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UVB辐射敏感的mir-486-3p通过靶向FLOT2促进皮肤鳞癌进展的机制研究

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UVB辐射敏感的miR-486-3p通过靶向FLOT2促进皮肤鳞癌进展的机制研...

作者：袁雅雯南方医科大学

学位级别：硕士

研究背景起源于表皮角质形成细胞的皮肤鳞状细胞癌属于第二常见的非黑色素瘤皮肤癌。根据2020年的全球癌症数据库统计,全球范围内非黑色素瘤皮肤癌的新发病例数已接近120万。皮肤鳞癌与多种因素有关,其中包括紫外线辐射暴露和慢性光老... 详细信息

研究背景起源于表皮角质形成细胞的皮肤鳞状细胞癌属于第二常见的非黑色素瘤皮肤癌。根据2020年的全球癌症数据库统计,全球范围内非黑色素瘤皮肤癌的新发病例数已接近120万。皮肤鳞癌与多种因素有关,其中包括紫外线辐射暴露和慢性光老化、年龄、性别、免疫抑制、吸烟和遗传因素,其中长期紫外线辐射暴露是最常见,也是极为重要的因素。微小RNA(mirNA)是一类内源性非编码单链小分子RNA,通过碱基互补配对的方式与靶基因的mRNA的3’端非编码区结合,调控靶基因的表达。大量研究表明,mirNA的异常调节参与了多种癌症的病理过程,因此mirNA被认为是潜在的诊断、治疗、预后的生物标志物。mir-486-3p在口腔癌、膀胱癌、肺癌等多种恶性肿瘤中表达水平较低,作为一种肿瘤抑制因子发挥作用,但至今仍未有mir-486-3p与皮肤鳞癌的相关研究。越来越多的证据表明,FLOT2已被证明在鼻咽癌、宫颈癌、乳腺癌等多种恶性肿瘤中表现较高的表达水平,可能在人类恶性肿瘤的发生发展中发挥关键作用。然而目前关于FLOT2在皮肤鳞癌中的表达情况及其在皮肤鳞癌中的临床病理相关意义在国内外未见报道。本研究旨在探讨mir-486-3p及其下游靶基因FLOT2在皮肤鳞癌中的生物学作用,进一步探索mir-486-3p通过调控FLOT2影响皮肤鳞癌进展的分子机制,为临床诊断与治疗皮肤鳞癌提供理论基础。方法我们采用荧光原位杂交(FISH)和qpCR检测mir-486-3p在正常皮肤与皮肤鳞癌中的表达水平。在皮肤鳞癌细胞系中构建沉默或过表达mir-486-3p的细胞模型后,采用CCK-8、克隆形成和迁移实验检测mir-486-3p对皮肤鳞癌细胞恶性行为的作用。建立裸鼠皮下成瘤模型检测mir-486-3p在体内对皮肤鳞癌的体内成瘤能力的影响。随后我们采用生物信息学网站预测和双荧光素酶报告实验验证mir-486-3p与FLOT2之间直接靶向结合,同时用qpCR和western blot检测调控mir-486-3p后FLOT2的表达水平;接着我们采用qpCR和western blot检测FLOT2在正常皮肤与皮肤鳞癌中的表达水平。调控FLOT2和mir-486-3p后,采用CCK-8、克隆形成和迁移实验检测FLOT2对皮肤鳞癌细胞增殖与迁移能力的影响。结果1.mir-486-3p在皮肤鳞癌组织和皮肤鳞癌细胞中的表达水平高于正常皮肤;2.生物信息学预测FLOT2是mir-486-3p的下游靶基因,通过双荧光素酶报告实验验证两者之间的直接靶向关系;3.上调mir-486-3p或沉默FLOT2后,可增强HSC-1和HSC-5细胞的增殖和迁移能力,裸鼠成瘤能力也得以增强;而下调mir-486-3p或过表达FLOT2后,皮肤鳞癌细胞中的增殖和迁移被抑制,裸鼠成瘤能力也被抑制;4.回复实验证实FLOT2可逆转mir-486-3p过表达对皮肤鳞癌细胞恶性表型的促进作用。结论UVB辐射敏感的mir-486-3p在皮肤鳞癌中呈高表达,且可促进皮肤鳞癌恶性行为的进展。mir-486-3p与FLOT2之间存在靶向关系。FLOT2在皮肤鳞癌中呈低表达,可抑制皮肤鳞癌恶性行为的进展,且可逆转mir-486-3p过表达对皮肤鳞癌恶性行为的促进作用。

