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mir-300对骨肉瘤细胞增殖与凋亡作用研究

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中华肿瘤防治杂志 2017年第16期24卷 1137-1141页

作者：杨怡曾柱贵州医科大学附属人民医院肿瘤科贵州贵阳550002 贵州医科大学生物与工程学院贵州贵阳550025

目的骨肉瘤具有局部高度侵袭能力以及快速转移潜能,因而致死率较高。研究指出,mir-300的表达异常与多种肿瘤的发病相关。mir-300对骨肉瘤细胞是否存在调控作用却属未知。本研究探讨mir-300对骨肉瘤细胞Saos-2增殖与凋亡调控的作用。方法... 详细信息

目的骨肉瘤具有局部高度侵袭能力以及快速转移潜能,因而致死率较高。研究指出,mir-300的表达异常与多种肿瘤的发病相关。mir-300对骨肉瘤细胞是否存在调控作用却属未知。本研究探讨mir-300对骨肉瘤细胞Saos-2增殖与凋亡调控的作用。方法将mir-300转染进骨肉瘤细胞Saos-2中,实现mir-300在Saos-2细胞内的高表达。通过荧光定量PCR测定mir-300在细胞内的表达水平;分别采用MTT活细胞测试,细胞周期实验和克隆形成实验检测骨髓瘤细胞的增殖情况;通过蛋白质印迹法测定Bcl-2、Bax和Bak,裂解型Caspase-3蛋白水平来鉴定细胞凋亡。结果转染mir-300的Saos-2细胞,其mir-300表达量为对照组的(10.23±1.04)倍,t=3.613 8,P=0.000 6。MTT实验结果显示,在转染后24和48h,mir-300组的Saos-2相对活细胞百分比相对对照组分别为[(174.35±28.46)%,t=2.219,P=0.03]和[(225.73±24.62)%,t=2.738,P=0.008]。mir-300组Saos-2细胞处在G1期的百分比为39.42%,低于对照组的47.58%,t=2.366,P=0.021;而处在G2期的细胞百分比为19.12%,显著高于对照组的10.55%,t=2.987,P=0.004。mir-300组Saos-2细胞克隆形成率为(52.53±30.21)%,显著高于对照组的(24.67±2.05)%,t=2.711,P=0.008 6。mir-300组Saos-2细胞中Bax、Bak和裂解型Caspase-3表达水平分别为对照组的(0.25±0.02)倍(t=2.785,P=0.007)、(0.31±0.03)倍(t=3.223,P=0.002)和(0.36±0.03)倍(t=3.006,P=0.003 8),差异有统计学意义。Bcl-2蛋白水平为对照组的(6.32±0.57)倍,t=3.218,P=0.002。转染mirZip lent-shmir-300的Saos-2细胞,其mir-300数量为对照组的(0.28±0.03)倍,t=3.531,P=0.000 78。转染24h后,mir-300组Saos-2相对活细胞数为对照组的(64.46±5.32)%,t=2.324,P=0.024;48h后为对照组的(48.14±4.38)%,t=3.009,P=0.004。mir-300组Saos-2细胞处在G1期的百分比为55.71%,高于对照组的46.78%,t=2.108,P=0.039;处在G2期的细胞百分比为2.81%,低于对照组的11.46%,t=3.224,P=0.002。mir-300组的Saos-2细胞的克隆形成率为(17.63±3.89)%,显著低于对照组的(26.84±2.94)%,t=2.989,P=0.004。mir-300组Saos-2细胞中Bax表达水平为对照组的(6.25±4.23)倍,t=3.138,P=0.002 6;Bak表达水平为对照组的(6.03±4.27)倍,t=3.395,P=0.001 2;裂解型Capase-3表达水平为对照组的(5.35±0.37)倍,t=3.017,P=0.003 7;而Bcl-2蛋白水平为对照组的(0.36±0.02)倍,t=2.769,P=0.007 4。结论 mir-300在骨肉瘤细胞的增殖与凋亡调控中具有重要作用,抑制mir-300表达可以一定程度上减少骨髓瘤细胞的增殖,促进其凋亡,为骨肉瘤的病理机制研究提供了新研究方向。

关键词： mir-300 骨肉瘤 Saos-2 细胞增殖细胞凋亡

mir-300通过靶向BRD7对肝癌细胞增殖与侵袭的影响

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中国老年学杂志 2018年第21期38卷 5304-5307页

