的mirna,并与表达谱测定的葛根素作用MC3T3-E1前后mirna变化作比较。5.采用RT-PCR验证葛根素作用MC3T3-E1前后靶向Runx2基因的mirna表达量。6.构建Runx2 3'UTR/突变型Runx2 3'UTR重组质粒、合成mirna-204mimics和mirna-204NC共转染MC3T3-E1细胞,用双荧光素酶报告基因系统验证Runx2与mirna-204的靶向关系。7.分别用mirna-204inhibitor和mirna-204mimics转染MC3T3-E1细胞,RT-PCR和western blot检测转染前后Runx2的mRNA表达量和蛋白表达量的变化。结果：葛根素作用后,与空白对照组比较：1.成骨细胞增殖能力提高;***活性提高;***2的mRNA和蛋白表达水平上升;4. mirna表达谱和靶点预测软件预测靶向Runx2的mirna共同有miR-204、mirna-344f-5p;***结果显示mirna-204和mirna-344f-5p表达水平下降,mirna-2861表达水平上升,mirna-23a-5p、 mirna-770-5p、mirna-871-5p表达水平无明显改变;6.双荧光素酶报告基因法结果显示,细胞转染48h后,只有Runx2 3'UTR+mirna-204 mimics组荧光素蛋白的表达水平显著降低,说明只有mirna-204可抑制Runx2 3'UTR报告基因的表达;7.过表达mirna-204后Runx2的蛋白表达水平下降,干扰mirna-204表达后Runx2的蛋白水平上升。结论：葛根素可提高成骨细胞增殖、分化能力,并调节可能靶向Runx2的mirna,为进一步研究葛根素促进成骨细胞发育的机理研究提供可靠的依据。

关键词：葛根素增殖成骨细胞 Runx2 mirna-204

NDV通过mirna-204对人肺腺癌A549细胞凋亡的影响

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NDV通过miRNA-204对人肺腺癌A549细胞凋亡的影响

作者：田雯钰广西医科大学

学位级别：硕士

研究背景及目的:肺癌是当今社会上最常见的恶性肿瘤之一,在常见的因疾病而死亡的原因中排名第一。我国作为一个经济发展中国家,由于人们的身体素质和生活质量不如发达国家,医疗水平和科学技术略显匮乏,因此肺癌发病率和死亡率的上升趋... 详细信息

研究背景及目的:肺癌是当今社会上最常见的恶性肿瘤之一,在常见的因疾病而死亡的原因中排名第一。我国作为一个经济发展中国家,由于人们的身体素质和生活质量不如发达国家,医疗水平和科学技术略显匮乏,因此肺癌发病率和死亡率的上升趋势尤为显著。新城疫病毒（Newcastle disease virus,NDV）属于禽Ⅰ型副黏病毒科副黏病毒属,为单股负链RNA病毒。当禽类养殖业遭遇NDV的袭击时,若不幸发生大面积广泛传播,将对禽类养殖业造成巨大伤害。除引起禽病外,NDV对人类也有有益的一面,它可以诱发肿瘤细胞凋亡,而对人体多数正常细胞或组织没有损伤或损伤较小,因而成为溶瘤病毒家族中极具潜力的候选病毒。NDV可以通过诱发肿瘤细胞凋亡而达到抗癌的目的,其机制的阐明是解锁NDV生物治疗的关键钥匙之一。近年来,mirna参与调控肿瘤细胞凋亡的研究表明mirna能够通过转录后调节级联信号通路来影响细胞凋亡的生物学过程。那么,我们以“凋亡途径是NDV抗肿瘤的主要途径”为出发点,再结合“mirna参与肿瘤细胞凋亡调控”,提出“NDV诱导肿瘤细胞的凋亡是否存在mirna的调控”这个科学问题。拟以“mirna调控”为切入点,选择参与肿瘤细胞凋亡调控的mirna-204为研究对象,探讨mirna在NDV促肺癌细胞凋亡中的作用,项目的完成将有助于我们对NDV的溶瘤机制进一步认识,也为基于“NDV-mirna-肿瘤细胞”生物治疗策略提供新的理论依据。方法:1.利用不同效价的NDV-7793病毒体外作用于人肺腺癌A549细胞,采用CCK-8法检测24 h、48 h和72 h三个时间点病毒作用后的人肺腺癌A549细胞的存活率,筛选出最佳病毒效价以及感染时间。采用该效价的病毒体外感染人肺腺癌A549细胞,通过显微镜观察细胞病变（Cytopathic Effect,CPE）,TUNEL法荧光显微镜下观察细胞凋亡情况,进一步确定NDV-7793是否能够成功感染A549细胞并使其发生凋亡。2.将体外作用A549细胞的处理实验分为六组,分别是NDV-7793组（NDV-7793）、紫外灭活NDV-7793组（UV-NDV-7793）、流感病毒BR07组（BR07）、紫外灭活流感病毒BR07组（UV-BR07）、抗癌药物组（顺铂）和空白对照组（PBS）。采用RT-PCR法分别检测各组A549细胞24 h、48 h和72 h的mirna-204表达情况;血凝实验检测NDV-7793组三个时间点细胞上清液的血凝素神经氨酸酶（hemagglutinin-neuraminidase,HN）效价;流式细胞术检测六组在24 h、48 h和72 h的A549细胞的凋亡率;RT-PCR检测六组三个时间点凋亡相关蛋白Caspase-3、Bax的表达;3.验证试验:采用转染mirna-204抑制物的方法建立去表达mirna-204的A549细胞模型,在模型中设置inhibitor组和inhibitor-nc组。然后用NDV-7793体外作用经mirna-204抑制物转染预处理后的A549细胞,采用RT-PCR法检测mirna-204的表达情况;流式细胞术检测A549细胞的凋亡率;RT-PCR、Western Blot法检测凋亡相关蛋白Caspase-3、Bax的表达。结果:1.成功扩增NDV-7793病毒;经CCK-8检测得出,在体外作用A549细胞的不同HN效价的NDV-7793病毒组中,HN为1:2048的NDV-7793体外作用48 h的A549细胞的存活率最低且稳定,因此后续实验均选择HN为1:2048的NDV-7793病毒进行研究且最佳感染时间为48 h。在病毒致细胞病变效应观察中,我们发现NDV-7793体外作用24 h时,细胞状态开始出现改变,48 h大量细胞明显皱缩、变圆并不再贴壁,72 h细胞大量死亡;TUNEL法荧光显微镜下观察显示NDV-7793组A549细胞出现大量绿色荧光,即NDV-7793能够引起A549细胞凋亡。***-PCR结果显示NDV-7793组mirna-204表达量最高,且显著高于其他五组,随着时间的延长,表达量呈递增趋势,差异具有统计学意义,同时发现,在72 h内NDV-7793组细胞上清液HN效价随时间延长呈递增趋势;流式细胞术显示NDV-7793组细胞凋亡率最高,且显著高于其他五组,与时间正相关,呈递增趋势,差异具有统计学意义;RT-PCR显示NDV-7793组的Caspase-3、Bax表达量最高,且显著高于其他五组,差异具有统计学意义。以上结果提示mirna-204可能是NDV-7793引起人肺腺癌A549细胞凋亡的特异性mirna,并且能通过影响凋亡相关蛋白Caspase-3、Bax的表达来促进NDV-7793致A549细胞凋亡的作用。3.验证试

