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Local delivery of EGFR+NSCs-derived exosomes promotes neural regeneration post spinal cord injury via mir-34a-5p/HDAC6 pathway

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Bioactive Materials 2024年第3期33卷 424-443页

作者： Tian Qin Chengjun Li Yan Xu Yiming Qin Yuxin Jin Rundong He Zixiang Luo Jinyun Zhao Chunyue Duan Hongbin Lu Yong Cao Jianzhong Hu Department of Spine Surgery and Orthopaedics Xiangya HospitalCentral South UniversityXiangya Road 87Changsha410008China Key Laboratory of Organ Injury Aging and Regenerative Medicine of Hunan ProvinceXiangya Road 87Changsha410008China National Clinical Research Center for Geriatric Disorders Xiangya HospitalCentral South UniversityXiangya Road 87Changsha410008China Department of Sports Medicine Xiangya HospitalCentral South UniversityXiangya Road 87Changsha410008China

Spinal cord injury(SCI)causes severe axon damage,usually leading to permanent paraparesis,which still lacks effective regenerative *** studies have suggested that exosomes derived from neural stem cells(NSCs)may hold promise as attractive candidates for SCI *** Growth Factor Receptor positive NSC(EGFR+NSC)is a subpopulation of endogenous NSCs,showing strong regenerative capability in central nervous system *** the current study,we isolated exosomes from the EGFR+NSCs(EGFR+NSCs-Exos)and discovered that local delivery of EGFR+NSCs-Exos can effectively promote neurite regrowth in the injury site of spinal cord-injured mice and improve their neurological function *** the mirNA-seq,we firstly characterized the microRNAs(mirNAs)cargo of EGFR+NSCs-Exos and identified mir-34a-5p which was highly enriched in EGFR+NSCs derived *** further interpreted that exosomal mir-34a-5p could be transferred to neurons and inhibit the HDAC6 expression by directly binding to its mRNA,contributing to microtubule stabilization and autophagy induction for aiding SCI ***,our research demonstrated a novel therapeutic approach to improving neurological functional recovery by using exosomes secreted from a subpopulation of endogenous NSCs and providing a precise cell-free treatment strategy for SCI repair.

关键词： Spinal cord injury Exosomes Neural regeneration mir-34a-5p HDAC6

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mir-34a-5p及AKT1基因在子宫内膜异位症子宫内膜组织中的表达及其对子宫内膜基质细胞迁移和侵袭的影响

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解放军医学杂志 2020年第5期45卷 503-508页

作者：冯婉琴邓月秀马颖南方医科大学珠江医院妇产科广州510282 桂林市妇幼保健院妇产科广西桂林541001

目的探讨mir-34a-5p及AKT1基因在子宫内膜异位症(EM)患者子宫内膜组织中的表达及其对子宫内膜基质细胞(ESC)迁移和侵袭的影响。方法收集2018年1月-2019年6月因良性妇科疾病在南方医科大学珠江医院妇产科行子宫切除术的患者91例,分为EM组... 详细信息

目的探讨mir-34a-5p及AKT1基因在子宫内膜异位症(EM)患者子宫内膜组织中的表达及其对子宫内膜基质细胞(ESC)迁移和侵袭的影响。方法收集2018年1月-2019年6月因良性妇科疾病在南方医科大学珠江医院妇产科行子宫切除术的患者91例,分为EM组(n=68)与非EM组(n=23),获取其子宫内膜组织,采用原位杂交及免疫组化法检测mir-34a-5p及AKT1基因在子宫内膜组织中的表达情况;使用脂质体-3000将mir-34a-5p mimic和阴性对照RNA(mir-NC)对ESC细胞进行转染,构建mir-34a-5p mimic组及mir-NC组细胞模型,培养12、24、48 h后,采用CCK-8法检测细胞增殖率,采用细胞迁移、侵袭、凋亡及自噬能力实验检测mir-34a-5p对ESC增殖、迁移、侵袭、凋亡及自噬的影响。结果EM组子宫内膜组织中的mir-34a-5p阳性表达率低于非EM组(16.2%vs.82.6%,χ~2=34.323,p581,pmir-NC组培养12、24、48 h后的细胞增殖率均高于mir-34a-5p mimic组,差异有统计学意义(p5);mir-NC组细胞迁移能力(65.00%±5.00%)高于mir-34a-5p mimic组(30.67%±4.04%),差异有统计学意义(t=9.25,p5);mir-NC组的侵袭能力较mir-34a-5p mimic组明显增强[(88.0±8.5)个vs.(32.3±6.1)个,t=9.179,p5];mir-NC组的细胞凋亡率(9.33%±3.51%)明显低于mir-34a-5p mimic组(18.00%±2.00%);mir-NC组中LC3基因的表达水平明显低于mir-34a-5p mimic组[(0.19±0.04)vs.(0.39±0.03),t=8.02,p5]。结论mir-34a-5p可能通过靶向AKT1基因来影响ESC的增殖、迁移、侵袭、凋亡及自噬功能,从而参与EM的发病。

