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mirna-203在绒山羊毛囊发育周期中的差异表达及其靶基因功能鉴定

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miRNA-203在绒山羊毛囊发育周期中的差异表达及其靶基因功能鉴定

作者：马涛吉林大学

学位级别：硕士

辽宁绒山羊在绒毛品质和产绒量方面,居世界同类品种前列,所产羊绒属于稀有的特种动物纤维,是一种珍贵的纺织原料。近日国家统计局发布的国内羊绒及山羊数据显示,国内原绒产量自2014年开始逐年下降,且跌幅较大,自产的羊绒原料远远满足不... 详细信息

辽宁绒山羊在绒毛品质和产绒量方面,居世界同类品种前列,所产羊绒属于稀有的特种动物纤维,是一种珍贵的纺织原料。近日国家统计局发布的国内羊绒及山羊数据显示,国内原绒产量自2014年开始逐年下降,且跌幅较大,自产的羊绒原料远远满足不了本土企业和外商投资企业的生产和出口需要。而毛囊作为被毛生长发育的重要部位,无论在胚胎期还是出生后,均具有自我更新和周期性生长的特点,且整个过程多基因参与。因此,通过对调控毛囊发育周期机理的研究来改善和提高羊绒的品质和产量成为近年来的研究目标。mirnas是在真核生物中发现的内源性的单链非编码小RNA,通过与靶基因mRNA的非编码区的结合抑制其翻译或引起降解,从而参与生物体的生物学过程。近年来研究团队对绒山羊和细毛羊毛囊周期发育中的mirna开展了系统的研究,通过高通量测序手段,发现作为上皮组织特异性表达的mirna-203,参与绒山羊和细毛羊毛囊的发育,但其如何在毛囊周期发育中起调控作用的未见相关报道。因此,mirna-203被选为本实验的研究目标。利用miRBase、***、TargetScanHuman7.1和microRNA target prediction等在线生物学软件预测mirna-203的靶基因,并筛选出与毛囊发育相关的靶基因,在mRNA水平、蛋白水平和细胞水平上,验证mirna-203和候选靶基因在绒山羊毛囊周期发育中的表达差异,明确mirna-203与靶基因的结合位点,阐明mirna-203对绒山羊毛囊发育周期的调控机理,完善mirna在毛囊发育周期中的作用,为,提高和改善绒山羊羊绒产量和毛品质提供了新的思路。具体研究结果如下:1.利用在线生物信息学软件miRBase、***、TargetScanHuman7.1和microRNA target prediction等预测mirna-203的靶基因,并筛选出与毛囊发育相关的靶基因:DDOST、NAE1和GLYATL2。2.同源性分析,对DDOST、NAE1和GLYATL2测序表明与绵羊、牛等物种的同源性高达95%以上,说明靶基因序列具有遗传保守性。3.在mRNA水平上,对mirna-203及DDOST、NAE1和GLYATL2进行鉴定发现,mirna-203在绒山羊毛囊发育的生长期和休止期均有表达,且在休止期的表达量显著高于生长期;候选靶基因的表达则相反。-4.对靶基因DDOST和NAE1进行蛋白鉴定,结果表明,DDOST和NAE1在绒山羊生长期中表达上调,结果与荧光定量结果一致。体内实验的结果初步表明mirna-203通过DDOST和NAE1参与绒山羊毛囊周期发育。5.双荧光素酶报告基因系统鉴定mirna-203与靶基因DDOST和NAE1的特异性结合位点表明,在DDOST和NAE1的3’UTR上存在mirna-203的靶位点—GAACCAC、GGCGTCC。6.通过体外实验,对细胞进行转染,在mRNA水平和蛋白水平上,对过表达mirna-203后的mirna-203及DDOST和NAE1进行验证,结果表明,mirna-203在mimics组的表达量明显高于阴性对照组,而靶基因的表达则相反,mirna-203显著下调DDOST和NAE1的表达。综上,mirna-203通过负调控靶基因(DDOST和NAE1)参与毛囊周期发育,可作为一种进一步选育优质羊品种的方法手段。

