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非小细胞肺癌患者血清外泌体中mir-539的临床意义及生物学功能研究

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现代肿瘤医学 2023年第17期31卷 3197-3204页

作者：梁月兰王进李建祥苏州市吴中人民医院江苏苏州215100 苏州大学苏州医学院公共卫生学院江苏苏州215123

目的:分析非小细胞肺癌患者预后相关的外泌体mirNA的临床意义,并通过实验验证其功能,作为肺癌诊断和治疗的生物标志物。方法:从公共数据库下载非小细胞肺癌患者血清外泌体和肺癌组织的mirNA表达谱及临床数据;分别利用R语言“limma”“su... 详细信息

目的:分析非小细胞肺癌患者预后相关的外泌体mirNA的临床意义,并通过实验验证其功能,作为肺癌诊断和治疗的生物标志物。方法:从公共数据库下载非小细胞肺癌患者血清外泌体和肺癌组织的mirNA表达谱及临床数据;分别利用R语言“limma”“survival”和“survminer”包进行mirNA的差异表达分析和生存分析;通过靶基因富集分析预测mirNA生物学功能并分析其与免疫细胞浸润的相关性;在两种肺癌细胞中敲低mirNA,通过CCK-8、EdU和Transwell实验分析其对细胞增殖和迁移的影响;收集过表达mirNA肺癌细胞的外泌体,处理人正常支气管上皮细胞BEAS-2B并分析生物学功能变化。结果:基于差异分析和单因素COX分析,选定has-mir-539-5p(mir-539)进一步探究其与多个肿瘤相关信号通路和免疫系统相关;相关性分析表明mir-539表达与多种免疫细胞浸润显著相关;敲低mir-539能够显著降低肺癌细胞增殖和迁移能力,而过表达mir-539肺癌细胞外泌体处理正常肺细胞能够使其获得恶性细胞特征,包括增殖和迁移能力的增强。结论:mir-539能够调控肺癌细胞增殖和迁移能力,并且在非小细胞肺癌患者肿瘤组织和血清外泌体中上调,对患者诊断和预后具有重要的指导意义。

关键词：非小细胞肺癌外泌体 mir-539 预后增殖迁移

mir-539通过结合TIPE激活SAPK/JNK信号通路促进结直肠癌铁死亡的研究

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miR-539通过结合TIPE激活SAPK/JNK信号通路促进结直肠癌铁死亡的...

作者：杨焱厦门大学

学位级别：硕士

背景:结直肠癌是一种极其常见的肿瘤,有着很高的复发率,并且已经成为世界第三大致命的癌症,严重危害人类健康。如今,结直肠癌的治疗,诸如手术、化疗、放疗和分子靶向治疗已获致一些成效,然而治愈率和生存率仍停滞在较低的水平。因此,探... 详细信息

背景:结直肠癌是一种极其常见的肿瘤,有着很高的复发率,并且已经成为世界第三大致命的癌症,严重危害人类健康。如今,结直肠癌的治疗,诸如手术、化疗、放疗和分子靶向治疗已获致一些成效,然而治愈率和生存率仍停滞在较低的水平。因此,探究结直肠癌的发病机制寻找新的治疗靶点势在必行。microRNA-539(mir-539)在多种癌症中低表达,其中,包括结直肠癌。肿瘤坏死因子诱导蛋白8(TNFAIP8/TIPE)在结直肠癌的高表达促进其增殖,迁移和血管生成。然而,mir-539和TIPE之间的关系以及调节结直肠癌增殖的机制仍有待探索。故,本课题将着重探讨mir-539在结直肠癌增殖中的调控作用及机制。方法:利用生物信息学分别对mir-539和TIPE在结直肠癌中的表达及二者的相关性展开探究。检测了结肠癌细胞中mir-539和TIPE的表达。双荧光素酶报告基因分析了 mir-539和TIPE之间的作用。分析外源改变mir-539和TIPE的表达对两种结直肠癌细胞系HCT116和SW480铁死亡现象及其信号通路的影响。利用TIPE过表达的SW480细胞(下文图示中均表示为SW480+/+)建立裸鼠异位移植瘤模型,验证TIPE对肿瘤生长的影响。结果:在结直肠癌组织中,mir-539表达降低、TIPE表达升高。双荧光素酶报告基因实验证实mir-539可以靶向结合TIPE基因。体外实验证实,mir-539可以结合TIPE并调节其表达,激活SAPK/JNK途径抑制铁死亡的关键分子谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)的表达,提高活性氧(ROS)和脂质活性氧(Lipid-ROS)的水平,抑制细胞的增殖;体内实验证实,TIPE可通过抑制SAPK/JNK通路抑制铁死亡,促进肿瘤生长。结论:mir-539可以结合TIPE并调节其表达,进一步激活SAPK/JNK通路抑制GPX4的表达,促进铁死亡的发生。本研究揭示了 mir-539的新作用,即通过结合TIPE激活SAPK/JNK通路调节结直肠癌细胞铁死亡,为解释结直肠癌异常增殖的机制提出新思路,且为晚期结直肠癌在治疗层面提示了可能有效的靶点。