作者：邓爱民李建华郑州澍青医学高等专科学校河南郑州450064

目的探讨mir-300通过靶向溴含蛋白质(BRD)7对肝癌细胞增殖与侵袭影响的机制。方法将mir-300及对照分别转染入肝癌细胞系HepG 2和Hep3b进行CCK-8增殖实验和Matrigel侵袭实验,观察mir-300对肝癌细胞增殖和侵袭的影响。运用荧光素酶报告实... 详细信息

目的探讨mir-300通过靶向溴含蛋白质(BRD)7对肝癌细胞增殖与侵袭影响的机制。方法将mir-300及对照分别转染入肝癌细胞系HepG 2和Hep3b进行CCK-8增殖实验和Matrigel侵袭实验,观察mir-300对肝癌细胞增殖和侵袭的影响。运用荧光素酶报告实验、实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和Western印迹验证mir-300靶向下调BRD7表达。结果 CCK-8增殖实验和Matrigel侵袭实验发现,与转染阴性对照(NC)组相比,转染mir-300 mimic能够促进肝癌细胞增殖和侵袭。荧光素酶报告实验和Western印迹实验发现,mir-300可以靶向下调BRD7的表达,且BRD7参与调节上述过程。结论 mir-300通过靶向下调BRD7促进肝癌细胞增殖和侵袭过程。

关键词： mir-300 溴含蛋白质7 增殖侵袭

mir-300调控LEF-1抑制人肝细胞癌增殖与迁移的研究

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miR-300调控LEF-1抑制人肝细胞癌增殖与迁移的研究

作者：陈宇佛蚌埠医学院

学位级别：硕士

研究背景与目的:肝癌是一种高侵袭性的恶性肿瘤,为全球第六大常见癌症,居世界癌症死亡原因第四位。尽管目前的治疗方法取得了一定进展,但肝癌的预后极差,复发率很高。越来越多的研究表明,mirNAs在肝细胞肝癌(Hepatocellular carcinoma,H... 详细信息

研究背景与目的:肝癌是一种高侵袭性的恶性肿瘤,为全球第六大常见癌症,居世界癌症死亡原因第四位。尽管目前的治疗方法取得了一定进展,但肝癌的预后极差,复发率很高。越来越多的研究表明,mirNAs在肝细胞肝癌(Hepatocellular carcinoma,HCC)的增殖和转移中发挥重要的作用,但mir-300对HCC的影响仍不清楚,本文拟通过研究mir-300及靶基因对HCC细胞增殖和迁移的影响,探讨其相关分子机制,寻找治疗和改善肝癌患者预后的潜在靶点。研究方法:在本研究中我们以4株人肝癌细胞及正常肝细胞为研究对象,利用qRT-PCR观察5株细胞中mir-300表达情况,选取mir-300高表达株转染mir-300 inhibitor,mir-300低表达株转染mir-300 mimic。此外,我们分别通过MTT实验,克隆形成试验,创伤愈合实验,Transwell实验和流式细胞术检测mir-300对HCC生物学行为的影响。利用生物信息学软件预测LEF-1为mir-300的靶基因,并通过双荧光素酶等实验进行验证。为进一步研究LEF-1是否介导mir-300的相关作用,我们将mir-300 mimic/inhibitor与LEF-1/LEF-1 shRNA2共转染后检测细胞生物学行为变化。此外,我们收集临床标本86例,通过检测组织中mir-300和LEF-1的表达水平,研究两者之间及与肝细胞癌患者预后的相关性。研究结果:***-PCR发现,HCC细胞中mir-300表达量低于正常肝细胞,其中Huh-7为mir-300相对低表达株,Hep3B为mir-300相对高表达株。2.在Huh-7中转染mir-300 mimic后,细胞增殖、迁移和侵袭能力均下降,凋亡率增高,并诱导G1/S期阻滞;在Hep3B中转染mir-300 inhibitor后,细胞增殖、迁移和侵袭能力增强,凋亡率减低,G0/G1期细胞减少,S期细胞增多。3.经生物信息学软件预测并通过双荧光素酶等实验证实,LEF-1是mir-300的靶基因。4.构建LEF-1稳定过表达/干扰细胞株,发现LEF-1可促进细胞增殖,提高迁移和侵袭能力,抑制细胞凋亡,影响细胞周期进程。5.通过上调或下调mir-300,结合LEF-1的过表达或干扰,发现LEF-1过表达可在一定程度上减弱mir-300mimic对细胞增殖及迁移能力的抑制作用,而干扰LEF-1可部分抑制mir-300inhibitor所诱导的细胞增殖及迁移;与上述结果类似,过表达或干扰LEF-1可分别减弱mir-300 mimic或inhibitor对细胞凋亡和周期的影响。***组织中mir-300低表达和LEF-1高表达与HCC患者的不良预后相关。研究结论:mir-300抑制HCC细胞的增殖与转移,促进凋亡,诱导细胞周期阻滞;LEF-1是mir-300的直接靶基因,mir-300下调LEF-1的表达;LEF-1促进HCC细胞的增殖与转移,抑制凋亡,影响细胞周期;mir-300通过靶向调控LEF-1影响HCC的恶性生物学行为;mir-300低表达和LEF-1高表达与HCC患者的不良预后相关。