关键词：子宫内膜异位症 mir-34a-5p AKT1基因免疫组化原位杂交迁移侵袭

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mir-34a-5p通过调控CDK6表达和pI3K/AKT信号通路调节滋养层细胞的增殖、浸润和凋亡

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南方医科大学学报 2020年第1期40卷 79-86页

作者：李勤许娟秀江西省妇幼保健院产科江西南昌330006 江西省妇幼保健院肿瘤科江西南昌330006

目的探讨mir-34a-5p及CDK6对滋养层细胞增殖,浸润和凋亡的作用和下游机制以及二者的调节关系。方法培养滋养层细胞HTR-8/Svneo和人绒毛膜癌细胞系BeWo和JEG-3HTR-8/Svneo,使用RTqpCR法检测3种细胞中mir-34a-5p的表达差异。根据对HTR-8/S... 详细信息

目的探讨mir-34a-5p及CDK6对滋养层细胞增殖,浸润和凋亡的作用和下游机制以及二者的调节关系。方法培养滋养层细胞HTR-8/Svneo和人绒毛膜癌细胞系BeWo和JEG-3HTR-8/Svneo,使用RTqpCR法检测3种细胞中mir-34a-5p的表达差异。根据对HTR-8/Svneo细胞的不同处理进行如下分组:无处理的HTR-8/Svneo细胞(对照组);mir-34a-5p拟似物mimic转染细胞(mimic组),pcDNA-CDK6和mimic共转染HTR-8/Svneo细胞(pcDNA-CDK6+mimic组),mir-34a-5p抑制剂inhibitor转染HTR-8/Svneo细胞(inhibitor组)。MTT法检测细胞增殖,ELISA法测定caspase 3活性检测细胞凋亡水平,Transwell实验检测细胞浸润能力;Western blot检测细胞周期依赖性蛋白激酶CDK6,凋亡标记物cleaved-caspase 3,浸润标记物MMp-9的表达;荧光素酶报告基因实验确认mir-34a-5p对CDK-6的直接靶向关系。结果过表达mir-34a-5p抑制HTR-8/Svneo细胞的增殖活性(p=0.000)和浸润能力(p=0.049),下调细胞中MMp-9(p=0.004)和CDK6(p=0.014)的表达水平,上调caspase 3活性(p=0.018)和cleaved caspase 3的表达水平(p=0.003);CDK6是mir-34a-5p的靶基因,过表达CDK6削弱mir-34a-5p对细胞增殖(p=0.000)、凋亡(p=0.015)和浸润(p=0.046)的作用;使用IFG-1激活pI3K/AKT通路部分逆转mir-34a-5p对细胞增殖(p=0.011)、凋亡(p=0.004)和浸润(p=0.002)的作用。结论 mir-34a-5p通过调控CDK6表达和pI3K/AKT信号通路激活调节滋养层细胞的增殖,浸润和凋亡。

关键词：滋养层细胞 mir-34a-5p 细胞周期依赖性激酶6 增殖活性凋亡浸润

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mir-34a-5p/pLCD3轴调控骨关节炎进展的机制

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中国组织工程研究 2024年第33期28卷 5320-5325页

作者：应璞许岳路通薛燚缪逸鸣南京中医药大学常熟附属医院江苏省常熟市215500

背景:目前已有针对mirNA/mRNA轴调节骨关节炎疾病进程的分子机制研究。先前生物信息学研究发现具有临床预测价值的mRNA(磷脂酶Cδ3:phospholipase C delta 3,pLCD3)及其靶向mirNA(mir-34a-5p),尚缺实验验证其调控骨关节炎的具体作用及... 详细信息

