检索结果-南通市图书馆

生物工程学报 2024年第7期40卷 2162-2177页

作者：郝琴琴闫俊蓉任静成俊丽朱芷葳李鹏飞山西农业大学生命科学学院山西太谷030801

本研究旨在筛选调控牛下丘脑可卡因-苯丙胺调节转录肽(cocaine and amphetamine regulated transcript peptide,CART)表达的长链非编码RNA (long non-coding RNA,lncRNA)小核仁RNA宿主基因3 (small nucleolar RNA host gene 3,SNHG3),明确lncRNA SNHG3调控牛下丘脑CART表达的作用机制。利用Star Base v2.0、NCBI、DIANA tools数据库预测分别与极显著抑制CART表达的mir-381、mir-491存在靶向关系的lncRNAs,分析其结合位点;选取3头健康成年西门塔尔母牛,提取其下丘脑组织总RNA,通过半定量RT-PCR技术鉴定所筛选的lncRNAs内源表达情况;双荧光素酶报告基因技术检测mir-381/491与lncRNAs间的靶向结合关系;构建lncRNAs、CART过表达载体及mir-381/491 mimics,分别转染至293T细胞,分析lncRNAs对CART基因表达的调控作用机制;利用动物活体实验对在细胞水平调控作用效果最强的lncRNA进行功能分析。lncRNA TUG1、SNHG3与mir-381存在结合位点,lncRNA H19、SNHG12、DANCR与mir-491存在结合位点,且lncRNA TUG1、SNHG3、H19、SNHG12、DANCR均在牛下丘脑中有表达;双荧光素酶检测结果显示,mir-381显著抑制TUG1-WT重组荧光质粒的相对荧光活性(Pmir-491显著抑制DANCR-WT和H19-WT的荧光素酶活性表达(Pmir-381极显著提高CART表达(Pmir-491极显著提高CART表达(Pmir-381显著提高CART m RNA和蛋白表达。本研究证实了lncRNA SNHG3作为mir-381的竞争性内源RNA (competing endogenous RNAs,ce RNA),在转录和转录后水平均显著上调CART表达,为进一步研究牛下丘脑CART的分子网络调控机制奠定了基础。

关键词：牛卵泡发育下丘脑可卡因-苯丙胺调节转录肽(CART) 长链非编码RNA(lncRNAs) mir-381/491

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