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长链非编码RNA NEAT1靶向mir-27b调控RA-FLS细胞生物学功能机制研究

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现代诊断与治疗 2023年第18期34卷 2697-2700,2726页

作者：欧阳棠林宋丽玉方慧玲郑悦谭吉褚葆龄袁浩然徐杰易金萍黄自坤罗清南昌大学公共卫生学院南昌大学第一附属医院/赣江新区人民医院检验科南昌大学第一附属医院检验科江西南昌330000

目的研究长链非编码RNA NEAT1靶向mir-27b调控类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞(RA-FLS)细胞生物学功能机制。方法选取2021年1月至2022年12月在南昌大学第一附属医院东湖院区风湿免疫科确诊的类风湿关节炎(RA)患者40例作为观察组,同期行膝... 详细信息

目的研究长链非编码RNA NEAT1靶向mir-27b调控类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞(RA-FLS)细胞生物学功能机制。方法选取2021年1月至2022年12月在南昌大学第一附属医院东湖院区风湿免疫科确诊的类风湿关节炎(RA)患者40例作为观察组,同期行膝关节手术的健康创伤患者40例作为对照组开展研究。分别采集观察组和对照组研究对象的膝关节滑膜组织中进行培养,培养成功之后将RA-FLS细胞根据免疫荧光分为对照组以及观察组。其中观察组待细胞汇合度达至80%时转入si-NEAT1,对照组则转入对照组-siRNA。比较两组NEAT1、mir-27b的表达,RA-FSL细胞生物学功能,炎症因子表达水平,并行Pearson相关性分析。结果观察组NEAT1、mir-27b相对表达量分别相较于对照组均更低,差异有统计学意义(Pmir-27b与IL-1β、IL-6、TNF-α表达水平均呈正相关(Pmir-27b调控炎症因子,进而影响RA-FLS细胞生物学功能。

关键词：类风湿性关节炎成纤维样滑膜细胞长链非编码RNA NEAT1 mir-27b 生物学功能

在心肌细胞中过表达mir-27b导致小鼠发生心肌纤维化和线粒体损伤

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在心肌细胞中过表达miR-27b导致小鼠发生心肌纤维化和线粒体损伤

mir-132、mir-27b调控心力衰竭大鼠心肌重构、心功能的作用机制

中国遗传学会第九次全国会员代表大会暨学术研讨会

作者：侯宁王剑李振华曹阳范开吉杨晓军事医学科学院生物工程研究所

以往的mirNA芯片研究结果显示,mir-27b在人类心脏疾病标本和压力负荷引起的小鼠心肌肥厚模型中表达水平明显升高,提示其在心脏疾病发生过程中发挥了重要功能。为研究mir-27b在心脏组织中的功能,文章建立了在心肌细胞特异性α-肌球蛋白重... 详细信息

以往的mirNA芯片研究结果显示,mir-27b在人类心脏疾病标本和压力负荷引起的小鼠心肌肥厚模型中表达水平明显升高,提示其在心脏疾病发生过程中发挥了重要功能。为研究mir-27b在心脏组织中的功能,文章建立了在心肌细胞特异性α-肌球蛋白重链(α-MHC)启动子(5.5 kb)控制下过表达mir-27b的转基因小鼠。通过Real-time PCR检测,发现mir-27b前体和成熟体表达水平在转基因小鼠心脏组织中明显升高。mir-27b转基因小鼠不仅出现心肌肥厚,还表现出明显的心肌纤维化。进一步研究表明心肌纤维化的关键调节分子金属基质蛋白酶13(MMPl3)是mir-27b的靶分子,在mir-27b转基因小鼠中MMP13显著下调,胶原分子Ⅰ和Ⅲ则显著上调。此外,还发现mir-27b转基因小鼠会出现心脏超微结构的损伤。以上研究结果表明,mir-27b可能通过抑制MMP13促进心肌纤维化。

关键词： mir-27b 心肌细胞转基因小鼠心肌纤维化 MMP13

来源： cnki会议评论

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中国老年学杂志 2024年第17期 4224-4229页