关键词： mirna-203 绒山羊毛囊发育 DDOST NAE1

mirna-203表达水平对结直肠癌患者预后的临床价值

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现代肿瘤医学 2018年第21期26卷 3432-3436页

作者：方瑜洁张明丽西安市第一医院陕西西安710002

目的:探讨mirna-203表达水平对结直肠癌患者预后的预测价值。方法:回顾性选择2010年1月至2013年12月来我院接受手术切除治疗的结直肠癌患者120例,所有患者均经病理确认。根据结直肠癌组织中mirna-203表达水平将患者分为mirna-203低表达... 详细信息

目的:探讨mirna-203表达水平对结直肠癌患者预后的预测价值。方法:回顾性选择2010年1月至2013年12月来我院接受手术切除治疗的结直肠癌患者120例,所有患者均经病理确认。根据结直肠癌组织中mirna-203表达水平将患者分为mirna-203低表达组(n=42)和mirna-203高表达组(n=78)。分析结直肠癌组织中mirna-203表达水平与临床病理特征的关系,应用单因素、多因素非条件Cox回归分析影响结直肠癌患者预后的危险因素,并采用Kaplan-Meier法绘制累积生存曲线。结果:结直肠癌患者组织中mirna-203表达量与年龄、性别、吸烟史、嗜酒史、组织类型、肿瘤位置、肿瘤直径无关(P> 0. 05),与分化程度、TNM分期、淋巴结转移、脉管浸润有关(P mirna-203低表达是影响结直肠癌患者无进展生存率和总生存率的危险性因素(P mirna-203高表达组结直肠癌患者无进展生存率和总生存率显著高于低表达组(P mirna-203表达水平可作为预测结直肠癌患者预后的指标。

关键词：结直肠癌 mirna-203 无进展生存率总生存率

mirna-203联合TSGF、CEA检测在胃癌诊断中的临床价值

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世界最新医学信息文摘 2018年第94期 131-131页

作者：黄泽波陈雯姣江南大学附属医院宜兴市人民医院

目的研究mirna-203联合TSGF、CEA检测在胃癌诊断中的临床价值。方法本次研究的观察组为本院接收的胃癌患者50例,对照组为同期的慢性胃炎患者50例。将两组受检对象的mirna-203、TSGF、CEA水平进行比对。结果观察组胃癌患者的mirna-203相... 详细信息

目的研究mirna-203联合TSGF、CEA检测在胃癌诊断中的临床价值。方法本次研究的观察组为本院接收的胃癌患者50例,对照组为同期的慢性胃炎患者50例。将两组受检对象的mirna-203、TSGF、CEA水平进行比对。结果观察组胃癌患者的mirna-203相对表达量低于对照组慢性胃炎患者,TSGF、CEA的表达水平和阳性率显著高于对照组数据,差异具有统计学意义(Pmirna-203相对表达量以及TSGF、CEA的表达水平和阳性率随着临床分期递增分别呈下降、增长趋势;联合检测可以提高诊断准确率。结论在胃癌诊断中采用mirna-203联合TSGF、CEA检测的诊断符合率和诊断价值均较高。

关键词：胃癌 mirna-203 TSGF CEA

非小细胞肺癌组织mirna-203表达及其与预后的关系

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现代肿瘤医学 2016年第11期24卷 1728-1731页

作者：张潍张振华王辉张伟刘伟良王勇西安交通大学第二附属医院陕西西安710004 汉中3201医院陕西汉中723000

目的:探讨mirna-203在非小细胞肺癌组织中的表达及其与预后的关系。方法:采用实时荧光定量PCR检测100例肺癌标本中mirna-203的水平。分析mirna-203表达与临床病理参数的关系;采用Kaplan-Meier法分析mirna-203表达与非小细胞肺癌生存期(o... 详细信息

