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mirNA sequencing analysis of healthy and atretic follicles of chickens revealed that mir-30a-5p inhibits granulosa cell death via targeting Beclin1

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Journal of Animal Science and Biotechnology 2022年第5期13卷 1351-1372页

作者： Haorong He Dongmei Li Yongtong Tian Qinyao Wei Felix Kwame Amevor Congjiao Sun Chunlin Yu Chaowu Yang Huarui Du Xiaosong Jiang Menggen Ma Can Cui Zhichao Zhang Kai Tian Yao Zhang Qing Zhu Huadong Yin Farm Animal Genetic Resources Exploration and Innovation Key Laboratory of Sichuan province Sichuan Agricultural UniversityChengdu 611130SichuanChina National Engineering Laboratory for Animal Breeding and Key Laboratory of Animal Genetics Breeding and ReproductionMinistry of Agriculture and Rural AffairsCollege of Animal Science and TechnologyChina Agricultural UniversityBeijing 100193China Animal Breeding and Genetics key Laboratory of Sichuan province Sichuan Animal Science AcademyChengdu 610066China College of Resources Sichuan Agricultural UniversityChengdu 611130China

Background:The egg production performance of chickens is affected by many factors,including genetics,nutrition and environmental conditions.These factors all play a role in egg production by affecting the development of follicles.MicroRNAs(mirNAs)are important non-coding RNAs that regulate biological processes by targeting genes or other non-coding RNAs after transcription.In the animal reproduction process,mirNA is known to affect the development and atresia of follicles by regulating apoptosis and autophagy of granulosa cells(GCs).Results:In this study,we identified potential mirNAs in the atretic follicles of broody chickens and unatretic follicles of healthy chickens.We identified gga-mir-30a-5p in 50 differentially expressed mirNAs and found that gga-mir-30a-5p played a regulatory role in the development of chicken follicles.The function of mir-30a-5p was explored through the transfection test of mir-30a-5p inhibitor and mir-30a-5p mimics.In the study,we used qpCR,western blot and flow cytometry to detect granulosa cell apoptosis,autophagy and steroid hormone synthesis.Confocal microscopy and transmission electron microscopy are used for the observation of autophagolysosomes.The levels of estradiol(E2),progesterone(p4),malondialdehyde(MDA)and superoxide dismutase(SOD)were detected by ELISA.The results showed that mir-30a-5p showed a negative effect on autophagy and apoptosis of granulosa cells,and also contributed in steroid hormones and reactive oxygen species(ROS)production.In addition,the results obtained from the biosynthesis and dual luciferase experiments showed that Beclin1 was the target gene of mir-30a-5p.The rescue experiment conducted further confirmed that Beclin1 belongs to the mir-30a-5p regulatory pathway.Conclusions:In summary,after deep mirNA sequencing on healthy and atretic follicles,the results indicated that mir-30a-5p inhibits granulosa cell death by inhibiting Beclin1.

关键词： Apoptosis Autophagy Beclin1 Chicken granulosa cells mir-30a-5p Oxidative stress RNA-seq Steroid hormone

LncRNA HIF1A-AS2 accelerates malignant phenotypes of renal carcinoma by modulating mir-30a-5p/SOX4 axis as a ceRNA

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Cancer Biology & Medicine 2021年第2期18卷 587-603页

作者： Mingwei Chen Xuedong Wei Xiu Shi Le Lu Guangbo Zhang Yuhua Huang Jianquan Hou Department of Urology The First Affiliated Hospital of Soochow UniversitySuzhou 215006China Department of Obstetrics and Gynecology The First Affiliated Hospital of Soochow UniversitySuzhou 215006China Jiangsu Institute of Clinical Immunology The First Affiliated Hospital of Soochow UniversityJiangsu Key Laboratory of Clinical ImmunologySoochow UniversityJiangsu Key Laboratory of Gastrointestinal Tumor ImmunologySuzhou 215006China

