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针刺调控mir-665对帕金森病小鼠BNIP3介导的线粒体自噬的影响

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中医学报 2024年第6期39卷 1138-1143页

作者：班维固齐辉卿鹏滕秀英陆丽娜朱莹许文婷黑龙江中医药大学附属第二医院康复医学二科黑龙江哈尔滨150001 暨南大学附属第一医院针灸科广东广州510630

目的:探讨针刺调控mir-665对帕金森病(Parkinson′s disease,PD)小鼠Bcl2/腺病毒E1B相互作用蛋白3(recombinant Bcl2/adenovirus E1B 19kDa interacting protein 3,BNIP3)介导的线粒体自噬的影响。方法:从55只BALB/c小鼠中随机选择10只作为假手术组,其余小鼠皮下注射鱼藤酮溶液(1 mg·kg^(-1)),每日1次,连续14 d。将造模成功的20只小鼠随机分为模型组和针刺组,每组10只。假手术组、模型组小鼠不进行干预,针刺组小鼠给予针刺治疗。采用RT-PCR法检测小鼠纹状体mir-665 mRNA水平,计数小鼠纹状体辅助性T细胞(helper T cells,TH)阳性细胞。通过旷场实验检测小鼠的自主活动情况,采用ELISA法检测小鼠血清白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、白细胞介素-8(interleukin-8,IL-8)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)水平。采用Western blot检测小鼠纹状体mito-LC 3Ⅱ、自噬蛋白5(autophagy protein 5,Atg5)、苄氯素1(recombinant beclin 1,Beclin1)、BNIP3蛋白表达水平。结果:与假手术组比较,模型组、针刺组小鼠纹状体mir-665 mRNA水平升高(Pmir-665 mRNA水平降低(Pmir-665表达,影响BNIP3介导的线粒体自噬,从而改善PD小鼠的运动功能和炎症反应。

关键词：针刺帕金森病 mir-665 BNIP3 线粒体自噬小鼠

败酱草水提物通过调控circ_0000936/mir-665抑制胶质瘤细胞增殖、迁移及侵袭

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现代肿瘤医学 2024年第6期32卷 1017-1024页

作者：张正平李坤正吴彬杰刘熹巨虎张晓璐青海大学附属医院神经外科青海西宁810000 南京医科大学附属无锡市人民医院神经外科江苏无锡214023

目的:探讨败酱草水提物对胶质瘤细胞生物行为的影响及其可能作用机制。方法:收集2019年2月至2020年1月期间于本院接受手术切除并经病理证实的31例胶质瘤组织,qRT-PCR法检测正常脑组织与胶质瘤组织中circ_0000936、mir-665的表达量;Pear... 详细信息

目的:探讨败酱草水提物对胶质瘤细胞生物行为的影响及其可能作用机制。方法:收集2019年2月至2020年1月期间于本院接受手术切除并经病理证实的31例胶质瘤组织,qRT-PCR法检测正常脑组织与胶质瘤组织中circ_0000936、mir-665的表达量;Pearson法分析胶质瘤组织中circ_0000936和mir-665表达量的相关性;体外培养人胶质瘤细胞LN229,不同浓度的败酱草(0.5 mg/mL、1.0 mg/mL、2.0 mg/mL)处理LN229细胞,si-NC、si-circ_0000936分别转染至LN229细胞,pcDNA-circ_0000936转染至LN229细胞后加入2.0 mg/mL败酱草处理细胞;CCK-8、平板克隆形成实验、Transwell小室实验与流式细胞术分别检测细胞增殖、克隆形成、迁移、侵袭及凋亡能力;双荧光素酶报告基因实验检测circ_0000936与mir-665的靶向关系;Western blot法检测Bax、Bcl-2蛋白表达量。结果:胶质瘤组织中circ_0000936的表达量高于正常脑组织(Pmir-665的表达量低于正常脑组织(Pmir-665呈负相关(r=-0.980,Pmir-665的表达量升高(Pmir-665的表达量升高(Pmir-665诱导胶质瘤细胞凋亡,并阻碍增殖、迁移及侵袭。

关键词：败酱草胶质瘤 circ_0000936 mir-665 细胞增殖迁移侵袭

Nuclear mir-665 aggravates heart failure via suppressing phosphatase and tensin homolog transcription