背景:目前已有针对mirNA/mRNA轴调节骨关节炎疾病进程的分子机制研究。先前生物信息学研究发现具有临床预测价值的mRNA(磷脂酶Cδ3:phospholipase C delta 3,pLCD3)及其靶向mirNA(mir-34a-5p),尚缺实验验证其调控骨关节炎的具体作用及机制。目的:探讨mir-34a-5p/pLCD3轴对骨关节炎进展的调控作用及机制。方法:选择15例膝骨关节炎患者的滑膜为骨关节炎组,同时选择同期因创伤致髌骨骨折行内固定术的15例年轻患者的健康滑膜为对照组,Real-time pCR法检测滑膜中pLCD3及mir-34a-5p的表达。通过细胞转染的方法,将人滑膜关节炎成纤维细胞(human fibroblast like synovial cells-osteoarthritis,HFLS-OA)进行处理,并分为mir-34a-5p模拟物组、pCDH-pLCD3组、mir-34a-5p模拟物+pCDH-pLCD3组、mir-34a-5p抑制剂组、si-pLCD3组、mir-34a-5p抑制剂+si-pLCD3组,通过Real-time pCR法检测pLCD3和mir-34a-5p表达的关系;通过CCK-8法、细胞划痕实验检测各组HFLS-OA细胞活力及细胞迁移的影响;使用Western Blot法检测凋亡标记蛋白表达水平;使用ELISA法检测炎症因子的表达。结果与结论:①pLCD3是mir-34a-5p的直接靶标,同时pLCD3和mir-34a-5p表达水平呈负相关。②pLCD3上调会促进HFLS-OA细胞的增殖并抑制细胞迁移,而mir-34a-5p上调会显著抑制HFLS-OA细胞的活性并增强细胞迁移;mir-34a-5p过表达使HFLS-OA细胞Casp3和Casp9蛋白水平显著升高,而pLCD3过表达则表现出相反趋势。③pLCD3过表达显著增加了HFLS-OA细胞白细胞介素6和肿瘤坏死因子α的表达,而mir-34a-5p模拟物则表现出保护活性。④结果说明,mir-34a-5p/pLCD3轴可能通过调节滑膜细胞的炎症过程或凋亡来影响骨关节炎的进展。

关键词：骨关节炎滑膜 mir-34a-5p 磷脂酶Cδ3 pLCD3 白细胞介素6 肿瘤坏死因子α

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mir-34a-5p通过调节Nrf2-Keap1信号通路介导年龄相关性白内障氧化应激的实验研究

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眼科新进展 2019年第7期39卷 635-639页

作者：唐雷徐曼华王妍茜彭正虹康刚劲西南医科大学附属医院眼科

目的探讨mir-34a-5p通过调节Nrf2-Keap1信号通路介导年龄相关性白内障的氧化应激。方法检测年龄相关性白内障患者和正常透明晶状体前囊组织及人晶状体上皮细胞氧化应激模型中mir-34a-5p和预测靶基因Nrf2表达及人晶状体上皮细胞内活性氧(... 详细信息

目的探讨mir-34a-5p通过调节Nrf2-Keap1信号通路介导年龄相关性白内障的氧化应激。方法检测年龄相关性白内障患者和正常透明晶状体前囊组织及人晶状体上皮细胞氧化应激模型中mir-34a-5p和预测靶基因Nrf2表达及人晶状体上皮细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)活性。将mir-34a-5p模拟物、模拟物对照、mir-34a-5p抑制剂和抑制剂对照分别转染人晶状体上皮细胞,然后用400μmol·L^-1 H2O2作用8 h后检测mir-34a-5p、Nrf2 mRNA和Nrf2蛋白表达,并检测人晶状体上皮细胞增殖活性。结果正常晶状体前囊组织中mir-34a-5p的相对表达量为1.03±0.29,Nrf2 mRNA的相对表达量为1.31±0.39;年龄相关性白内障组织中mir-34a-5p的相对表达量为2.69±0.99,Nrf2 mRNA的相对表达量为0.64±0.25。与正常组织相比,年龄相关性白内障晶状体组织中mir-34a-5p表达显著升高,Nrf2表达显著降低。Nrf2蛋白在年龄相关性白内障晶状体组织中表达也显著降低(均为pmir-34a-5p表达显著升高,靶基因Nrf2表达显著降低,内源性ROS水平显著升高(均为pmir-34a-5p模拟物转染人晶状体上皮细胞后,mir-34a-5p表达显著升高,Nrf2表达显著降低,内源性ROS水平显著升高,细胞增殖活性显著降低(均为pmir-34a-5p抑制剂转染人晶状体上皮细胞后,mir-34a-5p表达显著降低,Nrf2表达显著升高,内源性ROS水平显著降低,细胞增殖活性显著升高(均为pmir-34a-5p的直接靶点。结论 mir-34a-5p通过调节Nrf2-Keap1信号通路增加晶状体上皮细胞氧化应激,抑制晶状体上皮细胞的增殖,从而参与年龄相关性白内障的发生发展过程。

