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mir-32-5p aggravates intestinal epithelial cell injury in pediatric enteritis induced by Helicobacter pylori

World Journal of Gastroenterology 2019年第41期25卷 6222-6237页

作者： Jing Feng Jian Guo Jun-ping Wang Bao-Feng Chai Institute of Loess plateau Shanxi UniversityTaiyuan 030006Shanxi ProvinceChina Department of Gastroenterology Shanxi Provincial People's HospitalThe Affiliated People's Hospital of Shanxi Medical UniversityTaiyuan 030012Shanxi ProvinceChina Department of General Surgery Shanxi Provincial People's HospitalThe Affiliated People's Hospital of Shanxi Medical UniversityTaiyuan 030012Shanxi ProvinceChina

BACKGROUND pediatric enteritis is one of the infectious diseases in the digestive system that causes a variety of digestive problems,including diarrhea,vomiting,and bellyache in ***,Helicobacter pylori(***)infection is one of the common factors to cause pediatric *** has been demonstrated that aberrant expression of microRNAs(mirNAs)is found in gastrointestinal diseases caused by ***,and we discovered a significant increase of mir-32-5p in ***-related pediatric ***,the exact role of mir-32-5p in it is still *** To investigate the role of aberrant mir-32-5p in pediatric enteritis induced by *** mir-32-5p expression was detected by quantitative real time-polymerase chain *** biological role of mir-32-5p in ***-treated intestinal epithelial cells was evaluated by Cell Counting Kit-8 assay and flow *** potential target of mir-32-5p was predicted with TargetScanHuman and verified by luciferase *** downstream mechanism of mir-32-5p was explored by using molecular biology *** We found that mir-32-5p was overexpressed in serum of ***-induced pediatric *** investigation revealed that *** infection promoted the death of intestinal epithelial cells,and increased mir-32-5p ***,mir-32-5p mimic further facilitated apoptosis and inflammatory cytokine secretion of intestinal epithelial *** exploration revealed that SMAD family member 6(SMAD6)was the direct target of mir-32-5p,and SMAD6 overexpression partially rescued cell damage induced by *** following experiments showed that mir-32-5p/SMAD6 participated in the apoptosis of intestinal epithelial cells induced by transforming growth factor-β-activated kinase 1(TAK1)-p38 activation under *** *** Our work uncovered the crucial role of aberrant expression of mir-32-5p in ***–related pediatric enteritis,and suggested that the TAK1-p38

关键词： mir-32-5p SMAD family member 6 Transforming growth factor-β-activated kinase 1 Apoptosis Enteritis Helicobacter pylori

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mir-32-5p通过靶向下调EZH2的表达抑制胰腺癌pANC-1细胞的恶性生物学行为与裸鼠移植瘤生长

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中国肿瘤生物治疗杂志 2022年第6期29卷 557-566页

作者：柳君君张燕燕雷衡阳甘肃医学院附属医院普外科甘肃平凉744000 甘肃省平凉市第二人民医院妇产科甘肃平凉744099

目的:探究mir-32-5p通过靶向zeste基因增强子人类同源物2(EZH2)对胰腺癌pANC-1细胞恶性生物学行为的影响及其分子机制。方法:利用GEpIA数据库分析胰腺癌组织中EZH2的表达水平及其与患者的预后生存期的关系,并分析mir-32-5p表达与患者临... 详细信息