关键词： mir-539 TIPE 结直肠癌 GPX4 铁死亡

mir-539在铜绿假单胞菌肺炎中作用的研究

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miR-539在铜绿假单胞菌肺炎中作用的研究

作者：李建波西南医科大学

学位级别：硕士

目的:本课题以课题组前期研究为基础,通过转染mir-539 mimic,体外观察mir-539对铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa,PA)诱导的MH-S细胞(小鼠肺泡巨噬细胞)TNF-α和IL-1β表达的影响;并在体内观察mir-539对小鼠所致铜绿假单胞菌所致肺... 详细信息

目的:本课题以课题组前期研究为基础,通过转染mir-539 mimic,体外观察mir-539对铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa,PA)诱导的MH-S细胞(小鼠肺泡巨噬细胞)TNF-α和IL-1β表达的影响;并在体内观察mir-539对小鼠所致铜绿假单胞菌所致肺炎严重程度影响,包括肺组织形态学和生存率,探究mir-539在铜绿假单胞菌肺炎中可能存在的潜在作用。方法:(1)以MH-S细胞为研究对象,铜绿假单胞菌PA14感染MH-S细胞,采用RT-q PCR技术检测MH-S细胞中的mir-539的相对表达水平变化。(2)转染带有FAM标记的mir-539 mimic(539-m),细胞流式仪检测细胞转染效率后,以Negative Control mimic(NC-m)为对照,RT-q PCR检测mir-539的表达水平。(3)体外培养的MH-S细胞,随机分为4组,分别为NC-m(-)、539-m(-)组(对照)和NC-m(+)、539-m(+)组(PA14感染),PA14感染组在转染mirNA 24 h后,以MOI(multiplicity of infection,感染复数)=20的细菌量,感染转染后的细胞1 h,弃含菌培养基,加入100ng/m L多粘菌素B(polymyxin B),继续培养24 h,收集细胞后分别提取RNA和蛋白,采用RT-q PCR检测各组细胞mir-539、TNF-αm RNA和IL-1βm RNA的表达变化,采用Western blot检测各组细胞TNF-α和IL-1β在蛋白水平的表达差异。(4)通过气道灌注含5 x 10个细菌的50μl菌液,建立C57BL/6小鼠铜绿假单胞菌肺炎模型,同时观察小鼠一般情况、体重变化、肺组织病理切片及CFU(colony forming units,菌落形成单位)计数等。(5)尾静脉注射mir-539 mimic 50μg/只,转染24 h后,取肺组织,RT-q PCR检测mir-539 mimic转染效果,建立小鼠肺部转染模型。(6)转染mir-539 mimic(539-m)或Negative Control mimic(NC-m)的C57BL/6小鼠,气道灌注铜绿假单胞菌5x10CFU/只24 h后,取左肺福尔马林固定,进行HE(hematoxylin-eosin staining,苏木素-伊红)染色观察肺组织形态学变化。右肺匀浆后CFU计数并提取RNA检测mir-539、TNF-αm RNA和IL-1βm RNA的表达。结果:(1)同正常培养的MH-S细胞相比,PA14感染后的MH-S细胞内mir-539相对表达量增加,提示mir-539与铜绿假单胞菌所致炎症的发展有关。(2)与未转染的MH-S细胞相比,转染带FAM标记的mir-539mimic后,细胞流式仪检测,转染效率为(92.62±0.4152)%。采用RT-q PCR检测后,与NC-m(-)组的细胞相比,转染mir-539 mimic的细胞内mir-539相对表达量增加约10倍。(3)MH-S细胞经mir-539 mimic转染后,经PA14感染,539-m(+)组mir-539的相对表达量较539-m(-)组降低。与NC-m(+)组相比,539-m(+)组细胞内TNF-αm RNA和IL-1βm RNA的相对表达量增加了约50%,均有显著差异。Western blot检测各炎症因子的表达量变化,与RNA水平结果一致,PA14感染后,539-m(+)组较NC-m(+)组细胞内TNF-α和IL-1β蛋白表达也增加。转录水平与蛋白水平的结果,提示mir-539促进MH-S细胞在PA14所致的炎症反应中TNF-α和IL-1β的表达,表明mir-539在小鼠肺泡巨噬细胞对PA14所致炎症有一定的调节作用。同时,mir-539抑制剂可以阻断这些细胞因子的升高。(4)与PBS组小鼠相比,PA14感染后小鼠体重下降更多,下降比例分别占原体重的2%与12%。同时PA14组小鼠肺组织重量增加,约占体重的1%,PBS组约0.6%。CFU计数显示,PBS组未检测出铜绿假单胞菌,PA14组小鼠肺组织约10 CFU/mg。肺组织病理切片经HE染色后,在光镜下观察,PBS组小鼠肺组织结构完整,肺泡腔内无渗出液,无炎性细胞浸润,肺泡壁无增厚。PA14组小鼠肺泡结构紊乱,肺泡壁水肿增厚,部分肺泡腔融合,组织内可见大量散在的炎性细胞浸润。(5)通过尾静脉注射mirNA mimic,与NC-m(-)组相比,539-m(-)组肺组织内细胞mir-539相对表达量增加。基于转染小鼠,观察mir-539在铜绿假单胞菌肺炎中的作用,结果显示,与NC-m(-)组相比,经过PA14感染后,539-m(+)组mir-539的相对表达量上调。与NC-m(+)组相比,539-m(+)组小鼠肺组织内TNF-αm RNA和IL