关键词： mir-34a-5p Nrf2-Keap1信号通路年龄相关性白内障氧化应激增殖

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mir-34a-5p对ARpE-19细胞TGF-β/Smad通路相关蛋白表达及细胞增殖、迁移和上皮-间质转化的影响

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眼科新进展 2022年第9期42卷 690-694页

作者：庄海容吴子东陈雪红李成军海南医学院第二附属医院眼科海南省海口市570311

目的探讨mir-34a-5p对ARpE-19细胞TGF-β/Smad通路相关蛋白表达及细胞增殖、迁移和上皮-间质转化(EMT)的影响。方法将ARpE-19细胞分为4组:对照组、转化生长因子(TGF)-β1组、mir-34a-5p过表达组与复合干预组,对照组与TGF-β1组采用Lipof... 详细信息

目的探讨mir-34a-5p对ARpE-19细胞TGF-β/Smad通路相关蛋白表达及细胞增殖、迁移和上皮-间质转化(EMT)的影响。方法将ARpE-19细胞分为4组:对照组、转化生长因子(TGF)-β1组、mir-34a-5p过表达组与复合干预组,对照组与TGF-β1组采用Lipofectamine 2000转染试剂转染对照模拟物,mir-34a-5p过表达组与复合干预组转染mir-34a-5p模拟物,培养24 h后采用无血清培养基饥饿培养12 h,TGF-β1组与mir-34a-5p过表达组均添加10 mg·L^(-1)的TGF-β1,复合干预组添加10 mg·L^(-1)的TGF-β1与10μmol·L^(-1)的TGF-β通路激活剂SRI-011381,各组细胞继续培养24 h,测定细胞增殖、迁移与EMT。采用Western blot检测细胞TGF-β/Smad通路相关蛋白的表达水平,Ki67荧光染色检测细胞增殖情况,免疫荧光染色测定细胞EMT相关蛋白表达情况,划痕实验和Transwell实验测定细胞的迁移和侵袭能力。结果与对照组相比,TGF-β1组细胞内TGF-β受体(TGF-βR)1、TGF-βR2、磷酸化Smad2(p-Smad2)和p-Smad3的表达水平均增高(均为p5)。与TGF-β1组相比,过表达mir-34a-5p能够明显逆转TGF-β1对TGF-β/Smad信号通路的激活作用。与mir-34a-5p过表达组相比,复合干预组细胞内TGF-β/Smad信号通路明显被激活。与TGF-β1组相比,mir-34a-5p过表达组细胞Ki67阳性率为(6.67±1.52)%,明显降低(p5)。与mir-34a-5p过表达组相比,复合干预组细胞Ki67阳性率为(16.67±1.53)%,显著升高(p5)。划痕实验和Transwell实验结果显示:与对照组相比,TGF-β1能够促进ARpE-19细胞迁移和侵袭。过表达mir-34a-5p能够明显抑制TGF-β1组ARpE-19细胞的迁移和侵袭能力。在复合干预组内,TGF-β通路激活剂SRI-011381能够明显逆转过表达mir-34a-5p对ARpE-19细胞迁移能力的抑制作用。免疫荧光染色结果显示:与对照组相比,TGF-β1能够明显提高ARpE-19细胞内α-SMA和纤维连接蛋白表达水平,并抑制钙黏蛋白E的表达。与TGF-β1组相比,过表达mir-34a-5p能够明显抑制ARpE-19细胞发生EMT。在复合干预组内,TGF-β通路激活剂SRI-011381能够缓解过表达mir-34a-5p对ARpE-19细胞EMT的抑制作用。结论mir-34a-5p通过靶向失活TGF-β/Smad信号通路抑制ARpE-19细胞的增殖、迁移与EMT。