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Science China(Life Sciences) 2020年第5期63卷 724-736页

作者： Jiahui Fan Xudong Zhang Xiang Nie Huaping Li Shuai Yuan Beibei Dai Jiabing Zhan Zheng Wen Jiangang Jiang Chen Chen Daowen Wang Division of Cardiology Department of Internal MedicineTongji HospitalTongji Medical CollegeHuazhong University of Science and TechnologyWuhan 430030China Hubei Key Laboratory of Genetics and Molecular Mechanisms of Cardiological Disorders Wuhan 430030China

Although numerous mirNAs have been discovered,their functions in the different subcellular organelles have remained obscure.In this study,we found that mir-665 was enriched in the nucleus of cardiomyocytes,and then investigated the underlying role of nuclear mir-665 in heart failure.RNA fluorescence in situ hybridization assays in human heart tissue sections and primary cardiomyocytes showed that mir-665 was localized in the nucleus of cardiomyocytes.Increased expression of nuclear mir-665 was observed not only in the cardiomyocytes isolated from the heart of mice treated in vivo by transverse aortic constriction(TAC),but also in phenylephrine(PE)-treated cultured cardiomyocytes in vitro.To further explore the role of mir-665 in heart failure,a type 9 recombinant adeno-associated virus(rAAV)system was employed to manipulate the expression of mir-665 in mice.Overexpression of mir-665 aggravated TAC-induced cardiac dysfunction,while down-expression of mir-665 showed opposite effects.Bioinformatic prediction and biological validation confirmed that the PTEN(phosphatase and tensin homolog)gene was one of the targets of mir-665 in the nucleus.Furthermore,restoring PTEN expression significantly eliminated the destructive effects of mir-665 over-expression in TAC-induced cardiac dysfunction.Our data showed that nuclear mir-665 aggravates heart failure via inhibiting PTEN expression,which provided a therapeutic approach for heart failure.

关键词： nucleus mir-665 heart failure phosphatase and tensin homolog

老年慢性心力衰竭患者血清微小RNA-665和微小RNA-144表达水平与心功能的关系

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中华老年心脑血管病杂志 2024年第2期26卷 163-166页

作者：李桂梅张红梅谢秀峰内蒙古医科大学附属医院老年医学中心呼和浩特010050 内蒙古医科大学附属医院急诊内科呼和浩特010050 内蒙古医科大学第二附属医院重症医学科

目的探讨老年慢性心力衰竭(chronic heart failure,CHF)患者血清微小RNA(mir)-665、mir-144水平与心功能的关系。方法连续选取2021年3月至2023年3月内蒙古医科大学附属医院诊治的老年CHF患者120例为CHF组,根据纽约心脏病协会(NYHA)心功... 详细信息

目的探讨老年慢性心力衰竭(chronic heart failure,CHF)患者血清微小RNA(mir)-665、mir-144水平与心功能的关系。方法连续选取2021年3月至2023年3月内蒙古医科大学附属医院诊治的老年CHF患者120例为CHF组,根据纽约心脏病协会(NYHA)心功能分级:Ⅱ级39例、Ⅲ级51例、Ⅳ级30例;选择同时间段老年健康志愿者120例纳入对照组。收集临床资料及心功能指标,检测血清mir-665、mir-144表达水平,Pearson相关性分析mir-665、mir-144与心功能指标的关系。结果与对照组比较,CHF组LVEF显著降低,左心室舒张末期内径(left ventricular end-diastolic diameter,LVEDD)、左心室收缩末期内径(left ventricular end-systolic diameter,LVESD)及血清mir-665、mir-144表达水平显著升高(Pmir-665、mir-144表达水平依次升高,差异有统计学意义(Pmir-665与mir-144呈正相关(r=0.693,P=0.000);mir-665、mir-144与LVEF呈负相关(r=-0.577,P=0.000,r=-0.591,P=0.000),与LVEDD(r=0.485,P=0.000,r=0.507,P=0.000)、LVESD(r=0.539,P=0.000,r=0.494,P=0.000)呈正相关。结论老年CHF患者血清mir-665、mir-144水平升高,均与心功能密切相关。