作者：陈运起吴钟伟赵圣吉李堪董王敢钟江华海南西部中心医院心血管内科中南大学湘雅医学院附属海口医院心血管内科

目的探究微小RNA(mir)-132、mir-27b对缺血性心力衰竭大鼠心肌重构、心功能改变的影响及机制。方法选取SD大鼠50只，随机分为假手术(Sham)组、模型(Model)组、腺病毒介导的mir-132过表达(mir-132 mimics)组、腺病毒介导的mir-27b过表... 详细信息

目的探究微小RNA(mir)-132、mir-27b对缺血性心力衰竭大鼠心肌重构、心功能改变的影响及机制。方法选取SD大鼠50只，随机分为假手术(Sham)组、模型(Model)组、腺病毒介导的mir-132过表达(mir-132 mimics)组、腺病毒介导的mir-27b过表达(mir-27b mimics)组及腺病毒介导的mir-132、mir-27b过表达(mir-132+mir-27b mimics)组；除去Sham组，其他各组均做缺血性心力衰竭模型，实验结束后，观察各组日常状态，检测其血压、心率和超声心动图相关指标[射血分数(EF)、收缩分数(FS)、舒张早期二尖瓣血流速与舒张晚期的血流速度比值(E/A)、心室舒张末期室间隔厚度(IVSd)、左心室舒张末期容积(LVEDV)、左心室收缩末期直径(LVIDs)];苏木素-伊红(HE)染色观察心肌病理改变，流式细胞仪检测心肌细胞凋亡指数(AI);实时荧光定量-聚合酶链反应(qRT-PCR)检测心肌组织内mir-132、mir-27b mRNA表达；Western印迹检测心肌重构相关蛋白[胶原蛋白(Collagen)Ⅰ、CollagenⅢ、基质金属蛋白酶(MMP)-1、MMP-2、MMP-9]表达水平；酶联免疫吸附试验(ELISA)检测心肌组织内炎症因子[白细胞介素(IL)-18、IL-1β、IL-6、肿瘤坏死因子(TNF)-α]水平。结果 Sham组一切正常，Model组呼吸困难喘息、体质量减轻、毛发光泽减少、精神萎靡、活动减少现象；mir-132 mimics组上述症状得到缓解，mir-27b mimics组加重，mir-132过表达可以逆转mir-27b mimics组表现；与Sham组相比，Model组心肌组织内mir-132 mRNA表达明显下调，mir-27b mRNA表达明显上调，收缩压、舒张压、心率、EF、FS、E/A明显下调，LVEDV、LVIDs、IL-18、IL-1β、IL-6、TNF-α水平、AI、CollagenⅠ、CollagenⅢ、MMP-1、MMP-2、MMP-9表达均明显上调(均Pmir-132 mimics组收缩压、舒张压、心率、EF、FS、E/A明显上调，LVEDV、LVIDs、IL-18、IL-1β、IL-6、TNF-α水平、AI、CollagenⅠ、CollagenⅢ、MMP-1、MMP-2、MMP-9表达均明显下调(均Pmir-27b mimics组收缩压、舒张压、心率、EF、FS、E/A水平明显下调，LVEDV、LVIDs、IL-18、IL-1β、IL-6、TNF-α水平、AI、CollagenⅠ、CollagenⅢ、MMP-1、MMP-2、MMP-9表达明显上调(Pmir-132过表达可以逆转mir-27b mimics组因子变化趋势，明显上调收缩压、舒张压、心率、EF、FS、E/A水平，明显下调LVEDV、LVIDs、IL-18、IL-1β、IL-6、TNF-α水平、AI、CollagenⅠ、CollagenⅢ、MMP-1、MMP-2、MMP-9表达(Pmir-132为心力衰竭大鼠心肌重构发展抑制因子，mir-27b为促进因子，二者调控心肌重构发展、心功能变化与心肌细胞凋亡、炎症反应、心肌纤维化密切相关。

