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mir-218通过靶向调控E2F2对人胶质瘤细胞生长与代谢的影响

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MiR-218通过靶向调控E2F2对人胶质瘤细胞生长与代谢的影响

作者：张雅旋南京医科大学

学位级别：硕士

背景与目的:近年来,微小RNA(micro RNA,mirNA)的发现为现代肿瘤的治疗提供了一个新的视角,其中就包括我们所探讨的胶质瘤。微小RNA是一种小分子非编码RNA,其可以通过结合于靶向基因的3’非转录区(3'-untranslated region,3’-UTR)来调... 详细信息

背景与目的:近年来,微小RNA(micro RNA,mirNA)的发现为现代肿瘤的治疗提供了一个新的视角,其中就包括我们所探讨的胶质瘤。微小RNA是一种小分子非编码RNA,其可以通过结合于靶向基因的3’非转录区(3'-untranslated region,3’-UTR)来调节相关蛋白的表达。随着对mirNA的研究的深入,虽然有很多mirNA逐渐被人们所熟知,但其仅仅是mirNA家族的一小部分,需要更多的研究来更深入的认识其功能及作用。mirNA并不能直接引起细胞功能的改变,其主要是通过调控下游靶基因尤其是一些转录因子的表达而调节细胞功能的。E2F转录因子家族一开始是因为其可以与腺病毒E2启动子区结合从而引起相关基因转录而被发现的。随后的研究表明,在哺乳动物中,E2F家族与细胞周期的调节密切相关。然而近年来,越来越多的研究集中于这个转录因子家族与各种癌症的发生发展的关系上,而且研究也表明,其可能在癌症的发生发展中起着不可小觑的作用。本研究通过体外实验及临床数据分析,发现由mir-218介导的E2F2基因的调节在抑制胶质瘤发生发展中发挥重要作用。此发现可能为今后的胶质瘤诊断,治疗,及判断患者预后方面提供一个新的方向和思路。研究方法:1、利用下载于中国胶质瘤基因组图谱数据库(Chinese Glioma Genome Atlas,CGGA)的人胶质瘤和正常脑组织的mirNA、m RNA的芯片表达数据以及患者的生存数据进行相关数据分析。2、利用mirNA荧光定量PCR技术检测mir-218在胶质瘤组织及细胞中的表达水平,及转染mir-218 mimic后验证mir-218的表达水平变化情况。3、利用E2F2-si RNA敲低E2F2表达,或转染mir-218 mimic后利用western-blot技术检测E2F2表达变化情况。4、利用流式细胞仪检测不同组别胶质瘤细胞周期变化情况。5、同时利用CCK8实验及平板克隆形成实验,检测细胞生长增殖能力的改变情况。6、使用Biovision公司糖代谢检测试剂盒,检测不同组别胶质瘤细胞糖代谢的情况变化。7、采用生物信息预测、荧光素酶报告实验和Western-blot技术验证E2F2为mir-218直接靶基因。研究结果1、CGGA数据库分析得出mir-218在胶质瘤中表达明显降低,且其在胶质母细胞瘤中表达水平与患者预后成正相关。2、体外实验中,胶质瘤细胞系U87及U251中升高mir-218的表达后,细胞周期明显阻滞于G1期,细胞增殖速率明显减慢,葡萄糖消耗量及乳酸生成量减少。3、根据CGGA数据库数据分析结果表明,E2F2基因在胶质瘤中呈高表达,且生存分析表明其高表达提示患者预后不良。4、在体外实验中,转染E2F2 si-RNA后,E2F2表达明显下降,且细胞周期明显阻滞于G1期,细胞增殖速率明显减慢,糖代谢检测提示葡萄糖消耗量及乳酸生成量明显减少。5、生物信息学预测、荧光素酶报告基因检测和Western-blot实验研究表明:mir-218直接结合E2F2 m RNA的3’UTR区,调控其的表达。6、利用E2F2回复实验表明,上调E2F2后能够逆转mir-218产生的抑癌效应,使得细胞增殖能力及糖代谢水平有所逆转。研究结论1、E2F2在胶质瘤中的表达较正常组织中明显升高,其表达量越高,患者生存时间越短。2、mir-218在胶质瘤中表达明显较正常组织中低,其表达情况与E2F2成负相关,且其在胶质母细胞瘤患者中的表达越高,患者生存期越长。3、mir-218通过直接靶向调节E2F2来影响胶质瘤细胞的增殖及糖代谢水平,可能为今后及早诊断及治疗胶质瘤提供一个新的靶点。