目的:探究mir-32-5p通过靶向zeste基因增强子人类同源物2(EZH2)对胰腺癌pANC-1细胞恶性生物学行为的影响及其分子机制。方法:利用GEpIA数据库分析胰腺癌组织中EZH2的表达水平及其与患者的预后生存期的关系,并分析mir-32-5p表达与患者临床病理因素的关系。qpCR法检测正常胰腺HpDE6-C7细胞和胰腺癌pANC-1、AspC-1、SW1990细胞中mir-32-5p和EZH2 mRNA的表达,通过Lipofectamine^(TM)2000将mir-NC、mir-32-5p mimic、mir-32-5p inhibitor、pcDNA-NC、pcDNA EZH2质粒分别转染pANC-1细胞,其分为对照组(不转染)、mir-NC组(转染mir-NC)、mir-32-5p mimic组(转染mir-32-5p mimic)、Anti-mir-32-5p组(转染mir-32-5p inhibitor)、mir-NC+pcDNA-NC组(转染mir-NC+pcDNA-NC)、mir-NC+pcDNA EZH2组(转染mir-NC+pcDNA EZH2)、mir-32-5p mimic+pcDNA-NC组(转染mir-32-5p mimic+pcDNA-NC)、mir-32-5p mimic+pcDNA EZH2组(转染mir-32-5p mimic+pcDNA EZH2)。双荧光素酶报告基因实验验证mir-32-5p与EZH2的靶向关系;MTT法及克隆形成实验检测各组细胞的增殖能力,划痕愈合实验检测各组细胞的迁移能力;Transwell小室实验检测各组细胞的侵袭能力,WB法检测各组细胞EZH2、E-cadherin、N-cadherin的表达;裸鼠成瘤实验检测转染后各组pANC-1细胞移植瘤的生长情况,免疫组化染色法观察移植瘤组织中Ki67和MMp-2的表达。结果:GEpIA数据库显示胰腺癌组织中EZH2的表达水平高于癌旁组织,患者预后生存期与EZH2的表达水平呈负相关(均p5);mir-32-5p表达水平与胰腺癌神经浸润、肿瘤分化程度、TNM分期、淋巴结转移有明显的关联(均p5);与HpDE6-C7细胞相比,pANC-1、AspC-1、SW1990细胞中mir-32-5p呈高表达、EZH2 mRNA呈低表达、mir-32-5p表达水平与EZH2表达水平呈负相关(均p5)。mir-32-5p靶向EZH2且抑制其表达(均p5);过表达mir-32-5p能够下调Ki67、MMp-2、N-cadherin表达水平、上调E-cadherin表达水平,抑制pANC-1细胞的增殖、迁移和侵袭能力,抑制移植瘤质量增加(均p5)。结论:mir-32-5p能够靶向调控EZH2从而影响胰腺癌pANC-1细胞的增殖、迁移、侵袭、EMT进程及裸鼠体内移植瘤的生长。

关键词： mir-32-5p zeste基因增强子人类同源物2 胰腺癌 pANC-1细胞增殖迁移侵袭上皮间质转化

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mir-32-5p通过STAT3/pTEN通路对ApoE基因敲除小鼠动脉粥样硬化斑块的影响

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医学动物防制 2023年第10期39卷 989-993,997,F0003页

作者：马香书苑可心李永辉赵培路永刚帖彦清河北省人民医院检验科河北石家庄050051 河北省人民医院心内一科河北省疾病预防控制中心

目的研究微RNA(microRNA,mirNA)-32-5p(mir-32-5p)对载脂蛋白E(apolipoprotein E,ApoE)基因敲除(ApoE^(-/-))小鼠动脉粥样硬化的作用及其是否通过信号转导和转录活化因子3(signal transducer and activator of transcription 3,STAT3)/磷酸酶及张力蛋白同源物(phosphates and tensin homologue deleted on chromosome ten,pTEN)通路影响巨噬细胞极化与动脉粥样硬化之间的联系。方法将6~8周龄动脉粥样硬化雄性ApoE^(-/-)小鼠随机分为实验组和模型组,实验组通过给小鼠注射mir-32-5p慢病毒构建过表达模型,模型组注射同等剂量生理盐水。4周后解剖小鼠,留取主动脉组织常规石蜡切片,采用苏木精-伊红(hematoxylin and eosin staining,HE)染色、免疫组化、免疫荧光法分别检测主动脉斑块面积及斑块内巨噬细胞含量;通过Western blotting(WB)检测主动脉斑块和体外培养巨噬细胞中磷酸化的信号转导和转录活化因子3(phosphorylated signal transducer and activator of transcription 3,p-STAT3)、pTEN、CCAAT增强子结合蛋白β(CCAT/enhancer-binding protein beta,C/EBp-β)等相关蛋白表达量。结果与模型组相比,实验组小鼠主动脉斑块面积明显缩小(Z=-3.477,pppp-STAT3(t=-10.381,ppβ(t=-6.205,ppTEN(t=7.057,pptor/CD206)(t=-5.386,pp5.701,ppp-STAT3(t=-12.401,pp-β(t=-4.755,ppTEN(t=21.729,pmir-32-5p过表达可通过激活STAT3通路抑制pTEN,促进巨噬细胞向M2表型转化,发挥保护动脉粥样硬化的作用。

关键词： mir-32-5p pTEN 动脉粥样硬化巨噬细胞 ApoE基因敲除小鼠

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mir-32-5p靶向ZEB1、ZEB2基因调控乳腺癌增殖和侵袭能力的机制