关键词： mirNA mir-539 铜绿假单胞菌肺炎

mir-539抑制乳腺癌细胞MCF-7迁移的作用机制分析

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唐山师范学院学报 2023年第6期45卷 65-69页

作者：孙煜曦邓英姿张美玲张运峰许可胡芬华北理工大学生命科学学院河北唐山063210 唐山师范学院生命科学系河北唐山063000

利用定量PCR检测其在乳腺癌细胞系中表达,Transwell检测其对细胞迁移的作用,利用TargetScan7.1、RNA22、mirDB、mirTarbase、DAVID和GEPIA分析mir-539的靶基因、生物功能及组织表达。结果表明,mir-539在乳腺癌组织低表达,且在4种乳腺癌... 详细信息

利用定量PCR检测其在乳腺癌细胞系中表达,Transwell检测其对细胞迁移的作用,利用TargetScan7.1、RNA22、mirDB、mirTarbase、DAVID和GEPIA分析mir-539的靶基因、生物功能及组织表达。结果表明,mir-539在乳腺癌组织低表达,且在4种乳腺癌细胞系中表达存在差异,抑制MCF-7的迁移,在物种间高度保守;174个靶基因主要富集在RNA降解、雌激素信号通路(P<0.01);GEPIA分析结果显示42个靶基因在乳腺癌和正常组织中存在表达差异。

关键词： mir-539 细胞迁移靶基因生物信息学分析

mir-539通过靶向EMT调节宫颈癌细胞增殖、转移

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中国优生与遗传杂志 2022年第9期30卷 1542-1546页

作者：吕洪磊周季平何金祥安徽医科大学第四附属医院妇产科安徽省合肥230012

目的探讨微小RNA-539(mir-539)对人宫颈癌细胞C33a增殖、转移的影响及转移机制。方法收集宫颈癌组织及癌旁正常组织并检测组织中mir-539 mRNA含量;以人正常宫颈上皮细胞系HUCECs作为对照,筛选宫颈癌细胞中mir-539 mRNA相对表达量最低... 详细信息