目的:探讨mirna-203在非小细胞肺癌组织中的表达及其与预后的关系。方法:采用实时荧光定量PCR检测100例肺癌标本中mirna-203的水平。分析mirna-203表达与临床病理参数的关系;采用Kaplan-Meier法分析mirna-203表达与非小细胞肺癌生存期(overall survival,OS)之间的关系。Cox风险比例模型分析各个协变量的联合效应。结果:mirna-203的表达量与病理类型(P=0.026)相关,与性别(P=0.756)、年龄(P=0.280)及吸烟史(P=0.122)无明显关系;生存分析显示mirna-203高表达组患者生存期显著低于低表达组(P=0.02)。Cox风险比例模型分析显示mirna-203表达可作为非小细胞肺癌患者预后不良的标志。结论:mirna-203的高表达提示非小细胞肺癌患者预后较差,是潜在的肺癌预后预测分子标志物。

关键词： mirna-203 非小细胞肺癌荧光实时定量PCR 预后

表达microRNA-203tough decoy的慢病毒载体构建及应用

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天津医药 2014年第10期42卷 961-964页

作者：刘涛王玉亮宋红丽付楠楠吴本娟沈中阳天津市第一中心医院卫生部危重病急救医学重点实验室邮编 300384 器官移植中心天津医科大学一中心临床学院

目的建立表达microRNA(mirna)tough decoy(TuD)的慢病毒载体构建方法,并检测其对细胞内mirna表达水平及细胞表型的影响。方法在慢病毒表达质粒pSIH1-H1-copGFP中通过两步克隆,首先构建mirna TuD通用骨架质粒,进一步构建特异性针对大鼠mi... 详细信息

目的建立表达microRNA(mirna)tough decoy(TuD)的慢病毒载体构建方法,并检测其对细胞内mirna表达水平及细胞表型的影响。方法在慢病毒表达质粒pSIH1-H1-copGFP中通过两步克隆,首先构建mirna TuD通用骨架质粒,进一步构建特异性针对大鼠miR-203的TuD表达载体。在293T细胞中包装成慢病毒后,感染大鼠骨髓间充质干细胞(BM-MSCs),同时用pSIH1-H1-copGFP空质粒包装慢病毒,感染BM-MSCs作为对照。定量RT-PCR检测细胞中miR-203的水平变化,并用CCK-8法和Annexin V-PI双标记法分别检测BM-MSCs的活性和凋亡。结果成功构建了基于pSIH1-H1-copGFP质粒的miR-203 TuD表达载体,并对其序列进行了验证。用表达miR-203 TuD的重组慢病毒感染BM-MSCs后第3、6、9天检测细胞内源性miR-203表达水平降低,同时细胞活性增高,凋亡比例降低,与对照组相比差异有统计学意义。结论两步克隆法构建mirna TuD表达载体是一种简便高效的方法,其表达产物能够有效抑制细胞内源性mirna水平,同时影响细胞表型。

关键词：间质干细胞慢病毒属遗传载体质粒细胞凋亡微RNAs 细胞活性 mirna-203 tough decoy

MicroRNA-203与急性ST段抬高型心肌梗死诊断的相关性研究

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MicroRNA-203与急性ST段抬高型心肌梗死诊断的相关性研究

作者：李俊安徽医科大学

学位级别：硕士

引言:急性ST段抬高型心肌梗死是急性冠脉综合征最严重的类型,也是当今人类的主要死因之一。每年在全世界造成180多万人死亡,是一个全球主要的健康负担。在我们医院常规使用心梗三项(c Tn I、CK-MB和Myo)对STEMI做出早期的判断。c Tn I... 详细信息