关键词：肝细胞肝癌 mir-300 LEF-1 增殖迁移

Hsa＿circ＿0001508/mir-300轴对结肠癌恶性生物学行为的影响及机制研究

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Hsa＿circ＿0001508/miR-300轴对结肠癌恶性生物学行为的影响及机...

作者：李莹昆明医科大学

学位级别：硕士

【目的】环状RNA(circular RNA)是一种以共价闭合的环状结构为特征的内源性非编码RNA,在基因转录及转录后水平起着至关重要的作用。但是,circ RNA在结肠癌(Colon Cancer,CC)中的潜在机制仍然尚不明确。我们结合组织全转录组测序结果,用... 详细信息

【目的】环状RNA(circular RNA)是一种以共价闭合的环状结构为特征的内源性非编码RNA,在基因转录及转录后水平起着至关重要的作用。但是,circ RNA在结肠癌(Colon Cancer,CC)中的潜在机制仍然尚不明确。我们结合组织全转录组测序结果,用收集的组织标本证实hsa＿circ＿0001508在CC组织中的差异表达水平,分析其在临床病理特征之间的相关性;通过FISH、PCR等实验技术探究hsa＿circ＿0001508生物学特性;进行体外细胞表型实验验证hsa＿circ＿0001508对CC细胞增殖、迁移及转移作用的影响及其下游分子机制,为CC提供新的生物标志物和治疗方向提供依据。【方法】1.通过q RT-PCR检测hsa＿circ＿0001508在50对CC癌组织及配对正常组织中的相对表达水平,结合病人资料进行临床病理特征的相关性分析。2.通过q RT-PCR检测hsa＿circ＿0001508在CC多种细胞株中的表达水平,根据相对表达情况挑选合适的细胞株进行后续研究。利用Sanger测序鉴定hsa＿circ＿0001508的环状生物特性;FISH实验进行hsa＿circ＿0001508的亚细胞定位。3.构建hsa＿circ＿0001508敲低si RNA与过表达质粒,利用q RT-PCR和倒置荧光显微镜下评估转染效率,通过细胞增殖(CCK-8、克隆)、划痕和Tranwell侵袭实验明确circ＿0001508对CC细胞增殖转移作用的影响。4.使用生物信息学技术预测hsa＿circ＿0001508与mi R-300的结合位点,证实两者存在负相关;构建mi R-300 mimics及NC mimics瞬时转染HCT116/SW480,评估转染效率后分4个组别进行回复实验。5.使用生物信息学技术预测mi R-300下游潜在靶向基因SORBS1、GCP6、FAM107B和SLC6A8,用q RT-PCR证实mi R-300与靶基因之间的相关性。最后使用TCGA数据库及在线信息网站查询4个基因在CC中的表达情况、预后及生存分析。【结果】1.q RT-PCR结果显示,与正常结肠组织相比,hsa＿circ＿0001508在癌组织中低表达(P0.05)。***＿Circ＿0001508是由MSH3转录本的第16-19外显子剪接产生环状RNA,主要定位细胞胞浆中;q RT-PCR结果显示,hsa＿circ＿0001508在CC细胞株中均相对低表达(P均300存在结合位点,呈负性调控关系(P均300 mimics、NC mimics、circ＿0001508+mi R-300 mimics、circ＿0001508+NC mimics),实验结果证实mi R-300 mimics可以导致HCT116/SW480细胞增殖活性、迁移与转移能力增强(P均300下游潜在靶基因有37个,结合TCGA数据库结肠癌相关基因表达情况,最终得到共同的SORBS1、GCP6、FAM107B和SLC6A8等基因,并提示存在相互结合作用。q RT-PCR结果显示mi R-300与下游基因具有相关性(P均300的竞争性结合来调节SORBS1的表达。

关键词：结肠癌 hsa_circ_0001508 mir-300 SORBS1

mir-300对人卵巢癌细胞增殖、周期及凋亡的影响

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现代肿瘤医学 2017年第6期25卷 868-871页

作者：袁渊常晓斌姚安梅王静陕西省肿瘤医院妇瘤科陕西西安710061 陕西省肿瘤医院放疗科陕西西安710061

目的:研究mir-300对人卵巢癌细胞增殖、凋亡和周期的影响。方法:通过荧光实时定量PCR(qRT-PCR)检测卵巢正常上皮细胞及卵巢癌细胞中mir-300的表达水平和mir-300 siRNA的沉默效果;CCK-8法检测沉默mir-300对卵巢癌细胞增殖的影响;流式细... 详细信息