关键词：心力衰竭循环微RNA 超声心动描记术,多普勒,彩色数据相关性 mir-665 mir-144

mir-665在奶牛乳腺上皮细胞炎症中的表达及功能分析

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生物技术通报 2022年第5期38卷 159-168页

作者：李宇航王兴平杨箭罗仍卓么任倩倩魏大为马云宁夏大学农学院银川750021 宁夏回族自治区反刍动物分子细胞育种重点实验室银川750021

为探究mir-665在奶牛乳腺上皮细胞炎症中的表达及功能,利用脂多糖(LPS)诱导奶牛乳腺上皮细胞产生炎症反应,在LPS诱导0、3、6和12 h采用qPCR技术检测了mir-665及其潜在靶mRNA的表达水平,并采用生物信息学方法进行了mir-665保守性分析、... 详细信息

为探究mir-665在奶牛乳腺上皮细胞炎症中的表达及功能,利用脂多糖(LPS)诱导奶牛乳腺上皮细胞产生炎症反应,在LPS诱导0、3、6和12 h采用qPCR技术检测了mir-665及其潜在靶mRNA的表达水平,并采用生物信息学方法进行了mir-665保守性分析、靶基因预测及其KEGG和GO功能富集分析。结果表明,mir-665在牛、人和小鼠等物种间高度保守;与0 h相比,mir-665在LPS诱导乳腺上皮细胞产生炎症的3、6和12 h的表达量均显著上调,且与促进炎症相关的潜在靶基因(MAPK14、MAP3K2、SMAD2、SP1)的表达量呈相反趋势;mir-665的靶基因预测及其KEGG和GO功能富集结果显示,mir-665可能通过参与MAPK、Th17细胞分化、肿瘤坏死因子等信号通路发挥作用。推测mir-665可能在LPS诱导的乳腺上皮细胞炎症中具有抑制作用。

关键词：奶牛 mir-665 乳腺上皮细胞乳腺炎生物信息学分析

过表达mir-665对绵羊黄体细胞StAR、3β-HSD和孕酮表达水平的影响

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中国畜牧杂志 2022年第7期58卷 171-175页

作者：邵焱焱杨恒牟健朱梦婷南颖赵宗胜石河子大学动物科技学院新疆石河子832000 西南大学动物医学院重庆402460 省部共建绵羊遗传改良与健康养殖国家重点实验室新疆农垦科学院新疆石河子832000

本实验旨在研究过表达mir-665对绵羊黄体细胞类固醇激素调节基因StAR、3β-HSD表达水平以及孕酮(P4)分泌水平的影响。通过mir-665模拟物及阴性对照物与绵羊黄体细胞共转染,设置空白对照组,48h后在不同转染组中分别检测mir-665的表达水平... 详细信息

本实验旨在研究过表达mir-665对绵羊黄体细胞类固醇激素调节基因StAR、3β-HSD表达水平以及孕酮(P4)分泌水平的影响。通过mir-665模拟物及阴性对照物与绵羊黄体细胞共转染,设置空白对照组,48h后在不同转染组中分别检测mir-665的表达水平和StAR、3β-HSD的mRNA、蛋白表达水平及P4分泌水平变化。结果表明:与空白对照组和阴性对照组相比,mir-665模拟物组中mir-665的表达量极显著升高;同时,孕酮合成关键基因StAR、3β-HSD的mRNA和蛋白表达量极显著增加,分泌水平极显著升高。综上,过表达mir-665能够促进黄体细胞内StAR、3β-HSD基因表达和P4分泌,其在绵羊黄体内分泌功能调控过程中发挥重要作用。

关键词：绵羊黄体细胞 mir-665 孕酮

mir-665靶向GNB3调控铝致PC12细胞凋亡的作用机制研究

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miR-665靶向GNB3调控铝致PC12细胞凋亡的作用机制研究

作者：雷阳山西医科大学

学位级别：硕士

目的:铝通过多种途径发挥神经毒性作用,主要体现为对认知功能的损伤,使学习记忆功能衰弱。本研究通过验证mi R-665靶向结合GNB3激活PI3K/AKT信号通路从而揭示铝暴露对PC12细胞凋亡的影响,阐述了铝的神经毒性作用机制,为铝毒性的预防和... 详细信息

