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贵州畜牧兽医 2023年第3期47卷 34-36页

作者：袁丹袁茂莎石婷婷蒙泽飞刘英渠贵州大学动物科学学院高原山地动物遗传育种与繁殖教育部重点实验室贵州贵阳550025 贵州省动物遗传育种与繁殖重点实验室贵州贵阳550025

为探究mir-615在香猪不同颜色皮肤组织中的表达情况,采集香猪不同颜色的皮肤组织,提取皮肤组织中的RNA反转录合成cDNA,采用qRT-PCR分析不同颜色皮肤组织中mir-615的表达水平。结果:mir-615在香猪白色皮肤组织中的表达量极显著高于黑色... 详细信息

为探究mir-615在香猪不同颜色皮肤组织中的表达情况,采集香猪不同颜色的皮肤组织,提取皮肤组织中的RNA反转录合成cDNA,采用qRT-PCR分析不同颜色皮肤组织中mir-615的表达水平。结果:mir-615在香猪白色皮肤组织中的表达量极显著高于黑色皮肤组织(Pmir-615可抑制黑色素的生成,与香猪白色皮肤的形成有关。

关键词：香猪皮肤组织 mir-615 基因表达

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牛mir-615潜在生物学功能分析及其组织表达鉴定

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西北农业学报 2021年第10期30卷 1435-1444页

作者：丁燕玲王鹏飞杨朝云马应师丹丹史远刚康晓龙宁夏大学农学院银川750021

mirNA作为进化保守的非编码RNA,在细胞的发生、发展和增殖过程发挥重要功能。前期研究鉴定到mir-615是剩余采食量相关的差异mirNA之一,但其潜在靶基因及在牛各组织的表达规律尚不清楚。对mir-615在各物种间的保守性,潜在靶基因及其富集... 详细信息

mirNA作为进化保守的非编码RNA,在细胞的发生、发展和增殖过程发挥重要功能。前期研究鉴定到mir-615是剩余采食量相关的差异mirNA之一,但其潜在靶基因及在牛各组织的表达规律尚不清楚。对mir-615在各物种间的保守性,潜在靶基因及其富集通路进行分析,通过茎环荧光定量PCR技术检测牛各组织中mir-615的表达。结果表明,mir-615成熟序列在各物种间保守性较高,靶基因显著富集于PI3K-ATK、Ras和MAPK等与肌肉发育相关的通路中。qRT-PCR结果显示,mir-615在皮下脂肪中的表达量最高,其次是背最长肌;mir-615在背最长肌和心脏组织中的表达差异不显著,但在皮下脂肪中的表达显著高于背最长肌和心脏组织;在其他组织中mir-615均呈现低表达模式,且各组织间表达差异不显著。研究结果将为进一步探讨mir-615在牛肌肉发育中的作用奠定理论基础,同时也为解析牛肌肉发育的分子机制提供新思路。

关键词： mir-615 组织表达靶基因预测 qRT-PCR 富集通路

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mir-615在平行培养的神经干细胞与运动神经元的表达比较

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中国组织化学与细胞化学杂志 2012年第2期21卷 152-156页

作者：索耀君王春芳浙江大学医学院附属儿童医院麻醉科杭州市310003 山西医科大学实验动物中心太原市030001

目的探讨mir-615在脊髓源性神经干细胞与运动神经元间的表达特征。方法通过免疫磁珠法分离纯化胚胎大鼠脊髓运动神经元;通过神经克隆球形成技术分离纯化胚胎大鼠脊髓源性神经干细胞。采用TaqMan mir-615Assay定量检测培养的脊髓源性神... 详细信息

目的探讨mir-615在脊髓源性神经干细胞与运动神经元间的表达特征。方法通过免疫磁珠法分离纯化胚胎大鼠脊髓运动神经元;通过神经克隆球形成技术分离纯化胚胎大鼠脊髓源性神经干细胞。采用TaqMan mir-615Assay定量检测培养的脊髓源性神经干细胞与运动神经元中mir-615的表达差异。结果通过平行培养技术分别获得了纯化的脊髓源性神经干细胞与运动神经元。定量检测结果显示,mir-615在分离的运动神经元中较在脊髓源性神经干细胞中显著高表达。结论本文提示mir-615可能在神经干细胞定向分化为运动神经元过程中发挥重要的调节作用。

关键词： mir-615 神经干细胞运动神经元调节

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小鼠脊髓源神经干细胞与人骨髓间充质干细胞定向诱导为运动神经元的实验研究

小鼠脊髓源神经干细胞与人骨髓间充质干细胞定向诱导为运动神经元...

