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circ0023642通过调控miR-508-3p/ERBB4分子轴促进胃癌GMC-803细胞的恶性生物学行为

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中国肿瘤生物治疗杂志 2019年第9期26卷 976-982页

作者：施兵徐健张秀兵徐春华南通市第二人民医院肿瘤科江苏南通226002 南通市第二人民医院药剂科江苏南通226002

目的:探讨circ0023642通过调控miR-508-3p/ERBB4分子轴对胃癌GMC-803细胞增殖和转移的影响及其作用机制。方法:选取2015年5月至2018年3月南通市第二人民医院手术切除的31例胃癌患者癌组织及配对的癌旁组织标本和胃癌细胞系,使用qpCR检... 详细信息

目的:探讨circ0023642通过调控miR-508-3p/ERBB4分子轴对胃癌GMC-803细胞增殖和转移的影响及其作用机制。方法:选取2015年5月至2018年3月南通市第二人民医院手术切除的31例胃癌患者癌组织及配对的癌旁组织标本和胃癌细胞系,使用qpCR检测胃癌组织、癌旁组织和细胞系中circ0023642和miR-508-3p的表达情况;WB实验检测MGC-803细胞中ERBB4、E-cadherin、N-cadherin和Vimentin的表达;CCK-8和Transwell实验检测调控circ0023642和miR-508-3p的表达对MGC-803细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响;双荧光素酶报告基因验证miR-508-3p是否能够结合circ0023642和ERBB4的3’UTR。结果:circ0023642在胃癌组织和细胞系中的表达水平分别显著高于癌旁组织和正常胃黏膜细胞(pp3细胞中表达水平最高。敲降circ0023642后MGC-803细胞增殖、迁移、侵袭和上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition, EMT)受到明显抑制(均pp3642与ERBB4均可以靶向结合miR-508-3p的作用位点,并进一步实验证实circ0023642通过海绵吸附miR-508-3p促进MGC-803细胞增殖、迁移、侵袭和EMT(pp3642通过与ERBB4竞争性结合miR-508-3p的作用位点,进而促进胃癌MGC-803细胞增殖和转移,其可作为胃癌临床诊断的标志物。

关键词：胃癌 MGC-803细胞 circ0023642 miR-508-3p ERBB4 增殖转移 EMT

miR-508-3p抑制肺腺癌恶性生物学行为的研究

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miR-508-3p抑制肺腺癌恶性生物学行为的研究

作者：沈俊廷昆明医科大学

学位级别：硕士

[目的]对miR-508-3p在肺腺癌中的临床意义及生物信息学进行分析,研究过表达miR-508-3p对肺腺癌细胞中增殖、迁移、侵袭、细胞周期及凋亡等生物学行为的影响;预测miR-508-3p潜在的作用靶点及相关信号通路,并对其潜在作用靶点基因进行初... 详细信息