目的:研究mir-300对人卵巢癌细胞增殖、凋亡和周期的影响。方法:通过荧光实时定量PCR(qRT-PCR)检测卵巢正常上皮细胞及卵巢癌细胞中mir-300的表达水平和mir-300 siRNA的沉默效果;CCK-8法检测沉默mir-300对卵巢癌细胞增殖的影响;流式细胞术检测沉默mir-300对卵巢癌细胞凋亡和周期的影响。结果:mir-300在卵巢癌细胞中的表达显著高于卵巢正常上皮细胞;mir-300 siRNA可有效沉默卵巢癌细胞中mir-300的表达;沉默mir-300的表达可以明显抑制卵巢癌细胞的增殖能力,增强卵巢癌细胞的凋亡能力,并使卵巢癌细胞的周期阻滞于G_1期。结论:mir-300在卵巢癌细胞的增殖、凋亡和周期过程中起着重要的调控作用。

关键词： mir-300 卵巢癌增殖凋亡细胞周期

mir-300在胶质母细胞瘤中表达上调并促进胶质瘤细胞增殖、侵袭和上皮-间质转化的研究

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Mir-300在胶质母细胞瘤中表达上调并促进胶质瘤细胞增殖、侵袭和...

mir-300通过下调ROCK1降低肝癌细胞增殖和分化的研究

2015浙江省神经外科学学术年会暨浙闽江赣四省神经外科学术交流会

作者：叶红星黄红光金晶曹飞方泽斌郑秀珏詹仁雅浙江大学医学院附属第一医院神经外科

目的越来越多的研究表明micro RNA参与了肿瘤的发生发展。mi R-300在多种恶性肿瘤中起促进或抑制肿瘤生长的作用。但是,其在人胶质母细胞瘤中的具体作用仍不太明确。本研究目的探索mi R-300在人胶质母细胞瘤中的表达及其是否影响肿瘤细... 详细信息

目的越来越多的研究表明micro RNA参与了肿瘤的发生发展。mi R-300在多种恶性肿瘤中起促进或抑制肿瘤生长的作用。但是,其在人胶质母细胞瘤中的具体作用仍不太明确。本研究目的探索mi R-300在人胶质母细胞瘤中的表达及其是否影响肿瘤细胞的增殖、侵袭等生物学行为。方法:用q RT-PCR的方法检测了胶质瘤细胞株(U251,U87,SHG44)及45例有临床预后的胶质母细胞瘤组织标本和5例正常脑组织标本中mir-300的表达情况。mir-300用lipofectamine2000(Invitrogen,CA,USA)转染U87细胞,CCK-8检测细胞的增殖,Transwell小室检测肿瘤细胞的侵袭能力。用Target Scan数据库、荧光素酶实验及western blot确定mir-300的靶基因。结果:RT-q PCR检测发现,与低级别胶质瘤细胞株SHG44及正常脑组织比较,mir-300在胶质母细胞瘤株(U251,U87)及胶质母细胞瘤组织中表达升高;转染mir-300的U87细胞株较未转染组有更强的增殖、侵袭能力,并促进上皮-间质转化。而且,我们确认LZTS2是mir-300的一个靶基因,过表达LZTS2是能明显抑制mir-300促进U87细胞的增殖、侵袭及EMT的作用。结论:在胶质母细胞瘤中mir-300通过抑制LZTS2的表达促进肿瘤细胞的增殖、侵袭和上皮-间质转化。

关键词：脑胶质瘤 mir-300 增殖侵袭上皮-间质转化

来源： cnki会议评论

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实用癌症杂志 2021年第8期36卷 1228-1231页

作者：贡旭楠饶艳伟中山大学附属第三医院 510000 吉林省人民医院 130021

目的探讨mir-300是否通过下调ROCK1来降低肝癌HepG2和Huh-7细胞的增殖和分化能力。方法RT-qPCR检测肝癌组织和细胞中mir-300和ROCK1的表达水平;体外培养肝癌细胞HepG2和Huh-7,给予mir-300模拟物转染后,RT-qPCR和Western Blot检测细胞RO... 详细信息