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作者：张振山山西医科大学

学位级别：硕士

目的：本部分实验旨在通过干扰mir-31诱导小鼠脊髓源神经干细胞向运动神经元分化，探讨干扰mir-31对神经干细胞向运动神经元分化的影响的同时，进一步检测mir-615, mir-126,mir-128三种基因的表达变化，探讨该三种基因在mir-31基因被干... 详细信息

目的：本部分实验旨在通过干扰mir-31诱导小鼠脊髓源神经干细胞向运动神经元分化，探讨干扰mir-31对神经干细胞向运动神经元分化的影响的同时，进一步检测mir-615, mir-126,mir-128三种基因的表达变化，探讨该三种基因在mir-31基因被干扰后可能发挥的作用及它们与mir-31可能存在的作用关系。方法：将怀孕14-15天的昆明小鼠麻醉后取出胚胎小鼠，逐层剥离取出脊髓组织后制备成单细胞悬液，待原代细胞球大量形成并应用免疫细胞化学技术检测Nestin呈阳性表达后，分为四组：第一组添加入mmu-mir-31Anti-mirTMmirNAInhibitor，第二组加入Anti-mir Negative Control#1，第三组由培养瓶中接种到六孔板里后，加入DMEM/F12培养基，第四组为完全空白组，即继续在培养瓶中培养。按照以上分组方法处理后置于37℃，5%CO2培养箱中孵育3天。3天后分别提取以上分组中细胞的总RNA,应用荧光定量PCR技术及免疫细胞化学技术分析四个分组中运动神经元标记物ChAT基因的表达变化，并同时运用PCR技术检测mir-615,mir-126,mir-128三种mirNA基因的表达变化。结果：小鼠胎鼠脊髓源神经干细胞经干扰mir-31诱导后，免疫细胞化学检测及荧光定量PCR技术均可见运动神经元的标记基因ChAT表达显著增高，同时mir-615,mir-126,mir-128三种mirNA也在mir-31被干扰后表达显著增高结论：小鼠脊髓源神经干细胞具有向运动神经元分化的潜能，干扰mir-31可以定向诱导脊髓源神经干细胞向运动神经元分化，干扰mir-31可以对mir-615、mir-126、mir-128三种mirNA的表达产生了影响，并共同参与了对神经干细胞定向向运动神经元分化的调控。目的：本部分实验通过离心分层所采集的人体骨髓血分离并获得了人骨髓间充质干细胞，并通过体外培养使其大量增殖与分化，为了解其分化特点及定向诱导其向运动神经元方向分化提供了充分的细胞来源。并在此基础上通过采用全反式维甲酸（RA）与音猬因子（Shh）联合诱导人骨髓间充质干细胞定向向神经干细胞乃至运动神经元方向分化，观察其在分化过程中Nestin与Hb9的表达变化情况。方法：采用离心分离法获得人骨髓间充质干细胞，体外培养使其大量扩增后使用含有RA与Shh的诱导液处理，应用免疫细胞化学及荧光定量PCR方法分析Nestin与Hb9表达的变化情况。结果：人骨髓间充质干细胞经过RA与Shh诱导后Nestin与Hb9的表达明显高于未加RA与Shh的对照组及空白组。结论：hBMSC具有向神经干细胞乃至运动神经元方向分化的潜能。RA与Shh可以在体外诱导hBMSC定向向该方向分化。

关键词：脊髓源神经干细胞 mir-31 ChAT mir-615 mir-126 mir-128 骨髓间充质干细胞运动神经元 Nestin Hb9 人

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MicroRNA甲基化与表达的关联分析及其在结直肠癌中预后判断价值的研究

MicroRNA甲基化与表达的关联分析及其在结直肠癌中预后判断价值的...