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临床与实验病理学杂志 2021年第3期37卷 264-270页

作者：俞杨姚嘉杨时平李冠乔海南省人民医院乳腺外科海口570311

目的探讨ZEB1和ZEB2在乳腺癌中的作用及mir-32-5p对乳腺癌调控的分子机制。方法通过Western blot和qRT-pCR检测乳腺癌和癌旁组织中ZEB1、ZEB2和mir-32-5p的表达,筛选出ZEB1和ZEB2高表达的乳腺癌细胞系,采用Western blot和qRT-pCR检测敲... 详细信息

目的探讨ZEB1和ZEB2在乳腺癌中的作用及mir-32-5p对乳腺癌调控的分子机制。方法通过Western blot和qRT-pCR检测乳腺癌和癌旁组织中ZEB1、ZEB2和mir-32-5p的表达,筛选出ZEB1和ZEB2高表达的乳腺癌细胞系,采用Western blot和qRT-pCR检测敲减效率。应用克隆形成、迁移和侵袭实验检测敲减ZEB1或ZEB2后对乳腺癌细胞生物学行为的影响,Western blot检测上皮-间质转化相关蛋白(E-cadherin、vimentin)的表达。双荧光素酶报告系统检测mir-32-5p与ZEB1或ZEB23′UTR区域的结合。Western blot、迁移和侵袭实验检测抑制mir-32-5p后对上皮-间质转化相关蛋白、迁移和侵袭的影响。结果乳腺癌组织中ZEB1、ZEB2和mir-32-5p mRNA表达高于癌旁组织。乳腺癌组织中mir-32-5p表达和ZEB1、ZEB2表达呈正相关。MCF-10A、MDA-MB-231和MCF-7三种细胞中,MCF-7细胞ZEB1和ZEB2表达水平较高。敲减ZEB1或ZEB2后,形成的克隆数目减少,迁移和侵袭能力减弱,E-cadherin蛋白表达增加,vimentin蛋白表达降低。ZEB1或ZEB23′UTR区域存在mir-32-5p的结合位点,抑制mir-32-5p会增加迁移和侵袭能力,E-cadherin蛋白表达增加,vimentin蛋白表达降低。增加ZEB1或ZEB2表达会使抑制作用减弱。结论mir-32-5p通过靶向ZEB1和ZEB2调控E-cadherin和vimentin蛋白表达,抑制乳腺癌的增殖、凋亡、迁移和侵袭。

关键词：乳腺肿瘤 microRNA mir-32-5p ZEB1 ZEB2

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mir-32-5p靶向CEBpA调控EGFR/β-catenin信号通路影响骨髓瘤细胞的增殖、凋亡和侵袭

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现代肿瘤医学 2021年第15期29卷 2591-2596页

作者：赵辉郭欢绪刘强空军军医大学第二附属医院(唐都医院)血液内科陕西西安710038

目的:探究mir-32-5p靶向CCAAT增强子结合蛋白α(CCAAT/enhancer binding proteinsα,CEBpA)调控表皮生长因子/β联蛋白(EGFR/β-catenin)信号通路影响骨髓瘤细胞增殖、凋亡和侵袭的机制。方法:qRT-pCR、Western blot检测细胞中mir-32-5p、CEBpA的表达水平;转染慢病毒至骨髓瘤细胞U266,MTT检测细胞增殖情况,流式细胞仪检测细胞凋亡水平;生物信息学预测mir-32-5p的靶基因,双荧光素酶报告基因、Western blot验证mir-32-5p与CEBpA的关系及在骨髓瘤细胞中的作用,Western blot检测mir-32-5p与CEBpA的表达对EGFR/β-catenin信号通路的影响。结果:与正常浆细胞比较,骨髓瘤细胞株H929、U266、IM-9、RpMI-8226中mir-32-5p表达水平显著增高,CEBpA mRNA和蛋白水平显著降低(p5);与NC、anti-mir-con组比较,anti-mir-32-5p组mir-32-5p mRNA表达量显著降低,细胞凋亡率显著升高,24 h、48 h、72 h的OD值显著降低,细胞侵袭数目显著减少(p5);TargetScan生物信息学预测显示,mir-32-5p与CEBpA 3'UTR存在结合位点,双荧光素酶报告实验、Western blot进一步证实mir-32-5p可与CEBpA直接结合负向调控CEBpA的表达;与NC、pcDNA-control组比较,pcDNA-CEBpA组CEBpA表达量显著升高,24 h、48 h、72 h的OD值显著降低,凋亡率显著升高,细胞侵袭数目显著减少(p5);与anti-mir-con组比较,anti-mir-32-5p组CEBpA蛋白表达量显著升高,EGFR、p-EGFR、β-catenin蛋白表达量显著降低;与anti-mir-32-5p+si-con组比较,anti-mir-32-5p+si-CEBpA组CEBpA蛋白表达量显著降低,EGFR、p-EGFR、β-catenin蛋白表达量显著升高(p5)。结论:骨髓瘤细胞的增殖、凋亡和侵袭受mir-32-5p和CEBpA的双重调控,mir-32-5p可靶向CEBpA调控EGFR/β-catenin信号通路影响骨髓瘤细胞的增殖、凋亡和侵袭。