Objective:Several reports have proposed that lnc RNAs,as potential biomarkers,participate in the progression and growth of malignant tumors.HIF1 A-AS2 is a novel lnc RNA and potential biomarker,involved in the genesis and development of carcinomas.However,the molecular mechanism of HIF1 A-AS2 in renal carcinoma is unclear.Methods:The relative expression levels of HIF1 A-AS2 and mir-30 a-5 p were detected using RT-qpCR in renal carcinoma tissues and cell lines.Using loss-of-function and overexpression,the biological effects of HIF1 A-AS2 and mir-30 a-5 p in kidney carcinoma progression were characterized.Dual luciferase reporter gene analysis and Western blot were used to detect the potential mechanism of HIF1 A-AS2 in renal carcinomas.Results:HIF1 A-AS2 was upregulated in kidney carcinoma tissues when compared with para-carcinoma tissues(p5).In addition,tumor size,tumor node mestastasis stage and differentiation were identified as being closely associated with HIF1 A-AS2 expression(p5).Knockdown or overexpression of HIF1 A-AS2 either restrained or promoted the malignant phenotype and WNT/β-catenin signaling in renal carcinoma cells(p5).Mi R-30 a-5 p was downregulated in renal cancers and partially reversed HIF1 A-AS2 functions in malignant renal tumor cells.HIF1 A-AS2 acted as a micro RNA sponge that actively regulated the relative expression of SOX4 in sponging mir-30 a-5 p and subsequently increased the malignant phenotypes of renal carcinomas.HIF1 A-AS2 showed a carcinogenic effect and mir-30 a-5 p acted as an antagonist of the anti-oncogene effects in the pathogenesis of renal carcinomas.Conclusions:The HIF1 A-AS2-mir-30 a-5 p-SOX4 axis was associated with the malignant progression and development of renal carcinoma.The relative expression of HIF1 A-AS2 was negatively correlated with the expression of mir-30 a-5 p,and was closely correlated with SOX4 mRNA levels in renal cancers.

关键词： HIF1A-AS2 SOX4 mir-30a-5p kidney carcinoma ceRNA

猫眼草提取物通过mir-30a-5p/NF-κB抑制白介素-1β诱导结直肠癌细胞增殖、迁移和侵袭

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中国药理学通报 2022年第12期38卷 1890-1895页

作者：吴雄健朱海燕胡滢黄子倩刘晓平赣南医学院第一附属医院消化内科江西赣州341000 赣南医学院第一附属医院药学部江西赣州341000 赣南医学院第一附属医院普外五科江西赣州341000

目的研究猫眼草提取物是否通过mir-30a-5p/核因子κB(NF-κB)调节白介素-1β(IL-1β)诱导的结直肠癌细胞增殖、迁移和侵袭。方法将HT29细胞分为:NC组、IL-1β组、低剂量(2.5 mg·L^(-1))+IL-1β组、中剂量(5 mg·L^(-1))+IL-1β组、高剂... 详细信息

目的研究猫眼草提取物是否通过mir-30a-5p/核因子κB(NF-κB)调节白介素-1β(IL-1β)诱导的结直肠癌细胞增殖、迁移和侵袭。方法将HT29细胞分为:NC组、IL-1β组、低剂量(2.5 mg·L^(-1))+IL-1β组、中剂量(5 mg·L^(-1))+IL-1β组、高剂量(10 mg·L^(-1))+IL-1β组、mir-NC+IL-1β组、mir-30a-5p+IL-1β组、anti-mir-NC+高剂量+IL-1β组、anti-mir-30a-5p+高剂量+IL-1β组。采用细胞计数试剂盒-8法检测各组细胞增殖活性,克隆形成实验检测细胞克隆,Transwell法检测细胞迁移和侵袭,Western blot检测细胞蛋白的表达水平,qRT-pCR检测mir-30a-5p表达水平。结果与NC组比较,IL-1β组结直肠癌细胞HT29的增殖活性、细胞克隆数、迁移及侵袭数量增多,mir-30a-5p表达水平减弱(均pmir-30a-5p表达水平提升(均pp-p65表达水平低于IL-1β组(pmir-30a-5p+IL-1β组结直肠癌细胞HT29的增殖活性、细胞克隆数、迁移和侵袭数量比mir-NC+IL-1β组降低(均pmir-30a-5p+高剂量+IL-1β组结直肠癌细胞HT29的增殖活性、细胞克隆数、迁移和侵袭数量高于anti-mir-NC+高剂量+IL-1β组(均pmir-30a-5p、下调NF-κB信号通路活性,抑制IL-1β诱导的结直肠癌细胞增殖、迁移及侵袭。