关键词：缺血性心力衰竭心肌重构心功能微小RNA(mir)-132 mir-27b 心肌纤维化

MicroRNA(mir)-27b在山羊生长过程中的组织表达谱分析

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农业生物技术学报 2013年第6期21卷 677-683页

作者：凌英会丁建平张晓东王丽娟向浩张运海张子军章孝荣安徽农业大学动物科技学院

本研究旨在分析microRNA(mir)-27b在安徽白山羊(Capra hircus)和波尔山羊生长发育过程中的表达变化,以了解其在山羊肌肉发育中的重要作用。选用安徽白山羊和波尔山羊不同发育时期(初生,6月龄和12月龄3个时期)背最长肌为材料,利用Real-ti... 详细信息

本研究旨在分析microRNA(mir)-27b在安徽白山羊(Capra hircus)和波尔山羊生长发育过程中的表达变化,以了解其在山羊肌肉发育中的重要作用。选用安徽白山羊和波尔山羊不同发育时期(初生,6月龄和12月龄3个时期)背最长肌为材料,利用Real-time quantitative PCR(qRT-PCR)方法检测mir-27b的表达变化。同时,分析了mir-27b在6月龄山羊各组织中(心脏、肝脏、脾脏、肺、肾脏、腿肌和胸肌)的表达。并用MEGA3.1分析mir-27b在不同物种中的保守性。结果显示,mir-27b在安徽白山羊和波尔山羊骨骼肌发育过程中差异表达,呈现不同的表达模式。安徽白山羊12月龄背最长肌mir-27b表达最高,初生时最低。在山羊不同组织中,骨骼肌和心脏中mir-27b表达量较高,肝脏和肾脏中mir-27表达处于中度水平,而在另外4种组织中表达量较低。实验结果表明,mir-27b可能参与山羊肌细胞增殖和分化,从而影响山羊骨骼肌生长发育,与山羊肌肉的生长类型有关。同时序列分析显示,mir-27b在10个物种中具有较高的保守性。山羊mir-27b的表达具有的组织和时序差异性实验结果为进一步研究mir-27b的功能提供基础资料。

关键词：山羊 mir-27b 生长表达

mirNA-27b靶向TET2基因对ox-LDL诱导内皮细胞炎症反应和细胞凋亡的影响

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中华微生物学和免疫学杂志 2019年第11期39卷 856-863页

作者：鲍金伟孙蓓马萍萍徐辉纪丽丽烟台市烟台山医院内二科 264000 烟台市烟台山医院五官科 264000 烟台市烟台山医院心内科 264000

目的探讨mir-27b靶向TET2对ox-LDL诱导的内皮细胞炎症反应和细胞凋亡的影响。方法双荧光素酶报告基因分析法验证mir-27b对TET2的靶向作用。体外用ox-LDL诱导人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVEC),分为对照组... 详细信息

目的探讨mir-27b靶向TET2对ox-LDL诱导的内皮细胞炎症反应和细胞凋亡的影响。方法双荧光素酶报告基因分析法验证mir-27b对TET2的靶向作用。体外用ox-LDL诱导人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVEC),分为对照组、ox-LDL组、ox-LDL+anti-mir-con组、ox-LDL+anti-mir-27b组、ox-LDL+pcDNA组、ox-LDL+pcDNA-TET2组、anti-mir-27b+si-con组和anti-mir-27b+si-TET2组。qRT-PCR检测mir-27b和TET2 mRNA的表达水平,MTT法检测细胞活力,流式细胞仪检测细胞凋亡率,Western blot检测TET2、Cyclin D1和Caspase-3蛋白的表达水平。结果TET2是mir-27b的靶基因,mir-27b可负性调控TET2的表达。ox-LDL处理促进HUVEC细胞mir-27b表达,抑制TET2表达。对照组、ox-LDL+anti-mir-27b组,ox-LDL+pcDNA-TET2组和anti-mir-27b+si-con组HUVEC细胞的炎性因子分泌和凋亡率分别显著低于ox-LDL组,ox-LDL+anti-mir-con、ox-LDL+pcDNA组和anti-mir-27b+si-TET2组(Pmir-27b通过下调TET2表达促进ox-LDL诱导的内皮细胞炎症反应和细胞凋亡。

关键词： mir-27b 氧化低密度脂蛋白 TET2 HUVEC 炎症反应凋亡

mir27b通过靶向PPARγ调控脂肪在皮下脂肪细胞与肌内脂肪细胞中的差异沉积

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miR27b通过靶向PPARγ调控脂肪在皮下脂肪细胞与肌内脂肪细胞中的...