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作者：张升复旦大学

学位级别：硕士

目的：结直肠癌是最常见的恶性肿瘤之一,根据中国卫生部2002年报告,结直肠癌发病率已跃居恶性肿瘤第三位,根据上海市疾病预防控制中心报告,2003年起结直肠癌发病率已跃居上海市区恶性肿瘤第二位。30一40%结直肠癌患者最终死于复发转移,... 详细信息

目的：结直肠癌是最常见的恶性肿瘤之一,根据中国卫生部2002年报告,结直肠癌发病率已跃居恶性肿瘤第三位,根据上海市疾病预防控制中心报告,2003年起结直肠癌发病率已跃居上海市区恶性肿瘤第二位。30一40%结直肠癌患者最终死于复发转移,因此早期诊断与治疗对于提高结直肠癌生存率尤为关键。近年来,众多研究者应用各种高通量组学技术(基因组学、转录组学、蛋白组学、表遗传组学和代谢组学等)试图寻找新的肿瘤预测以及预后分子生物学指标,然而,不同研究结果差异很大,可重复性差,迄今尚未找到公认的具有临床应用价值的预后分子指标。本研究在甲基化芯片初筛结果之上,试图寻找具有预后判断价值的新结直肠癌分子标记物,以提高结直肠癌预后判断的准确性,指导患者的个体化治疗. 材料与方法：细胞株：从上海中科院细胞室获取三株生长良好的肠癌细株HCT116,RKO,SW480 组织标本：获取96例手术后的结直肠癌新鲜组织标本,其中54例具有配对癌旁正常粘膜组织。所有标本均来自2008年12月-2010年3月复旦大学附属肿瘤医院/上海市肿瘤医院大肠外科,且均保存在-80度液氮中,其中提取RNA的组织均为RNALater保存,所有病人均签署过知情同意书,而且术前均未行新辅助化疗/放疗。病理分期严格按照AJCC(美国癌症联合委员会)分期第七版,此项研究经复旦大学附属肿瘤医院伦理委员会讨论并审核通过. 芯片初筛：大肠外科蔡国响博士前期应用全基因组甲基化芯片(Illumina HumanMethylation27)筛选结直肠癌相关甲基化基因,发现mir-615等基因启动子CpG岛甲基化不仅具有致癌性,且与预后有关,从而为本研究提供候选的目标基因。实验方法： 1采用甲基化特异性PCR(MSP)方法检测细胞株中基因mir-615启动子甲基化状态,对其中MSP阳性细胞株采用去甲基化试剂5-aza-2-CdR干预,分别采用定量甲基化(qMSP)和TaqMan定量PCR(qRT-PCR)检测mir-615甲基化水平和表达水平. 2.在96例结直肠癌组织以及54例配对癌旁正常组织粘膜中提取DNA并亚硫酸氢盐修饰,采用定量甲基化(qMSP)方法检测基因mir-615启动子甲基化水平,对有RNAlater保存的56例癌组织和27例正常组织抽提RNA,采用TaqMan定量PCR (qRT-PCR)方法检测mir-615表达水平。数据分析：根据样本、标准品中目标基因以及内参基因实时定量甲基化PCR扩增的Ct值计算甲基化比例(percentage of methylated reference, PMR), PMR=100×(目标基因/内参)样本/(目标基因/内参基因)标准品,PMRmir-615基因甲基化与临床病理特征的关联性,配对卡方检验分析54对癌与癌旁甲基化差异,独立样本t检验分析56例癌甲基化与表达之间的关联性.采用配对t检验分析27对癌与配对正常组织之间mir-615表达差异,采用Kaplan-Meier和Log-rank检验分析甲基化与预后关系,所有检验均为双侧,Pmir-615表达.54例癌与配对的正常组织中,mir-615在癌组织中甲基化阳性率显著高于配对正常组织(P=0.002);27对癌与配对的正常组织中,mir-615在癌组织中表达显著低于癌旁正常组织(P=0.047);在56例癌组织同时行甲基化和表达的定量检测,独立样本t检验显示癌组织甲基化和表达呈显著负相关(p=0.042);在85例Ⅱ、Ⅲ期根治术后结直肠癌中,甲基化和DFS显著相(p=0.029),高甲基化提示预后不良,但甲基化和OS没有显著性相关性(p=0.358). 结论：在结直肠癌中,mir-615表达受甲基化调节,异常高甲基化具有致癌性,且在预测结肠癌患者预后中具有潜在的应用价值.