关键词：结直肠癌猫眼草提取物 IL-1β mir-30a-5p NF-κB 增殖转移

mir⁃30a⁃5p靶向与调控SNAIL1抑制人胃癌细胞BGC⁃823的迁移

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中国生物化学与分子生物学报 2023年第3期39卷 438-447页

作者：李欣张富蕊周文淼张乐乐施天怡张震刘昆梅韩学波郭乐宁夏医科大学临床病原微生物重点实验室银川750004 宁夏医科大学总医院老年与特需科银川750004 宁夏医科大学颅脑疾病重点实验室银川750004

已有研究表明,mir-30a-5p在胃癌中发挥抑癌基因的作用,抑制胃癌细胞的增殖与侵袭,但其抑制胃癌发生发展的机制尚不清楚。本文研究mir-30a-5p如何靶向调控SNAIL 1,进而影响人胃癌细胞BGC-823的迁移。通过qRT-pCR检测和TCGA数据库分析发现... 详细信息

已有研究表明,mir-30a-5p在胃癌中发挥抑癌基因的作用,抑制胃癌细胞的增殖与侵袭,但其抑制胃癌发生发展的机制尚不清楚。本文研究mir-30a-5p如何靶向调控SNAIL 1,进而影响人胃癌细胞BGC-823的迁移。通过qRT-pCR检测和TCGA数据库分析发现,mir-30a-5p的表达水平在胃癌组织与胃癌细胞BGC-823中均降低。利用划痕实验和Transwell实验检测发现,在BGC-823细胞中转染mir-30a-5p mimics过表达mir-30a-5p后细胞迁移和侵袭明显被抑制,而转染mir-30a-5p inhibitor降低mir-30a-5p表达水平时细胞迁移和侵袭能力提高。qRT-pCR和Western印迹及免疫荧光检测发现,过表达mir-30a-5p细胞中波形蛋白(vimentin)和N-钙黏着蛋白(N-cadherin)的mRNA及蛋白质表达水平降低,而E-钙黏着蛋白(E-cadherin)表达水平升高。在mir-30a-5p inhibitor组中结果恰恰相反。通过生物信息学预测、双荧光素酶基因报告、Western印迹及免疫荧光验证SNAIL 1是mir-30a-5p作用的靶基因。在过表达mir-30a-5p的BGC-823细胞中进一步过表达SNAIL 1,可以逆转mir-30a-5p的作用。该研究表明,mir-30a-5p可通过负调控靶基因SNAIL 1的表达,进而抑制BGC-823胃癌细胞的迁移。本研究将为mir-30a-5p在胃癌发生发展中的作用机制提供理论依据,并有望为胃癌治疗提供新靶点和生物标志物。

关键词：胃癌 mir-30a-5p SNAIL 1 迁移

mir-30a-5p在人乳腺癌MCF-7细胞对他莫昔芬耐药性中的作用研究

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中国现代应用药学 2022年第6期39卷 764-771页