[目的]对miR-508-3p在肺腺癌中的临床意义及生物信息学进行分析,研究过表达miR-508-3p对肺腺癌细胞中增殖、迁移、侵袭、细胞周期及凋亡等生物学行为的影响;预测miR-508-3p潜在的作用靶点及相关信号通路,并对其潜在作用靶点基因进行初步验证,为肺癌的诊断及治疗提供一定的理论依据。[方法]1.下载TCGA数据库中肺腺癌患者的一般资料及临床病理信息,包括:性别、年龄、吸烟史、病理类型、肿瘤分期、靶向治疗史、基因表达量、生存时间、预后等。2.使用独立样本T检验对TCGA数据库中446例癌和44例癌旁组织中miR-508-3p表达量进行统计分析,配对样本T检验对38例成对的癌及癌旁组织中miR-508-3p表达量进行统计分析。3.根据入排标准,筛选出TCGA数据库中421例病例数据,以miR-508-3p表达的中位数3.073作为临界值将miR-508-3p表达谱分为高表达组和低表达组。采用卡方检验分析miR-508-3p基因表达量与肺腺癌患者性别、年龄、肿瘤分期、吸烟史等临床病理特征的关系;Kaplan-Meier分析miR-508-3p对肺腺癌患者预后的影响;Cox回归分析miR-508-3p表达量、性别、年龄、肿瘤分期、吸烟史等因素危险。4.根据miR-508-3p基因表达量将TCGA数据库中的肺腺癌病例进行四分位分组,用R语言limma包进行差异基因分析。应用DAVID对上述差异基因进行GO及KEGG分析,筛选出可能存在调控关系的信号通路。通过在线分析工具（http://***/）,对miR-508-3p靶基因进行预测,并与上述显著低表达的差异基因进行负相关的交集分析,筛选出存在潜在调控关系的靶基因。5.使用mimics瞬时转染A549细胞株,并使用RT-qpCR检测转染效率:将生长状态良好的肺腺癌A549细胞株接种至6孔板中,待细胞密度生长至50-60%,使用Lipo3000将mimics miR-508-3p转染至A549细胞中;待转染48小时后使用RT-qpCR对转染效率进行验证;并按照2-ΔΔct公式计算miR-508-3p的相对表达量。6.细胞功能学实验:使用CCK8检测细胞增殖能力;划痕实验检测细胞迁移能力;Transwell检测细胞侵袭能力;流式细胞术检测细胞周期及凋亡。7.以转染后48h的肺腺癌A549细胞株作为样本,使用RT-qpCR对潜在的靶基因进行初步验证;并按照2-ΔΔct公式计算各潜在靶基因的相对表达量。[结果]1.miR-508-3p于TCGA数据库中446例癌组织及44例癌旁组织表达量无统计学差异（p＞0.05）;38例成对癌及癌旁组织中表达量亦无统计学差异（p＞0.05）。2.TCGA数据库中的肺腺癌样本中,miR-508-3p表达水平与年龄、肿瘤T分期具有统计学差异（p＜0.05）;miR-508-3p的高表达水平相对危险度为0.679且具有统计学差异（p＜0.05）;肿瘤的TNM分期是肺腺癌患者OS的危险因素且具有统计学差异（p＜0.05）;矫正T、N、M分期等影响因素后,miR-508-3p的高表达水平相对危险度为0.665且具有统计学差异（p＜0.05）。3.通过靶基因预测分析,获得8个在肺腺癌中可能存在调控关系的靶基因:TpX2、KIF14、pFN2、CENpA、GREM1、CEp55、CKAp2L 和 HOXC11。4.RT-qpCR结果显示,在A549细胞株转染48小时后,miR-508-3p过表达组表达量明显上升,是NC对照组的10.68倍,且具有统计学差异（p＜0.05）。5.miR-508-3p的高表达水平能对A549细胞株的增殖、迁移、侵袭及周期产生抑制作用且具有统计学差异（p＜0.05）;但miR-508-3p的高表达水平无法促进A549细胞株的凋亡,无统计学差异（p＞0.05）。6.RT-qpCR 结果显示,CEp55、CKAp2L、GREM1、KIF14 四个基因在miR-508-3p过表达组的相对表达量分别为NC组的0.2585±0.03285、0.6196±0.06806、0.3434±0.13426、0.7947±0.09365 倍,均低于 NC 组,且具有统计学差异（p＜0.05）;根据筛选靶基因过程中进行的负相关交集分析,提示CEp55及GREM1两个基因可能是miR-508-3p具有潜在调控关系的靶基因。[结论]1.miR-508-3p在肺癌及癌旁组织中表达量无差异,但miR-508-3p高表达水平是肺腺癌患者生存预后的保护性因素;2.过表达miR-508-3p可以抑制肺腺癌细胞A549的增殖、侵袭、迁移能力,阻滞细胞周期,但对细胞凋亡无影响;3.CEp55及GREM1两个基因可能是miR-508-3p具有潜在调控关系的靶基因。

关键词：肺腺癌生物学行为 miR-508-3p

miR-508-3p在肺动脉高压中的功能性表达和调节机制研究

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MiR-508-3p在肺动脉高压中的功能性表达和调节机制研究

作者：马意山东大学

学位级别：硕士

1研究背景肺动脉高压（pulmonary arterial hypertension,pAH）是一种严重的心肺相关慢病,由肺小动脉的细胞增殖和纤维化以及非肌型小动脉肌化引起,导致肺血管阻力（pulmonary vascular resistance,pVR）逐渐升高。对pAH明确诊断需在海... 详细信息

