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miR-350通过抑制MAPK14及JNK介导心肌细胞肥大

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临床心血管病杂志 2015年第8期31卷 888-891页

作者：张淑华吴志婷潘淑娟王云霞刘秋玲葛郁芝江西省人民医院江西省心血管病研究所南昌330006

目的:探讨miR-350调控MAPK14及JNK介导心肌细胞肥大的作用机制。方法:miR-350过表达及MAPK14的shRNA表达载体转染H9c2细胞,显微镜下观察细胞形态变化并测量细胞直径;免疫细胞化学法检测NFATc的转核情况;Western blotting检测靶基因MAPK1... 详细信息

目的:探讨miR-350调控MAPK14及JNK介导心肌细胞肥大的作用机制。方法:miR-350过表达及MAPK14的shRNA表达载体转染H9c2细胞,显微镜下观察细胞形态变化并测量细胞直径;免疫细胞化学法检测NFATc的转核情况;Western blotting检测靶基因MAPK14及JNK的蛋白表达;RT-PCR的方法检测MAPK14及JNK的mRNA表达。结果:细胞转染后第3天,AngⅡ,miR-350及sh-MAPK14均能诱导细胞肥大,且miR-350及sh-MAPK14促使NFATc的转核明显增多,但仅miR-350抑制JNK和MAPK14蛋白表达而不影响JNK和MAPK14mRNA水平。结论:miR-350可能是通过抑制靶基因MAPK14及JNK表达,影响NFATc的转核介导心肌肥大的。

关键词：心肌肥厚 miR-350 H9c2

miR-350靶向调控脂多糖诱导的巨噬细胞中白细胞介素-6表达的研究

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国际免疫学杂志 2015年第6期38卷 525-528页

作者：王知明田雨北京海军机关门诊部 100841

目的探讨miR-350在巨噬细胞的固有免疫炎症反应中的作用。方法实时荧光定量PCR方法检测脂多糖（LPS）刺激的小鼠腹腔巨噬细胞中miR-350表达水平的变化。软件预测及荧光素酶报告基因方法确定miR-350的靶基因，实时荧光定量PCR方法检测mir... 详细信息

目的探讨miR-350在巨噬细胞的固有免疫炎症反应中的作用。方法实时荧光定量PCR方法检测脂多糖（LPS）刺激的小鼠腹腔巨噬细胞中miR-350表达水平的变化。软件预测及荧光素酶报告基因方法确定miR-350的靶基因，实时荧光定量PCR方法检测miR-350对LPS刺激的小鼠原代腹腔巨噬细胞中靶基因表达水平的影响。结果LPS刺激小鼠原代腹腔巨噬细胞后，miR-350表达水平呈时间依赖性下调。荧光报告基因方法确定mir-50能够显著调控炎症因子白细胞介索石（IL-6）的3’UTR区的活性（P〈0．01）。在小鼠原代腹腔巨噬细胞中过表达和抑制miR-350的表达，给予LPS刺激，IL-6的表达水平显著下调和上调（P〈0．01），而对IL-6启动子关键的转录因子p-p65水平没有影响。结论LPS触发的固有免疫信号通路中，下调表达的miR-350能够显著抑制促炎因子IL-6的表达。

关键词： miR-350 白细胞介素-6 脂多糖固有免疫炎症

miR-350在腹主动脉部分缩窄大鼠心肌组织中的表达及意义

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山东医药 2013年第25期53卷 1-3,22页

作者：张淑华吴志婷章志玲潘淑娟王云霞刘秋玲葛郁芝江西省人民医院江西省心血管病研究所南昌330006

目的观察腹主动脉部分缩窄大鼠心肌组织miR-350在心肌肥厚形成过程中的表达变化并探讨其临床意义。方法将20只雄性SD大鼠随机分成正常组5只、假手术组5只和模型组10只,采用腹主动脉部分缩窄术制备大鼠心肌肥厚模型。采用Trizol法提取心... 详细信息

目的观察腹主动脉部分缩窄大鼠心肌组织miR-350在心肌肥厚形成过程中的表达变化并探讨其临床意义。方法将20只雄性SD大鼠随机分成正常组5只、假手术组5只和模型组10只,采用腹主动脉部分缩窄术制备大鼠心肌肥厚模型。采用Trizol法提取心肌组织RNA,芯片技术检测mirNA表达。构建过表达miR-350质粒载体,转染大鼠的胚胎心肌细胞H9c2;采用Real-time PCR方法检测心肌细胞中ANP、BNP、β-myosin及α-actin的表达。结果 miR-350在模型组的表达量明显高于对照组;过表达miR-350的细胞中ANP mRNA及BNP mRNA升高(PmiR-350表达升高,且介导心肌细胞肥厚。

