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miR-495-3p靶向IL-6R抑制宫颈癌细胞的增殖和转移的机制研究

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中国免疫学杂志 2022年第4期38卷 443-447页

作者：吉洁马志君曹振东邵雪斋张玉娟承德医学院附属医院承德067000

目的:探讨miR-495-3p和白细胞介素6受体基因(IL-6R)在宫颈癌细胞增殖和转移中的作用。方法:实时荧光定量pCR(RT-qpCR)和Western blot检测人宫颈永生化细胞H8和宫颈癌细胞(SiHa、HeLa、caski)中miR-495-3p和IL-6R表达水平。将SiHa细胞分... 详细信息

目的:探讨miR-495-3p和白细胞介素6受体基因(IL-6R)在宫颈癌细胞增殖和转移中的作用。方法:实时荧光定量pCR(RT-qpCR)和Western blot检测人宫颈永生化细胞H8和宫颈癌细胞(SiHa、HeLa、caski)中miR-495-3p和IL-6R表达水平。将SiHa细胞分为mir-NC、miR-495-3p、si-NC、si-IL-6R、miR-495-3p+pcDNA-NC、miR-495-3p+pcDNA-IL-6R组。细胞计数试剂盒(CCK-8)、Transwell实验分别检测SiHa细胞的增殖和转移能力。Western blot检测细胞周期素D1(CyclinD1)、基质金属蛋白酶2(MMp2)、MMp9蛋白表达。双荧光素酶报告实验、Western blot确定miR-495-3p对IL-6R的靶向调控作用。结果:与H8细胞比较,宫颈癌细胞中miR-495-3p表达降低,IL-6R表达升高(pmiR-495-3p或抑制IL-6R表达后SiHa细胞CyclinD1、MMp2和MMp9表达降低,细胞增殖和转移能力降低(pmiR-495-3p对SiHa细胞增殖、转移以及其相关蛋白表达的影响(pmiR-495-3p的靶基因,miR-495-3p负调控IL-6R表达。结论:miR-495-3p通过靶向IL-6R抑制宫颈癌细胞的增殖和转移,提示miR-495-3p在宫颈癌中具有抑癌作用。

关键词： miR-495-3p 白细胞介素6受体基因宫颈癌细胞增殖转移

miR-495-3p对山羊卵巢颗粒细胞功能的影响

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畜牧兽医学报 2022年第2期53卷 436-446页

作者：王磊何莉娜唐雪李碧筠黄思艺王钰锟徐德军赵中权西南大学动物科学技术学院重庆400715

旨在探究miR-495-3p对山羊卵巢颗粒细胞功能的影响及作用机制。本研究选取健康的3~4月龄大足黑山羊母羊,收集卵巢颗粒细胞,利用miR-495-3p模拟物(mimics)和抑制物(inhibitor)构建过表达和抑制模型,通过流式细胞术检测细胞凋亡和周期,EL... 详细信息

旨在探究miR-495-3p对山羊卵巢颗粒细胞功能的影响及作用机制。本研究选取健康的3~4月龄大足黑山羊母羊,收集卵巢颗粒细胞,利用miR-495-3p模拟物(mimics)和抑制物(inhibitor)构建过表达和抑制模型,通过流式细胞术检测细胞凋亡和周期,ELISA分析颗粒细胞的雌二醇(E2)和孕酮(p4)分泌,采用qRT-RCR、Western blot检测细胞凋亡、增殖、周期及类固醇激素合成相关基因的mRNA和蛋白的表达水平。结果显示,miR-495-3p显著促进卵巢颗粒细胞凋亡(pppmiR-495-3p呈时间依赖性抑制细胞增殖活力,显著降低pCNA的表达(pmiR-495-3p显著增加G2/M期细胞百分比(pppmiR-495-3p极显著降低CCNE1的mRNA水平(pmiR-495-3p促进颗粒细胞E2和p4分泌;过表达miR-495-3p显著提高3β-HSD(pp11A1(pp19A1(pmiR-495-3p极显著抑制3β-HSD(pp11A1的表达(pmiR-495-3p促进颗粒细胞凋亡,抑制增殖,将细胞周期阻滞在G2/M期,刺激类固醇激素分泌,从而影响山羊卵泡的发育。