关键词： NDV mirna-204 Caspase-3 Bax 凋亡

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mirna-204与肿瘤关系的研究进展

沈阳医学院学报 2016年第6期18卷 479-482页

作者：江海波葛瑞祥钱冬喜毛捷皖南医学院弋矶山医院神经外科安徽芜湖241001

mirna-204在人体中广泛表达,并在很多肿瘤中表达异常。mirna-204在人体内通过对靶基因的调节,在肿瘤的发生发展过程中起重要作用。mirna-204常作为肿瘤的抑癌基因,且通过相关分子机制可以抑制肿瘤的侵袭、转移,也可以作为潜在的分子标... 详细信息

mirna-204在人体中广泛表达,并在很多肿瘤中表达异常。mirna-204在人体内通过对靶基因的调节,在肿瘤的发生发展过程中起重要作用。mirna-204常作为肿瘤的抑癌基因,且通过相关分子机制可以抑制肿瘤的侵袭、转移,也可以作为潜在的分子标记物用于肿瘤的治疗。对mirna-204的深入研究,可对肿瘤的预防及治疗提供新思路。

关键词： mirna-204 肿瘤靶基因

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mirna-204与肿瘤关系的研究进展

miRNA-204与肿瘤关系的研究进展

基于定痫汤干预后癫痫小鼠海马区mirna-204表达水平的变化及脑电图变化的研究

2016“定量药理学与药物临床评价”国家级继续教育培训班

作者：江海波葛瑞祥钱冬喜毛捷皖南医学院弋矶山医院神经外科

mirna-204在人体中广泛表达,并在很多肿瘤中表达异常。研究发现,mirna-204在人体内通过对靶基因的调节,在肿瘤的发生发展过程中起重要作用。mirna-204常作为肿瘤的抑痛基因,且通过相关分子机制可以抑制肿瘤的侵袭转移,也可以作为潜在的... 详细信息

mirna-204在人体中广泛表达,并在很多肿瘤中表达异常。研究发现,mirna-204在人体内通过对靶基因的调节,在肿瘤的发生发展过程中起重要作用。mirna-204常作为肿瘤的抑痛基因,且通过相关分子机制可以抑制肿瘤的侵袭转移,也可以作为潜在的分子标记物用于肿瘤的治疗中。随着对mirna-204的深入研究,有可能对肿瘤的预防及治疗提供新思路。

关键词： mirna-204 肿瘤靶基因

来源： cnki会议评论

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中医药学报 2022年第2期50卷 33-38页

作者：卢玲刁丽梅李欢廖现秋广西中医药大学广西南宁530001 广西中医药大学第一附属医院广西南宁530023

目的:研究定痫汤干预后癫痫小鼠脑电图的变化、小鼠海马区mirna-204表达水平的变化以及自噬相关蛋白ATG7、LC3II的表达变化,探讨其可能的作用机制。方法:取50只雄性昆明小鼠,其中40只随机分成模型组、生理盐水组、卡马西平组和定痫汤组... 详细信息

