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中国老年学杂志 2021年第19期41卷 4367-4373页

作者：周倩李双阳徐萍黄晓宇陈婧白雪西南医科大学附属中医医院心脑病科四川泸州646000 邛崃市中医医院内科都江堰市医疗中心消化内科

目的探讨NEAT1对血管紧张素(Ang)Ⅱ诱导主动脉血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖、迁移和侵袭的影响及作用机制。方法10-7 mol/L的AngⅡ诱导VSMCs或转染si-NEAT1、mir-504-5p mimics或共转染si-NEAT1与anti-mir-504-5p的VSMCs,实时荧光定量-聚合酶链反应(qRT-pCR)检测细胞中NEAT1和mir-504-5p表达,噻唑蓝(MTT)检测细胞增殖,Transwell检测细胞迁移和侵袭,Western印迹检测细胞周期蛋白(Cyclin)D1、p21、基质金属蛋白酶(MMp)-2和E-钙黏蛋白(E-cadherin)表达水平。双荧光素酶报告基因实验验证NEAT1与mir-504-5p调控关系。结果AngⅡ组NEAT1水平明显高于对照组,而mir-504-5p水平明显低于对照组(均ppp21水平明显低于对照组(均pp21水平明显高于AngⅡ+si-NC组(均ppp-2蛋白水平明显升高(pppp-2蛋白水平明显降低(ppmir-NC组比较,mir-504-5p组WT-NEAT1水平明显降低(pmir-504-5p表达量明显高于转染si-NC的VSMCs(pmir-504-5p mimics的VSMCs中NEAT1表达量明显高于转染mir-NC的VSMCs(pmir-NC组比较,AngⅡ+mir-504-5p组CyclinD1、MMp-2水平明显降低,24 h、48 h及72 h细胞活性明显降低,迁移和侵袭细胞数明显减少,而p21、E-cadherin水平明显升高(均pmir-NC组相比,AngⅡ+si-NEAT1+anti-mir-504-5p组迁移和侵袭细胞数明显增加,24 h、48 h及72 h细胞活性明显升高,CyclinD1及MMp-2水平明显增加,而p21和E-cadherin水平明显下降(均pmir-504-5p表达发挥作用。

关键词： NEAT1 mir-504-5p 动脉粥样硬化血管平滑肌细胞增殖迁移侵袭

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靶向抑制去甲基化酶（FTO）的mirNA预测及在乳腺癌细胞中的实验验证研究

靶向抑制去甲基化酶（FTO）的miRNA预测及在乳腺癌细胞中的实验验...

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作者：陆双欣西南交通大学

学位级别：硕士

乳腺癌是在全球女性中常见的恶性肿瘤,得益于早期诊断及治疗,乳腺癌的死亡率有所下降。然而,乳腺癌的高异质性、耐药性、晚期转移等给它的临床治疗带来了挑战。通常来说,癌症的发生与进展涉及到细胞内的多种遗传变化,这一些变化的累积... 详细信息

