检索结果-南通市图书馆

作者：王娇蚌埠医学院

学位级别：硕士

目的:利用盲肠穿刺结扎技术(Cecal Ligation and puncture,CLp)诱导小鼠脓毒症急性肺损伤的模型,探讨高剂量的维生素C注射液对脓毒症小鼠急性肺损伤的保护作用以及高剂量维生素C(Vitamin C,Vit C)注射液与mir126a-5p,Caspase通路之间可... 详细信息

目的:利用盲肠穿刺结扎技术(Cecal Ligation and puncture,CLp)诱导小鼠脓毒症急性肺损伤的模型,探讨高剂量的维生素C注射液对脓毒症小鼠急性肺损伤的保护作用以及高剂量维生素C(Vitamin C,Vit C)注射液与mir126a-5p,Caspase通路之间可能的潜在的联系,在治疗中有一定的效果及相对经济的条件下为临床治疗提供新的作用靶点及新的治疗方向。方法:将4-6周健康雄性BALB/c小鼠使用5%的水合氯醛溶液进行麻醉,四肢固定后采取经典方法盲肠穿刺结扎法(CLp)对健康小鼠进行制造脓毒症模型制作并使健康小鼠诱导成为脓毒症急性肺损伤。将实验分为三组:分别为假手术组(对照组,CON组),脓毒症+NS(模型组,SEp组),脓毒症+Vitamin C(药物干预组,SEp+IR组),在盲肠穿刺结扎诱导脓毒症急性肺损伤之前,使用1000mg/kg维生素C注射液尾静脉连续注射3天,假手术组及脓毒症+Vitamin C组连续3天注射相同体积的生理盐水。建立脓毒症模型12h后诱导急性肺损伤,取脓毒症急性肺损伤肺组织(仅用滤纸吸干未经处理及干燥48h后的肺组织)进行称重,计算肺湿重/干重的比值,采用苏木精-伊红(H&E)染色法,进行肺组织染色,检测小鼠的肺组织病理变化,用ELISA法对肺组织炎症因子(IL-6,TNF-α)的水平进行测定,采用蛋白印迹法对脓毒症肺损伤的肺组织的Caspase-1,Caspase-3进行测定,采用荧光定量pCR法对脓毒症肺损伤中的肺组织mir126a-5p进行测定。结果:1.高剂量维生素C预处理后对盲肠穿刺结扎的脓毒症肺损伤小鼠生存率的影响。健康小鼠进行盲肠穿刺结扎后出现嗜睡,竖毛,精神状态差,出现黑色大便等表现,盲肠穿刺结扎24h后,对照组,模型组,药物干预组的生存率100%,0,33%,给予尾静脉注射维生素C(1000mg/kg)的生存率显著高于模型组。结果说明,高剂量维生素C可降低脓毒症肺损伤的炎症,提高生存率。高剂量维生素C预处理后对进行盲肠穿刺结扎脓毒症肺损伤小鼠急性肺损伤肺湿/干重(W/D)比的影响。进行盲肠穿刺结扎的模型组湿干重比值显著高于对照组即假手术组(p5)。2.高剂量维生素C预处理后对脓毒症急性肺损伤小鼠的肺组织的病理切片的影响。对照组即假手术组有完整的肺泡结构,没明显的炎症细胞浸润,且肺泡壁未见明显增厚的情况。进行盲肠穿刺结扎的模型组没有完整的肺泡结构,且肺泡壁充血水肿,有明显炎症细胞浸润及明显的增厚情况,而尾静脉注射高剂量维生素C预处理后急性肺损伤的肺组织的变化介于两者之间。3.高剂量维生素C预处理后对脓毒症急性肺损伤小鼠肺组织炎症因子中促炎因子IL-6因子,TNF-α因子表达的影响。盲肠穿刺结扎模型组IL-6,TNF-α因子含量显著高于对照组即假手术组(p5),高剂量维生素C预处理组IL-6,TNF-α含量显著低于对照组。4.高剂量维生素C预处理后对脓毒症急性肺损伤小鼠的肺组织的Caspase-1和Caspase-3蛋白水平的影响.检测检测小鼠肺组织中的Caspase-1和Caspase-3的蛋白水平的表达,结果表明盲肠穿刺结扎模型组中的Caspase-1和Caspase-3显著高表达显著高于对照组即假手术组(p5),与模型组相比,预处理后高剂量维生素C中Caspase-1及Caspase-3显著低表达。5.高剂量维生素C预处理后对脓毒症急性肺损伤肺组织的mir126a-5p的表达影响。检测小鼠肺组织中的mir126a-5p发现,结果表明小鼠经过盲肠穿刺结扎的模型组的mir126a-5p明显高于对照组及假手术组的mir126a-5p,与模型组相比,高维生素C预处理后中mir126a-5p显著低于模型组。结论:1.高剂量维生素C预处理后可能与提高脓毒症症小鼠急性肺损伤的生存率有关;2.高剂量维生素C预处理后减轻脓毒症小鼠急性肺损伤模型组的炎症,可能与降低治疗组的湿重/干重比值有关,可能与肺泡直径的变化有关;3.高剂量维生素C预处理脓毒症急性肺损伤后形成肺保护可能与调控mir126a-5p降低Caspase-1,Caspase-3蛋白的表达的作用机制有关。可进一步继续研究,明确具体机制,为治疗脓毒症肺损伤提供新的靶点。