关键词： mir-32-5p CEBpA EGFR/β-catenin 骨髓瘤细胞增殖凋亡侵袭

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mir-32-5p靶向KLF4调控IL-6分泌影响食管癌细胞增殖和转移

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中国老年学杂志 2021年第22期41卷 5089-5093页

作者：徐汉桥方军张梁江汉大学附属医院武汉市第六医院胸外科湖北武汉430015

目的研究mir-32-5p对食管癌Eca-109细胞增殖、迁移和侵袭的影响及潜在的分子机制。方法qRT-pCR检测食管癌组织和细胞中KLF4和mir-32-5p RNA的表达,四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法测定Eca-109细胞增殖活性,Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能... 详细信息

目的研究mir-32-5p对食管癌Eca-109细胞增殖、迁移和侵袭的影响及潜在的分子机制。方法qRT-pCR检测食管癌组织和细胞中KLF4和mir-32-5p RNA的表达,四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法测定Eca-109细胞增殖活性,Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力,双荧光素酶报告系统验证mir-32-5p与KLF4的调控关系,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测炎症因子白细胞介素(IL)-6的表达,Western印迹检测KLF4和增殖凋亡蛋白的表达。结果食管癌组织中的mir-32-5p和IL-6表达量显著高于正常食管组织(p5),KLF4表达量显著低于正常食管组织(p5);抑制mir-32-5p表达和过表达KLF4均可抑制Eca-109细胞增殖、迁移和侵袭,抑制炎症因子IL-6的产生(均p5);mir-32-5p靶向负调控KLF4的表达;抑制KLF4表达可逆转抑制mir-32-5p对Eca-109细胞增殖、迁移和侵袭及IL-6表达的抑制作用(均p5)。结论mir-32-5p通过靶向KLF4抑制Eca-109细胞的增殖、迁移和侵袭,抑制炎症因子IL-6的产生。mir-32-5p是抑制食管癌的潜在分子靶点。

关键词：食管癌 Eca-109 mir-32-5p KLF4 增殖迁移侵袭

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lncRNA XIST通过mir-32-5p/EZH2分子轴调控结直肠癌HCT-8细胞的恶性生物学行为

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中国肿瘤生物治疗杂志 2019年第12期26卷 1363-1370页

作者：吴瑞平陈冠阳陈志康中南大学湘雅医院直肠肛门外科

目的:探讨lncRNA XIST通过mir-32-5p/果蝇Zeste基因增强子同源物2(enhancer of zeste homolog2,EZH2)分子轴调控结直肠癌HCT-8细胞的恶性生物学行为。方法:收集2014年7月至2018年8月中南大学湘雅医院直肠肛门外科资料完整的结直肠癌患... 详细信息

目的:探讨lncRNA XIST通过mir-32-5p/果蝇Zeste基因增强子同源物2(enhancer of zeste homolog2,EZH2)分子轴调控结直肠癌HCT-8细胞的恶性生物学行为。方法:收集2014年7月至2018年8月中南大学湘雅医院直肠肛门外科资料完整的结直肠癌患者28例癌组织和配对的癌旁组织标本,采用qpCR检测结直肠癌组织及细胞系中lncRNA XIST和mir-32-5p的表达水平,双荧光素酶报告基因验证1ncRNA XIST、mir-32-5p和EZH2的靶向关系,并进一步通过WB检测EZH2的表达水平。CCK-8、Transwell及Annexin V-FITC/pI染色流式细胞术检测HCT-8细胞增殖、迁移及凋亡情况。结果:lncRNA XIST在结直肠癌组织及细胞系中高表达,且在HCT-8细胞中表达最高(p5或pmir-32-5p(p5),且EZH2是mir-32-5p的靶基因。敲降1ncRNA XIST抑制HCT-8细胞增殖和迁移并诱导其凋亡(p5或pmir-32-5p的表达水平,从而下调EZH2表达水平,进而抑制HCT-8细胞增殖和迁移并诱导其凋亡。结论:lncRNA XIST通过mir-32-5p/EZH2分子轴促进HCT-8细胞增殖、迁移并抑制细胞凋亡。