目的探讨mir-300是否通过下调ROCK1来降低肝癌HepG2和Huh-7细胞的增殖和分化能力。方法RT-qPCR检测肝癌组织和细胞中mir-300和ROCK1的表达水平;体外培养肝癌细胞HepG2和Huh-7,给予mir-300模拟物转染后,RT-qPCR和Western Blot检测细胞ROCK1蛋白表达,MTT法检测细胞的增殖率,流式细胞术检测细胞Sub-G0/G1比值。结果RT-qPCR结果表明:与正常肝组织相比,肝癌组织和肝癌细胞中mir-300的表达水平明显降低(Pmir-300 mimic组的ROCK1的表达水平明显降低(Pmir-300 mimic组的细胞增殖率明显降低(Pmir-300 mimic组的Sub-G0/G1比值水平明显增加(Pmir-300通过下调ROCK1降低肝癌HepG2和Huh-7细胞的增殖和分化能力。

关键词：肝癌 mir-300 ROCK1 增殖分化

急性肺损伤患者血浆mir-221及mir-300表达水平及与预后相关性分析

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国际检验医学杂志 2021年第5期42卷 545-548,553页

作者：曾宗鼎邢崇浩郑辉才卓越李镇杜莉陈亮张璐璐三亚中心医院呼吸内科海南三亚572000

目的探讨急性肺损伤(ALI)患者血浆mir-221及mir-300表达水平及其与预后相关性。方法选取2016年1月至2019年6月该院收治的ALI患者137例,根据ALI患者生存情况分为存活组(n=90)和死亡组(n=47)。采用急性生理学与慢性健康状况评分系统Ⅱ(APA... 详细信息

目的探讨急性肺损伤(ALI)患者血浆mir-221及mir-300表达水平及其与预后相关性。方法选取2016年1月至2019年6月该院收治的ALI患者137例,根据ALI患者生存情况分为存活组(n=90)和死亡组(n=47)。采用急性生理学与慢性健康状况评分系统Ⅱ(APACHEⅡ)评分标准将ALI患者分为低中危组(n=74)和高危组(n=63)。采用实时荧光定量PCR检测各组血浆mir-221及mir-300表达水平。应用多因素Logistic回归分析ALI患者死亡的危险因素。绘制受试者工作特征曲线(ROC曲线)分析血浆mir-221及mir-300表达水平对ALI患者死亡的预测价值。结果死亡组血浆mir-221及mir-300表达水平均明显高于存活组,差异有统计学意义(Pmir-221、mir-300表达水平及病死率均明显高于低中危组,差异有统计学意义(Pmir-221(OR=3.270,95%CI:2.247~7.115)及mir-300(OR=2.683,95%CI:1.715~6.207)表达水平升高是ALI患者死亡的独立危险因素。ROC曲线分析显示,血浆mir-221及mir-300表达水平预测ALI患者死亡的最佳截断值分别为2.80、1.73,二者联合预测ALI患者死亡的曲线下面积(0.907,95%CI:0.858~0.974)最大。结论血浆mir-221及mir-300表达水平升高与ALI患者预后不良相关,且其是ALI患者死亡的独立危险因素,二者联合对预测ALI患者死亡具有一定的价值。

关键词：急性肺损伤 mir-221 mir-300 预后

胃癌患者血清mir-300的表达及临床意义

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现代实用医学 2014年第7期26卷 796-798,830,F0003页

作者：龙香娥董琢杨杰吴巧萍陈慧玲宁波卫生职业技术学院宁波315100 浙江医药高等专科学校宁波大学医学院宁波市医疗中心李惠利医院

目的探讨胃癌患者血清中mir-300的表达水平及mir-300作为胃癌诊断标记物的可能性。方法采用实时定量RT-PCR方法检测25例胃癌患者及15例健康志愿者血清中mir-300的表达水平;采用全自动化学发光免疫分析法,检测上述标本的血清癌胚抗原(CEA... 详细信息

目的探讨胃癌患者血清中mir-300的表达水平及mir-300作为胃癌诊断标记物的可能性。方法采用实时定量RT-PCR方法检测25例胃癌患者及15例健康志愿者血清中mir-300的表达水平;采用全自动化学发光免疫分析法,检测上述标本的血清癌胚抗原(CEA)、癌抗原125(CA125)、癌抗原199(CA199)及癌抗原153(CA153)水平。结果 25例胃癌患者mir-300表达水平是正常人的23.4倍,两者差异有统计学意义(=0.024);胃癌患者血清CEA、CA125、CA199及CA153水平显著高于对照组(均mir-300的敏感性比CEA、CA125、CA199及CA153高,但特异性较低。结论血清mir-300在胃癌中的表达水平高于正常人,对于胃癌的诊断具有一定价值。

关键词：胃肿瘤癌肿瘤标志物 mir-300