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视网膜色素上皮细胞通过分泌含有mir-4488的外泌体抑制糖尿病视网膜病变进展的机制研究

眼科新进展 2022年第5期42卷 353-358页

作者：令狐绍容罗泓扬遵义医科大学附属医院眼科中心贵州省遵义市563000 遵义医科大学附属医院眼科临床技能实验室贵州省遵义市563000

目的探讨视网膜色素上皮细胞通过分泌含有mir-4488的外泌体抑制糖尿病视网膜病变进展的分子机制。方法将人视网膜色素上皮细胞系ARPE-19细胞分为空白组、高糖组。将人视网膜微血管内皮细胞(HRMECs)分为NG组、HG组、NG+外泌体组和HG+外... 详细信息

目的探讨视网膜色素上皮细胞通过分泌含有mir-4488的外泌体抑制糖尿病视网膜病变进展的分子机制。方法将人视网膜色素上皮细胞系ARPE-19细胞分为空白组、高糖组。将人视网膜微血管内皮细胞(HRMECs)分为NG组、HG组、NG+外泌体组和HG+外泌体组。空白组、NG组和NG+外泌体组细胞用含5.5 mmol·L^(-1)正常浓度葡萄糖的培养基培养24 h;高糖组、HG组和HG+外泌体组细胞用含30 mmol·L^(-1)高浓度葡萄糖的培养基培养24 h;NG+外泌体组和HG+外泌体组细胞在培养基中分别加入空白组或高糖组ARPE-19细胞分泌的外泌体40μg·L^(-1)。PKH67绿色荧光标记外泌体;利用CCK-8法、Transwell小室法检测HRMECs增殖、迁移和血管生成。取空白组和高糖组ARPE-19细胞外泌体进行mirNA微阵列分析。采用双荧光素酶报告分析检测mir-4488和转化生长因子β受体Ⅱ(TGFβR2)基因序列的靶向关系。采用Western blot或免疫荧光染色检测各组HRMECs中TGFβR2、Smad2、p-Smad2ser467或Desmin、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达。结果空白组和高糖组ARPE-19细胞分泌的被PKH67标记的外泌体加入培养基后都可被HRMECs吸收。与NG组相比,HG组HRMECs细胞增殖率、迁移率、血管结点数和血管总长度、TGFβR2和p-Smad2ser467蛋白表达量、Desmin和α-SMA蛋白荧光强度均增加(均为P0.05)。与空白组相比,高糖组ARPE-19细胞分泌的外泌体中mir-4488相对表达量增加,且mir-4488模拟物和TGFβR2wt共转染可增加双荧光素酶活性(均为Pmir-4488/TGFβR2/Smad信号通路抑制HRMECs间充质转化。

关键词： mir-4488 转化生长因子β 糖尿病视网膜病变内皮细胞间充质转化外泌体视网膜色素上皮细胞

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mir-4488在人类肝细胞癌中的功能研究

miR-4488在人类肝细胞癌中的功能研究

引用

作者： RASHED NASOT AHMED SALEH 湖北中医药大学

学位级别：硕士

肝细胞癌（HCC）是最常见的原发性癌症,常发生于肝硬化患者,近年来已成为全球第四大癌症相关死亡原因。HCC是一种侵袭性肿瘤,常伴有转移,同时也是一种异质性很强的疾病。大多数HCC患者被确诊在疾病的中晚期,失去了纠正治疗的机会。目前... 详细信息

肝细胞癌（HCC）是最常见的原发性癌症,常发生于肝硬化患者,近年来已成为全球第四大癌症相关死亡原因。HCC是一种侵袭性肿瘤,常伴有转移,同时也是一种异质性很强的疾病。大多数HCC患者被确诊在疾病的中晚期,失去了纠正治疗的机会。目前应用于HCC诊断的影像学方法包括超声（US）、计算机x线断层扫描（CT）和磁共振成像（MRI）等,均难以确定肝细胞癌的特征。而生物标记物例如AFP等的敏感性和特异性均较低。因此,迫切需要阐明HCC的分子调控机制,以改善该疾病的整体预后、诊断和治疗。近年来,一些研究表明mirNAs是多种恶性肿瘤潜在的生物标志物。MicroRNA（mirNA）是一种小的非编码RNA,大约有18-24个核苷酸。它们与mRNA的3’非翻译区（3’-UTR）互补序列碱基配对从而进行转录后水平调控基因表达。mirNA在细胞凋亡、增殖、代谢和分化在肿瘤侵袭、转移和血管生成过程中发挥重要作用。人类基因组中大约编码有几千种不同的mirNA,其中一些在健康和癌症组织中表达有差异。之前有研究发现mi R-4488在多种癌症中表达下调,但尚无何研究报道mi R-4488在肝细胞癌中的具体作用。因此,我们究选择在Hep G2和Huh-7细胞中研究mi R-4488的功能。我们在HCC细胞系中过表达mi R-4488,通过q PCR比较其预测靶基因的水平变化,并利用划痕实验检查其对HCC细胞迁移能力的影响。我们的结果显示mi R-4488是一个具备典型功能的mirNA,过表达mi R-4488下调了预测靶基因中的NFIC,并且抑制了HCC细胞系的迁移。本研究可能会提高我们对mirNA在肝癌中作用的认识。