关键词： miR-495-3p 山羊卵巢颗粒细胞凋亡类固醇激素

miR-495-3p对山羊骨骼肌细胞增殖分化的影响

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中国畜牧兽医 2022年第4期49卷 1271-1279页

作者：杨丽丽张琼文张瑜刘笑笑陈婷江明生广西大学动物科学技术学院南宁530004

【目的】研究miR-495-3p对山羊骨骼肌细胞增殖分化的影响及其在不同组织中的表达情况,为探究mirNA在肌肉发育中的调控机制提供理论基础。【方法】利用生物信息学方法预测miR-495-3p的靶基因;实时荧光定量pCR检测miR-495-3p及其靶基因在... 详细信息

【目的】研究miR-495-3p对山羊骨骼肌细胞增殖分化的影响及其在不同组织中的表达情况,为探究mirNA在肌肉发育中的调控机制提供理论基础。【方法】利用生物信息学方法预测miR-495-3p的靶基因;实时荧光定量pCR检测miR-495-3p及其靶基因在心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、背最长肌、腿肌等组织中的表达水平。构建miR-495-3p的过表达(miR-495-3p mimic、miR-495-3p mimic NC)及抑制物(miR-495-3p inhibitor、miR-495-3p inhibitor NC),在山羊骨骼肌细胞汇合度达60%~70%时进行转染,并用含2%马血清的培养基进行诱导分化,用CCK-8检测细胞增殖活力,实时荧光定量pCR检测过表达和干扰效率及增殖分化相关基因配对盒基因(paired-box 7,pax7)、细胞蛋白周期E(Cyclin E)、肌细胞生成素(myogenin,myoG)、生肌因子5(recombinant myogenic factor 5,Myf5)的表达;构建miR-495-3p靶基因的野生型和突变型载体并转染至293T细胞,用双荧光素酶测定miR-495-3p与其靶基因的结合情况。【结果】生物信息学预测结果表明,miR-495-3p的靶基因为心肌肌动蛋白α1(alpha cardiacactin 1,ACTC1),且miR-495-3p和ACTC1在1和10月龄山羊背最长肌中表达量均差异极显著(pmiR-495-3p和ACTC1在心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、背最长肌、腿肌6种组织中均有表达,在背最长肌中表达量较高。细胞转染结果表明,miR-495-3p mimic极显著促进miR-495-3p的表达(pmiR-495-3p inhibitor极显著抑制miR-495-3p的表达(pmiR-495-3p mimic和miR-495-3p inhibitor可用于后续试验。实时荧光定量pCR结果表明,过表达miR-495-3p促进骨骼肌细胞分化相关标志基因MyoG、Myf5的表达,抑制miR-495-3p则降低MyoG、Myf5基因的表达;过表达、干扰miR-495-3p对pax7、Cyclin E基因的表达及细胞增殖活力均无显著影响(p>0.05)。双荧光素酶报告结果表明,miR-495-3p与ACTC1基因存在靶向关系。【结论】miR-495-3p对山羊骨骼肌细胞的增殖无显著影响,但可通过靶向ACTC1基因促进山羊骨骼肌细胞分化。

关键词：山羊 miR-495-3p 骨骼肌细胞分化

lncRNA SNHG12靶向抑制miR-495-3p进而调控pI3K/Akt信号通路对前列腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响

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现代泌尿外科杂志 2024年

作者：田莉崔海军徐晋珩胡月明赵济华曹渤海唐山中心医院泌尿外科唐山中心医院华北理工大学临床医学院唐山中心医院病理科

目的探究长链非编码RNA(lncRNA)核仁小分子RNA宿主基因12(SNHG12)靶向抑制miR-495-3p/磷脂肌醇-3-激酶(pI3K)/蛋白激酶B(Akt)信号通路对前列腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法实时荧光定量pCR(qRT-pCR)检测前列腺癌组织和细胞(LN... 详细信息