目的探讨微小RNA-539(mir-539)对人宫颈癌细胞C33a增殖、转移的影响及转移机制。方法收集宫颈癌组织及癌旁正常组织并检测组织中mir-539 mRNA含量;以人正常宫颈上皮细胞系HUCECs作为对照,筛选宫颈癌细胞中mir-539 mRNA相对表达量最低的细胞株;甲基噻唑基四唑(MTT)法检测宫颈癌细胞的增殖;Transwell小室法检测mir-539对细胞侵袭、迁移能力的影响;实时定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检法、蛋白免疫印迹(Western blot)法检测波形蛋白(vimentin)相对表达量。结果 RT-qPCR结果显示,宫颈癌癌组织中mir-539含量较癌旁正常组织显著减少(Pmir-539明显降低(Pmir-539后,与空白对照组相比,mimics-mir-539组增殖能力减弱(Pmir-539组细胞侵袭和迁移能下降(Pmir-539组vimentin mRNA及蛋白相对表达量较对照组显著降低(Pmir-539在人宫颈癌表达降低,在人宫颈癌细胞C33a中,过表达mir-539能够抑制其增殖、迁移,迁移机制可能与下调vimentin表达有关。

关键词：宫颈癌 mir-539 增殖侵袭迁移

mir-539对非小细胞肺癌细胞增殖凋亡的影响及机制

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临床肿瘤学杂志 2022年第6期27卷 540-543页

作者：方庆亮顾小强毛广敏王蕾刘雪顾香莲李晓黎上海中医药大学附属龙华医院放疗科上海200032 上海中医药大学附属龙华医院肿瘤七科 200032

目的探究分析非小细胞肺癌细胞H460中mir-539表达差异及凋亡相关基因的影响,阐明其作用机制。方法采用实时荧光定量PCR(qPCR)检测非小细胞癌细胞系H460和健康人体的支气管上皮细胞(16HBE)mir-539表达。实验分为空白对照组、阴性对照组... 详细信息

目的探究分析非小细胞肺癌细胞H460中mir-539表达差异及凋亡相关基因的影响,阐明其作用机制。方法采用实时荧光定量PCR(qPCR)检测非小细胞癌细胞系H460和健康人体的支气管上皮细胞(16HBE)mir-539表达。实验分为空白对照组、阴性对照组及转染组(mir-539);MTT法检测各组细胞的增殖作用,流式细胞术检测各组细胞凋亡情况,qPCR检测细胞凋亡相关基因表达。结果健康人体支气管上皮细胞的mir-539表达水平为1.01±0.09,高于NCI-H460的0.21±0.03,差异具有统计学意义(Pmir-539在非小细胞肺癌细胞中低表达,上调mir-539表达可增强顺铂对肺癌细胞的增殖抑制作用以及凋亡水平。

关键词：非小细胞肺癌 mir-539 凋亡相关基因

姜黄素作用于mir-539对胃癌细胞生物学行为影响的研究

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胃肠病学 2021年第11期26卷 656-662页

作者：苏娜娜崔敏李兰兰周而乐李红曹璋滨州医学院病理学教研室 264003 滨州市人民医院小儿科

背景:研究发现,姜黄素可调控多种mirNAs表达来影响肿瘤细胞的生物学行为,而姜黄素是否通过调控mir-539表达影响胃癌细胞的生物学行为尚未明确。目的:探讨姜黄素通过调控mir-539表达对胃癌细胞增殖、迁移、侵袭、凋亡等生物学行为的影响... 详细信息

背景:研究发现,姜黄素可调控多种mirNAs表达来影响肿瘤细胞的生物学行为,而姜黄素是否通过调控mir-539表达影响胃癌细胞的生物学行为尚未明确。目的:探讨姜黄素通过调控mir-539表达对胃癌细胞增殖、迁移、侵袭、凋亡等生物学行为的影响及其作用机制。方法:收集49例胃癌患者组织,将胃癌AGS、SGC7901细胞分为空白组、姜黄素组、阴性对照组、mir-539 mimics组、mir-539抑制剂组、抑制剂对照组、mir-539抑制剂+姜黄素组。采用qRT-PCR法检测胃癌组织和细胞中mir-539 mRNA表达。MTT法检测细胞增殖,划痕实验和Transwell实验检测细胞迁移和侵袭,流式细胞术检测细胞凋亡,蛋白质印迹法检测APOBEC3B、c-Myc、cyclin D1、claudin-1、N-cadherin蛋白表达。结果:胃癌组织和细胞中mir-539表达均显著低于对照组(Pmir-539表达与肿瘤分期有关(Pmir-539表达(Pmir-539 mimics组、姜黄素组胃癌细胞增殖、迁移、侵袭能力均明显降低,细胞凋亡率明显增加,APOBEC3B、c-Myc、cyclin D1、claudin-1、N-cadherin蛋白表达明显降低(Pmir-539在胃癌组织中表达降低,姜黄素可通过上调mir-539表达来抑制胃癌细胞增殖、迁移、侵袭,并诱导细胞凋亡。