关键词：视网膜色素上皮细胞 mir-34a-5p 转化生长因子通路上皮-间质转化

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mir-34a-5p通过调控MDM4对糖尿病性白内障晶状体上皮细胞间质转化的影响

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眼科新进展 2023年第11期43卷 858-862页

作者：王心淼王玉珏郑丽莹张敬轩陈晔内蒙古自治区肿瘤医院眼科内蒙古自治区呼和浩特市010010 内蒙古医科大学内蒙古自治区呼和浩特市010010 内蒙古自治区人民医院内分泌科内蒙古自治区呼和浩特市010017

目的探讨mir-34a-5p通过调控鼠双微体4(MDM4)对糖尿病性白内障晶状体上皮细胞(LEC)间质转化(EMT)的影响。方法体外培养LEC,对LEC进行转染及双荧光素酶检测。实验分为对照组、高糖组、mir-NC组和mir-34a-5p抑制物组。采用MTT法和细胞... 详细信息

目的探讨mir-34a-5p通过调控鼠双微体4(MDM4)对糖尿病性白内障晶状体上皮细胞(LEC)间质转化(EMT)的影响。方法体外培养LEC,对LEC进行转染及双荧光素酶检测。实验分为对照组、高糖组、mir-NC组和mir-34a-5p抑制物组。采用MTT法和细胞划痕实验检测LEC细胞增殖和迁移水平,采用酶联免疫吸附试验检测LEC中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)水平,采用RT-qpCR检测LEC中mir-34a-5p、MDM4、转化生长因子-β2(TGF-β2)mRNA水平,采用Western blot检测LEC中MDM4、TGF-β2、β-catenin和E-cadherin蛋白表达水平。结果 mir-34a-5p对MDM4有潜在的结合位点。与对照组和mir-NC组相比,mir-34a-5p抑制物组LEC中MDM4-MUT荧光素酶活性均明显降低(均为p5),对照组和mir-NC组LEC中MDM4-MUT荧光素酶活性差异无统计学意义(p>0.05);对照组、mir-NC组及mir-34a-5p抑制物组LEC中MDM4-WT荧光素酶活性差异无统计学意义(p>0.05)。与对照组相比,高糖组、mir-NC组和mir-34a-5p抑制物组LEC细胞增殖率、划痕愈合率、MDA、mir-34a-5p、TGF-β2 mRNA、TGF-β2蛋白和β-catenin蛋白均增加,SOD、MDM4 mRNA和蛋白、E-cadherin蛋白均降低(均为p5);与高糖组和mir-NC组相比,mir-34a-5p抑制物组LEC细胞增殖率、划痕愈合率、MDA、mir-34a-5p、TGF-β2 mRNA和蛋白、β-catenin蛋白均降低,SOD、MDM4 mRNA和蛋白、E-cadherin蛋白均增加(均为p5);高糖组与mir-NC组LEC各指标差异均无统计学意义(均为p>0.05)。结论 mir-34a-5p在糖尿病性白内障LEC细胞模型中表达上调,下调mir-34a-5p可以靶向促进MDM4的表达,抑制高糖诱导的LEC的EMT进程。

关键词： mir-34a-5p 鼠双微体4 糖尿病性白内障间质转化

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mir-34a-5p过表达靶向抑制MET对肝癌细胞HepG2恶性增殖、侵袭和肿瘤形成的影响

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安徽医科大学学报 2021年第5期56卷 693-699页

作者：杨慧萍朱梦佳王淋赵文霞陈雨河南中医药大学郑州450000 河南中医药大学第一附属医院郑州450000 郑州市妇幼保健院郑州450000

目的探究mir-34a-5p过表达对肝癌细胞HepG2恶性增殖、侵袭和肿瘤形成的影响。方法荧光素酶实验检测mir-34a-5p与MET靶向关系。构建MET pcDNA载体过表达MET,将mir-34a-5p与pcDNA-MET单独或联合转染HepG2,将细胞随机分为4组:Control、mimi... 详细信息