引言:急性ST段抬高型心肌梗死是急性冠脉综合征最严重的类型,也是当今人类的主要死因之一。每年在全世界造成180多万人死亡,是一个全球主要的健康负担。在我们医院常规使用心梗三项(c Tn I、CK-MB和Myo)对STEMI做出早期的判断。c Tn I在起病后3-4小时升高;CK-MB在起病4小时升高;Myo在起病后2小时升高。随着中国胸痛中心的建立,优化院前时间的管理,绝大部分患者就诊时的胸痛时间缩短在4小时以内,传统的心梗三项很难对STEMI做出准确的判断,因此积极探寻敏感度和特异度高的新型心肌损伤标志物成为临床研究的焦点。目的:研究血清mi RNA-203对急性ST段抬高型心肌梗死的预测价值。方法:选取2020年12月至2021年12月在我院确诊的STEMI患者70例,选取同期在我院心内科因其他疾病住院同时具有一过性胸痛症状的患者35例,分别收集两组患者血清并进行mi RNA-203半定量实验。收集所有患者的临床资料,对比两组之间的差异、进行ROC分析和多因素Logistic回归统计分析。结果:STEMI组的mi RNA-203高于对照组,差异有统计学意义(P203在预测STEMI的AUC面积为0.912,以最大约登指数计算得出其最大AUC面积相应参数截阀值为0.672(敏感性84.3%,特异性82.9%);Logistic回归分析显示,mi RNA-203和白细胞是STEMI的独立危险因素(P203的表达水平,可能有助于对急性ST段抬高型心肌梗死的诊断。

关键词：急性ST段抬高型心肌梗死 mirna-203 预测

七氟烷影响乳腺癌细胞增殖能力的分子机制研究

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七氟烷影响乳腺癌细胞增殖能力的分子机制研究

作者：刘俊丽郑州大学

学位级别：硕士

研究背景乳腺癌是全球女性最常见的恶性肿瘤,在过去的几十年里,乳腺癌的病例数量稳步增长。在世界范围内,乳腺癌是导致癌症死亡的第五大最常见的原因,在女性人群中,它是导致癌症死亡的第二大最常见的原因。外科手术在乳腺癌的诊断、分... 详细信息

研究背景乳腺癌是全球女性最常见的恶性肿瘤,在过去的几十年里,乳腺癌的病例数量稳步增长。在世界范围内,乳腺癌是导致癌症死亡的第五大最常见的原因,在女性人群中,它是导致癌症死亡的第二大最常见的原因。外科手术在乳腺癌的诊断、分析及综合治疗中发挥着重要作用。人们也更加关注手术后是否能降低癌症复发和转移的风险。围手术期间最常用的麻醉药物之一便是七氟烷。因其独特的优点被广大麻醉工作者及各个年龄段的患者所接受。七氟烷无刺激性,临床上常规使用的浓度不燃不爆,血气分配系数低,在血中溶解度小,肺泡中的气体浓度升高快,麻醉诱导过程迅速,被广泛用于全身麻醉的诱导和维持。七氟烷还具有抑制炎症反应,诱导细胞凋亡的作用,对肿瘤的发生发展过程具有一定的抑制作用。微RNA(mirna)是一种小的非编码RNA,可通过与信使RNA(mRNA)的3’端结合来调控基因的表达。越来越多的研究也表明mirnas可影响肿瘤细胞的增殖、转移及侵袭。mirna在不同疾病背景下的特殊作用在很大程度上依然是未知的。miR-203也曾被报道为早期检测宫颈癌淋巴结转移的潜在标志物。