关键词：姜黄素 mir-539 胃肿瘤细胞增殖细胞侵袭细胞凋亡

EM患者子宫内膜组织的ESCs中mir-539表达水平及其靶向MMP-9对ESCs侵袭和迁移的影响

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天津医药 2021年第10期49卷 1025-1030页

作者：肖田廉红梅湖北省妇幼保健院外科 430070 湖北省妇幼保健院妇科 430070

目的探究子宫内膜异位症(EM)患者子宫内膜组织的子宫内膜基质细胞(ESCs)中mir-539表达水平,以及mir-539靶向基质金属蛋白酶9(MMP-9)对ESCs侵袭和迁移的影响。方法收集60例EM患者子宫内膜异位组织及47例正常子宫内膜组织,分离ESCs原代培... 详细信息

目的探究子宫内膜异位症(EM)患者子宫内膜组织的子宫内膜基质细胞(ESCs)中mir-539表达水平,以及mir-539靶向基质金属蛋白酶9(MMP-9)对ESCs侵袭和迁移的影响。方法收集60例EM患者子宫内膜异位组织及47例正常子宫内膜组织,分离ESCs原代培养,实时荧光定量PCR检测mir-539和MMP-9 mRNA表达水平,并采用双荧光素酶报告基因检测其靶向关系。利用Lipofectamine 3000试剂转染ESCs,并将其分为mir-539 mimics组、mimics NC组、mir-539 inhibitors组和inhibitors NC组。CCK-8检测各组细胞增殖情况;划痕实验检测细胞迁移;Transwell检测细胞侵袭;Western blot法检测各组细胞中MMP-9蛋白表达水平。结果EM组mir-539 m RNA水平显著低于对照组,MMP-9 mRNA水平显著高于对照组(Pmir-539与MMP-9具有明显的靶向关系(Pmir-539 mimics组ESCs细胞增殖、划痕愈合率、侵袭细胞数量及MMP-9蛋白表达水平均显著降低(Pmir-539 inhibitors组ESCs细胞增殖、划痕愈合率、侵袭细胞数量及MMP-9蛋白表达水平均显著升高(Pmir-539可靶向调节MMP-9表达水平,影响ESCs的增殖、迁移和侵袭。

关键词：子宫内膜异位症基质金属蛋白酶9 细胞运动肿瘤侵润微RNAs 子宫内膜基质细胞 mir-539 迁移和侵袭

mir-539通过抑素调控非小细胞肺癌的细胞增殖、迁移和凋亡

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国际呼吸杂志 2020年第19期40卷 1510-1515页

作者：钟敏华吴展陵李新军涂平华杨英武汉科技大学附属孝感医院呼吸科 432100 武汉科技大学 430081

目的:探讨mir-539通过抑素调控非小细胞肺癌(NSCLC)细胞增殖、迁移和凋亡的机制。方法:选择2019年1月至2020年1月期间武汉科技大学附属孝感医院收治的6例NSCLC手术患者作为研究对象进行回顾性分析,术中采集未实施放化疗的NSCLC标本,置... 详细信息

目的:探讨mir-539通过抑素调控非小细胞肺癌(NSCLC)细胞增殖、迁移和凋亡的机制。方法:选择2019年1月至2020年1月期间武汉科技大学附属孝感医院收治的6例NSCLC手术患者作为研究对象进行回顾性分析,术中采集未实施放化疗的NSCLC标本,置于液氮中保存,提取总RNA,通过mir-539在NSCLC中靶基因的筛选确定抑素是mir-539的候选靶基因。采用反转录荧光定量聚合酶链式反应技术定量检测mir-539、抑素,CCK-8检测细胞增殖,划痕试验检测细胞迁移,流式细胞术检测细胞凋亡。比较靶向抑制抑素组、过表达mir-539组和低表达mir-539组的细胞增殖、迁移及凋亡情况检测。结果:过表达组抑素mRNA相对表达量(1.00±0.07)明显高于阴性对照组(0.20±0.02)(t=26.917,Pmir-539的候选靶基因,两者均可作为抑癌基因抑制癌细胞增殖、迁移,促进细胞凋亡。mir-539对NSCLC细胞增殖、迁移、凋亡的调控作用与抑素具有紧密的关系。

关键词：癌非小细胞肺细胞增殖细胞凋亡 mir-539 抑素