作者：南文婷南京农业大学

学位级别：硕士

肌内脂肪含量是影响猪肉品质的重要因素。而育种过程中对高瘦肉率的长期选择,导致了肌内脂肪含量以及猪肉品质的下降。因此,提高肌内脂肪含量,同时不影响其它部位脂肪的沉积,特别是皮下脂肪,成为猪育种的一个重要目标。由于不同部位的... 详细信息

肌内脂肪含量是影响猪肉品质的重要因素。而育种过程中对高瘦肉率的长期选择,导致了肌内脂肪含量以及猪肉品质的下降。因此,提高肌内脂肪含量,同时不影响其它部位脂肪的沉积,特别是皮下脂肪,成为猪育种的一个重要目标。由于不同部位的脂肪在脂肪代谢与脂肪细胞分化能力上存在着差异,这为寻找调控脂肪在不同组织差异沉积的分子机理提供了可能性。为了解肌内脂肪与皮下脂肪差异沉积的机制,我们比较了源于皮下脂肪与肌内脂肪的前体脂肪细胞的分化能力,并对脂肪分化与沉积起关键调控作用的PPARy基因在两种细胞中的表达量进行了检测。随后预测了靶向PPARy的mirNA,并对其在两种细胞中的表达量进行了比较,最后通过双荧光报告系统对差异表达的mirNA进行靶向性验证。主要实验结果如下：1、在体外环境下,源于肌内脂肪组织的前体脂肪细胞在分化能力上强于皮下脂肪组织来源的前体脂肪细胞。DMI诱导分化9天后,肌内前体脂肪细胞脂质积聚水平显著高于皮下脂肪细胞(Pboxylase, ACC)、脂肪酸合成酶(Fatty Acid Synthase, FAS),以及脂肪降解相关基因脂肪甘油三酯脂酶(Adipose Triglyceride Lipase, ATGL)、激素敏感酯酶(Hormone Sensitive Lipase, HSL)在肌内脂肪细胞中的表达水平显著高于其在皮下脂肪细胞中的表达水平(Pmir-130a、mir-130b、mir128、mir-301、mir-27a和mir-27b等6个靶向PPARγ的mirNA。定量分析结果表明,mir-27a与mir-27b在皮下脂肪细胞的表达量显著高于肌内脂肪细胞中的表达量(Pmir-130a、 mir-130b、mir128、mir-301的表达量在皮下脂肪细胞与肌内脂肪细胞中没有显著差异(P>0.05)。构建含PPARγ 3’-UTR序列的表达质粒pGL3-Control/PPARγ,荧光素酶活性分析表明,mir-27b可以靶向调控PPARγ。本研究表明,肌内前体脂肪细胞比皮下前体脂肪细胞在体外具有更强的分化能力。mir-27b能够靶向调控PPARγ, mir-27b在两种脂肪细胞中表达的差异能够导致PPARy在两种细胞中的表达差异,进而引起不同部位脂肪细胞分化能力的差异。

关键词： mir-27b PPARγ 皮下脂肪肌内脂肪

上调microRNA-27b对血小板衍生因子诱导下的人视网膜色素上皮细胞增殖的抑制作用

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眼科新进展 2020年第9期40卷 822-825页

作者：李静李迪李雪颖寇列玲车选义陕西省人民医院眼科陕西省西安市710068 安康市中医院陕西省安康市725000

目的观察过表达的microRNA-27b(mir-27b)对血小板衍生因子(platelet-derived growth factor,PDGF)诱导下的人视网膜色素上皮细胞(ARPE-19)增殖的抑制作用,探讨mir-27b在ARPE细胞生物学行为中的作用及其调控机制。方法将mir-27b过表达质... 详细信息