1研究背景肺动脉高压（pulmonary arterial hypertension,pAH）是一种严重的心肺相关慢病,由肺小动脉的细胞增殖和纤维化以及非肌型小动脉肌化引起,导致肺血管阻力（pulmonary vascular resistance,pVR）逐渐升高。对pAH明确诊断需在海平面条件下,右心漂浮导管检测平均肺动脉压≥25mmHg,肺动脉楔压≤15mmHg和pVR＞3wood单位。此外还必须排除如肺部疾病和慢性血栓栓塞性疾等其他病因导致的pAH。在过去20多年中,pAH流行病学特征和治疗观念发生很大变化。在老年患者中越来越多诊断出pAH,其中大部分患有合并症,增加医疗护理挑战性。尽管pAH发病机理始于肺循环,然而右心衰竭是死亡首要原因。当前,临床上pAH主要治疗策略是针对靶向肺血管系统中功能异常的信号通路以及传导途径,疗效有限,不能满意提高pAH患者生活质量。因此,迫切需要更深入地探讨pAH的复杂调控网络,开辟新的特异性治疗靶点。pAH主要病理学特征表现在肺动脉血管收缩（vasoconstriction）、血管重塑（vascularremodeling）以及血栓形成（thrombosis）。pAH分子机制涉及内皮细胞功能障碍、肺动脉血管平滑肌细胞增殖、血管炎症和免疫失调、能量代谢和线粒体异常、过度的生长因子刺激和离子通道缺陷等。体内一氧化氮（nitric oxide）,内皮素-1（endothelin-1）,前列环素（prostacyclin）和 5-羟色胺（serotonin）等血管活性介质的失衡和肺泡低氧（缺氧）（alveolarhypoxia）共同促进肺血管收缩。血管损伤和内皮细胞功能紊乱（endothelialcells,EC）可通过改变细胞因子/生长因子水平、提高凝血能力以及增加分泌细胞外基质（extracellular matrix,ECM）（主要是弹力蛋白和胶原蛋白）来改变血管稳态,进而促进肺血管重塑。炎性反应贯穿在pAH病理生理过程,并被认为是肺血管重塑主要致病因素。肺血管细胞（平滑肌细胞和内皮细胞）和炎性细胞是局部趋化因子和细胞因子的重要来源,可促进肺血管重塑。实际上,细胞因子和趋化因子表达增强导致肺血管细胞过度收缩和增殖。IL-1可以诱导成纤维细胞生长因子（fibroblast growth factor,FGF）-2表达,FGF-2和IL-6又能刺激pAH中平滑肌样细胞和肺血管的成纤维细胞增殖。多种细胞因子可直接控制肺血管细胞细胞增殖、迁移和分化。其中IL-6在促炎性细胞因子中占据主导地位,并且与pAH发病机理有关。在pAH动物实验中,与对照组小鼠相比,重组IL-6蛋白显著促进模型小鼠肺血管重构,并增强模型小鼠对缺氧的高反应性。此外,IL-6还通过调控转录因子KLF-5促进FGF-2表达,进而导致肺动脉平滑肌细胞增殖。pAH中肺动脉血管丛周围浸润着由巨噬细胞,T淋巴细胞和B淋巴细胞组成的血管周细胞。在野百合碱（monocrotaline,MCT）诱导的 pAH 模型中,基质衍生因子-1（stromal-derived factor,SDF-1）是炎症细胞募集的关键趋化因子之一,具备阻断CD68+细胞、CD3+细胞和肥大细胞的肺血管浸润的作用。巨噬细胞和单核细胞的聚集和活化通常导致细胞因子、血管活性分子（如内皮素等）和活性氧释放（reactive oxygen species,ROS）。活化的巨噬细胞分泌基质金属蛋白酶（matrixmetalloproteinases,MMp）和丝氨酸蛋白酶（serineproteases）,有利于基底膜和细胞外基质降解,促进白细胞迁移、外膜纤维化以及细胞分化。肺血管周围CD8+T细胞的浸润与内皮细胞凋亡-抗凋亡信号转导受损有关。骨形态发生蛋白（bone morphogenetic protein,BMp）激活巨噬细胞表达,而巨噬细胞本身反馈并参与BMp信号调节。在pAH中,BMpR2突变以及BMpR2相关联的信号通路功能障碍都会导致血管细胞中生长因子异常表达和促炎反应。微小RNA（microRNA,mirNA）,是长度约为22个核苷酸的非编码RNA。研究表明,mirNA参与并调节正常细胞和肿瘤细胞中的多种细胞过程,异常表达的mirNA通过充当疾病抑制因子或激活因子调控疾病病理机理过程。迄今,已证实多种 mirNA,如 mir-17-92、mir-143/145、mir-204、mir-214、mir-21和mir-130/301等在调节pAH相关信号通路和病理发展中发挥重要调控作用,使得mirs逐渐成为临床上预测和治疗pAH的新思路。前期分析发现,在pAH病理组织测序mirNA表达芯片,与对照组相比,pAH组中miR-508-3p呈显著低表达。这提示miR-508-3p可能参与调节抑制pAH相关的信号通路和疾病发展。通过研究pAH病理组织测序mRNA微阵

