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不明原因复发性流产患者血清lncRNA-KCNQ1OT1、mir-29a-3p及SOCS3mRNA水平的表达及其相关性

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现代实用医学 2024年第5期36卷 662-664页

作者：王珺周荷玲李洁娴陈雪君浙江省台州医院浙江省台州317000

复发性流产是指与同一性伴侣在妊娠28周之前,连续2次及以上发生自然流产的情况,其病因复杂,至今仍有50%以上的复发性流产病因尚未明确,即不明原因复发性流产(URSA)^([1-2])。有研究表明URSA患者子宫蜕膜存在明显的炎症微环境,可以引起... 详细信息

复发性流产是指与同一性伴侣在妊娠28周之前,连续2次及以上发生自然流产的情况,其病因复杂,至今仍有50%以上的复发性流产病因尚未明确,即不明原因复发性流产(URSA)^([1-2])。有研究表明URSA患者子宫蜕膜存在明显的炎症微环境,可以引起性激素紊乱,与URSA的发生及发展密切相关^([3])。细胞因子信号传导抑制因子3 (SOCS3)是一个具有多项调节功能的蛋白质分子,可以调节机体免疫炎症反应,能够促进滋养细胞和T细胞增殖分化,从而影响着复发性流产的发生和发展^([4-5])。

关键词：复发性流产 lncRNA-KCNQ1OT1 mir-29a-3p 细胞因子信号传导抑制因子3

Inhibiting collagen Ⅰ production and tumor cell colonization in the lung via mir-29a-3p loading of exosome-/liposome-based nanovesicles

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Acta pharmaceutica Sinica B 2022年第2期12卷 939-951页

作者： Yan Yan Cancan Du Xixi Duan Xiaohan Yao Jiajia Wan Ziming Jiang Zhongyu Qin Wenqing Li Longze pan Zhuoyu Gu Fazhan Wang Ming Wang Zhihai Qin Medical Research Center the First Affiliated Hospital of Zhengzhou UniversityZhengzhou UniversityZhengzhou 450052China Academy of Medical Sciences Zhengzhou UniversityZhengzhou 450052China Department of Urology the First Affiliated Hospital of Zhengzhou UniversityZhengzhou UniversityZhengzhou 450052China Changzhi Medical College Changzhi 046000China Institute of Biophysics Chinese Academy of SciencesBeijing 100101China

The lung is one of the most common sites for cancer metastasis.Collagens in the lung provide a permissive microenvironment that supports the colonization and outgrowth of disseminated tumor cells.Therefore,down-regulating the production of collagens may contribute to the inhibition of lung metastasis.It has been suggested that mi R-29 exhibits effective anti-fibrotic activity by negatively regulating the expression of collagens.Indeed,our clinical lung tumor data shows that mi R-29 a-3 p expression negatively correlates with collagen I expression in lung tumors and positively correlates with patients’outcomes.However,suitable carriers need to be selected to deliver this therapeutic mi RNA to the lungs.In this study,we found that the chemotherapy drug cisplatin facilitated mi R-29 a-3 p accumulation in the exosomes of lung tumor cells,and this type of exosomes exhibited a specific lung-targeting effect and promising collagen down-regulation.To scale up the preparation and simplify the delivery system,we designed a lung-targeting liposomal nanovesicle(by adjusting the molar ratio of DOTAp/cholesterol-mi RNAs to 4:1)to carry mi R-29 a-3 p and mimic the exosomes.This liposomal nanovesicle delivery system significantly down-regulated collagen I secretion by lung fibroblasts in vivo,thus alleviating the establishment of a pro-metastatic environment for circulating lung tumor cells.