目的观察过表达的microRNA-27b(mir-27b)对血小板衍生因子(platelet-derived growth factor,PDGF)诱导下的人视网膜色素上皮细胞(ARPE-19)增殖的抑制作用,探讨mir-27b在ARPE细胞生物学行为中的作用及其调控机制。方法将mir-27b过表达质粒或空载体转入ARPE-19细胞36 h后,用终浓度为20μg·L^-1的PDGF预处理ARPE-19细胞5 h。根据转染物不同,将实验分为空白对照组(control组)、mir-27b阴性对照组(mir-27b NC组)、mir-27b模拟物转染组(PDGF+mimics组)和空载体转染组(PDGF+NC组)。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测转染后各组ARPE-19细胞中mir-27b的表达水平;MTT法测定各组细胞活性;通过流式细胞术评估各组细胞周期的分布变化;Western blot检测各组细胞周期的正向调控因子cyclinD1、CDK4和负向调控因子p21 CIP1和p27 KIP1的表达水平。结果qRT-PCR检测结果显示:经PDGF处理5 h,与mir-27b NC组相比,PDGF+NC组mir-27b的表达显著降低(Pmir-27b的表达增加(Pmir-27b NC组相比,PDGF+NC组ARPE-19细胞的光密度(D)值增加(Pmir-27b NC组相比,PDGF+NC组G0/G1期细胞的百分比显著降低,S期细胞的百分比增加(Pmir-27b的过表达显著增加了G0/G1期细胞的百分比,并抑制了细胞增殖(均为Pblot检测结果显示:与PDGF-NC组相比,PDGF+mimics组mir-27b的过表达可显著降低cyclinD1蛋白和CDK4蛋白的表达,同时增强了p21 CIP1蛋白和p27 KIP1蛋白的表达(均为Pmir-27b表达可抑制PDGF诱导的ARPE细胞增殖。

关键词： mir-27b 人视网膜色素上皮细胞血小板衍生因子细胞周期细胞增殖

高血压合并左心室肥厚患者血清微小RNA-1、27b和195水平及联合检测与病情评估和预后的关系

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中华高血压杂志 2020年第12期28卷 1213-1217页

作者：邓百路叶少武宋博卢谦右江民族医学院附属医院心血管内科广西百色533000 梧州市人民医院心血管内科

目的探讨高血压合并左心室肥厚(LVH)患者血清中微小RNA(mir)-195、mir-1和mir-27b水平及联合检测对其病情评估与预后结局的关系。方法入选2016年1月-2019年6月收治的高血压合并LVH(HbP-LVH组)118例、高血压不合并LVH患者(HbP-NLVH组)108... 详细信息