关键词： mir-486-3p 皮肤鳞癌 FLOT2 增殖迁移

plin 5和mir-486-3p在结直肠癌组织中的表达及与患者临床病理特征的关系

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热带医学杂志 2023年第10期23卷 1364-1369,1502页

作者：朱水津殷洪敏上海健康医学院附属崇明医院消化内科上海202150

目的探究脂滴包被蛋白5(plin5)、mir-486-3p在结直肠癌(CRC)组织中的表达及与患者临床病理特征的关系。方法以2015年1月-2016年12月上海交通大学医学院附属新华医院崇明分院收治的60例经病理确诊的CRC患者为研究对象,选取手术切除的肿... 详细信息

目的探究脂滴包被蛋白5(plin5)、mir-486-3p在结直肠癌(CRC)组织中的表达及与患者临床病理特征的关系。方法以2015年1月-2016年12月上海交通大学医学院附属新华医院崇明分院收治的60例经病理确诊的CRC患者为研究对象,选取手术切除的肿瘤组织为CRC组,距癌组织>5 cm的癌旁组织为癌旁组。采用实时荧光定量pCR法(qRT-pCR)检测plin5 mRNA和mir-486-3p表达量,采用免疫组化法检测plin5蛋白。pearson相关性分析plin5 mRNA和mir-486-3p水平的关系,采用Kaplan-Meier法分析plin5、mir-486-3p与患者预后的关系,COX回归分析影响CRC预后的独立危险因素。结果与癌旁组比较,CRC组患者plin5 m RNA[(1.03±0.17)vs.(0.53±0.08)]水平降低,mir-486-3p[(1.05±0.19)vs.(2.39±0.42)]水平上升,差异均有统计学意义(t=20.614、22.517,p均plin5阳性表达率为38.33%,显著低于癌旁组68.33%,差异有统计学意义(χ^(2)=10.848,ppearson相关性分析显示,plin5 mRNA与mir-486-3p水平成负相关(r=-0.585,pplin5和mir-486-3p表达均与CRC患者TNM分期、浆膜浸润、淋巴结转移、肿瘤分化有关(χ^(2)_(plin5)=9.545、8.013、14.203、7.856,χ^(2)_(mir-486-3p)=10.725、11.125、12.858、8.399,p均plan-Meier法分析结果显示,plin5阳性表达组5年内累积生存率为69.57%,高于阴性表达组32.43%,差异有统计学意义(χ^(2)=7.858,p=0.005);mir-486-3p高表达组5年内累积生存率为31.25%,低于低表达组64.29%,差异有统计学意义(χ^(2)=6.548,p=0.010)。多因素COX回归分析显示,TNM分期、淋巴结转移、plin5低表达、mir-486-3p高表达是影响CRC预后的独立危险因素(HR=1.623、1.763、1.689、1.824,p均plin5、mir-486-3p在CRC组织中呈异常表达,二者与患者临床病理特征密切相关,共同参与CRC的发生发展。

关键词：脂滴包被蛋白5 mir-486-3p 结直肠癌

血清外泌体mir-486-3p对非小细胞肺癌早期诊断价值

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青岛大学学报（医学版） 2023年第2期59卷 292-295页

作者：王琳娜王静青岛大学基础医学院山东青岛266071 山东省慢性病医院(山东省康复中心)检验科

目的分析血清外泌体mir-486-3p对非小细胞肺癌的早期诊断价值。方法选择非小细胞肺癌病人120例为观察组,同期体检健康志愿者120例为对照组,均采集空腹静脉血,磷钨酸钠溶液染色后采用透射电镜观察外泌体形态,Western blot方法检测外泌体... 详细信息