目的探究长链非编码RNA(lncRNA)核仁小分子RNA宿主基因12(SNHG12)靶向抑制miR-495-3p/磷脂肌醇-3-激酶(pI3K)/蛋白激酶B(Akt)信号通路对前列腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法实时荧光定量pCR(qRT-pCR)检测前列腺癌组织和细胞(LNCap、C4-2、DU145)中SNHG12、miR-495-3p相对表达水平(将其中的DU145细胞分为si-NC组、si-SNHG12组、si-SNHG12+anti-mir-NC组、si-SNHG12+anti-miR-495-3p组,4组检测);双荧光素酶报告实验检测SNHG12与miR-495-3p靶向关系;MTT法检测细胞增殖;Transwell检测细胞迁移和侵袭;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测增殖细胞核抗原(pCNA)、N-钙粘蛋白(N-cadherin)、E-钙粘蛋白(E-cadherin)蛋白相对表达水平。结果在前列腺癌组织和细胞(LNCap、C4-2、DU145)中SNHG12相对表达水平明显升高,miR-495-3p相对表达水平明显降低(ppCN A、N-cadherin蛋白相对表达水平,减少迁移及侵袭细胞数,增加E-cadherin蛋白相对表达水平(p miR-495-3p,下调miR-495-3p可逆转敲低SNHG12对前列腺癌细胞增殖、迁移及侵袭的影响。与si-NC组相比,si-SNHG12组p-pI3K、p-Akt蛋白相对表达水平明显降低(pmir-NC组相比,si-SNHG12+anti-miR-495-3p组p-pI3K、p-Akt蛋白相对表达水平明显增加(pmiR-495-3p/pI3K/Akt信号通路促进前列腺癌细胞增殖、迁移和侵袭。

关键词：长链非编码RNA 核仁小分子RNA宿主基因12 miR-495-3p pI3K/Akt信号通路前列腺癌增殖迁移侵袭

隆林山羊肌肉发育关键mirNA-mRNA筛选及miR-495-3p功能研究

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隆林山羊肌肉发育关键miRNA-mRNA筛选及miR-495-3p功能研究

作者：张琼文广西大学

学位级别：硕士

为初步揭示mirNA对山羊肌肉生长发育的分子调控机制,试验以1月龄和10月龄月龄隆林山羊的背最长肌样品为材料,利用RNA-seq技术筛选差异表达的mirNA及mRNA,对其中与肌肉性状密切相关的差异mirNA及mRNA进行生物信息学分析,对差异mirNA的预... 详细信息

为初步揭示mirNA对山羊肌肉生长发育的分子调控机制,试验以1月龄和10月龄月龄隆林山羊的背最长肌样品为材料,利用RNA-seq技术筛选差异表达的mirNA及mRNA,对其中与肌肉性状密切相关的差异mirNA及mRNA进行生物信息学分析,对差异mirNA的预测靶基因及测序筛选出的mRNA进行GO和KEGG通路富集分析,并验证候选mirNA在山羊骨骼肌卫星细胞中的功能,主要试验结果如下:1.成功构建了1月龄与10月龄隆林山羊背最长肌mirNA测序文库,经过过滤质控等步骤一共筛选出233个差异表达的mirNA(p3个上调mirNA,130个下调mirNA。q pCR验证10个随机选取的差异mirNA,结果与测序结果相同。对差异表达mirNA的靶基因进行功能富集和通路分析,富集到与肌肉发育相关Notch信号通路和wnt信号通路,还有很多靶基因与发育和蛋白质合成相关。2.通过对1月龄和10月龄山羊背最长肌为试验材料进行高通量测序,筛选出1999个差异表达基因(p38个上调差异基因和1061个下调差异基因。其中pAX7、ACTC1、MYF5、IGF2、BMp1、MEF2A等基因影响肌肉发育。对差异表达的基因进行功能和通路富集分析,发现差异基因富集于发育等生物学过程,还注释到ppAR信号通路MApK信号通路,pI3K-AKT信号通路等与肌肉发育相关的信号通路。3.从mirNA测序结果中筛选出miR-495-3p,结合转录组测序及利用软件预测miR-495-3p的靶基因可能为ACTC1基因。1月龄隆林山羊组织表达谱分析表明miR-495-3p在脾中表达最高,在背最长肌和腿肌中表达较高;ACTC1在心肌中表达量最高,其次为背最长肌和腿肌。推测miR-495-3p可能靶向ACTC1调控肌肉发育。4.利用miR-495-3p过表达和抑制的研究方法,探究miR-495-3p对山羊骨骼肌卫星细胞增殖分化及预测靶基因ACTC1表达量的影响。CCK-8试验发现过表达与抑制miR-495-3p对山羊骨骼肌卫星细胞增殖活性无显著影响。但在细胞分化时期,过表达miR-495-3p能促进分化标志基因Myo G、Myf5及预测靶基因ACTC1的表达,抑制miR-495-3p降低分化标志基因Myo G、Myf5及预测靶基因ACTC1的表达。证明miR-495-3p可能靶向ACTC1促进山羊骨骼肌卫星细胞的分化。5.成功构建ACTC1基因野生型和突变型载体,双荧光素酶报告试验证明miR-495-3p与ACTC1基因3’UTR存在靶向关系。综合以上结果:通过mirNA测序和转录组测序,筛选到肌肉发育关键候选miR-495-3p及其可能的靶基因ACTC1,通过功能验证表明miR-495-3p能够促进山羊骨骼肌卫星细胞的分化并且与ACTC1基因的3’UTR结合。