关键词： Lung metastasis mir-29a-3p CollagenⅠ Liposomal nanovesicle Exosomes Fibroblasts pre-metastatic niche

mir-29a-3p靶向SGMS2调控pCOS卵巢颗粒细胞慢性炎症的机制研究

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中华生殖与避孕杂志 2023年第10期43卷 1032-1040页

作者：徐芳李晓珂潘紫萌梁锦玲马明匡洪影孙淼黑龙江中医药大学附属第一医院妇科哈尔滨150040 北京中医医院顺义医院妇产科北京101300 黑龙江中医药大学第一临床医学院哈尔滨150040 黑龙江中医药大学附属第一医院外科哈尔滨150040

目的探究mir-29a-3p/SGMS2轴对人类卵巢颗粒样肿瘤细胞系(human ovarian granulosa-like tumor cell line,KGN)炎症反应的调控机制。方法通过构建并验证过表达和敲低mir-29a-3p及SGMS2转染KGN细胞模型,双荧光素酶报告基因实验检测mir-29... 详细信息

目的探究mir-29a-3p/SGMS2轴对人类卵巢颗粒样肿瘤细胞系(human ovarian granulosa-like tumor cell line,KGN)炎症反应的调控机制。方法通过构建并验证过表达和敲低mir-29a-3p及SGMS2转染KGN细胞模型,双荧光素酶报告基因实验检测mir-29a-3p与SGMS2的结合;MTT法检测各组细胞的增殖;免疫荧光法观察增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,pCNA)和Ki67蛋白荧光强度;流式细胞术检测细胞凋亡;酶联免疫吸附法检测细胞上清液中肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白介素(interleukin,IL)-6、IL-1β和鞘磷脂的表达;Western blotting检测细胞中Caspase-3、cleaved-Caspase-3、SGMS2和p-p65蛋白表达。结果mir-29a-3p与SGMS2之间存在位点结合,且能够负向调控SGMS2的表达水平。KGN细胞中过表达SGMS2能够增高其吸光度值(p=0.007),并增强其pCNA和Ki67蛋白的免疫荧光强度(均pp=0.001),升高炎症因子TNF-α、IL-6、IL-1β和鞘磷脂的表达水平(均ppase-3、p-p65和SGMS2蛋白表达量升高(p=0.001,ppmir-29a-3p与SGMS2之间存在靶向负向调节关系,SGMS2能够促进KGN细胞的炎症反应,可为多囊卵巢综合征等妇科内分泌疾病的治疗提供靶点。

关键词：多囊卵巢综合征 mir-29a-3p 神经鞘磷脂合成酶2 卵巢颗粒细胞炎症

熟地黄水提液通过外泌体mir-29a-3p调节OVX大鼠的脂代谢

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中国病理生理杂志 2022年第5期38卷 893-904页

作者：梁梓雯胡雪灵钟文强罗冰洁潘琪林青李小云王攀攀朱晓峰蔡宇张荣华杨丽暨南大学药学院广东广州510632 暨南大学中医学院广东广州510632

目的:探讨熟地黄(Rehmanniae Radix praeparata,RR)水提液对双侧卵巢切除(ovariectomy,OVX)大鼠脂代谢紊乱的影响及作用机制。方法:将40只3月龄SD雌性大鼠随机分为5组,分别为假手术组、OVX组、RR水提液低剂量组、RR水提液中剂量组和RR... 详细信息