关键词：肺动脉高压 pASMC miR-508-3p NR4A3

宫颈脱落细胞microRNA-508-3p、ROCK1的表达及其对宫颈癌的诊断价值研究

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中国现代医学杂志 2021年第16期31卷 28-35页

作者：何立群袁婧张舒云诸暨市人民医院病理科浙江诸暨311800

目的探究宫颈脱落细胞microRNA-508-3p(miR-508-3p)、ROCK1的表达及其对宫颈癌的诊断价值。方法选取2016年2月—2019年9月诸暨市人民医院收集的宫颈脱落细胞标本172例,其中正常组70例、宫颈上皮内瘤变组54例、宫颈癌组48例。通过qRT-pC... 详细信息

目的探究宫颈脱落细胞microRNA-508-3p(miR-508-3p)、ROCK1的表达及其对宫颈癌的诊断价值。方法选取2016年2月—2019年9月诸暨市人民医院收集的宫颈脱落细胞标本172例,其中正常组70例、宫颈上皮内瘤变组54例、宫颈癌组48例。通过qRT-pCR、免疫组织化学、Western blotting检测各组细胞miR-508-3p、ROCK1的表达,荧光素酶报告实验验证宫颈病变脱落细胞miR-508-3p与ROCK1的相关性,观察宫颈癌脱落细胞miR-508-3p、ROCK1表达与宫颈癌患者临床资料的关系,通过受试者工作特征(ROC)曲线评估宫颈病变脱落细胞miR-508-3p、ROCK1表达对宫颈病变的诊断价值。结果与正常组比较,宫颈癌组和宫颈上皮内瘤变组miR-508-3p降低(ppmiR-508-3p降低,ROCK1 mRNA、ROCK1 mRNA阳性率、ROCK1蛋白相对表达量升高(pmiR-508-3p与ROCK1 mRNA呈负相关(r=-0.6678和-0.5234,均p=0.000),ROCK1是miR-508-3p的直接靶基因。miR-508-3p、ROCK1水平与宫颈癌患者FIGO分期、淋巴结转移有关(pp>0.05)。在诊断宫颈癌和宫颈上皮内瘤变时,miR-508-3p的ROC曲线下面积(AUC)分别为0.946(95%CI:0.899,0.993)和0.851(95%CI:0.782,0.921),敏感性为87.1%(95%CI:0.776,1.654)和84.3%(95%CI:0.746,1.589),特异性为100.0%(95%CI:1.000,2.000)和79.6%(95%CI:0.702,1.497);ROCK1的AUC分别为0.949(95%CI:0.892,1.000)和0.905(95%CI:0.852,0.958),敏感性为89.6%(95%CI:0.810,1.706)和77.8(95%CI:0.667,1.445),特异性为100.0%(95%CI:1.000,2.000)和88.6%(95%CI:0.812,1.698)。随访1年后,48例宫颈癌患者中生存42例,死亡6例。生存组miR-508-3p高于死亡组(ppmiR-508-3p、ROCK1在宫颈癌患者中表达异常,其中miR-508-3p下调,ROCK1上调,两者呈靶向负调控关系,并与宫颈癌患者FIGO分期及淋巴结转移密切相关,具有一定的宫颈癌诊断价值,可作为早期宫颈癌筛查的潜在生物学指标。

关键词：宫颈脱落细胞 miR-508-3p ROCK1 宫颈癌诊断价值

miR-508-3p靶向AFF4/TGFβ1信号通路调控人牙髓细胞分化的机制研究

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广西医科大学学报 2021年第9期38卷 1671-1677页

作者：杨正涛林方梁温利梅四川省自贡市第一人民医院自贡643000

目的:探讨miR-508-3p对缺氧牙髓细胞分化的影响及其机制。方法:用氯化钴(CoCl2)诱导缺氧模型,记为实验组。用等量生理盐水处理的牙髓细胞为对照组。脂质体法将mir-NC、miR-508-3p、si-NC、si-AFF4、miR-508-3p+pcDNA、miR-508-3p+pcDNA-... 详细信息