乳腺癌是在全球女性中常见的恶性肿瘤,得益于早期诊断及治疗,乳腺癌的死亡率有所下降。然而,乳腺癌的高异质性、耐药性、晚期转移等给它的临床治疗带来了挑战。通常来说,癌症的发生与进展涉及到细胞内的多种遗传变化,这一些变化的累积会引起参与细胞进展的关键途径发生改变,从而引起恶性表型的发生。m6A作为一种RNA修饰,参与到多种机体生理活动中,m6A的失调导致的基因改变会促使机体从正常生理状态转变为病理状态,比如癌症。mirNA可以通过靶向结合靶基因促进靶基因降解等来实现对靶基因的调节,在基因调控中扮演着非常重要的角色,在癌症的诊疗中有着巨大的潜力。在本研究中,通过对m6A调节酶的表达水平进行分析,筛选出在乳腺癌中表达异常的m6A调节酶。通过m6A表达水平的高低将乳腺癌病人进行分组,随后进行Kaplan-Meier生存分析,发现m6A去甲基化酶FTO的表达水平与乳腺癌病人的生存情况有着相关性,FTO高表达的乳腺癌病人相比于FTO低表达的病人有着更低的生存概率,因此我们选择FTO作为下一步的研究对象。在乳腺癌细胞MDA-MB-231和MCF-7细胞转染两条si RNA后,RT-q pCR与Western blot实验证实了两条si RNA的效果,FTO的表达水平下调。CCK-8实验检测FTO的下调对乳腺癌细胞增殖的影响,结果表明,FTO的下调能够抑制乳腺癌细胞的增殖,这与前面的生物信息学分析结果一致。通过Target Scan,Mi Randa,DIANA-micro T三个数据库预测靶向FTO的mirNA,并取交集,得到3条共同的mirNA,mir-150-5p,mir-504-5p,mir-590-3p作为潜在的能够靶向FTO的mirNA,通过在MCF-7和MDA-MB-231细胞系转染相应的mirNA类似物与阴性对照后,RT-q pCR与Western blot实验检测FTO表达水平的变化,发现细胞内mir-504-5p水平的提高能够引起FTO表达水平的下调,而另外两条mirNA在重复实验中没有得到一致的结果。随后,根据Target Scan预测出的mir-504-5p与FTO的两个结合位点,构建两个包含结合位点的野生型荧光素报告质粒,再通过定点突变分别构建两个突变质粒,双荧光素酶报告基因实验验证了mir-504-5p与FTO的结合关系,证实了mir-504-5p与FTO是在FTO 3’-UTR的5927-5933位置处结合的,m6A定量实验发现,mir-504-5p能够使细胞m6A水平升高。CCK-8实验、流式细胞术、划痕愈合实验、Transwell小室等发现,乳腺癌细胞的增殖与迁移水平与mir-504-5p水平呈负相关,而凋亡水平与mir-504-5p的水平则呈现正相关的关系,mir-504-5p水平的提高使乳腺癌细胞在G0/G1期阻滞。综上所述,本研究发现了靶向调控去甲基化FTO下调的mirNA——mir-504-5p,并且乳腺癌细胞内mir-504-5p水平的提高对FTO的靶向抑制能够提高细胞内的m6A水平,细胞表型实验发现乳腺癌细胞的增殖与迁移能力在mir-504-5p水平升高的情况下受到抑制,而细胞的凋亡水平则相反,出现升高的现象,mir-504-5p使细胞阻滞在G0/G1期。这可以为mirNA与FTO以及m6A在乳腺癌的分子机制研究与诊疗中提供一些参考。

关键词：乳腺癌 N6-腺苷酸甲基化 FTO mir-504-5p

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LINC01359在颅内动脉瘤患者血清中的表达及对血管平滑肌细胞增殖和凋亡的影响

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山西医科大学学报 2021年第12期52卷 1531-1536页

作者：印辰宇季爱平季海明刘艺春杨海峰江苏省泰兴市人民医院神经外科泰兴225400 华中科技大学附属同济医院神经外科

目的探讨颅内动脉瘤患者血清中长链非编码RNA(lncRNA)LINC01359的表达水平及其对血管平滑肌细胞的作用机制。方法选择健康体检者(健康组)和颅内动脉瘤患者(动脉瘤组)各40例,实时定量聚合酶链反应(qRT-pCR)检测血清中LINC01359的表达水... 详细信息

目的探讨颅内动脉瘤患者血清中长链非编码RNA(lncRNA)LINC01359的表达水平及其对血管平滑肌细胞的作用机制。方法选择健康体检者(健康组)和颅内动脉瘤患者(动脉瘤组)各40例,实时定量聚合酶链反应(qRT-pCR)检测血清中LINC01359的表达水平。用含有si-LINC01359序列的人重组慢病毒载体MCS-CMV-si(si-LINC01359组)或空载病毒MCS-CMV(空白对照组)感染人血管平滑肌细胞(HVSMC)。细胞活力测定法(MTS)和AnnexinⅤ/7-AAD双染法检测LINC01359对HVSMC细胞增殖和凋亡水平的影响。生物信息学方法和双荧光素酶报告基因实验分析LINC01359在HVSMC细胞中的作用靶点。qRT-pCR检测LINC01359作用靶点在HVSMC细胞中的表达。Western blot检测HVSMC细胞中凋亡蛋白的表达变化。结果动脉瘤组血清中LINC01359表达水平明显高于健康组(p59组HVSMC细胞中LINC01359表达明显降低(pp5),细胞凋亡水平显著降低(p59可靶向结合mir-504-5p(p59组细胞中mir-504-5p表达显著增加(ppase-9蛋白表达降低,抗凋亡因子Bcl-xL和Bcl-w蛋白表达增多。结论颅内动脉瘤患者血清中LINC01359表达水平上升,下调LINC01359通过靶向结合mir-504-5p调节血管平滑肌细胞的增殖和凋亡,抑制动脉瘤的形成。

关键词：动脉瘤 LINC01359 血管平滑肌细胞 mir-504-5p

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