目的分析血清外泌体mir-486-3p对非小细胞肺癌的早期诊断价值。方法选择非小细胞肺癌病人120例为观察组,同期体检健康志愿者120例为对照组,均采集空腹静脉血,磷钨酸钠溶液染色后采用透射电镜观察外泌体形态,Western blot方法检测外泌体标志性蛋白CD81、TSG101表达,实时荧光定量pCR(RT-qpCR)方法检测mir-486-3p水平,采用化学发光法检测血癌胚抗原(CEA)、糖类抗原125(CA125)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)、细胞角蛋白19片段(CYFRA21-1)水平,绘制受试者工作特征曲线(ROC曲线)分析血清外泌体mir-486-3p诊断非小细胞肺癌的灵敏度和特异度。结果透射电镜观察可见,外泌体呈盘状囊泡样结构,直径为20~300 nm,颗粒状。Western blot实验鉴定表面标志蛋白CD81、TSG101证实为外泌体。观察组血清CEA、CA125、NSE、CYFRA21-1水平均高于对照组(t=10.701~31.406,pmir-486-3p水平低于对照组(t=17.155,pmir-486-3p表达水平均低于中青年、女性、无淋巴转移性病灶及TNM分期Ⅰ~Ⅱ期病人(t=8.168~19.658,pmir-486-3p诊断非小细胞肺癌的曲线下面积(AUC)为0.781,95%置信区间(CI)为0.724~0.839,灵敏度为51.67%,特异度为98.33%,最佳界值为0.945。结论血清外泌体mir-486-3p对非小细胞肺癌具有一定的早期诊断价值,血清外泌体mir-486-3p表达水平越低,非小细胞肺癌病人恶化程度越高。

关键词：血清外泌体 mir-486-3p 癌,非小细胞肺癌症早期检测

腹腔镜结直肠癌根治术前病人外周血穿透素-联合mir-486-3p水平预测术后复发转移的价值探讨

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临床外科杂志 2023年第10期31卷 954-958页

作者：孙会群马熙高星天津医院肛肠外科 300000

目的探讨腹腔镜结直肠癌根治术前病人外周血穿透素-3(pTX-3)联合mir-486-3p预测术后复发转移的价值。方法2018年3月~2021年5月我院收治的腹腔镜结直肠癌根治术病人157例,术前检测所有病人外周血pTX-3、mir-486-3p水平,术后随访1年,根据... 详细信息

目的探讨腹腔镜结直肠癌根治术前病人外周血穿透素-3(pTX-3)联合mir-486-3p预测术后复发转移的价值。方法2018年3月~2021年5月我院收治的腹腔镜结直肠癌根治术病人157例,术前检测所有病人外周血pTX-3、mir-486-3p水平,术后随访1年,根据病人术后是否发生复发转移分为复发转移组与非复发转移组。比较两组病人临床资料,采用多因素Logistic回归分析腹腔镜结直肠癌根治术后复发转移的相关因素,绘制受试者工作特征曲线(ROC),以曲线下面积(AUC)评估预测价值。结果随访1年,157例病人失访5例,随访率为96.82%,其中复发转移28例,复发转移率为18.42%,124例未复发转移。复发转移组年龄≥60岁、淋巴结转移、Ⅲ期、低分化、肿瘤直径≥5 cm、术前血小板计数、癌胚抗原(CEA)、糖类抗原19-9(CA19-9)、外周血pTX-3、mir-486-3p水平高于非复发转移组(ppTX-3水平、术前外周血mir-486-3p水平为腹腔镜结直肠癌根治术后复发转移的影响因素(ppTX-3、mir-486-3p水平及二者联合预测腹腔镜结直肠癌根治术后复发转移的AUC值(95%CI)分别为0.746(0.643~0.833)、0.805(0.707~0.881)、0.868(0.779~0.930)(pppTX-3联合外周血mir-486-3p水平预测腹腔镜结直肠癌根治术后复发转移的AUC值高于淋巴结转移、Ⅲ期联合低分化预测的AUC值(ppTX-3、mir-486-3p水平可用于预测腹腔镜结直肠癌根治术后复发转移,二者联合具有更高的预测价值。

关键词：腹腔镜结直肠癌根治术穿透素-3 mir-486-3p 复发转移预测价值

人翼状胬肉中mir-486-3p的表达及其潜在靶基因的生物信息学分析

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国际眼科杂志 2021年第6期21卷 969-974页

作者：徐玉亭乔晨何思颖董世栖徐云峰严明武汉大学中南医院眼科中国湖北省武汉市430071 武汉大学第二临床学院中国湖北省武汉市430071 汉口爱尔眼科医院中国湖北省武汉市430024

目的:通过检测人翼状胬肉组织及正常结膜组织中mir-486-3p的表达情况,探寻其在翼状胬肉发生发展中可能的作用机制。方法:于2018-09/2019-12收集原发性翼状胬肉患者69例69眼,收集术中切除的翼状胬肉组织和术眼正常结膜组织,采用RT-pCR定... 详细信息