然而,七氟烷是否或如何调节乳腺癌细胞的发生发展及信号传导过程现在还不清楚,本研究可能揭示七氟烷对乳腺癌的调节作用,提示mirna可能是乳腺癌预防和治疗的潜在靶点。研究目的本课题旨在研究七氟烷是否通过抑制microRNA-203水平抑制乳腺癌细胞增殖。材料与方法乳腺癌细胞是从中国科学院细胞培养库购买,RPMI-1640培养基中进行培养。实验分三个部分进行。第一部分随机将细胞分为Ctrl组、Sevoflurane组,研究七氟烷对乳腺癌细胞增殖的作用。第二部分随机将细胞分为miR-203 Ctrl组、miR-203组、miR-203 inhibitor Ctrl组、miR-203 inhibitor组,探究miR-203对乳腺癌增殖的作用。第三部分为挽救实验,随机将细胞分为Ctrl组、Sevoflurane组、Sevoflurane+miR-203 inhibitor组。需七氟烷处理的细胞暴露于2%七氟烷6小时。采用MTS法检测细胞的增殖能力,使用溴脱氧尿苷(Brd U)掺入试验分析计数Brd U阳性细胞数,采用实时荧光定量PCR技术检测细胞周期相关基因cyclin D,cyclin E和细胞周期抑制基因Rb1,P21,P27的表达量,Western Blot技术分析细胞周期相关基因cyclin D,cyclin E和细胞周期抑制基因Rb1,P21,P27的相对表达量。使用流式细胞术检测乳腺癌细胞中各个细胞周期的细胞比例。结果(1)七氟烷抑制乳腺癌细胞的增殖与Ctrl组相比,Sevoflurane组的乳腺癌细胞的增殖能力受到抑制,细胞周期相关基因cyclin D,cyclin E的表达水平明显下降,细胞周期抑制基因Rb1,P21,P27的表达水平升高,差异有统计学意义(P203水平上调且miR-203抑制乳腺癌细胞的增殖与Ctrl组相比,Sevoflurane组的乳腺癌细胞miR-203的表达上调,差异有统计学意义(P203转染乳腺癌细胞发现miR-203明显抑制细胞增殖,相反,转染miR-203抑制剂的癌细胞能促进癌细胞的增殖,差异有统计学意义(P203组细胞周期相关基因cyclin D,cyclin E的表达水平明显下降,细胞周期抑制基因Rb1,P21,P27的表达水平升高,miR-203inhibitor组细胞周期相关基因cyclin D,cyclin E的表达水平明显上调,细胞周期抑制基因Rb1,P21,P27的表达水平下调,差异有统计学意义(P203水平上调,且miR-203有抑制乳腺癌细胞增殖的能力。(3)miR-203抑制剂能挽救七氟烷对乳腺癌细胞的作用用转染miR-203抑制剂的癌细胞经七氟烷处理,其抑制癌细胞增殖的能力与Ctrl组相似,差异无统计学意义(P>0.05);与Sevoflurane组相比,Sevoflurane+miR-203 inhibitor组抑制癌细胞增殖作用不明显,差异有统计学意义(P203 inhibitor组细胞周期相关基因cyclin D,cyclin E及细胞周期抑制基因Rb1,P21,P27的表达水平无差异性(P>0.05),与Sevoflurane组相比,Sevoflurane+miR-203 inhibitor组细胞周期相关基因cyclin D,cyclin E表达上调,细胞周期抑制基因Rb1,P21,P27的表