目的:研究定痫汤干预后癫痫小鼠脑电图的变化、小鼠海马区mirna-204表达水平的变化以及自噬相关蛋白ATG7、LC3II的表达变化,探讨其可能的作用机制。方法:取50只雄性昆明小鼠,其中40只随机分成模型组、生理盐水组、卡马西平组和定痫汤组,每组10只,另外10只为备用小鼠。首先对各组实验动物进行灌胃给药两周,模型组和生理盐水组均予20 mL·kg^(-1)·d^(-1)生理盐水进行灌胃;定痫汤组予7 g·kg^(-1)·d^(-1)定痫汤药液进行灌胃;卡马西平组予30 mg·kg^(-1)·d^(-1)卡马西平混悬液灌胃。然后,通过盐酸匹罗卡品构建小鼠急性癫痫模型。其次,对各组小鼠进行行为学和脑电图观察。最后,将小鼠断头取脑,采用实时荧光定量PCR技术检测小鼠海马区mirna-204表达水平的变化;并且通过免疫组化法检测自噬相关蛋白ATG7、LC3II的表达变化。结果:与生理盐水组相比,模型组小鼠癫痫发作的频率多、持续时间长,小鼠脑电图尖波、棘波、棘慢波明显增多,海马区mirna-204的表达明显下调(Pmirna-204的表达升高(Pmirna-204的表达,抑制自噬相关蛋白ATG7、LC3II的表达,拮抗小鼠海马神经元过度自噬,从而发挥抗癫痫的作用。

关键词：定痫汤癫痫 mirna-204 脑电图 ATG7 LC3II

基于基因芯片对癫痫小鼠海马组织mirna-204表达的研究及生物信息学分析

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中风与神经疾病杂志 2022年第6期39卷 493-495页

作者：吴琼吕婷婷刁丽梅郑州大学附属信阳医院信阳市中心医院河南信阳464000 广西中医药大学研究生学院广西南宁530001 广西中医药大学第一附属医院广西南宁530000

目的基于基因芯片对癫痫小鼠海马组织mirna-204表达进行分析研究。方法选取癫痫小鼠海马组织,利用基因芯片技术检测出差异基因,并利用生物信息学对其靶基因进行富集分析和通路分析。结果本实验检测到与癫痫相关差异基因mirna-204表达下... 详细信息

目的基于基因芯片对癫痫小鼠海马组织mirna-204表达进行分析研究。方法选取癫痫小鼠海马组织,利用基因芯片技术检测出差异基因,并利用生物信息学对其靶基因进行富集分析和通路分析。结果本实验检测到与癫痫相关差异基因mirna-204表达下调,预测到相关457个相交集靶基因,富集分析得到27个基因功能(Pmirna-204表达下调对癫痫小鼠的影响,并分析出mirna-204相关通路Wnt,为进一步研究mirna-204作用于癫痫的调控机制奠定基础。

关键词：基因芯片癫痫 mirna-204 Wnt通路生物信息学分析

食管鳞状细胞癌组织MiR-204表达生物学意义研究

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中华肿瘤防治杂志 2015年第17期22卷 1382-1387页

作者：刘洪建张敬敬王玉波徐海涛解桢张连国刘建伟张庆广滨州医学院附属医院胸外科山东滨州256603

目的探讨微小RNA-204(microRNA-204,miR-204)在食管鳞状细胞癌(esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)组织中的表达、临床意义及可能分子机制。方法收集2014-01-04-2014-11-25滨州医学院附属医院手术切除的60例ESCC及对应癌旁组织。实时定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)检测miR-204、Bcl-2及SIRT1mRNA在ESCC及癌旁组织中的表达,统计分析miR-204表达与肿瘤临床病理特征及Bcl-2和SIRT1mRNA的相关性。采用化学合成的miR-204模拟物转染人食管癌TE-1细胞,MTT法和流式细胞术检测TE-1细胞的增殖和凋亡情况,qRT-PCR和蛋白质印迹法分别检测miR-204下游潜在靶点Bcl-2与SIRT1的mRNA和蛋白表达。结果 miR-204在ESCC组织中表达水平显著低于对应癌旁组织,t=4.752,P204低表达与肿瘤大小(t=2.847,P=0.006)及肿瘤TNM分期(t=3.341,P=0.002)显著相关;ESCC组织中miR-204与Bcl-2和SIRT1的mRNA表达呈负相关关系,P204可显著抑制TE-1细胞的增殖并促进其凋亡,P204表达可显著抑制Bcl-2与SIRT1的mRNA与蛋白表达水平,P204在ESCC组织中表达下调,并与肿瘤恶性临床病理特征有关。miR-204可能通过下调Bcl-2和SIRT1的表达来发挥抑制食管癌细胞生长的生物学作用。

关键词： mirna-204 食管鳞状细胞癌生长 Bcl-2 SIRT1