目的:通过检测人翼状胬肉组织及正常结膜组织中mir-486-3p的表达情况,探寻其在翼状胬肉发生发展中可能的作用机制。方法:于2018-09/2019-12收集原发性翼状胬肉患者69例69眼,收集术中切除的翼状胬肉组织和术眼正常结膜组织,采用RT-pCR定量检测标本中mir-486-3p的相对表达量,并利用Targetscan数据库、miWalk3.0数据库、mirDB数据库对mir-486-3p进行靶基因预测后将得到的潜在靶基因取交集;采用DAVID数据库对mir-486-3p潜在靶基因进行功能和通路富集分析;采用String网站对mir-486-3p潜在靶基因进行互作分析。结果:mir-486-3p在翼状胬肉组织中的相对表达量[(6.183±1.366)×10-6]与正常结膜组织的相对表达量[(7.930±1.394)×10-5]有显著差异(pmir-486-3p潜在靶基因436个,其生物学功能主要富集于对RNA聚合酶Ⅱ启动子转录的调控、囊泡介导的转运和转录调控、DNA依赖性RNA代谢过程的调控。KEGG通路主要富集于神经轴突导向(Axon guidance)通路及溶酶体通路上,其中Axon guidance通路可能对翼状胬肉的发生发展起着重要的调控作用。ppI网络分析进一步表明Axon guidance通路中的关键基因ABL1、pLXNA1对翼状胬肉具有重要作用。结论:mir-486-3p可能通过SLIT(神经导向因子Slit)/Robo(回旋引导受体)和SEMA3A(神经导向因子Semaphorin 3A)/pLXNA1(丛蛋白受体A1)等Axon guidance通路致翼状胬肉的新生血管异常,从而参与翼状胬肉的发生、发展。

关键词：翼状胬肉 mir-486-3p 靶基因生物信息学分析

pVT1通过调节mir-486-3p/MApK14轴降低食管癌细胞的化学敏感性

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中国免疫学杂志 2021年第24期37卷 2999-3004页

作者：卢万里金哲段东奎王铮裴书飞南阳市中心医院胸外科南阳473000 南阳市中心医院消化科南阳473000

目的:探讨长链非编码RNA pVT1通过调节mir-486-3p/MApK14轴降低食管癌细胞化学敏感性的相关机制。方法:qRT-pCR检测永生化人食管上皮细胞系和食管癌细胞系中pVT1、mir-486-3p、MApK14的相对表达水平;生物信息学预测pVT1、mir-486-3p的... 详细信息

目的:探讨长链非编码RNA pVT1通过调节mir-486-3p/MApK14轴降低食管癌细胞化学敏感性的相关机制。方法:qRT-pCR检测永生化人食管上皮细胞系和食管癌细胞系中pVT1、mir-486-3p、MApK14的相对表达水平;生物信息学预测pVT1、mir-486-3p的靶向关系,并以荧光素酶报告实验验证靶向关系;构建pVT1、mir-486-3p、MApK14过表达和pVT1敲除耐顺铂食管癌细胞系Eca-109/DDp,DDp处理后,比较各组Eca-109/DDp中的半抑制浓度(IC50)、细胞存活率、细胞凋亡率,并检测细胞凋亡蛋白(Bcl-2、Bax)、耐药蛋白(MRp1、p-gp)表达情况。结果:pVT1、MApK14在食管癌细胞中高表达,mir-486-3p低表达(ppVT1靶向抑制mir-486-3p表达,过表达pVT1后Eca-109/DDp细胞的IC50、细胞增殖率,MRp1、p-gp、Bcl-2表达水平显著升高(ppmir-486-3p能够恢复上述表型;敲除pVT1后Eca-109/DDp细胞的IC50、细胞增殖率、MApK14表达水平显著降低(pppK14后能够恢复上述表型。结论:pVT1可能通过靶向抑制mir-486-3p表达,促进MApK14表达诱导耐药蛋白上调表达,降低食管癌细胞的化学敏感性。

关键词：食管鳞状细胞癌 pVT1 mir-486-3p MApK14 顺铂敏感性

mir-486-3p通过直接靶向BIK调控结直肠癌细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭

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中国免疫学杂志 2021年第8期37卷 964-969页

作者：冯莉刘妍荆丽韩晶张雪刘义冰河北医科大学第四医院肿瘤内科石家庄050011

目的:探讨mir-486-3p对结直肠癌细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的调节作用。方法:采用q-pCR法测定结直肠癌细胞株SW620和正常结肠细胞系NCM-460中mir-486-3p和BIK表达,荧光素酶报告试验测定mir-486-3p的直接作用靶点,将结直肠癌细胞株SW62... 详细信息