作者：张欣颖金湛甘椿椿浙江中医药大学杭州310053 衢州职业技术学院浙江衢州324000

目的探究mir-30a-5p在人乳腺癌MCF-7细胞对他莫昔芬(tamoxifen,TAM)耐药性中的作用,并阐明相关作用机制。方法通过短时间高浓度TAM刺激MCF-7细胞诱导耐药株,MTT法检测细胞耐药性的改变;qRT-pCR法检测MCF-7细胞及其耐药细胞株MCF-7/TAM中... 详细信息

目的探究mir-30a-5p在人乳腺癌MCF-7细胞对他莫昔芬(tamoxifen,TAM)耐药性中的作用,并阐明相关作用机制。方法通过短时间高浓度TAM刺激MCF-7细胞诱导耐药株,MTT法检测细胞耐药性的改变;qRT-pCR法检测MCF-7细胞及其耐药细胞株MCF-7/TAM中mir-30a-5p的表达情况;吖啶橙染色及Western blotting检测MCF-7/TAM细胞相对于MCF-7细胞自噬的变化;转染mir-30a-5p模拟物后,采用MTT法检测MCF-7/TAM细胞对TAM敏感性的变化,并通过吖啶橙染色和Western blotting观察mir-30a-5p对MCF-7/TAM细胞自噬的影响;采用生物信息学方法对mir-30a-5p进行靶基因预测,荧光素酶报告基因试验验证mir-30a-5p对ATG5的靶向调控作用;Western blotting检测mir-30a-5p对ATG5表达的影响。结果TAM对MCF-7/TAM细胞的抑制作用明显弱于对MCF-7细胞;mir-30a-5p在MCF-7/TAM细胞中的表达水平明显低于在MCF-7细胞中;相对于MCF-7细胞,MCF-7/TAM细胞的自噬水平明显升高;过表达mi R-30a-5p后,MCF-7/TAM细胞对TAM敏感性显著增加,自噬水平显著降低;Targetscan软件分析表明ATG5是mir-30a-5p的下游靶基因,通过荧光素酶报告基因试验进一步证明mir-30a-5p靶向调控ATG5;MCF-7/TAM细胞中上调mir-30a-5p能够抑制ATG5的表达。结论mir-30a-5p靶向调控ATG5,并能够抑制细胞的自噬,进而增强乳腺癌细胞对TAM的敏感性。

关键词： mir-30a-5p 自噬乳腺癌细胞他莫昔芬耐药性

lncRNA H19靶向mir-30a-5p对雨蛙肽诱导的急性胰腺炎细胞凋亡、炎症因子分泌和自噬的影响

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世界华人消化杂志 2022年第22期30卷 997-1003页

作者：王春晖潘卓唐忠明湖州市第一人民医院外科浙江省湖州市313000 湖州市第一人民医院消化科浙江省湖州市313000

背景本研究旨在探究影响急性胰腺炎进程的潜在分子机制.通过功能缺失实验分析H19敲低对细胞功能的影响.并通过生物信息学预测以及实验验证确定H19与mir-30a-5p的互作关系.我们推测H19可能通过靶向mir-30a-5p来促进急性胰腺炎进程.目的... 详细信息