关键词：结直肠癌 lncRNA XIST mir-32-5p 果蝇Zeste基因增强子同源物2 增殖迁移凋亡

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mir-32-5p在小鼠血管平滑肌细胞中对pTEN表达调控的作用及机制研究

miR-32-5p在小鼠血管平滑肌细胞中对PTEN表达调控的作用及机制研究

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作者：欧林灵南华大学

学位级别：硕士

目的:本实验拟以小鼠血管平滑肌细胞为对象,探究mir-32-5p的靶向调控基因及其影响的细胞信号通路,为寻求血管钙化有效的潜在干预靶点提供实验依据。方法:1.通过在线核酸数据库获取mir-32-5p的成熟序列,利用靶基因预测软件并结合相关因... 详细信息

目的:本实验拟以小鼠血管平滑肌细胞为对象,探究mir-32-5p的靶向调控基因及其影响的细胞信号通路,为寻求血管钙化有效的潜在干预靶点提供实验依据。方法:1.通过在线核酸数据库获取mir-32-5p的成熟序列,利用靶基因预测软件并结合相关因素分析,筛选出mir-32-5p的靶基因。2.利用双荧光素酶报告基因载体,验证mir-32-5p与预测目标基因的靶向关系。3.构建mir-32-5p mimic/mir-32-5p inhibitor转染成功的小鼠血管平滑肌细胞并检验转染效率。4.利用实时荧光定量pCR及Western Blot技术分别检测mir-32-5p、预测目标基因mRNA及其蛋白的表达。5.采用Western Blot技术检测上调小鼠血管平滑肌细胞mir-32-5p后对靶蛋白的下游调控蛋白表达的影响。结果:1.利用miranda、TargetScan、RNAhybrid等多个数据库,结合生物信息学和文献分析,发现pTEN为mir-32-5p的靶基因之一。2.转染mir-32-5p mimic的血管平滑肌细胞mir-32-5p表达水平明显上调,pTEN蛋白表达水平降低;而转染mir-32-5p inhibitor的血管平滑肌细胞mir-32-5p表达水平明显下调,pTEN蛋白水平显著上升。而mir-32-5p mimic或mir-32-5p inhibitor的转染对血管平滑肌细胞pTEN mRNA的表达水平没有显著影响。3.基因测序结果表明,野生型(WT)及突变型(MUT)pTEN 3’UTR荧光素酶报告基因载体构建成功,mir-32-5p mimic和WT-GV272-pTEN共转染组的荧光素酶活性显著下降,而mir-32-5p mimic和MUT-GV272-pTEN共转染组的荧光素酶活性无明显变化,对照质粒转染对野生型及突变型pTEN 3’UTR的荧光素酶活性均无影响。*** Blot技术检测显示转染mir-32-5p mimic组,pTEN调控下游p-AKT明显升高,RUNX2表示水平及RUNX2的磷酸化水平明显升高,pI3K抑制物LY294002可降低RUNX2及AKT与RUNX2的磷酸化水平,对pTEN蛋白的表达无明显影响。结论:***-32-5p在小鼠血管平滑肌细胞中可通过靶向pTEN 3’UTR序列抑制pTEN的表达,pTEN是mir-32-5p下游的调控靶基因。***-32-5p可通过靶向抑制pTEN的表达,进而激活pI3K/AKT通路,提高RUNX2及RUNX2的磷酸化水平,促进小鼠血管平滑肌细胞向成骨样细胞分化。

关键词： mir-32-5p pTEN pI3K/AKT 小鼠血管平滑肌细胞钙化

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mir-32-5p通过调控pI3K/AKT信号通路抑制A549细胞增殖、迁移及侵袭

miR-32-5p通过调控PI3K/AKT信号通路抑制A549细胞增殖、迁移及侵袭

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作者：黄秋霞湖南中医药大学

学位级别：硕士

目的:研究显示,mir-32-5p在肿瘤中异常表达,发挥促癌以及抑癌基因的双重作用。多项研究已经证实mir-32-5p在非小细胞肺癌组织及细胞中表达下调,发挥抑癌基因作用,对肺癌细胞的增殖、侵袭、迁移、凋亡等具有重要调控作用,本研究主要探讨m... 详细信息