关键词： mir-615 甲基化结直肠癌预后表达

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环状RNA circLPP在奶牛乳腺炎组织中的表达及其作为潜在治疗靶点的应用分析

环状RNA circLPP在奶牛乳腺炎组织中的表达及其作为潜在治疗靶点...

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作者：王兵兵西北农林科技大学

学位级别：硕士

奶牛乳腺炎是奶牛养殖中最常见的疾病之一,是制约奶牛养殖业健康发展主要因素,给奶牛养殖业带来了巨大的经济损失。奶牛乳房炎的防治除了重在加强饲养管理、重视环境卫生和挤奶卫生外,国内外采用抗生素、中草药、生物制剂和生物活性提... 详细信息

奶牛乳腺炎是奶牛养殖中最常见的疾病之一,是制约奶牛养殖业健康发展主要因素,给奶牛养殖业带来了巨大的经济损失。奶牛乳房炎的防治除了重在加强饲养管理、重视环境卫生和挤奶卫生外,国内外采用抗生素、中草药、生物制剂和生物活性提取物治疗等多种技术外用于防治奶牛乳腺炎,但是乳腺炎的防治工作依旧十分严峻。近年来研究发现环状RNA(circRNA)的表达和作用发挥与多种疾病的发生发展相关,其在正常与病变样本中的差异表达以及在疾病中的作用方式的逐步阐明,使circRNA成为可能作为临床疾病的新型诊断标志物并具有成为有效治疗靶点的潜力。本研究从实验室前期对奶牛正常和炎性乳腺上皮细胞进行高通量测序后得到差异表达circRNA中,挑选了一个新发现的circRNA并命名为circLPP,研究了其在奶牛正常乳腺组织和炎性乳腺组织的表达水平,并通过在乳腺上皮细胞过表达的方式,研究了炎症状态下高表达的circLPP对乳腺上皮炎性细胞因子分泌、活力和增殖的影响,以初步阐明该circRNA是否参与奶牛乳腺炎的发生发展过程,并有望成为奶牛乳腺炎治疗的新靶点及抗乳腺炎奶牛育种的新基因。研究取得如下结果:1.根据高通量测序得到的该circRNA序列进行生物信息学分析,结果显示circLPP来源于亲本基因LIM domain containing preferred translocation partner in lipoma(LPP)的第一个外显子,因此将其命名circLPP。CircLPP预测的靶microRNA为mir-615,而SPRED3是mir-615下游的靶mRNA。实时定量荧光PCR结果显示circLPP在乳腺炎患牛的乳腺组织中的表达水平显著高于在奶牛正常乳腺组织中的表达,表明circLPP参与奶牛乳腺炎的发生发展过程。2.在奶牛乳腺上皮MAC-T细胞系中过表达circLPP,建立了稳定过表达circLPP的奶牛乳腺上皮细胞系。通过一系列的实验方法研究发现过表达circLPP可诱导奶牛乳腺上皮细胞对炎性细胞因子TNF-α、IL1-β和IL-6的分泌;降低乳腺上皮细胞的活力,并抑制乳腺上皮的增殖能力。结果表明炎症状态高表达circLPP对乳腺上皮细胞的生物学功能有着重要的影响。3.实验通过质粒转染、使用mir-615的模拟物和抑制剂等分子生物学的方法,进一步证实了circLPP→mir-615→SPRED3的上下游调控方式,发现circLPP通过circLPP→mir615→SPRED3相互调控作用影响奶牛乳腺上皮细胞炎性应答及增殖作用,进而参与奶牛乳腺炎的发生发展过程。综上所述,本研究结果表明circLPP在奶牛乳腺发生炎症后其表达水平明显增高;奶牛乳腺在炎症状态高表达的circLPP,对奶牛乳腺上皮的炎性细胞因子分泌、增殖和活力具有重要的调控作用,进而参与奶牛乳腺的炎症发生过程,这一研究结果提示circLPP可能作为将来奶牛乳腺炎防治的一个靶点以及抗乳腺炎奶牛育种的候选基因。

关键词：奶牛乳腺炎乳腺上皮细胞环状RNA circLPP 增殖 mir-615

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