背景本研究旨在探究影响急性胰腺炎进程的潜在分子机制.通过功能缺失实验分析H19敲低对细胞功能的影响.并通过生物信息学预测以及实验验证确定H19与mir-30a-5p的互作关系.我们推测H19可能通过靶向mir-30a-5p来促进急性胰腺炎进程.目的研究lnc RNA H19靶向mir-30a-5p对雨蛙肽诱导的急性胰腺炎细胞凋亡、炎症因子分泌和自噬的影响.方法培养人胰腺AR42J细胞,雨蛙肽诱导建立胰腺损伤细胞模型.将实验分为雨蛙肽+si-NC组、雨蛙肽+si-H19组、雨蛙肽+mir-NC组、雨蛙肽+mir-30a-5p组、雨蛙肽+si-H19+anti-mir-NC组、雨蛙肽+si-H19+anti-mir-30a-5p组.实时荧光定量pCR(RTqpCR)检测细胞中H19和m i R-30a-5p表达水平;流式细胞术检测细胞凋亡;酶联免疫吸附实验检测细胞中肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)和白介素-6(interleukin-6, IL-6)水平;蛋白质印迹(Western blot)法检测细胞自噬相关的微管相关蛋白1轻链3(microtubule-associatedprotein1lightchain3,LC3)-Ⅰ、LC3-Ⅱ蛋白表达.双荧光素酶实验检测细胞中H19和mir-30a-5p靶向结合关系.结果与正常胰腺细胞比较,雨蛙肽诱导损伤的胰腺炎细胞中H19表达水平显著升高, mir-30a-5p表达水平显著降低(p5).与雨蛙肽+si-NC组比较,雨蛙肽+siH19组H19表达水平显著降低;细胞存活率显著升高;TNF-α、IL-1β和IL-6水平显著降低;LC3-Ⅰ蛋白表达显著降低、LC3-Ⅱ蛋白表达显著升高(p5).与雨蛙肽+mir-NC组比较,雨蛙肽+mir-30a-5p组mir-30a-5p表达水平显著升高;细胞存活率显著升高;TNF-α、IL-1β和IL-6水平显著降低;LC3-Ⅰ蛋白表达显著降低、LC3-Ⅱ蛋白表达显著升高(p5).与雨蛙肽+si-H19+anti-mir-NC比较,雨蛙肽+si-H19+antimir-30a-5p组mir-30a-5p表达显著降低;细胞存活率显著降低;TNF-α、IL-1β和IL-6水平显著升高;LC3-Ⅰ蛋白表达显著升高、LC3-Ⅱ蛋白表达显著降低(p5).结论下调H19通过靶向mir-30a-5p来抑制雨蛙肽诱导的急性胰腺炎细胞凋亡、炎症因子分泌和自噬.

关键词： lncRNA H19 mir-30a-5p 急性胰腺炎凋亡炎症因子自噬

circBSCR17通过调节mir-30a-5p/JAK1轴减轻高糖诱导的人肾小球系膜细胞纤维化和炎症反应

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安徽医科大学学报 2023年 1756-1762+1768页

作者：董海芸韩芳齐一舟梅峰青海大学附属医院肾内科昆明医科大学海源学院口腔医学

目的探讨circ-WBSCR17通过调节mir-30a-5p/JAK1轴对高糖诱导的人肾小球系膜细胞纤维化和炎症的影响。方法将人肾小球系膜细胞HMCL分为NG组(5.5mmol/L葡萄糖处理HMCL细胞)、HG组(30 mmol/L葡萄糖处理细胞)、si-NC组(30 mmol/L葡萄糖+转... 详细信息