目的探讨高血压合并左心室肥厚(LVH)患者血清中微小RNA(mir)-195、mir-1和mir-27b水平及联合检测对其病情评估与预后结局的关系。方法入选2016年1月-2019年6月收治的高血压合并LVH(HbP-LVH组)118例、高血压不合并LVH患者(HbP-NLVH组)108例,入选同期年龄与性别相匹配的正常血压体检者100人为对照组,比较三组研究对象的血清mir-195、mir-1和mir-27b表达水平。采用Pearson相关性分析mir-195、mir-1和mir-27b表达水平与左心室质量指数(LVMI)、室间隔厚度(IVST)、左心室后壁厚度(LVPWT)以及血压之间的相关性;采用受试者工作特征曲线(ROC)分析mir-195、mir-1和mir-27b水平对高血压合并LVH的诊断价值;根据高血压合并LVH患者随访6个月的预后情况分为预后良好组和预后不良组,分析血清mir-195、mir-1和mir-27b水平与预后的关系。结果 HbP-LVH组和HbP-NLVH组患者血清mir-195、mir-1、mir-27b表达水平高于对照组(均PbP-LVH组高于HbP-NLVH组(Pmir-195、mir-1、mir-27b表达水平与HbP-LVH患者IVST、LVPWT、LVMI、收缩压和舒张压呈正相关(均Pmir-195以29.58为诊断截断值时,灵敏度为73.73%,特异度为69.44%,ROC曲线下面积为0.768(95%CI 0.724~0.846);mir-1以13.02为诊断截断值时,灵敏度为64.41%,特异度为76.85%,ROC曲线下面积为0.756(0.687~0.834);血清mir-27b以2.43为诊断截断值时,灵敏度为61.02%,特异度为70.37%,ROC曲线下面积为0.659(0.585~0.762);三者联合检测灵敏度为80.51%,特异度为74.07%,约登指数为0.546,ROC曲线下面积为0.886(95%CI 0.741~0.932),诊断效能最佳。随访6个月,预后良好组血清mir-195、mir-1、mir-27b表达水平低于预后不良组(均Pmir-195、mir-1和mir-27b表达水平升高,且与LVMI、血压等呈正相关,三者联合检查可提高高血压合并LVH诊断效能;三种mir表达水平与患者预后有关。

关键词：高血压左心室肥厚微小RNA mir-195 mir-1 mir-27b 联合检查预后

负载mirNA-27b的bMSCs来源的外泌体治疗实验性骨关节炎

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中国矫形外科杂志 2019年第8期27卷 726-734页

作者：苏永蔚周山健肖大伟田大川罗华刘丹平綦慧锦州医科大学附属第一医院运动与关节科辽宁锦州121000 北京市创伤骨科研究所北京100035 锦州医科大学附属奉贤医院骨科上海201499 阜阳市肿瘤医院骨二科安徽阜阳236000 句容市人民医院骨科江苏句容212400

[目的]探讨负载mirNA-27b的间充质干细胞来源的外泌体(MSC-27b-Exos)对炎症环境下的软骨细胞的保护作用。[方法]体外利用10 ng/ml白介素-1β(IL-1β)建立软骨细胞炎症环境模型,采用超速离心法收集外泌体,分别以80μg/ml的MSC-27b-Exos,... 详细信息

[目的]探讨负载mirNA-27b的间充质干细胞来源的外泌体(MSC-27b-Exos)对炎症环境下的软骨细胞的保护作用。[方法]体外利用10 ng/ml白介素-1β(IL-1β)建立软骨细胞炎症环境模型,采用超速离心法收集外泌体,分别以80μg/ml的MSC-27b-Exos,普通外泌体MSC-Exos、inhibitor沉默的MSC-27boff-Exos作用炎症环境下的软骨细胞,并设PbS处理为对照组,检测各处理组软骨细胞凋亡水平,Western blot检测软骨细胞中MMP-13,及凋亡蛋白Caspase的表达水平。体内实验:20只雄性SD大鼠随机分为4组,建立创伤性骨关节炎(post-traumatic osteoarthritis, PTOA)模型,分别注射等量的MSC-mir27b-Exos、MSC-mir27b^(off)-Exos,并设立单纯PbS组和假手术组,6周后取材,观察关节软骨形态;ELISA检测关节液中IL-1β、TNF-α的含量;免疫组化对比各组Ⅱ型胶原表达。[结果]体外实验中,MSC-27b-Exos组的软骨细胞增殖能力较MSC-mir27b^(off)-Exos组增强,较空白组明显旺盛(P27b-Exos组软骨细胞中cleave-Caspase-9水平降低(P27bExos组对软骨缺损修复效果优于空白组和MSC-mir27b^(off)-Exos组。MSC-27b-Exos组关节液中IL-1β、TNF-α的含量低于空白组,明显低于MSC-27b^(off)-Exos组。[结论]在实验型SD大鼠PTOA模型中,利用MSC-27b-Exos关节腔内注射具有明显抗炎的作用和减缓关节软骨退行性变。

关键词：间充质干细胞外泌体骨关节炎 mir-27b 基质金属蛋白酶13(MMP-13)