关键词：心肌病,肥厚性腹主动脉缩窄 miR-350 H9c2细胞大鼠

mirNA-350靶向MAPK14及JNK调控H9c2细胞增殖和凋亡

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中国老年学杂志 2018年第18期38卷 4482-4485页

作者：张淑华洪浪王云霞吴志婷刘秋玲葛郁芝江西省人民医院江西省心血管病研究所江西南昌330006

目的观察mirNA(mir)-350对H9c2细胞凋亡的诱导作用。方法 H9c2细胞转染miR-350诱导细胞肥大。显微镜下观察细胞形态变化并测量细胞表面积;运用MTT法分析细胞增殖,流式细胞技术检测细胞凋亡。并采用Western印迹法检测靶基因丝裂原活化蛋... 详细信息

目的观察mirNA(mir)-350对H9c2细胞凋亡的诱导作用。方法 H9c2细胞转染miR-350诱导细胞肥大。显微镜下观察细胞形态变化并测量细胞表面积;运用MTT法分析细胞增殖,流式细胞技术检测细胞凋亡。并采用Western印迹法检测靶基因丝裂原活化蛋白激酶(MAPK) 14及c-Jun氨基末端激酶(JNK)的蛋白表达,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)的方法检测MAPK14及JNK m RNA表达。结果 miR-350转染第7天细胞发生明显肥大和皱缩,miR-350及sh-MAPK14均能诱导细胞肥大;MTT结果显示miR-350组细胞活性显著下降(PmiR-350组细胞凋亡率升高,分别是16. 36%和8. 39%。miR-350可在转录水平抑制内源性p38和JNK基因的表达。然而,miR-350上述活性均可被miR-350 antagomir有效阻滞。结论 miR-350靶向MAPK14及JNK基因调控H9c2细胞的增殖和凋亡。

关键词：心肌肥厚 miR-350 凋亡

纳米二氧化钛对RAW264.7细胞的mirNAs调控及机制研究

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纳米二氧化钛对RAW264.7细胞的miRNAs调控及机制研究

MicroRNA在正常和肥厚心肌中的表达与功能学研究及鉴定

中国毒理学会第四届中青年学者科技论坛

作者：梁戈玉付艳云张艳秋马书梅隋静尹立红浦跃朴东南大学公共卫生学院环境医学工程教育部重点实验室

目的研究纳米二氧化钛（TiO2）对巨噬细胞的mirNAs表达谱影响及调控机制。方法以巨噬细胞为研究对象,应用高通量测序技术,检测纳米TiO2暴露后产生的mirNAs表达谱改变,筛选免疫相关的mirNAs,并通过生物信息学软件对差异表达mirNAs进行... 详细信息

目的研究纳米二氧化钛（TiO2）对巨噬细胞的mirNAs表达谱影响及调控机制。方法以巨噬细胞为研究对象,应用高通量测序技术,检测纳米TiO2暴露后产生的mirNAs表达谱改变,筛选免疫相关的mirNAs,并通过生物信息学软件对差异表达mirNAs进行调控通路分析,在此基础上对miR-350的生物学功能及靶基因调控进行研究。结果纳米TiO2暴露后使RAW264.7细胞mirNAs表达谱发生了明显改变,共有140个mirNAs发生差异表达。差异表达mirNAs可能参与了T cell receptor、B cell receptor、Natural killer cell mediated cytotoxicity等免疫相关信号通路的调节。miR-350可能通过对PIK3R3基因负向调控促进RAW264.7细胞的凋亡。结论研究为了解纳米TiO2暴露对机体免疫功能影响的可能机制提供了理论依据,但纳米材料的表观遗传调控机制仍有待大量研究去进一步探索。

关键词：纳米二氧化钛 RAW264.7细胞 mirNAs miR-350

来源： cnki会议评论

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MicroRNA在正常和肥厚心肌中的表达与功能学研究及鉴定

作者：潘淑娟南昌大学

学位级别：硕士

在本研究中,我们拟通过芯片分析microRNA在正常和肥厚心肌中的表达变化,结合生物信息学预测,寻找和明确microRNA参与心肌肥厚的线索:利用mRNA功能研究方法,确认microRNA对心肌肥厚的调控作用,并对这种调控作用的机制进行初步研究,为阐明... 详细信息