目的探讨circ-WBSCR17通过调节mir-30a-5p/JAK1轴对高糖诱导的人肾小球系膜细胞纤维化和炎症的影响。方法将人肾小球系膜细胞HMCL分为NG组(5.5mmol/L葡萄糖处理HMCL细胞)、HG组(30 mmol/L葡萄糖处理细胞)、si-NC组(30 mmol/L葡萄糖+转染si-NC)、sicirc＿WBSCR17组(30 mmol/L葡萄糖+转染si-circWBSCR17)、si-circ＿WBSCR17+inhibitor-NC组(30 mmol/L葡萄糖+si-circ＿WBSCR17和inhibitor-NC共转染)、si-circWBSCR17+mir-30a-5p inhibitor组(30 mmol/L葡萄糖+sicirc＿WBSCR17和mir-30a-5p inhibitor共转染);RT-qpCR检测细胞中circ＿WBSCR17、mir-30a-5p的表达;CCK-8法检测细胞增殖;流式细胞仪检测细胞凋亡;ELISA法检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-6和IL-8表达水平;Western blot检测细胞中JAK1、增殖细胞核抗原(pCNA)、Bax、转化生长因子-β1(TGF-β1)、纤维连接蛋白(FN)、Ⅳ型胶原蛋白(collagenⅣ)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达;荧光原位杂交(FISH)实验检测circ＿WBSCR17的分布情况,双荧光素酶报告基因实验分别验证circ＿WBSCR17和mir-30a-5p、JAK1的关系。结果与NG组比较,HG组HMCL细胞增殖能力降低,TNF-α、IL-6和IL-8水平、pJAK1/JAK1、p-STAT1/STAT1、p-STAT3/STAT3、Bax、TGF-β1、FN、collgeenⅣ、α-SMA蛋白表达升高(p5);与HG组和si-NC组比较,si-circ＿WBSCR17组HMCL细胞中mir-30a-5p表达、OD＿(450)值、pCNA表达升高,TNF-α、IL-6和IL-8水平、circ WBSCR17、p-JAK1/JAK1、p-STAT1/STAT1、p-STAT3/STAT3、Bax、TGF-β1、FN、collagenIV、α-SMA表达降低(p 5);抑制mir-30a-5p减弱了敲低circ＿WBSCR17对HMCL细胞增殖的促进作用,增强了细胞凋亡、细胞纤维化和炎症反应;FISH实验证实circ＿WBSCR17主要分布在细胞质中;双荧光素酶报告基因实验证实circ＿WBSCR17、JAK1与mir-30a-5p存在靶向调控关系。结论敲低circ＿WBSCR17可通过调节mir-30a-5p/JAK1轴,进而减轻高糖诱导的人肾小球系膜细胞纤维化和炎症。

关键词： circ＿WBSCR17 mir-30a-5p JAK1 人肾小球系膜细胞纤维化炎症反应

circ_WBSCR17通过调节mir-30a-5p/JAK1轴减轻高糖诱导的人肾小球系膜细胞纤维化和炎症反应

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安徽医科大学学报 2023年第10期58卷 1756-1762,1768页

作者：董海芸韩芳齐一舟梅峰青海大学附属医院肾内科西宁810000 昆明医科大学海源学院口腔医学昆明650106

目的探讨circ_WBSCR17通过调节mir-30a-5p/JAK1轴对高糖诱导的人肾小球系膜细胞纤维化和炎症的影响。方法将人肾小球系膜细胞HMCL分为NG组(5.5 mmol/L葡萄糖处理HMCL细胞)、HG组(30 mmol/L葡萄糖处理细胞)、si-NC组(30 mmol/L葡萄糖+转... 详细信息

目的探讨circ_WBSCR17通过调节mir-30a-5p/JAK1轴对高糖诱导的人肾小球系膜细胞纤维化和炎症的影响。方法将人肾小球系膜细胞HMCL分为NG组(5.5 mmol/L葡萄糖处理HMCL细胞)、HG组(30 mmol/L葡萄糖处理细胞)、si-NC组(30 mmol/L葡萄糖+转染si-NC)、si-circ_WBSCR17组(30 mmol/L葡萄糖+转染si-circ_WBSCR17)、si-circ_WBSCR17+inhibitor-NC组(30 mmol/L葡萄糖+si-circ_WBSCR17和inhibitor-NC共转染)、si-circ_WBSCR17+mir-30a-5p inhibitor组(30 mmol/L葡萄糖+si-circ_WBSCR17和mir-30a-5p inhibitor共转染);RT-qpCR检测细胞中circ_WBSCR17、mir-30a-5p的表达;CCK-8法检测细胞增殖;流式细胞仪检测细胞凋亡;ELISA法检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-6和IL-8表达水平;Western blot检测细胞中JAK1、增殖细胞核抗原(pCNA)、Bax、转化生长因子-β1(TGF-β1)、纤维连接蛋白(FN)、Ⅳ型胶原蛋白(collagenⅣ)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达;荧光原位杂交(FISH)实验检测circ_WBSCR17的分布情况,双荧光素酶报告基因实验分别验证circ_WBSCR17和mir-30a-5p、JAK1的关系。结果与NG组比较,HG组HMCL细胞增殖能力降低,TNF-α、IL-6和IL-8水平、p-JAK1/JAK1、p-STAT1/STAT1、p-STAT3/STAT3、Bax、TGF-β1、FN、collagenIV、α-SMA蛋白表达升高(p5);与HG组和si-NC组比较,si-circ_WBSCR17组HMCL细胞中mir-30a-5p表达、OD450值、pCNA表达升高,TNF-α、IL-6和IL-8水平、circ_WBSCR17、p-JAK1/JAK1、p-STAT1/STAT1、p-STAT3/STAT3、Bax、TGF-β1、FN、collagenIV、α-SMA表达降低(p5);抑制mir-30a-5p减弱了敲低circ_WBSCR17对HMCL细胞增殖的促进作用,增强了细胞凋亡、细胞纤维化和炎症反应;FISH实验证实circ_WBSCR17主要分布在细胞质中;双荧光素酶报告基因实验证实circ_WBSCR17、JAK1与mir-30a-5p存在靶向调控关系。结论敲低circ_WBSCR17可通过调节mir-30a-5p/JAK1轴,进而减轻高糖诱导的人肾小球系膜细胞纤维化和炎症。