目的:铝通过多种途径发挥神经毒性作用,主要体现为对认知功能的损伤,使学习记忆功能衰弱。本研究通过验证mi R-665靶向结合GNB3激活PI3K/AKT信号通路从而揭示铝暴露对PC12细胞凋亡的影响,阐述了铝的神经毒性作用机制,为铝毒性的预防和治疗提供新的研究思路。方法:1、将大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞(PC12细胞)作为研究载体,设置四个不同浓度Al(mal)处理PC12细胞:0μM、100μM、200μM和400μM,分别为对照组、低剂量组、中剂量组、高剂量组。染毒24h后进行后续相关实验操作。通过CCK8检测细胞活力,并确定后续实验的麦芽酚铝染毒液使用浓度。通过流式细胞仪检测PC12细胞凋亡状况。通过RT-q PCR检测RNA相对表达量和Western blotting检测GNB3/PI3K/AKT信号通路表达量以及凋亡蛋白Caspase-3的蛋白表达量。2、通过在293T细胞中进行双荧光素酶实验,确定mi R-665和GNB3的靶向结合关系。3、对PC12细胞进行转染处理,设置分组为:Control group、200μM Al(mal)组、200μM Al(mal)+inhibitor NC组、200μM Al(mal)+mi R-665 inhibitor组。通过流式细胞仪检测PC12细胞凋亡状况。通过RT-q PCR检测RNA相对表达量和Western blotting检测GNB3/PI3K/AKT信号通路表达量以及凋亡蛋白Caspase-3的蛋白表达量。结果:1、麦芽酚铝染毒组结果(1)细胞形态:随着麦芽酚铝染毒剂量的增加,细胞数量以及细胞间连接减少,细胞状态变差。(2)细胞活力:相比于对照组,100、200、400μM浓度的麦芽酚铝组的细胞活力逐渐降低,且在中剂量组时差异出现统计学意义。(3)细胞凋亡:相比于对照组,随着麦芽酚铝剂量的上升,PC12细胞的早凋率和总凋率均逐渐增加;凋亡相关蛋白Caspase-3蛋白表达量逐渐上升。(4)mi R-665及GNB3 m RNA相对表达量:mi R-665相对表达量:相比于对照组,随着麦芽酚铝剂量的上升,mi R-665相对表达量呈现上升趋势(P665显著下调r-GNB3-3’UTR-wt的荧光素酶活性(P665与GNB3具有靶向结合关系。3、mi R-665 inhibitor转染实验结果(1)细胞形态:相比于麦芽酚铝染毒组,转染inhibitor NC组死细胞数量稍有增多,但细胞数量、细胞间连接等表现无明显差别;转染mi R-665 inhibitor组细胞数量增加,细胞间排列紧密、连接增多。(2)细胞凋亡:相比于Control组,Al(mal)组、Al(mal)+inhibitor NC组的早期凋亡率和总凋亡率均呈现上升趋势;相比Al(mal)组,Al(mal)+mi R-665 inhibitor组早凋率和总凋率均呈现下降趋势,差异均具有统计学意义(P665 inhibitor组的凋亡相关蛋白Caspase-3表达量下降,且差异具有统计学意义(P665及GNB3 m RNA相对表达量:mi R-665相对表达量:PCR结果显示转染mi R-665 inhibitor后有效抑制了mi R-665的表达。与Control相比较,Al(mal)、Al(mal)+inhibitor NC组的mi R-665相对表达量均增加(P665 inhibitor组的mi R-665表达量下降(P665 inhibitor组的GNB3 m RNA相对表达量增加(P<0.05)。(4)PI3K/AKT通路蛋白表达量:相对于Control组,Al(mal)组的通路蛋白GNB3/PI3K/AKT蛋白表达量均有所下降,且差异具有统计学意义;相对于Al(mal)组,Al(mal)+m

关键词：麦芽酚铝 mir-665 GNB3 PI3K/AKT Caspase-3

Circ0000798通过调节mir-665/HOXB5信号轴促进肾癌增殖与转移

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Circ0000798通过调节miR-665/HOXB5信号轴促进肾癌增殖与转移

作者：郑利伟宁波大学

学位级别：硕士

研究背景:肾细胞癌(renal cell carcinoma,RCC)是一种常见的泌尿系统肿瘤。随着影像学技术的发展,RCC的检出率不断提高。然而尽管诊疗手段取得了重大的进展,RCC患者的预后依旧很差。环状RNA(circular RNA,circRNA)是一类不具有编码蛋白... 详细信息

