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LncRNA DLX6-AS1靶向mir-374a-3p调控糖尿病患者创面愈合的分子机制

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中国老年学杂志 2022年第19期42卷 4792-4797页

作者：陈啸王媛媛崔云飞黄贤明青岛大学附属青岛市海慈医院血管外科山东青岛266000

目的探讨长链非编码RNA(LncRNA)DLX6-AS1靶向mir-374a-3p对糖尿病(DM)患者创面愈合的影响。方法将人微血管内皮细胞(HMECs)分为对照(NC)组、高糖(HG)组,小干扰RNA(siRNA)阴性对照(si-NC)+HG组(转染si-NC后用HG处理)、si-LncRNADLX6-AS1+HG组(转染si-LncRNADLX6-ASI后用HG处理)、mir-NC+HG组(转染mir-NC后用HG处理)、mir-374a-3p+HG组(转染mir-374a3p后用HG处理)、anti-mir-374a-3p+si-LncRNADLX6-AS1+HG组(转染imR-374a-3p+si-LncRNADLX6-AS1后用的HG处理)、anti-mir-NC+si-LncRNADLX6-AS1+HG组(转染anti-mir-NC+si-LncRNADLX6-AS1+HG后用HG处理)。采用实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qpCR)检测DM患者(DM组)和正常人(对照组)创面组织中mir-374a-3p和LncRNADLX6-AS1表达水平。CCK-8法检测细胞增殖,Transwell实验检细胞迁移和侵袭。LncRNADLX6-AS1和mir-374a-3p的靶向关系通过双荧光素酶报告实验确定。结果与对照组相比,DM组创面组织中mir-374a-3p表达显著降低(pppmir-374a-3p表达、细胞增殖率、迁移和侵袭数显著降低(ppmir-NC+HG组比较,mir-374a-3p+HG组HMECs增殖率、迁移和侵袭数显著升高(pmir-374a-3p是LncRNA DLX6-AS1的靶基因。与anti-mir-NC+si-LncRNA DLX6-AS1+HG组比较,anti-mir-374a-3p+si-LncRNA DLX6-AS1+HG组HMECs增殖率、迁移和侵袭数显著降低(pmir-374a-3p表达可诱导HMECs增殖、迁移和侵袭,促进DM患者创面愈合。

关键词：糖尿病创面愈合 LncRNA DLX6-AS1 mir-374a-3p 高糖人微血管内皮细胞增殖迁移侵袭

hsa-mir-374a-3p与VEGFB在结直肠癌中的相关性和作用

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解剖科学进展 2023年第3期29卷 295-298页

作者：朱亚雯达静徐凤霞姜树中陆翠华南通市第六人民医院消化内科江苏南通226001 南通大学附属医院消化内科江苏南通226006

目的探讨hsa-mir-374a-3p与VEGFB在结直肠癌中的相关性和作用。方法 TCGA数据集分析VEGFB在结直肠癌中的表达和对生存曲线的影响;免疫组织化学方法检测59例结直肠癌组织中VEGFB蛋白的表达;ELISA方法检测结直肠正常细胞和结直肠癌细胞中... 详细信息

目的探讨hsa-mir-374a-3p与VEGFB在结直肠癌中的相关性和作用。方法 TCGA数据集分析VEGFB在结直肠癌中的表达和对生存曲线的影响;免疫组织化学方法检测59例结直肠癌组织中VEGFB蛋白的表达;ELISA方法检测结直肠正常细胞和结直肠癌细胞中VEGFB的表达。重组人VEGFB蛋白或VEGFB抗体处理后,MTT法检测细胞活力;膜联蛋白V-pE和7-氨基放线菌素D(7-AAD)染色法检测细胞凋亡水平;FASAria细胞分选仪检测细胞周期。mirNA测序检测细胞中mirNA总体表达水平;实时荧光定量pCR检测mirNA-374a-3p与VEGFB mRNA的表达水平;荧光素酶报告实验验证mirNA-374a-3p与VEGFB-3′-UTR的靶向关系。结果 VEGFB在结直肠癌组织中的mRNA和蛋白表达水平显著高于正常组织。VEGFB高表达患者的中位生存期明显低于低表达患者。与结直肠正常细胞相比,结直肠癌细胞VEGFB表达水平明显升高。VEGFB蛋白处理后,结直肠正常细胞NCM460的细胞活力水平上升、细胞凋亡水平下降。结直肠癌组织中mir-374a-3p与VEGFB的表达水平存在负相关。mir-374a-3p靶向VEGFB mRNA的3′端非编码区。敲低mir-374a-3p后,细胞中VEGFB的mRNA和蛋白表达水平均上升,细胞活力上升,细胞凋亡减少。结论 mir-374a-3p与VEGFB的表达水平在结直肠癌中存在负相关,VEGFB/mir-374a-3p轴调控结直肠癌细胞的增殖与凋亡。