关键词：维生素C 脓毒症急性肺损伤 Caspase-1 Caspase-3 mir126a-5p

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维生素C预处理对脓毒症小鼠肺组织mir126a-5p、mir155-5p表达的影响

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蚌埠医学院学报 2022年第4期47卷 433-437页

作者：王娇邹琪刘成楚新旭汪华学蚌埠医学院第一附属医院重症医学科安徽蚌埠233004 蚌埠医学院组织移植重点实验室安徽蚌埠233030

目的:观察维生素C(vitamin C,Vit C)干预后脓毒症小鼠肺组织炎症表达情况及mir126a-5p和mir155-5p含量的变化,分析Vit C对脓毒症急性肺损伤的潜在保护机制。方法:选择4~6周雄性小鼠18只随机分为假手术组(对照组、CON组)、脓毒症+NS组(SE... 详细信息

目的:观察维生素C(vitamin C,Vit C)干预后脓毒症小鼠肺组织炎症表达情况及mir126a-5p和mir155-5p含量的变化,分析Vit C对脓毒症急性肺损伤的潜在保护机制。方法:选择4~6周雄性小鼠18只随机分为假手术组(对照组、CON组)、脓毒症+NS组(SEp组)、脓毒症组+Vit C干预组(SEp+IR组),予Vit C 1000 mg/kg术前连续3 d尾静脉进行注射,采用盲肠穿刺结扎制作模型,术后12 h检测肺组织的湿重/干重(W/D);用HE染色的方法观察肺脏病理形态,测量肺泡的直径;用RT-qpCR检测mir126a-5p、mir155-5p的变化,Western blotting检测Caspase 1及Caspase-3的蛋白表达量,ELISA法检测白细胞介素(IL)-6和肿瘤坏死因子(TNF)-α表达。结果:与CON组相比,SEp组中肺的W/D增加,肺泡孔径明显减小;SEp组中的mir126a-5p和mir155-5p以及蛋白Caspase 1和Caspase 3表达量升高;同时可进一步促进炎症因子IL-6和TNF-α增加(p5)。与SEp组相比,SEp+IR肺组织的W/D减低,肺泡孔径增大,mir126a-5p和mir155-5p以及蛋白Caspase 1和Caspase 3表达量降低,同时可进一步抑制炎症因子IL-6和TNF-α的增加(p5)。结论:Vit C具有减轻肺水肿和稳定肺泡体积的作用,可能与mir126a-5p和mir155-5p诱导的Caspase 1、Caspase 3表达降低有关。

关键词：脓毒症维生素C mir126a-5p mir155-5p

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