关键词：隆林山羊肌肉发育 mirNA 转录组 miR-495-3p

miR-495-3p调节山羊卵巢颗粒细胞功能的机制研究

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miR-495-3p调节山羊卵巢颗粒细胞功能的机制研究

作者：何莉娜西南大学

学位级别：硕士

山羊的繁殖性能影响山羊产业发展,大足黑山羊具有性成熟早、繁殖力高的特性,是提升养羊经济效益的优良种质资源,但其高繁殖调控机理尚不明确。卵巢颗粒细胞对卵泡发育和类固醇激素合成起着非常重要的调节作用,进而影响山羊的繁殖性能。m... 详细信息

山羊的繁殖性能影响山羊产业发展,大足黑山羊具有性成熟早、繁殖力高的特性,是提升养羊经济效益的优良种质资源,但其高繁殖调控机理尚不明确。卵巢颗粒细胞对卵泡发育和类固醇激素合成起着非常重要的调节作用,进而影响山羊的繁殖性能。mirNAs具有非常广泛的基因调节功能,它们在卵泡生长发育、卵母细胞成熟、排卵和黄体形成等生理过程中都发挥着重要的作用。尽管有研究表明miR-495-3p通过靶向调节基因表达决定细胞命运,但其在山羊卵巢颗粒细胞中的功能尚不清楚。因此,揭示miR-495-3p调节山羊卵巢颗粒细胞功能的作用机制,将为提高山羊繁殖性能提供理论基础。本研究以大足黑山羊卵巢颗粒细胞为研究对象,通过免疫组化、mirNA过表达或干扰、q RT-pCR、Western Blot、流式细胞术、转录组测序和双荧光素酶报告等技术,探究miR-495-3p对山羊卵巢颗粒细胞凋亡、增殖及类固醇激素分泌的影响机制,得到了如下结果:1.miR-495-3p促进卵巢颗粒细胞凋亡,抑制其增殖本研究通过将mimics和inhibitor转染到卵巢颗粒细胞中,构建miR-495-3p的过表达和抑制模型。结果发现,过表达miR-495-3p显著促进颗粒细胞凋亡,抑制miR-495-3p阻碍其凋亡(pmiR-495-3p显著提高了促凋亡基因BAX的mRNA和蛋白表达(ppmiR-495-3p降低了BAX的mRNA和蛋白表达(pmiR-495-3p促进卵巢颗粒细胞凋亡。利用CCK-8分别检测24 h、36 h和48 h细胞增殖活力发现,miR-495-3p呈现时间依赖性的抑制细胞增殖活力。运用流式细胞术发现,过表达miR-495-3p将细胞周期阻滞在G2/M期(pmiR-495-3p均对pCNA的mRNA水平无显著影响,但过表达miR-495-3p显著抑制了pCNA的蛋白水平(pmiR-495-3p显著抑制了CDK4和CCND1的mRNA水平(pmiR-495-3p显著降低了CCNE1的mRNA水平(pmiR-495-3p抑制颗粒细胞的增殖。2.miR-495-3p调节卵巢颗粒细胞类固醇激素分泌过表达或抑制miR-495-3p均促进雌二醇(E2)和孕酮(p4)的分泌。进一步分析发现,过表达miR-495-3p尽管对St AR表达无显著影响,但显著促进了3β-HSD、CYp11A1、CYp19A1的mRNA和蛋白表达(pmiR-495-3p抑制了3β-HSD的表达(pp11A1的表达(pmiR-495-3p可能通过调节类固醇激素合成途径关键基因的表达来促进E2和p4的分泌。3.miR-495-3p的靶向关系验证在颗粒细胞中过表达miR-495-3p,运用转录组测序技术筛选miR-495-3p候选靶基因。GO和KEGG富集分析发现,差异表达的mRNA主要富集在与细胞增殖、分化、凋亡和炎症相关的通路。通过对mimics组和mimics NC组的差异表达分析,筛选得到12个差异表达的基因,其中8个下调,4个上调。对8个下调基因进行q RT-pCR验证,发现除HBEGF没有显著差异外,其余7个基因均显著下调(pprocess)、细胞过程(cellular process)、催化(catalytic activity)、运输(transporter activity)、分子转化(molecular transducer activity)、细胞组成(cell part)、细胞(cell)等。对上述7个差异表达的基因(HMOX1、STC1、pLAU、STRA6、F2RL1、GDpD5、C4BpA)3’UTR区与miR-495-3p结合位点分析,发现F2RL1、HOMX1、STC1与miR-495-3p有结合位点。进一步通过双荧光素酶报告验证可知,miR-495-3p与STC1存在靶向关系。综上,本研究证明了:(1)miR-495-3p促进山羊卵巢颗粒细胞凋亡,并抑制其增殖;(2)miR-495-3p可能通过调节类固醇激素合成相关基因的表达,促进E2和p4的分泌;(3)miR-495-3p靶向抑制STC1的表达。研究结果为进一步揭示miR-495-3p靶向调控山羊卵泡发育与闭锁的机制提供理论支撑。