目的:探讨mir-486-3p对结直肠癌细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的调节作用。方法:采用q-pCR法测定结直肠癌细胞株SW620和正常结肠细胞系NCM-460中mir-486-3p和BIK表达,荧光素酶报告试验测定mir-486-3p的直接作用靶点,将结直肠癌细胞株SW620分为NC组、mir-486-3p模拟物组、mir-486-3p抑制剂组和BIK siRNA组,各组细胞转染24 h后,MTT法测定各组细胞增殖情况,划痕实验和Transwell实验测定细胞迁移和侵袭能力,流式细胞术测定细胞凋亡情况,RT-pCR和Western blot法测定BIK、ApAF1、p-Erk1/2、Erk1/2、Cyt C、Caspase-9和Caspase-3 mRNA和蛋白表达。结果:结直肠癌细胞SW620 mir-486-3p表达水平较正常结直肠细胞NCM-460显著提高(pp3′-UTR是mir-486-3p的直接靶标;与NC组相比,mir-486-3p抑制剂组24 h、48 h和72 h结肠癌细胞光密度显著降低(ppppppAF1、Caspase-9和Caspase-3 mRNA和蛋白表达显著增加,p-Erk1/2 mRNA和蛋白表达显著降低(pmir-486-3p模拟剂组和BIK siRNA组24 h、48 h和72 h结肠癌细胞光密度显著提高(ppppppAF1、Caspase-9和Caspase-3 mRNA和蛋白表达显著降低,p-Erk1/2 mRNA和蛋白水表达显著增加(pp>0.05)。结论:mir-486-3p是结直肠癌的致癌基因,可通过直接靶向BIK调节结直肠细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭。

关键词：结直肠癌 mir-486-3p Bcl-2相互作用杀伤蛋白细胞增殖细胞凋亡细胞迁移细胞侵袭

mir-486-3p靶向调控BMpR2影响BMp信号通路增加室间隔缺损的患病风险

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中国细胞生物学学报 2021年第8期43卷 1606-1613页

作者：彭楚玥王红艳姚晓英复旦大学生命科学学院上海200438 复旦大学附属妇产科医院上海200011

该研究发现在正常心脏发育窗口期和人胚胎干细胞向心肌细胞分化的早期,mir-486-3p低表达。但在室间隔缺损(ventricular septal defect,VSD)流产胎儿的心脏组织中对比匹配的对照心脏组织显著高表达。mir-486-3p在C57BL/6小鼠的心肌、室... 详细信息

该研究发现在正常心脏发育窗口期和人胚胎干细胞向心肌细胞分化的早期,mir-486-3p低表达。但在室间隔缺损(ventricular septal defect,VSD)流产胎儿的心脏组织中对比匹配的对照心脏组织显著高表达。mir-486-3p在C57BL/6小鼠的心肌、室间隔组织中高表达。过表达mir-486-3p显著抑制细胞增殖,下调上皮细胞标志物表达,上调间充质细胞标志物表达,促进细胞迁移。借助生物信息学分析和小鼠模型,鉴定了43个候选靶基因。qRT-pCR、蛋白免疫印迹和双荧光素酶报告基因实验验证了靶基因BMpR2。mir-486-3p抑制BMp信号通路活性,下调BMp信号通路下游靶基因mRNA水平。综上,该研究表明,mir-486-3p通过靶向下游基因BMpR2,抑制BMp信号通路信号,从而促进VSD发生,该研究为VSD的诊疗新方案提供了理论依据。

关键词：先天性心脏病室间隔缺损 mir-486-3p BMpR2

mir-486-3p调控CyclinD1在氟致成骨细胞增殖活化中的作用研究

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miR-486-3p调控CyclinD1在氟致成骨细胞增殖活化中的作用研究

作者：欧阳婷贵州医科大学

学位级别：硕士

目的:氟诱导的成骨细胞异常增殖和活化与氟骨症息息相关,但其机制尚未完全阐明。MicroRNAs(mirNAs)作为重要的表观遗传调控因子,参与骨代谢及细胞周期的调控。本研究在既往发现CyclinD1高表达参与氟暴露成骨细胞增殖活跃基础上,结合课... 详细信息