目的:研究显示,mir-32-5p在肿瘤中异常表达,发挥促癌以及抑癌基因的双重作用。多项研究已经证实mir-32-5p在非小细胞肺癌组织及细胞中表达下调,发挥抑癌基因作用,对肺癌细胞的增殖、侵袭、迁移、凋亡等具有重要调控作用,本研究主要探讨mi R-32-5p对非小细胞肺癌的影响,研究其对非小细胞肺癌A549细胞增殖、迁移、侵袭的影响,并验证其与pI3K/AKT信号通路的关系。方法:本实验通过qRT-pCR检测人非小细胞肺癌细胞系A549、H1299、H1975和正常支气管上皮细胞16HBE中mir-32-5p的表达。用mi R-32-5p模拟物(mi R-32-5p组)和mi R-32-5p阴性对照(NC组)分别转染A549细胞后,采用CCK8法检测A549细胞增殖情况、细胞划痕实验检测细胞迁移情况,Western Blot检测迁袭相关蛋白MMp2和MMp9及pI3K/AKT信号通路相关蛋白表达水平。结果:与正常支气管上皮细胞16HBE相比,mir-32-5p在各非小细胞肺癌细胞系中表达下降。与阴性对照组比较,mir-32-5p模拟物转染A549细胞后mi R-32-5p表达量上调,抑制A549细胞增殖、迁移及侵袭。pI3K/AKT信号通路的关键蛋白分子pI3K、p-pI3K、AKT、p-AKT蛋白水平下调。结论:过表达mir-32-5p可以抑制A549细胞的增殖、迁移及侵袭,该作用机制可能通过调控pI3K/AKT信号通路发挥作用。

关键词：非小细胞肺癌 mir-32-5p 增殖迁移侵袭 pI3K/AKT信号通路

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mir-32-5p及mir-30a基因敲除小鼠模型的构建

miR-32-5p及miR-30a基因敲除小鼠模型的构建

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作者：贺菁南华大学

学位级别：硕士

目的构建mir-32-5p及mir-30a基因单敲小鼠模型以及mir-32-5p/mir-30a基因双敲小鼠模型,为进一步探讨mir-32-5p及mir-30a在血管钙化发生发展中的作用提供动物模型。方法1)应用CRISpR/Cas9敲除技术,同时将mmu-mi R-32-5p(鼠源性mir-32-5p)和mmu-mir-30a(鼠源性mir-30a)的single-guide RNA(单导RNA)与Cas9核酸酶的mRNA共同注射到小鼠受精卵中,一次性获得F0代双基因敲除的嵌合子小鼠。2)将F0代mir-32-5p/mir-30a双基因敲除的嵌合子小鼠与野生型C57BL/6小鼠交配以获得F1代mir-32-5p/mi R-30a双基因敲除的杂合子小鼠。3)F1代mir-32-5p/mir-30a双基因敲除的杂合子小鼠互相交配以在F2代及F3代获得mir-32-5p及mir-30a基因单敲纯合子小鼠与mi R-32-5p/mir-30a基因双敲纯合子小鼠。4)所有繁殖的后代小鼠均提取鼠尾DNA经pCR扩增后测序鉴定其基因型。结果1)通过CRISpR/Cas9技术获得16只F0代mir-32-5p/mi R-30a双基因敲除的嵌合子小鼠。2)F1代获得了29只mir-32-5p/mir-30a双基因敲除的杂合子小鼠。并可以继续繁殖后代,每次生产约4只,平均存活率72%。3)在F2代及F3代获得了mi R-32-5p及mir-30a基因单敲纯合子小鼠以及mir-32-5p/mir-30a基因双敲纯合子小鼠。结论mir-32-5p与mir-30a基因单敲小鼠和mir-32-5p/mir-30a基因双敲小鼠模型的构建均取得成功,已获得了F2代及F3代的mir-32-5p及mir-30a基因单敲纯合子小鼠以及mir-32-5p/mi R-30a基因双敲纯合子小鼠。

关键词： CRISpR/Cas9 mir-32-5p mir-30a 基因敲除小鼠模型

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