目的探究mir-34a-5p过表达对肝癌细胞HepG2恶性增殖、侵袭和肿瘤形成的影响。方法荧光素酶实验检测mir-34a-5p与MET靶向关系。构建MET pcDNA载体过表达MET,将mir-34a-5p与pcDNA-MET单独或联合转染HepG2,将细胞随机分为4组:Control、mimic、MET和mimic+MET组进行后续实验。克隆形成法检测细胞增殖、流式细胞仪检测细胞凋亡、Transwell检测细胞侵袭、Western blot检测Ki67、pCNA、Bax、Bcl-2、Caspase-3蛋白表达水平;构建肝癌裸鼠移植瘤模型,将裸鼠随机分为Control组和mimic组,检测裸鼠30 d肿瘤体积变化和第30天肿瘤重量,通过免疫组化方法检测Ki67阳性表达率、TUNEL染色细胞凋亡。结果结果表明,mir-34a-5p和MET存在直接靶向作用关系。与Control组相比较,mimic组细胞克隆形成率降低(p5),Ki67、pCNA蛋白水平降低(p5),细胞凋亡率升高(p5),Bax/Bcl-2、cleaved Caspase-3/Caspase-3比值升高(p5),侵袭细胞数降低(p5)。MET组细胞克隆形成率升高(p5),Ki67、pCNA蛋白水平升高(p5),细胞凋亡率降低(p5),Bax/Bcl-2、cleaved Caspase-3/Caspase-3比值降低(p5),侵袭细胞数升高(p5);与MET组相比较,mimic+MET组细胞克隆形成率降低(p5),Ki67、pCNA蛋白水平降低(p5),细胞凋亡率升高(p5),Bax/Bcl-2、cleaved Caspase-3/Caspase-3比值升高(p5),侵袭细胞数降低(p5);裸鼠成瘤实验中,与Control组相比较,mimic组第25、30天肿瘤体积降低(p5),肿瘤组织重量降低(p5),Ki67阳性细胞数降低(p5),肿瘤组织细胞凋亡率升高(p5)。结论mir-34a-5p过表达靶向MET抑制抑制HepG2增殖、侵袭并促进细胞凋亡,抑制肝癌裸鼠移植瘤肿瘤的生长。

关键词：肝癌 mir-34a-5p 间质表皮转化因子 HepG2

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mir-34a-5p通过靶向IMp3、pD-L1对乳腺癌细胞生物学行为的影响

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中国比较医学杂志 2023年第7期33卷 67-77页

作者：蒋莉萍王霞彭心华江西省吉安市妇幼保健院病理科江西吉安343000 井冈山大学医学部江西吉安343000 江西省吉安市妇幼保健院检验科江西吉安343000

目的探究mir-34a-5p通过靶向胰岛素样生长因子ⅡmRNA结合蛋白3(IMp3)、程序性死亡配体-1(pD-L1)表达对乳腺癌细胞生物学行为的影响。方法利用Human protein Atlas和GEpIA在线分析TCGA数据库和GTEx项目中乳腺癌及正常组织IMp3、pD-L1的... 详细信息

