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LncRNA Pvt1在心肌梗死中的作用和机制研究

LncRNA Pvt1在心肌梗死中的作用和机制研究

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作者：胡宇重庆医科大学

学位级别：硕士

目的:本研究旨在研究长链非编码RNA Pvt1在心肌细胞凋亡中的作用,以及涉及Pvt1-micro RNA-m RNA轴的机制,最终阐明Pvt1在心肌细胞凋亡中的作用。方法:1.细胞实验:通过转染小干扰RNA(si RNA)抑制细胞中Pvt1(si-Pvt1),小鼠HL-1细胞随机分... 详细信息

目的:本研究旨在研究长链非编码RNA Pvt1在心肌细胞凋亡中的作用,以及涉及Pvt1-micro RNA-m RNA轴的机制,最终阐明Pvt1在心肌细胞凋亡中的作用。方法:1.细胞实验:通过转染小干扰RNA(si RNA)抑制细胞中Pvt1(si-Pvt1),小鼠HL-1细胞随机分为对照组(Control),缺氧处理组(Hypoxia),缺氧+阴性对照组(Hypoxia+si-NC),缺氧+si-Pvt1组(Hypoxia+si-Pvt1)。Western blot检测、RT-q PCR、流式细胞术检测细胞凋亡水平及蛋白表达。3.动物实验:心肌梗死模型前7天通过尾静脉注射腺相关病毒为载体的sh RNA-Pvt1建立体内Pvt1敲低模型(sh-Pvt1),采用左前降支结扎(LAD)诱导的心肌梗死模型7天后,采用超声心动图测量心功能,并用HE染色评估小鼠心脏组织病理损伤,Western blot检测凋亡蛋白表达变化。3.机制探究实验:lnc RNA相关micro RNA通过生物信息学工具预测得到,并通过双荧光素酶实验进一步验证。为了研究Pvt1和mir-216的协同调节作用,共转染si-Pvt1与mir-216 mimics后采用Western blot检测凋亡基因表达变化。将细胞分为缺氧+si-NC组与缺氧+si-Pvt1组,RNA测序筛选差异表达基因,与利用生物信息学工具预测mir-216的靶基因交叉,筛选出感兴趣基因Ccnd3。同时转染mir-216 mimics与过表达Ccnd3,Western blot检测凋亡蛋白表达情况。结果:1.细胞实验:Pvt1在缺氧诱导的小鼠心肌细胞HL-1中高表达,抑制Pvt1可减少心肌细胞凋亡。2.动物实验:心肌梗死导致小鼠心肌损伤,抑制Pvt1可改善心肌梗死小鼠心脏功能,阻止部分炎症细胞浸润,减少心肌细胞凋亡。3.机制实验:PVT1作为mir-216的海绵,促进Ccnd3的表达,从而调控心肌细胞凋亡。结论:Pvt1可能通过mir-216/Ccnd3轴来促进心肌梗死诱导的心肌细胞凋亡。

关键词： LncRNA Pvt1 细胞凋亡心肌梗死 mir216 Ccnd3

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