目的:探讨熟地黄(Rehmanniae Radix praeparata,RR)水提液对双侧卵巢切除(ovariectomy,OVX)大鼠脂代谢紊乱的影响及作用机制。方法:将40只3月龄SD雌性大鼠随机分为5组,分别为假手术组、OVX组、RR水提液低剂量组、RR水提液中剂量组和RR水提液高剂量组,对大鼠分别行假手术或OVX,药物灌胃12周后取材,测定大鼠的体重、腹围、血清雌二醇(estradiol,E2)、子宫重量、胰岛素(insulin,INS)和血脂四项;行肝脏HE染色和油红O染色观察脂质积累;行腹部脂肪HE染色观察脂肪体积;Western blot和RT-qpCR检测腹部脂肪过氧化物酶体增殖物激活受体γ(peroxisome proliferator-activated receptorγ,ppARγ)、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)和白细胞介素1β(interleukin,IL-1β)的表达;RT-qpCR检测肥胖相关因子糖蛋白非转移性黑色素瘤蛋白B(glycoprotein non-metastatic melanoma protein B,GpNMB)、血清外泌体mir-29a-3p、腹部脂肪mir-29a-3p及其靶基因核因子I A(nuclear factor I A,NFIA)的表达;Western blot检测腹部脂肪Wnt信号通路相关蛋白的表达。结果:RR水提液显著降低OVX大鼠的腹围、INS、低密度脂蛋白胆固醇(low-density lipoprotein cholesterol,LDL-C)、肝脏脂质积累、腹部脂肪细胞扩张、ppARγ、TNF-α、IL-1β、GpNMB和NFIA的表达,显著升高OVX大鼠的血清E2、血清外泌体mir-29a-3p和腹部脂肪mir-29a-3p水平,激活腹部脂肪Wnt信号通路。结论:RR水提液可降低OVX大鼠的血清E2、INS、LDL-C和肝脏脂质积累,抑制腹部脂肪细胞扩张和炎症反应,其作用机制可能是与血清外泌体中mir-29a-3p和腹部脂肪中mir-29a-3p的含量增加后致NFIA表达量下降,从而激活腹部脂肪组织中Wnt信号通路有关。

关键词：熟地黄水提液 mir-29a-3p 卵巢切除大鼠脂代谢

地锦草乙醇提取物通过circRHOT1/mir-29a-3p轴抑制结直肠癌SW480细胞的恶性生物学行为

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中国肿瘤生物治疗杂志 2022年第9期29卷 806-812页

作者：樊红革戴卫波张学峰中山市中医院肛肠科广东中山528400 中山市中医院中药药理实验室广东中山528400 中山市中医院第三外科广东中山528400

目的:探讨地锦草乙醇提取物(EEEH)对人结直肠癌SW480细胞生物学行为的影响及其分子机制。方法:体外培养SW480细胞,实验分为Con组、EEEH-L组、EEEH-M组、EEEH-H组、si-NC组、si-circRHOT1组、EEEH-H+pcDNA组、EEEH-H+pcDNA-circRHOT1组,分别以si-NC、si-circRHOT1、pcDNA、pcDNA-circRHOT1转染SW480细胞,采用CCK-8法、细胞克隆形成实验、Transwell实验分别检测转染后各组细胞的增殖、迁移及侵袭能力,qpCR法检测转染后各组SW480细胞circRHOT1和mir-29a-3p的表达,WB法检测各组细胞中MMp-2、MMp-9蛋白的表达。双荧光素酶报告基因实验检测circRHOT1与mir-29a-3p之间的靶向关系。结果:与Con组比较,EEEH-L组、EEEH-M组、EEEH-H组SW480细胞中MMp-2和MMp-9蛋白表达均明显降低(均ppmir-29a-3p的表达均升高(均ppmir-29a-3p的表达。敲减circRHOT1可抑制SW480细胞的增殖、迁移及侵袭能力,而过表达circRHOT1则可减弱EEEH对SW480细胞增殖、迁移及侵袭的抑制作用。结论:EEEH可通过调控circRHOT1/mir-29a-3p轴而抑制结直肠癌SW480细胞的增殖、迁移及侵袭能力。

关键词：结直肠癌 SW480细胞地锦草乙醇提取物 circRHOT1 mir-29a-3p 增殖迁移侵袭

妊娠期糖尿病孕妇血清微小RNA-29a-3p、胰岛素样生长因子-1表达水平及其对胎儿生长受限的预测价值

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齐齐哈尔医学院学报 2024年第2期45卷 112-117页