目的:氟诱导的成骨细胞异常增殖和活化与氟骨症息息相关,但其机制尚未完全阐明。MicroRNAs(mirNAs)作为重要的表观遗传调控因子,参与骨代谢及细胞周期的调控。本研究在既往发现CyclinD1高表达参与氟暴露成骨细胞增殖活跃基础上,结合课题组前期mirNA测序结果,进一步探讨mir-486-3p对CyclinD1的调控机制及其在氟诱导的成骨细胞增殖活化中的作用,为mirNA在氟骨症防治中的应用提供新思路。方法:1.mir-486-3p与CyclinD1、TGF-β1在燃煤污染型氟暴露人群的表达及相关性分析:依据地方性氟中毒病区划分标准(GB 17018-2011),在贵州省燃煤污染型氟中毒病区毕节市织金县荷花村及非氟中毒地区安顺市双堡镇张官村选择调查对象。依据调查对象纳入、排除标准,追踪既往调查对象共248例,知情同意原则下取其血样及尿样,课题组前期通过氟离子选择电极法测定调查人群体内氟负荷并进行分组,根据测定的尿氟浓度(UF),将调查对象分为三组:(1)UF3.92 mg/g Cr,65例;(3)UF>3.92 mg/g Cr,66例。使用mirWalk3.0数据库的四种不同算法(mirDB、mirWalk、Target Scan和mirTar Base)预测靶向CyclinD1的mirNA,结合课题组前期的mirNA-seq结果和筛选标准,预测出氟暴露人群中表达下调且靶向调控CyclinD1的mirNAs,包括mir-4755-5p,let-7c-5p和mir-486-3p。生物信息学分析显示mir-486-3p还靶向TGF-β1/Smad通路中的TGF-β1,本论文选择mir-486-3p进一步研究。在课题组前期检测血清中碱性磷酸酶活性(ALp)和骨钙素(BGp)含量、外周血单个核细胞(pBMCs)中CyclinD1表达的基础上。实时荧光定量pCR(qRT-pCR)验证调查对象血浆中mir-486-3p表达;qRT-pCR、ELISA法检测pBMCs中TGF-β1mRNA转录及血浆中TGF-β1蛋白表达;Spearman相关性分析评估外周血中mir-486-3p和CyclinD1、TGF-β1之间的相关性。2.氟对mir-486-3p、CyclinD1、TGF-β1/Smad2/3/CyclinD1轴的影响:酶消法分离人原代成骨细胞,通过形态学观察、碱性磷酸酶及茜素红染色鉴定人原代成骨细胞。根据课题组前期实验及预实验结果以0、600、1200μmol/L NaF处理人成骨细胞72 h进行后续试验。qRT-pCR检测mir-486-3p、CyclinD1及TGF-β1 mRNA转录;免疫印迹法(Western blotting)检测CyclinD1、TGF-β1表达和核内外Smad2/3表达及磷酸化水平;细胞免疫荧光检测Smad2/3入核情况;染色质免疫共沉淀法(ChIp)法检测Smad2/3在CyclinD1转录调控区富集情况。3.mir-486-3p调控CyclinD1参与氟诱导的人成骨细胞增殖活化机制研究:(1)mir-486-3p参与氟诱导的人成骨细胞增殖活化:在课题组前期证实氟诱导人原代成骨细胞增殖活化的基础上,采用mir-486-3p mimic转染人成骨细胞24 h后进一步用1200μmol/L NaF处理人成骨细胞72 h。qRT-pCR检测mir-486-3p表达;使用CCK-8、Ed U、流式细胞术、ALp活性和BGp含量检测mir-486-3p对成骨细胞增殖活化的影响。(2)mir-486-3p可直接靶向CyclinD1在转录后水平调控氟诱导的CyclinD1的上调。mir-486-3p mimic转染人成骨细胞24 h后,使用1200μmol/L NaF处理人成骨细胞72 h,qRT-pCR检测CyclinD1 mRNA转录,Western blotting检测CyclinD1蛋白表达;双荧光素酶报告基因实验验证mir-486-3p与CyclinD1的靶标关系。(3)mir-486-3p可通过TGF-β1/Smad2/3通路在转录水平调控氟诱导的CyclinD1的上调。双荧光素酶报告基因实验验证mir-486-3p与TGF-β1的靶标关系。采用mir-486-3p mimic转染人成骨细胞24 h后进一步采用1200μmol/L NaF处理人成骨细胞72 h,qRT-pCR检测TGF-β1 mRNA转录,Western blotting检测TGF-β1蛋白表达、核内外Smad2/3表达及磷酸化水平,细胞免疫荧光检测Smad2/3入核情况,以及ChIp检测Smad2/3在CyclinD1转录调控区富集情况。4.248例调查对象CyclinD1表达与相关mirNAs的多重线性回归分析:在248例调查对象中,分别以Cyc

关键词： mir-486-3p CyclinD1 TGF-β1/Smad2/3信号通路氟骨症成骨增殖与活化