关键词： miR-495-3p 山羊卵巢颗粒细胞凋亡细胞周期类固醇激素

Hsa＿circ＿0016600对miR-495-3p/E2F3的调控在肝细胞肝癌中的作用及机制研究

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Hsa＿circ＿0016600对miR-495-3p/E2F3的调控在肝细胞肝癌中的作...

作者：严冬冬苏州大学

学位级别：硕士

原发性肝癌是全球范围内最常见的恶性肿瘤之一,其中又以肝细胞肝癌（hepatocellular carcinoma,HCC）最为常见。据最新流行病学统计显示,肝癌目前是全球的第六大常见癌症,同时也是第三大癌症相关死因。肝癌早期症状多不明显,出现症状时... 详细信息

原发性肝癌是全球范围内最常见的恶性肿瘤之一,其中又以肝细胞肝癌（hepatocellular carcinoma,HCC）最为常见。据最新流行病学统计显示,肝癌目前是全球的第六大常见癌症,同时也是第三大癌症相关死因。肝癌早期症状多不明显,出现症状时多已经发展成为了晚期,此时瘤体较大,且相对都有了转移,因此其5年生存率较低。目前为止,手术切除仍然是治疗肝癌的主要方式。虽然随着科技水平的进步,许多新手段被应用于肝癌的治疗,但是肝癌的总体生存率仍旧较低。因此,发现新的生物学标志物来早期发现及诊断肝癌,将有效降低肝癌的死亡率。环状RNA（circular RNA,circRNA）是封闭的内源性RNA,属于非编码RNA的一种,不受RNA外切酶的影响,相较于线性RNA来说,其具有表达稳定,不易降解的特点。之前,circRNA被认为是RNA复制和剪切过程中产生的无意义的副产物。但是最近的研究表明,circRNA具有多种生物学作用,比如其可以作为microRNA分子海绵（ceRNA机制）,也可以直接参与影响蛋白表达。种种这些发现都表明,circRNA在生命过程中具有重要的生物学作用。在本研究中,我们发现了一个新的circRNA,hsa＿circ＿0016600与肝癌相关,在肝癌组织中上调。此外,通过对50例标本的临床相关性分析,我们发现,hsa＿circ＿0016600的表达还与肝癌的肿瘤大小密切相关。然后通过进一步的分析,我们还发现了 hsa＿circ＿0016600具有ceRNA的功能,能够吸附miR-495-3p,引起miR-495-3p在肿瘤组织例下调,从而上调其内源性靶标E2F3的表达水平。因此,我们认为hsa＿circ＿0016600可能作为一种新型的内源性标志物,成为早期诊断与治疗肝癌的新靶点。第一部分CircRNAhsa＿circ＿0016600在肝癌里的表达情况以及其临床表现实验目的:通过设计一系列实验,研究hsa＿circ＿0016600在肝癌中的表达情况;设计特异性干扰片段改变肝癌细胞内hsa＿circ＿0016600的表达水平;利用体内外实验探究其对细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响;探究hsa＿circ＿0016600的表达水平与一系列临床相关信息之间的关系。