作者：郭欢欢蔡海瑜张晓丹周新华郑州市妇幼保健院妇科河南郑州450012 郑州市妇幼保健院妇产科河南郑州450012

目的探究妊娠期糖尿病(GDM)孕妇血清微小核糖核苷酸(micro RNA,mir)-29a-3p、胰岛素样生长因子-1(IGF-1)表达水平及其对胎儿生长受限的预测价值。方法选择2019年8月—2022年12月在本院202例就诊分娩的GDM患者(132例)及同期体检健康孕妇... 详细信息

目的探究妊娠期糖尿病(GDM)孕妇血清微小核糖核苷酸(micro RNA,mir)-29a-3p、胰岛素样生长因子-1(IGF-1)表达水平及其对胎儿生长受限的预测价值。方法选择2019年8月—2022年12月在本院202例就诊分娩的GDM患者(132例)及同期体检健康孕妇(70名)作为研究对象,就诊分娩的GDM患者为患病组,同期体检健康孕妇为对照组。根据GDM患者是否伴有胎儿生长受限分为GDM组和胎儿生长受限组,GDM组88例,胎儿生长受限组44例。qRT-pCR法检测血清mir-29a-3p水平,放射免疫法检测血清IGF-1表达。TargetScanHuman网站预测mir-29a-3p与IGF-1靶向关系。分析mir-29a-3p、IGF-1及其与胰岛素水平、新生儿体重、新生儿身长的相关性;Logistic回归分析GDM孕妇发生胎儿生长受限的影响因素;ROC曲线分析血清mir-29a-3p,IGF-1水平评估GDM孕妇发生胎儿生长受限的预测价值。结果患病组孕妇血清mir-29a-3p水平高于对照组,IGF-1水平低于对照组,差异有统计学意义(pmir-29a-3p水平低于胎儿生长受限组,IGF-1水平高于胎儿生长受限组,差异有统计学意义(pmir-29a-3p直接靶向作用于IGF-1表达;GDM组和胎儿生长受限组孕妇胰岛素、新生儿体重、新生儿身长比较,差异具有统计学意义(pmir-29a-3p与IGF-1水平呈负相关(r=-0.402,pmir-29a-3p水平与新生儿体重、新生儿身长呈负相关,IGF-1与新生儿体重、新生儿身长呈正相关(pmir-29a-3p,IGF-1是GDM孕妇发生胎儿生长受限的影响因素(pmir-29a-3p,IGF-1水平联合评估GDM孕妇发生胎儿生长受限的曲线下面积(AUC)为0.877(95%CI:0.808-0.928),显著高于两指标单独检测(Z_(mir-29a-3p-联合)=2.893,p=0.004;Z_(IGF-1-联合)=2.810,p=0.005)。结论GDM孕妇血清mir-29a-3p水平上调,IGF-1水平下调,与胎儿生长受限密切相关,二者联合对GDM孕妇发生胎儿生长受限有较好预测价值。

关键词：妊娠期糖尿病 mir-29a-3p 胰岛素样生长因子-1 胎儿生长受限预测价值

黄芪注射液通过mir-29a-3p/COL1A1信号轴干预肺纤维化的机制研究

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中华中医药学刊 2023年第3期41卷 107-110,I0026页

作者：周飘杜婧吴程周芮安丽萍王飞杜全宇成都中医药大学附属医院四川成都610072

目的探究黄芪注射液对肺纤维化的干预作用及可能机制。方法利用TargetScanHuman网站预测mir-29a-3p的靶基因。气管内注入博来霉素以构建肺纤维化大鼠模型。大鼠随机分为假手术组、博来霉素组、吡非尼酮组、黄芪注射液低剂量组和高剂量组... 详细信息