研究背景:肾细胞癌(renal cell carcinoma,RCC)是一种常见的泌尿系统肿瘤。随着影像学技术的发展,RCC的检出率不断提高。然而尽管诊疗手段取得了重大的进展,RCC患者的预后依旧很差。环状RNA(circular RNA,circRNA)是一类不具有编码蛋白质功能的非编码RNA。越来越多的证据表明,circ RNA在多种恶性肿瘤包括RCC中表达失调。因此,本研究旨在探索一种新的circ RNA,circ0000798在RCC中的作用机制,为今后设计治疗RCC的生物靶向药物提供新思路和理论基础。研究方法:应用RNA微阵列分析鉴定RCC组织中过度表达的circ RNA;通过RT-PCR检测RCC组织和细胞系中circ0000798的表达水平;构建敲低表达或过表达circ0000798、mi R-665、HOXB5的载体并转染至RCC细胞;通过CCK-8实验检测RCC细胞的增殖情况;分别通过划痕试验及transwell实验检测RCC细胞的迁移能力与侵袭性;通过ELISA法检测RCC细胞的凋亡情况;通过western blotting分析RCC细胞中MMP-2/-9、N-cadherin、E-cadherin、Vimentin、caspase-3、cleaved caspase-3、HOXB5等蛋白的表达水平;利用生物信息学工具识别circ0000798的下游靶基因;通过双荧光素酶报告基因实验验证circ0000798与mi R-665及mi R-665与HOXB5之间的相互作用。研究结果:CircRNA微阵列分析发现在RCC组织中circ0000798显著高表达,随后的研究发现在RCC组织和细胞系中circ0000798表达同样显著上调。沉默circ0000798水平通过抑制MMP-2/-9、N-cadherin、Vimentin、caspase-3蛋白表达和促进E-cadherin、cleaved caspase-3蛋白表达抑制RCC细胞的增殖、迁移和侵袭,并且促进细胞的凋亡。进一步研究表明,circ0000798通过直接靶向mi R-665作为海绵体发挥生物学作用,抑制mi R-665可逆转沉默circ0000798对RCC细胞凋亡、迁移及侵袭的影响。同时,mi R-665可对HOXB5进行负调控。研究结论:由此可见,circ0000798发挥癌基因的功能,可以通过充当mi R-665的海绵,间接增加下游靶基因HOXB5的表达,从而促进RCC的增殖、转移并抑制其凋亡。这些结果为circ0000798作为RCC潜在的诊断生物标记物以及治疗靶点提供理论依据。

关键词：肾细胞癌 circ0000798 mir-665 HOXB5 增殖转移

mir-665、STAT3和IL-17在白塞葡萄膜炎发病中的作用研究

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miR-665、STAT3和IL-17在白塞葡萄膜炎发病中的作用研究

作者：魏碧霞新疆医科大学

学位级别：硕士

目的:检测白塞葡萄膜炎(Beh(?)et’s uveitis,BU)与正常对照组标本中mir-665、STAT3、p-STAT3、IL-17的表达差异,探讨分子指标在疾病中发挥的生物学功能作用。方法:分别抽取实验组15例BU患者和对照组15例正常人外周静脉血,利用实时荧光... 详细信息

目的:检测白塞葡萄膜炎(Beh(?)et’s uveitis,BU)与正常对照组标本中mir-665、STAT3、p-STAT3、IL-17的表达差异,探讨分子指标在疾病中发挥的生物学功能作用。方法:分别抽取实验组15例BU患者和对照组15例正常人外周静脉血,利用实时荧光定量PCR法检测BU患者和正常对照者Mi R-665的表达水平,利用Western blot检测STAT3和p-STAT3的表达,利用ELISA方法检测血浆中IL-17水平。结果:1.实验组的mir-665 m RNA表达水平较对照组显著升高(P0.05);p-STAT3的蛋白表达水平在实验组中显著升高(Pmir-665、p-STAT3、IL-17表达异常,其三者可能参与了BU的发生和发展过程。

关键词： mir-665 STAT3 IL-17 白塞葡萄膜炎