目的:探讨miR-508-3p对缺氧牙髓细胞分化的影响及其机制。方法:用氯化钴(CoCl2)诱导缺氧模型,记为实验组。用等量生理盐水处理的牙髓细胞为对照组。脂质体法将mir-NC、miR-508-3p、si-NC、si-AFF4、miR-508-3p+pcDNA、miR-508-3p+pcDNA-AFF4转染缺氧牙髓细胞。RT-qpCR法检测miR-508-3p、AFF4的表达及分化相关基因牙本质基质蛋白(DMp1)、牙本质涎磷蛋白(DSpp)、骨钙素(OCN)、碱性磷酸酶(ALp)的表达。Western blotting法检测细胞中AFF4、DMp1、DSpp、OCN、ALp、转化生长因子β1(TGFβ1)、Smad、骨形态发生蛋白(BMp)的表达。双荧光素酶报告实验检测miR-508-3p与AFF4的靶向关系。结果:与对照组相比,实验组牙髓细胞miR-508-3p表达显著升高,AFF4、DMp1、DSpp、OCN、ALp的表达均显著降低(均pmiR-508-3p可显著抑制DMp1、DSpp、OCN、ALp的表达,敲减AFF4具有相似的作用(均pmiR-508-3p与AFF4存在互补的结合位点,且过表达AFF4逆转了过表达miR-508-3p对缺氧牙髓细胞的分化抑制作用(pmiR-508-3p表达或下调AFF4表达能显著降低TGFβ1、Smad、BMp蛋白表达(pmiR-508-3p通过靶向AFF4抑制下游TGFβ1信号通路的活性发挥抑制缺氧牙髓细胞分化作用。

关键词：牙髓细胞成牙分化 miR-508-3p AFF4 TGFβ1信号通路

恶性黑素瘤细胞miR-508-3p与叉头框转录因子C1的关系及对增殖、迁移和侵袭的影响

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实用皮肤病学杂志 2020年第5期13卷 257-261页

作者：朱世文王刚罗文娟王丽雯王倩青海大学附属医院皮肤科西宁810000

目的探讨miR-508-3p与叉头框转录因子C1(forkhead box C1,FOXC1)的关系及其在恶性黑素瘤中的表达和作用机制。方法通过实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qpCR)检测mi R-508-3p和FOXC1在HEM正常黑素细胞及A375恶性黑素瘤细胞中的表达;将体外... 详细信息

目的探讨miR-508-3p与叉头框转录因子C1(forkhead box C1,FOXC1)的关系及其在恶性黑素瘤中的表达和作用机制。方法通过实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qpCR)检测mi R-508-3p和FOXC1在HEM正常黑素细胞及A375恶性黑素瘤细胞中的表达;将体外培养的A375细胞分为mimics NC组、mi R-508-3p mimics组、inhibitor NC组和mi R-508-3p inhibitor组,RT-qpCR检测其沉默效果及对FOXC1 mRNA水平的影响;免疫印迹法(Western blot)分别检测FOXC1蛋白的表达量;MTT法检测A375细胞的增殖能力;Transwell实验检测转染后A375细胞侵袭及迁移能力的变化;荧光素酶报告基因技术检测FOXC1是否为mi R-508-3p的直接靶基因。结果与人正常黑素细胞相比,A375细胞中mi R-508-3p表达明显降低,而FOXC1表达明显升高;与inhibitor NC组相比,转染mi R-508-3p inhibitors的A375细胞中mi R-508-3p的表达明显下调,FOXC1 mRNA和蛋白表达、细胞的增殖、侵袭及迁移能力明显升高;与mimics NC组相比,转染mi R-508-3p mimics的A375细胞中mi R-508-3p的表达明显升高,FOXC1 mRNA和蛋白表达、细胞的增殖、侵袭及迁移能力明显降低;mi R-508-3p mimics可降低野生型FOXC1 3’-UTR的荧光素酶报告基因相对活性。结论 mi R-508-3p通过负向调控FOXC1抑制恶性黑素瘤的增殖、迁移和侵袭。

关键词：黑素瘤,恶性叉头框转录因子C1 miR-508-3p 增殖迁移侵袭