目的探究黄芪注射液对肺纤维化的干预作用及可能机制。方法利用TargetScanHuman网站预测mir-29a-3p的靶基因。气管内注入博来霉素以构建肺纤维化大鼠模型。大鼠随机分为假手术组、博来霉素组、吡非尼酮组、黄芪注射液低剂量组和高剂量组,分别予生理盐水腹腔注射、吡非尼酮灌胃、黄芪注射液低剂量和高剂量腹腔注射。连续给药28 d后,用肺功能仪测定肺通气指标,Masson染色和天狼猩红染色观察肺组织镜下胶原沉积情况,实时定量聚合酶链反应(real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-qpCR)检测肺组织mir-29a-3p和Ⅰ型胶原α1链基因(type I alpha 1 chain collagen gene,COL1A1)mRNA表达量。结果mir-29a-3p与COL1A1之间具有良好的靶向调控关系。与假手术组相比,博来霉素组大鼠肺动态顺应性(Cydn)显著下降,而吸气相气道阻力(RL)、呼气相气道阻力(Re)显著提高,肺组织COL1A1 mRNA表达显著提高且镜下胶原沉积明显增多(ppppmir-29a-3p表达均有上升趋势,但仅黄芪低剂量组与博来霉素组比较差异有显著统计学意义(ppmir-29a-3p/COL1A1信号轴减少肺内胶原沉积并改善博来霉素诱导的肺纤维化大鼠模型的肺通气障碍。

关键词：黄芪注射液肺纤维化 mir-29a-3p COL1A1 胶原沉积

熟地黄水提液通过Exo mir-29a-3p调节OVX大鼠的骨代谢与脂代谢

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熟地黄水提液通过Exo miR-29a-3p调节OVX大鼠的骨代谢与脂代谢

作者：梁梓雯暨南大学

学位级别：硕士

目的:采用双侧卵巢切除(OVX)大鼠模型模拟绝经后女性骨代谢和脂代谢失常的状态,从假手术(Sham)与OVX大鼠血清外泌体(Exo)中的差异mi RNAs及其靶基因与相关信号通路切入,探讨熟地黄(RR)水提液对OVX大鼠骨代谢和脂代谢紊乱的影响及作用机... 详细信息