实验方法:使用苏大附一院获得的8对肝癌及癌旁组织进行高通量测序,寻找其中具有显著差异的circRNA。收集于2014年1月至2018年12月在苏大附一院行手术治疗的50例患者的肝癌及癌旁组织标本,所有组织术后均经病理诊断为肝细胞肝癌。取下后记录患者的一般信息后存放于液氮中。随后提取癌及癌旁组织中的总RNA后检测其中hsa＿circ＿0016600的表达水平。设计实验明确hsa＿circ＿0016600的细胞内亚定位。然后根据患者的一般临床信息进行相关性分析。设计特异性的干扰片段与阴性对照片段转染肝癌细胞后进行增殖、侵袭、迁移等一系列功能实验,判断hsa＿circ＿0016600表达对肝癌的作用。实验结果:1.对8对肝癌组织及癌旁组织进行高通量测序检测发现hsa＿circ＿0016600在癌组织中高表达（p＜0.05）;2.通过qRT-pCR检测50对肝癌患者标本验证了 hsa＿circ＿0016600在癌组织中的高表达（p＜0.05）;3.通过相关性分析我们发现hsa＿circ＿0016600的表达量与肿瘤的大小显著相关,肿瘤越大,倾向于表达更高的hsa＿circ＿0016600（p＜0.05）;4.通过构建hsa＿circ＿0016600的干扰片段进行体内外实验,验证了hsa＿circ＿0016600的高表达具有促进肝癌细胞增殖、侵袭与迁移的能力,敲低hsa＿circ＿0016600表达后能有效抑制肝癌细胞的增殖、侵袭和迁移能力。实验结论:1.Hsa＿circ＿0016600在肝癌组织中表达上调并且定位于细胞质;2.高表达的hsa＿circ＿0016600可以促进肝癌细胞的增殖、侵袭以及迁移作用,敲低其表达后能有效抑制肝癌细胞的增殖、侵袭与迁移作用;3.Hsa＿circ＿0016600表达量与肿瘤的大小密切相关。第二部分高表达hsa＿circ＿0016600促进肝癌进展的相关机制研究实验目的:通过一系列的体内外实验来研究高表达的hsa＿circ＿0016600在肝癌发生发展中可能存在的作用,并尝试探究其相关机制。实验方法:利用生物信息学分析以及已有相关研究预测hsa circ＿0016600的可能下游靶标mirNA和mRNA,尝试构建与hsa＿circ＿0016600相关的ceRNA（竞争性内源RNA,competing endogenouse RNA）机制;通过双荧光素酶报告基因,qRT-pCR技术验证hsa＿circ＿0016600与下游mirNA以及mirNA与靶向mRNA之间的表达水平差异,明确其间的负相关关系,探究其可结合性;使用特异性的mirNA

关键词：肝细胞肝癌环状RNA 内源性竞争机制 miR-495-3p E2F3

LINC00467通过靶向miR-495-3p调控视网膜母细胞瘤细胞增殖和凋亡

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中国免疫学杂志 2021年第12期37卷 1423-1427,1433页