目的探究mir-34a-5p通过靶向胰岛素样生长因子ⅡmRNA结合蛋白3(IMp3)、程序性死亡配体-1(pD-L1)表达对乳腺癌细胞生物学行为的影响。方法利用Human protein Atlas和GEpIA在线分析TCGA数据库和GTEx项目中乳腺癌及正常组织IMp3、pD-L1的表达水平、患者的预后生存期;qRT-pCR、Western blot检测160例患者乳腺癌组织及癌旁正常组织中mir-34a-5p、IMp3、pD-L1 mRNA与蛋白表达;pearson检验分析mir-34a-5p分别与IMp3 mRNA、pD-L1 mRNA的相关性;免疫组化检测患者乳腺癌及正常组织IMp3、pD-L1、白细胞分化抗原44变异体6(CD44v6)的表达,分析IMp3、pD-L1表达水平与患者临床病理参数的关系;靶基因预测、双荧光素酶报告实验验证mir-34a-5p对IMp3、pD-L1的靶向调控作用。MCF7细胞分为control组、mir-NC组、mir-34a-5p组、mir-NC+pcDNA-NC组、mir-NC+IMp3组、mir-NC+pD-L1组、mir-34a-5p+pcDNA-NC组、mir-34a-5p+IMp3组和mir-34a-5p+pD-L1组,采用MTT法、克隆形成、划痕、Transwell小室实验测定细胞增殖活力、迁移、侵袭能力;Western blot检测IMp3、pD-L1、CD44v6、基质金属蛋白酶2(MMp-2)、MMp-9、E-钙黏蛋白(E-cadherin)表达水平。结果生物数据库显示乳腺癌组织IMp3、pD-L1表达水平越高,患者生存期越短(p5);qRT-pCR、Western blot结果显示,乳腺癌组织mir-34a-5p表达水平明显低于正常组织,IMp3、pD-L1 mRNA与蛋白表达水平明显高于正常组织,mir-34a-5p表达分别与IMp3 mRNA、pD-L1 mRNA呈明显负相关(p5);免疫组化结果显示,乳腺癌组织IMp3、pD-L1、CD44v6呈阳性表达,且IMp3、pD-L1表达越高,TNM分期越晚,肿瘤分化程度越低、越容易发生淋巴结和远处转移(p5);双荧光素酶实验验证了mir-34a-5p对IMp3、pD-L1的靶向调控作用;与control组和mir-NC组相比,mir-34a-5p组的细胞活力、单克隆形成数目、划痕愈合率、细胞侵袭数目、IMp3、pD-L1、CD44v6、MMp-2、MMp-9蛋白表达明显降低,E-cadherin蛋白表达明显升高,与mir-NC+pcDNA-NC组相比,mir-NC+IMp3组和mir-NC+pD-L1组细胞活力、单克隆形成数目、划痕愈合率、细胞侵袭数目、IMp3、pD-L1、CD44v6、MMp-2、MMp-9蛋白表达明显升高,E-cadherin蛋白表达明显降低,与mir-34a-5p+pcDNA-NC组相比,mir-34a-5p+IMp3组和mir-34a-5p+pD-L1组细胞活力、单克隆形成数目、划痕愈合率、细胞侵袭数目、IMp3、pD-L1、CD44v6、MMp-2、MMp-9水平升高,E-cadherin水平降低(p5)。结论mir-34a-5p能够通过靶向调控IMp3、pD-L1表达抑制乳腺癌细胞的增殖、迁移、侵袭和上皮间质化(EMT)。

关键词： mir-34a-5p 胰岛素样生长因子ⅡmRNA结合蛋白3 程序性死亡配体-1 乳腺癌增殖侵袭

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淫羊藿总黄酮调控mir-34a-5p保护成骨细胞脂多糖诱导性损伤的作用机制

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中国药理学通报 2020年第8期36卷 1158-1164页

作者：张丽张扬王绪平黄孝闻寿旦浙江中医药大学药学院浙江省中医药研究院中药研究中心浙江杭州310000

目的探讨淫羊藿总黄酮(total flavones of epimedium,TFE)调控mir-34a-5p保护脂多糖(lipopolysaccharide,LpS)诱导的成骨细胞损伤的作用机制。方法建立LpS诱导的大鼠成骨细胞模型,给予TFE含药血清,MTT法检测成骨细胞活性。构建荧光素酶... 详细信息

目的探讨淫羊藿总黄酮(total flavones of epimedium,TFE)调控mir-34a-5p保护脂多糖(lipopolysaccharide,LpS)诱导的成骨细胞损伤的作用机制。方法建立LpS诱导的大鼠成骨细胞模型,给予TFE含药血清,MTT法检测成骨细胞活性。构建荧光素酶报告基因,检测荧光活性,脂质体瞬时转染mir-34a-5p模拟物和抑制剂。RT-pCR分析转染前后mir-34a-5p、SMAD2、ALp、RUNX2mRNA的表达,Western blot检测SMAD2、RUNX2、ALp蛋白表达。结果TFE能提高LpS诱导的成骨细胞活性,促进RUNX2、ALp蛋白表达(ppS诱导的成骨细胞中可促进mir-34a-5p的表达,抑制SMAD2的mRNA及蛋白表达水平。mir-34a-5p转染细胞后,显著降低荧光素酶报告基因的活性,促进成骨细胞RUNX2、ALp的蛋白表达。抑制mir-34a-5p可促进成骨细胞SMAD2mRNA及蛋白表达,并抑制成骨因子的表达(p5),逆转了TFE对LpS诱导的成骨细胞损伤的保护作用。结论TFE通过调控mir-34a-5p与SMAD2相互作用,减轻LpS诱导的成骨细胞损伤。

关键词：淫羊藿总黄酮脂多糖成骨细胞 mir-34a-5p SMAD2 RUNX2

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