关键词： mir-374a-3p VEGFB 结直肠癌凋亡细胞活力

长链非编码生长停滞特异性蛋白6反义RNA1靶向mirNA-374a-3p调控高糖诱导的人肾小管上皮细胞损伤及纤维化分子机制的研究

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中国糖尿病杂志 2023年第1期31卷 60-66页

作者：邹宏昌朱淑英高明明徐曼徐承云涂卫平秦晓华南昌大学第二附属医院肾内科 330006

目的探讨长链非编码生长停滞特异性蛋白6反义RNA1(LncRNA DLX6-AS1)对高糖诱导的人肾小管上皮细胞HK-2损伤及纤维化的影响及其可能作用机制。方法高糖诱导HK-2细胞建立细胞损伤模型,实验分为正常对照(Con)组、高糖组(HG)、LncRNA DLX6-... 详细信息

目的探讨长链非编码生长停滞特异性蛋白6反义RNA1(LncRNA DLX6-AS1)对高糖诱导的人肾小管上皮细胞HK-2损伤及纤维化的影响及其可能作用机制。方法高糖诱导HK-2细胞建立细胞损伤模型,实验分为正常对照(Con)组、高糖组(HG)、LncRNA DLX6-AS1小分子干扰RNA阴性对照(si-NC)+HG组(si-NC+HG组)、LncRNA DLX6-AS1小分子干扰RNA(si-LncRNA DLX6-AS1)+HG组(si-LncRNA DLX6-AS1+HG组)、mir-374a-3p寡核苷酸模拟物阴性对照mimic NC序列(mir-NC)+HG组(mir-NC+HG组)、mir-374a-3p寡核苷酸模拟物(mir-374a-3p mimics)+HG组(mir-374a-3p+HG组)、mir-374a-3p特异性寡核苷酸抑制剂阴性对照(anti-mir-NC)+si-LncRNA DLX6-AS1+HG组(anti-mir-NC+si-LncRNA DLX6-AS1+HG组)、mir-374a-3p特异性寡核苷酸抑制剂(anti-mir-374a-3p)+si-LncRNA DLX6-AS1+HG组(anti-mir-374a-3p+si-LncRNA DLX6-AS1+HG组)。qRT-pCR法检测LncRNA DLX6-AS1、mir-374a-3p表达,ELISA法检测TNF-α、IL-1β水平,双荧光素酶报告实验检测LncRNA DLX6-AS1和mir-374a-3p的靶向关系,Western blot法检测人平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、纤维连接蛋白(Fn)、I型胶原α1链(COL1a1)、COL3a1蛋白表达量。结果转染si-LncRNA DLX6-AS1或mir-374a-3p mimic可降低TNF-α、IL-1β水平和α-SMA、Fn、COL1a1、COL3a1蛋白水平(pmir-374a-3p表达。共转染anti-mir-374a-3p与si-LncRNA DLX6-AS1可恢复转染si-LncRNA DLX6-AS1对HG诱导的HK-2细胞炎症及纤维化作用。结论干扰LncRNA DLX6-AS1表达可通过上调mir-374a-3p表达抑制高糖诱导的肾小管上皮细胞炎症反应及纤维化。

关键词：长链非编码生长停滞特异性蛋白6反义RNA1 mir-374a-3p 人肾小管上皮细胞肾脏纤维化