作者：李思莹周萍萍齐艳秀张剑王玉清佳木斯大学附属第一医院眼科佳木斯154002

目的:探讨LINC00467对视网膜母细胞瘤(Rb)细胞增殖、凋亡的影响和分子机制。方法:RT-qpCR检测Rb组织和正常视网膜组织中LINC00467和miR-495-3p表达。将Y79细胞分为si-NC、si-LINC00467、mir-NC、miR-495-3p、siLINC00467+anti-mir-NC、si-LINC00467+anti-miR-495-3p组,MTT法检测细胞增殖活力;流式细胞术检测细胞凋亡;Western blot检测细胞周期素D1(CyclinD1)、p21、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)和Bcl相关X蛋白(Bax)蛋白表达。双荧光素酶报告实验和RT-qpCR确定LINC00467对miR-495-3p的靶向调控作用。结果:抑制LINC00467表达,Y79细胞活力、CyclinD1和Bcl-2蛋白表达显著降低,细胞凋亡率、p21和Bax蛋白表达显著升高(pmiR-495-3p后Y79细胞活力、CyclinD1和Bcl-2蛋白表达显著降低,细胞凋亡率、p21和Bax蛋白表达显著升高(pmiR-495-3p表达可逆转抑制LINC00467表达对Y79细胞增殖、凋亡以及相关蛋白表达的影响(pmiR-495-3p表达降低。抑制LINC00467通过靶向上调miR-495-3p抑制Rb细胞增殖,诱导其凋亡。

关键词： LINC00467 miR-495-3p 视网膜母细胞瘤细胞增殖凋亡

环状RNA circHIpK3通过miR-495-3p靶向XIAp调控乳腺癌细胞增殖、迁移和凋亡

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中华保健医学杂志 2023年第3期25卷 307-310页

作者：程华冬国友刘志英唐山市妇幼保健院病理科 063000 唐山市妇幼保健院普外科 063000

目的探讨环状RNA同源域相互作用蛋白激酶3 (circHIpK3)通过miR-495-3p靶向X连锁凋亡蛋白抑制剂(XIAp)调控乳腺癌细胞增殖、迁移和凋亡。方法实时荧光定量pCR(qRT-pCR)、Western blot分别检测乳腺癌组织、良性组织、乳腺癌细胞系MCF-7 ... 详细信息

目的探讨环状RNA同源域相互作用蛋白激酶3 (circHIpK3)通过miR-495-3p靶向X连锁凋亡蛋白抑制剂(XIAp)调控乳腺癌细胞增殖、迁移和凋亡。方法实时荧光定量pCR(qRT-pCR)、Western blot分别检测乳腺癌组织、良性组织、乳腺癌细胞系MCF-7 circHIpK3、miR-495-3p、XIAp的表达;将si-NC、si-circHIpK3、si-circHIpK3+inhibitor NC、sicircHIpK3+miR-495-3p inhibitor分别转染至MCF-7细胞并命名为si-NC组、si-circHIpK3组、si-circHIpK3+inhibitor NC组、sicircHIpK3+miR-495-3p inhibitor组,未做任何处理的MCF-7细胞记为NC组。qRT-pCR检测MCF-7细胞中circHIpK3、miR-495-3p表达;MTT法检测MCF-7细胞增殖;流式细胞术检测MCF-7细胞凋亡;Transwell检测MCF-7细胞侵袭、迁移情况;Western blot检测MCF-7细胞XIAp、E-cadherin、Vimentin、N-cadherin以及凋亡蛋白水平;双荧光素酶验证circHIpK3与miR-495-3p、miR-495-3p与XIAp的关系。结果在乳腺癌组织和细胞中circHIpK3、XIAp水平显著上调,miR-495-3p表达量显著下调,且在MCF-7细胞差异最显著(p pK3组MCF-7细胞凋亡率、miR-495-3p表达量、E-cadherin、Bax、Cleaved caspase-3蛋白水平显著升高,差异有统计学意义(p pK3表达量、XIAp、N-cadherin、Vimentin、Bcl-2蛋白水平显著降低,差异有统计学意义(p miR-495-3p削弱了沉默circHIpK3对MCF-7细胞恶性生物学行为的抑制作用;circHIpK3靶向调节miR-495-3p/XIAp轴。结论沉默circHIpK3可能通过上调miR-495-3p来抑制XIAp表达,进而对乳腺癌细胞起到抗增殖,促凋亡的作用。

关键词：环状RNA同源域相互作用蛋白激酶3 miR-495-3p 乳腺癌增殖迁移凋亡