目的:采用双侧卵巢切除(OVX)大鼠模型模拟绝经后女性骨代谢和脂代谢失常的状态,从假手术(Sham)与OVX大鼠血清外泌体(Exo)中的差异mi RNAs及其靶基因与相关信号通路切入,探讨熟地黄(RR)水提液对OVX大鼠骨代谢和脂代谢紊乱的影响及作用机制。方法:1.采用3月龄SpF级SD雌性大鼠40只,自由饮水和摄食,适应性喂养1 w后将大鼠随机分成5组,分别为Sham组、模型(OVX)组、RR水提液低剂量(RR-L)组、RR水提液中剂量(RR-M)组和RR水提液高剂量(RR-H)组,Sham组大鼠仅摘除卵巢周围部分脂肪,其他组大鼠行OVX,术后药物灌胃12 w,取血清用ELISA法检测雌二醇(E2)水平以探讨RR水提液的类雌激素作用,取子宫进行称重与拍照、取肝肾作HE染色以判断RR水提液对子宫、肝、肾的影响;2.取各组大鼠的股骨进行Micro-CT扫描、3D重建和HE染色,观察骨密度(BMD)和骨微结构变化,确定RR水提液的最佳干预剂量;全自动生化分析仪和ELISA法检测血清骨代谢因子Ca2+、p5+、骨钙素(OCN)、抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAp)的水平,RT-q pCR法检测股骨碱性磷酸酶(ALp)、OCN、Ⅰ型胶原α1链蛋白(COL1A1)和Runt相关转录因子2(RUNX2)的m RNA水平,免疫组织化学法(IHC)检测股骨COL1A1和RUNX2的蛋白表达部位,Western blot法检测股骨ALp、COL1A1和RUNX2的蛋白表达量,以观察RR水提液对骨代谢的影响;3.测量大鼠体重及腹围;ELISA法和全自动生化分析仪检测血清脂代谢因子胰岛素(INS)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDLC)和高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C),并取肝脏作油红O染色,以观察RR水提液对OVX大鼠血清及肝脏脂代谢水平的影响;对腹部脂肪作HE染色以测量脂肪细胞大小,RT-q pCR法检测腹部脂肪过氧化物酶体增殖物激活受体γ(ppARγ)、糖蛋白非转移性黑色素瘤蛋白B(GpNMB)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白介素-1β(IL-1β)的m RNA水平;Western blot法检测腹部脂肪ppARγ、TNF-α和IL-1β的蛋白表达量,以观察RR水提液对腹部脂肪脂代谢的影响;4.试剂盒法提取血清Exo后,利用透射电镜、激光纳米粒度仪和Western blot法检测表面标志物进行Exo鉴定;提取Exo中的mi RNAs并用RT-q pCR法检测mi R-29a-3p的水平;RT-q pCR法检测股骨和腹部脂肪中的mi R-29a-3p、核因子I/A(NFⅠA)和经典Wnt信号通路抑制剂——分泌型卷曲相关蛋白1(SFRp1)的m RNA水平;Western blot法检测股骨和腹部脂肪中经典Wnt信号通路的关键因子——SFRp1、低密度脂蛋白受体相关蛋白5(LRp5)、磷酸化糖原合成酶激酶-3β(p-GSK-3β)(Ser 9)和糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)的蛋白表达量,以探讨RR水提液对骨代谢和脂代谢的调节机制。结果:1.低、中、高剂量的RR水提液均可提高OVX大鼠血清E2水平(pp>0.05),也不会导致OVX大鼠的肝肾发生明显的病理改变;2.OVX大鼠股骨的骨微结构遭到严重破坏,股骨的BMD也显著降低(pp5+和TRAp较Sham大鼠高(ppp5+水平(pp、OCN、COL1A1和RUNX2的m RNA表达量降低(pp、COL1A1和RUNX2的蛋白表达量也降低(pp3.OVX组大鼠体重从第2 w开始显著高于Sham组大鼠,给药后无明显降低(p>0.05),但RR-M可逆转OVX组大鼠的腹围增加(ppppARγ和GpNMB的表达(pp29a-3p水平均显著低于Sham大鼠(pp29a-3p可能靶向NFIA,OVX大鼠股骨和腹部脂肪中的NFIA水平均显著增高(ppp1进而调节Wnt信号

关键词：熟地黄水提液 OVX大鼠骨代谢脂代谢 mir-29a-3p Wnt信号通路

mir-29a-3p靶向COL3A1调控瘢痕疙瘩成纤维细胞的增殖和凋亡

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miR-29a-3p靶向COL3A1调控瘢痕疙瘩成纤维细胞的增殖和凋亡

作者：张宁宁新乡医学院

学位级别：硕士

背景瘢痕疙瘩（keloid disease,KD）是皮肤损伤后伤口异常愈合的产物,因其常出现疼痛或瘙痒等感觉异常、影响美观和导致局部功能障碍等症状,对患者的生活质量影响严重。KD的形成机制尚不明确,目前的治疗方法效果有限且容易复发,因此需... 详细信息