在本研究中,我们拟通过芯片分析microRNA在正常和肥厚心肌中的表达变化,结合生物信息学预测,寻找和明确microRNA参与心肌肥厚的线索:利用mRNA功能研究方法,确认microRNA对心肌肥厚的调控作用,并对这种调控作用的机制进行初步研究,为阐明microRNA在心脏发育、心肌肥厚和心律失常等心脏生理和病理生理过程中的功能作用提供新的理论依据,为心血管疾病防治提供新的思路和治疗策略。研究目的: (1)采用腹主动脉部分缩窄术,制备大鼠心肌肥厚模型。 (2)利用芯片技术寻找在肥厚的心肌组织中特异表达的microRNA (3)该特异性的microRNA对大鼠的胚胎心肌细胞(Hc)的影响 (4)探讨该特异性的microRNA导致心肌肥厚的机制方法 (1)20只雄性SD大鼠,体重180～210g,随机分成正常组5只、假手术组5只和模型组10只。分离腹主动脉和肾动脉后,在肾动脉上方约1cm处,将7号注射针头与腹主动脉一起结扎,然后抽出针头。7周后处死大鼠,取出心脏并解剖,计算HW/BW、LVW/BW并制作病理切片,HE染色,光镜下观察组织形态和纤维化程度。 (2)在7周后取出肥厚的心尖组织,用Trizol法提取心肌组织RNA,采用芯片技术检测mirNA的表达,并找到特异性表达的mirNA,随后通过mirNA荧光定量PCR试剂盒证实该mirNA确实在正常和肥厚的心肌组织中差异表达。 (3)构建表达该特异性microRNA的质粒载体,以Mock为对照,转染大鼠的胚胎心肌细胞(Hc);大鼠的胚胎心肌细胞(Hc)加AngⅡ(10mol/L)孵育48小时后,检测心肌细胞直径,采用mirNA荧光定量PCR试剂盒对该特异性的mirNA进行定量分析。 (4)将表达该特异性microRNA的质粒载体和Mock对照分别转染大鼠的胚胎心肌细胞(Hc),通过Real-time PCR的方法检测正常和肥厚的心肌细胞中β-myosin,α-actin,ANF及BNF基因的表达情况。采用免疫细胞化学的方法检测细胞骨架蛋白α-actinin的表达情况。用AnnexinV-PE试剂盒检测Hc细胞的凋亡情况。 (5)用生物信息学的方法预测miR-350的靶基因是JNK和MAPK14。在过表达miR-350的Hc细胞中,用Western blotting的方法检测靶基因JNK和MAPK14的蛋白表达;用RT-PCR的方法检测mRNA的表达。同时,我们采用免疫细胞化学的方法观察受JNK和MAPK14调节的下游基因NFATc的转核情况。并且构建了针对MAPK14基因的shRNA表达质粒,转染Hc细胞后,观察细胞形念的变化,并检测MAPK14基因的蛋白和mRNA水平的变化。实验结果: (1)与正常组相比,造模7周后,模型组IVSTd(2.40±0.03vs1.87+0.21,mm、LVPWTd(2.52±0.24vs1.77+0.17,mm)和LVDd(6.83±0.28vs4.50±0.19,mm)均有显著差异(P＜0.01),而假手术组三个指标均无明显变化(P＞0.05);解剖发现,模型组心脏明显大于正常组,左心室增厚显著。病理结果显示,模型组心肌细胞直径增大,细胞排列不整齐、间质纤维化明显。 (2)芯片结果分析发现miR-350在心肌肥厚的模型组表达量明显高于对照组,实时荧光定量PCR也证实miR-350在心肌肥厚的模型组表达量明显高于对照组,与芯片结果一致;而实时荧光定量PCR结果显示miR-350在AngⅡ诱导后的Hc细胞中与非诱导的Hc细胞中的表达量相比,并没有出现显著的变化。 (3)过表达miR-350 72小时后,实时定量PCR证实心肌肥厚的标志性基因β—myosin、α-actin、ANF及BNF,均出现上调。免疫细胞化学的方法检测细胞骨架蛋白α-actinin,也出现明显的增加。用AnnexinV-PE凋亡试剂盒检测,发现心肌细胞出现部分凋亡。 (4)通过生物信息学的方法预测出miR-350的靶基因是JNK和MAPK14。 (5)通过Western blotting的方法证实过表达miR-350的Hc细胞中,其靶基因JNK和MAPK14的蛋白表达水平下降,而mRNA水平则没有变化。同时发现,转染miR-350后,由JNK和MAPK14调节的NFATc的转核明显增多。Sh-MAPK14质粒转染后,MAPK14基因的蛋白和mRNA水平均出现下降,并且细胞出现了凋亡,同时伴随细胞肥大,但效果不如miR-350显著。结论 (1)肥厚与正常的心肌组织相比,mirNA表达存在差异。 (2)在大鼠胚胎的心肌细胞Hc细胞中,miR-350介导心肌细胞肥厚。 (3)miR-350的靶基因JNK和MAPK14共同参与miR-350调控的心肌肥厚。

关键词：心肌肥厚 miR-350 JNK MAPK14