关键词：肝细胞癌 microRNA mir-4488 HepG2 Huh-7 NFIC

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MCU依赖性分选外泌体mir-4488促进乳腺癌细胞的迁移和浸润

MCU依赖性分选外泌体miR-4488促进乳腺癌细胞的迁移和浸润

引用

作者：何展昕南方医科大学

学位级别：硕士

乳腺癌是世界范围内女性最常见的恶性肿瘤,其转移是导致乳腺癌患者死亡的主要原因。越来越多的研究表明,乳腺癌的发生发展与环境刺激如职业因素等存在着关联。时至今日,临床上针对乳腺癌(尤其是三阴性乳腺癌)仍然缺少特异性的治疗靶点,... 详细信息

乳腺癌是世界范围内女性最常见的恶性肿瘤,其转移是导致乳腺癌患者死亡的主要原因。越来越多的研究表明,乳腺癌的发生发展与环境刺激如职业因素等存在着关联。时至今日,临床上针对乳腺癌(尤其是三阴性乳腺癌)仍然缺少特异性的治疗靶点,因此,还需要深入研究介导乳腺癌发生发展的分子机制,为乳腺癌的临床治疗提供新的科学依据。肿瘤细胞分泌的外泌体可通过多种机制促进肿瘤细胞转移。线粒体钙单向转运体(mitochondrial calcium uniporter,MCU)位于线粒体内膜,其基本功能是为三羧酸循环提供钙离子。报道显示,MCU可通过SOCE或ROS等细胞内信号介导乳腺癌细胞的迁移和浸润,但MCU是否可还通过外泌体途径促进乳腺癌细胞的迁移和浸润尚未报道。因此,本研究致力于明确MCU是否通过外泌体作用于乳腺癌细胞迁移和浸润,并探讨其中的调控机制。本研究中,我们采用了慢病毒转染构建的MCU过表达、敲低细胞株作为实验模型。首先采用划痕、Transwell迁移实验验证MCU对乳腺癌细胞迁移的影响,同时通过Transwell浸润实验验证MCU对乳腺癌细胞浸润的影响。电镜、粒径测定和Western blot用于检测外泌体提取所得样本,并使用囊泡抑制剂抑制外泌体生成以研究外泌体在此过程中所起作用。Mimics与inhibitor瞬时转染、Western blot、qPCR和纳米流式等实验技术应用于检测mir-4488所起作用。通过Western blot确定MCU与CX3CL1关系后,我们使用干扰序列瞬时转染干扰CX3CL1的表达并验证CX3CL1对乳腺癌迁移与浸润的影响。网络数据库分析佐证实验结果。Western blot确认细胞系可用后,我们通过划痕、Transwell迁移和浸润实验确认了 MCU对乳腺癌细胞迁移与浸润的影响。随后我们抑制外泌体分泌确认了外泌体可促进迁移与浸润。qPCR结合纳米流式结果均表明MCU可抑制外泌体中mir-4488的分选。瞬时转染上调或抑制mir-4488的表达,结合划痕、Transwell迁移与浸润实验发现mir-4488具有抑制乳腺癌细胞迁移与浸润的作用。Western blot确认mir-4488通过作用于CX3CL1的mRNA而抑制该分子表达。而瞬时干扰敲低CX3CL1表达量并结合划痕、Transwell迁移与浸润实验发现CX3CL1同样具有促进乳腺癌细胞迁移浸润的作用。最后我们通过网络数据库分析发现,CX3CL1在三阴性乳腺癌、basal-like型和p53突变型乳腺癌中均呈现高表达。通过以上实验,我们认为MCU可通过抑制外泌体中mir-4488的分选,而上调CX3CL1的表达,从而促进乳腺癌细胞迁移与浸润。该发现有望为乳腺癌研究提供新的思路和为临床治疗提供新的靶点。

关键词：乳腺癌 MCU 迁移浸润 mir-4488 CX3CL1

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