背景瘢痕疙瘩（keloid disease,KD）是皮肤损伤后伤口异常愈合的产物,因其常出现疼痛或瘙痒等感觉异常、影响美观和导致局部功能障碍等症状,对患者的生活质量影响严重。KD的形成机制尚不明确,目前的治疗方法效果有限且容易复发,因此需要探索新的治疗策略。微小RNA（micro RNA,mirNA）是一种短链非编码RNA,在体内调节多种基因的表达,随着对KD研究的深入,许多mirNA被证明是KD发病过程中的关键调控因子。Ⅲ型胶原蛋白α-1（CollagenⅢalpha-1,COL3A1）是胶原基因的一种,参与Ⅲ型胶原蛋白α-1链的编码,已被证明在KD中表达升高。本研究探索了mir-29a-3p和COL3A1在KD中的作用和初步机制。目的1.观察mir-29a-3p在瘢痕疙瘩组织中的表达情况;2.证明瘢痕疙瘩成纤维细胞中mir-29a-3p对COL3A1的靶向作用;3.观察mir-29a-3p对瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖和凋亡的调控作用。方法1.收集临床确诊的瘢痕疙瘩患者的瘢痕组织28例及手术切除的正常皮肤组织15例,HE染色明确KD诊断,实时荧光定量逆转录pCR法（Quantitative reverse transcription-pCR,qRT-pCR）检测瘢痕组织及正常真皮组织中mir-29a-3p及COL3A1的表达水平。2.观察上调mir-29a-3p表达对KFBs的影响:向人瘢痕疙瘩成纤维细胞（keloid fibroblasts,KFBs）中转染mir-29a-3p mimic或mir-NC,通过qRT-pCR检测转染效果,CCK-8法和流式细胞术检测细胞增殖和凋亡。3.证明mir-29a-3p靶向COL3A1:利用Targetcan预测mir-29a-3p的潜在靶基因COL3A1,用野生型报告基因载体（含有pmir GLO-Wt-COL3A1 3’UTR）或突变型报告基因载体（含有pmir GLO-Mt-COL3A1 3’UTR或pmir GLO-M1t-COL3A1 3’UTR或pmir GLO-M2t-COL3A1 3’UTR）分别与mir-29a-3p mimic或mir-NC共转染KFBs细胞,利用双荧光素酶报告实验和Western Blot验证mir-29a-3p与COL3A1之间的靶向关系。4.通过rescue实验检测过表达COL3A1对上调mir-29a-3p的KFBs细胞效应的影响:用mir-NC或mir-29a-3p mimic或mir-29a-3p mimic+pc DNA3.1-COL3A1分别转染细胞,Western Blot检测各组细胞COL3A1表达,利用CCK-8法和流式细胞术,观察过表达COL3A1逆转上调mir-29a-3p对KFBs细胞增殖和凋亡的影响。结果1.与正常组织相比,瘢痕疙瘩组织中mir-29a-3p表达水平显著降低（p＜0.01）,COL3A1表达水平显著升高（p＜0.01）;2.qRT-pCR和Western Blot结果显示:转染mir-29a-3p mimic后的细胞,mir-29a-3p表达显著升高,COL3A1蛋白表达显著减少（p＜0.01）,CCK-8法和流式细胞术显示:上调mir-29a-3p表达后,抑制了KFBs的细胞增殖,促进细胞凋亡（p＜0.01）。3.生物信息学分析表明mir-29a-3p与COL3A1的3’UTR存在两个结合位点。双荧光素酶报告实验结果表明:当野生型报告基因载体与mir-29a-3p mimic共转染KFBs细胞时,荧光素酶活性受到明显抑制（p＜0.01）,而含有pmir GLO-Mt-COL3A13’UTR或pmir GLO-M1t-COL3A1 3’UTR或pmir GLO-M2t-COL3A1 3’UTR的突变型报告基因载体与mir-29a-3p mimic共转染细胞时,荧光素酶活性变化无统计学差异,28例瘢痕疙瘩组织中pearson相关性分析结果显示mir-29a-3p与COL3A1的表达水平呈显著负相关。4.与转染mir-29a-3p mimic组KFBs细胞相比,mir-29a-3p mimic+pc DNA3.1-COL3A1组细胞增殖活力显著升高,凋亡率降低（p＜0.05）;与转染mir-29a-3p mimic组KFBs细胞相比,mir-29a-3p mimic+pc DNA3.1-COL3A1组mir-29a-3p表达无明显差异（p＞0.05）。结论1.瘢痕疙瘩组织中mir-29a-3p显著低表达;2.瘢痕疙瘩成纤维细胞中mir-29a-3p靶向负调控COL3A1的表达;3.过表达mir-29a-3p靶向COL3A1抑制KFBs细胞增殖、促进凋亡。

关键词： mir-29a-3p COL3A1 瘢痕疙瘩增殖凋亡