关键词： circ_WBSCR17 mir-30a-5p JAK1 人肾小球系膜细胞纤维化炎症反应

mir-30a-5p通过靶向下调ATF1提高非小细胞肺癌A549细胞放射敏感性

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现代肿瘤医学 2022年第13期30卷 2331-2336页

作者：郭昱言王军利陈阿倩卫鑫柯悦包兴李宇星宋丽萍马红兵西安交通大学第二附属医院肿瘤放疗科陕西西安710004 西安交通大学第二附属医院超声科陕西西安710004 陕西省人民医院肿瘤内科陕西西安710068 西安交通大学第一附属医院肿瘤内科陕西西安710061

目的:探索mir-30a-5p对非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)A549细胞的放射增敏效应及其相关机制,为提高NSCLC放射敏感性提供理论依据。方法:采用qRT-pCR检测人正常肺上皮细胞株BEAS-2B、人肺癌细胞株A549、H460中mir-30a-5... 详细信息

目的:探索mir-30a-5p对非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)A549细胞的放射增敏效应及其相关机制,为提高NSCLC放射敏感性提供理论依据。方法:采用qRT-pCR检测人正常肺上皮细胞株BEAS-2B、人肺癌细胞株A549、H460中mir-30a-5p表达情况;应用mir-30a-5p agomir、antagomir及对照转染A549细胞株,联合放射,检测mir-30a-5p对A549细胞株的放射增敏效应;通过生物信息学预测并筛选mir-30a-5p的靶基因,采用双荧光素酶报告基因检测进行验证;siATF1、mir-30a-5p agomir及siATF1+mir-30a-5p agomir转染A549细胞,通过qRT-pCR、Western Blotting检测靶基因表达与mir-30a-5p的关系,并通过平板克隆形成实验检测其对A549细胞株的放射增敏效应。结果:mir-30a-5p在A549和H460细胞株中表达均低于BEAS-2B细胞株(pmir-30a-5p agomir转染联合放射,A549细胞放射生物学参数D_(0)、D_(q)、N较agomir NC组降低(均为p5)。靶基因预测及验证结果显示,mir-30a-5p可以与ATF1的3'UTR特异性结合,ATF1是mir-30a-5p的一个靶基因,过表达mir-30a-5p可下调ATF1表达。siATF1、mir-30a-5p agomir及siATF1+mir-30a-5p agomir转染A549细胞联合照射,A549细胞克隆形成率及放射生物学参数D_(0)、D_(q)、N均低于对照组(均为p5)。结论:mir-30a-5p通过靶向下调ATF1表达,在A549细胞中发挥放射增敏效应。

关键词：非小细胞肺癌 mir-30a-5p ATF1 放射敏感性