关键词：七氟烷乳腺癌细胞 mirna-203 细胞增殖

基于miR-203相关信号通路探讨薄芝糖肽干预KC增殖和分化的机制研究

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基于miR-203相关信号通路探讨薄芝糖肽干预KC增殖和分化的机制研究

作者：苑文吉林大学

学位级别：硕士

目的:采用薄芝糖肽处理以miR-203的模拟物和抑制物转染前后的HaCaT细胞,根据TAp63、SOCS3、STAT3及角蛋白表达量的变化,明确miR-203对TAp63和SOCS3的靶向作用和对STAT3信号通路的调控以及在KC增殖和分化中的作用;探讨薄芝糖肽对KC增殖... 详细信息

目的:采用薄芝糖肽处理以miR-203的模拟物和抑制物转染前后的HaCaT细胞,根据TAp63、SOCS3、STAT3及角蛋白表达量的变化,明确miR-203对TAp63和SOCS3的靶向作用和对STAT3信号通路的调控以及在KC增殖和分化中的作用;探讨薄芝糖肽对KC增殖和分化的干预作用机制。方法:1.以 miR-203 的模拟物和抑制物（miR-203 mimic 和 miR-203 inhibitor）定量转染人角质形成细胞HaCaT细胞系,以薄芝糖肽溶液处理转染前后的HaCaT细胞;2.采用qRT-PCR测定转染前后及薄芝糖肽溶液处理前后HaCaT细胞中TAp63、SOCS3、STA T3 mRNA 的表达水平;3.采用 Western blot 方法测定miR-203 mimic 和 miR-203 inhibitor 转染前后和薄芝糖肽溶液处理前后各组HaCaT细胞中TAp63、SOCS3、STAT3、K10和K16蛋白的表达;4.通过数据处理及分析明确miR-203对KC增殖和分化的调控作用及薄芝糖肽的干预机制。结果:***-PCR结果分析显示,与对照组相比,miR-203 mimic组TAp63、SOCS3 mRNA表达下调,STAT3 mRNA表达上调,miR-203 inhibitor组表达结果与此相反;与未加入薄芝糖肽组相比,薄芝糖肽组TAp63、SOCS3、STAT3 mRNA表达无明显影响。*** blot 结果显示,与对照组相比,miR-203 mimic 组 TAp63、SOCS3、STAT3蛋白表达下降,K10及K16表达显著上调;miR-203 inhibitor组TAp63蛋白、SOCS3蛋白、K16表达上调,STAT3蛋白及K10表达下降。与未加入薄芝糖肽组相比,薄芝糖肽组TAp63蛋白表达上调,SOCS3蛋白、STAT3蛋白以及K10、K16表达水平明显下调。***-203 mimic+薄芝糖肽组与 miR-203 mimic 组相比,TAp63 蛋白、SOCS3蛋白的表达上调,miR-203 inhibitor+薄芝糖肽组与miR-203 inhibitor组相比,TAp63蛋白、SOCS3蛋白的表达下调。结论:***细胞中miR-203通过靶向作用负向调节TAp63和SOCS3的表达,通过JAK/STAT信号通路正相调节STAT3 mRNA的表达,但STAT3蛋白表达不受miR-203变化的影响,提示正常生理状态下KC能够通过多种机制（信号通路）调节STAT3蛋白的表达,从而使其表达处于稳定状态,维持细胞稳态;***中K10的表达与miR-203水平呈正相关,K16的表达不受miR-203变化的影响;3.薄芝糖肽能够双向干预miR-203对TAp63和SOCS3的调节作用,并在转录和翻译水平干预miR-203对STAT3的作用,降低STAT3的表达从而抑制KC的增殖;4.薄芝糖肽通过上调TAp63,下调SOCS3、STAT3、K10和K16双向调节KC的增殖和分化,结果分析显示,其促分化作用强于促增殖作用。

关键词：角质形成细胞薄芝糖肽 mirna-203 TAp63 SOCS3

非小细胞肺癌组织中miR-203启动子DNA甲基化状态与SRC表达及临床病理因素的相关研究

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临床肺科杂志 2024年第3期29卷 405-410页

作者：左淑润杭文璐薄芸孔丽萍李海泉徐州医科大学第二附属医院呼吸与危重症学科江苏徐州221000 安徽理工大学安徽淮南232001

目的探讨非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)组织中miR-203启动子DNA甲基化状态与SRC蛋白表达及临床病理因素的关系,并进一步证实了miR-203启动子DNA甲基化可能参与SRC的表达调控。方法收集45例经手术切除的非小细胞肺癌... 详细信息

目的探讨非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)组织中miR-203启动子DNA甲基化状态与SRC蛋白表达及临床病理因素的关系,并进一步证实了miR-203启动子DNA甲基化可能参与SRC的表达调控。方法收集45例经手术切除的非小细胞肺癌组织标本及其对应的癌旁正常组织。采用甲基化特异性PCR(Methylation-specific PCR,MSP)检测miR-203基因启动子DNA甲基化水平,并通过亚硫酸氢盐测序(bisulfite sequencing PCR,BSP)进行确认,实时定量PCR(real-time quantitative PCR,RT-qPCR)检测miR-203的表达丰度,并通过免疫组织化学染色(Immunohistochemical,IHC)研究SRC蛋白在肺癌组织中的表达情况。分析miR-203基因启动子DNA甲基化与miR-203、SRC表达的相关性,以及与患者临床病理特征的关系。结果肺癌组织中miR-203甲基化率为66.67%(30/45),明显高于癌旁组织的24.44%(11/45),与miR-203表达呈负相关(r_(s)=-0.615,P203启动子DNA发生了高甲基化,这种变化可能是通过上调SRC蛋白表达促进非小细胞肺癌的恶性增殖。

关键词： mirna-203 DNA甲基化 SRC 非小细胞肺癌