关键词： mir-218 E2F2 胶质瘤增殖糖代谢

胶质瘤组织中mir-218的表达及其对血管生成的作用

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肿瘤防治研究 2019年第8期46卷 672-676页

作者：陈秋丹陈淑英上海市静安区中心医院(复旦大学附属华山医院静安分院)检验科上海200040 复旦大学附属华山医院检验医学科上海200040

目的明确mir-218在胶质瘤组织中的表达,探讨其对胶质瘤血管生成的作用及机制。方法采用荧光实时定量PCR法和免疫印迹法检测胶质瘤组织和细胞中mir-218、P70核糖体S6激酶1(p70s6k1)的表达情况,采用基质胶塞实验和小管形成实验分别在体内... 详细信息

目的明确mir-218在胶质瘤组织中的表达,探讨其对胶质瘤血管生成的作用及机制。方法采用荧光实时定量PCR法和免疫印迹法检测胶质瘤组织和细胞中mir-218、P70核糖体S6激酶1(p70s6k1)的表达情况,采用基质胶塞实验和小管形成实验分别在体内外检测mir-218对新血管生成的影响。结果 21例胶质瘤组织标本中mir-218表达较7例癌旁组织标本明显下调,且表达量与WHO分级有关。过表达mir-218能显著抑制血管生成。mir-218直接靶向p70s6k1。过表达p70s6k1能部分逆转mir-218对血管新生的抑制作用。结论 mir-218能通过靶向p70s6k1的表达调控胶质瘤血管生成,进而影响胶质瘤的进展。

关键词：胶质瘤 mir-218 p70s6k1 血管生成

高浓度葡萄糖通过上调mir-218诱导rRMECs凋亡的机制

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高浓度葡萄糖通过上调miR-218诱导rRMECs凋亡的机制

作者：郭闯锦州医科大学

学位级别：硕士

目的视网膜微血管内皮细胞凋亡是糖尿病视网膜病变（diabetic retinopathy,DR）的重要原因。mir-218在细胞增殖、分化及凋亡中发挥重要作用,但是否参与高浓度葡萄糖诱导的视网膜内皮细胞凋亡尚不清楚。本研究以大鼠视网膜微血管内皮细胞... 详细信息

目的视网膜微血管内皮细胞凋亡是糖尿病视网膜病变（diabetic retinopathy,DR）的重要原因。mir-218在细胞增殖、分化及凋亡中发挥重要作用,但是否参与高浓度葡萄糖诱导的视网膜内皮细胞凋亡尚不清楚。本研究以大鼠视网膜微血管内皮细胞（rat retinal microvascular endothelial cells,rRMECs）为研究对象,探讨mir-218在高浓度葡萄糖诱导rRMECs凋亡中的作用及机制,为DR的临床治疗提供参考。方法分四组培养rRMECs,对照组、高糖组、mir-218抑制组及mir-218阴性抑制组。对照组以DMEM低糖培养基培养,高糖组葡萄糖浓度为25 mmol/l,高糖组基础上给予mir-218阴性对照抑制剂或mir-218抑制剂即为mir-218阴性抑制组或mir-218抑制组。分组培养72 h后Real-time PCR检测各组mir-218含量,CCK-8试剂盒检测细胞活力,Hoechst染色观察rRMECs细胞凋亡并计数细胞凋亡率,Western blot检测Caspase-3的表达变化。结果对照组、高糖组、mir-218阴性抑制组、mir-218抑制组的mir-218相对表达量分别为1.00±0.08、1.48±0.12、1.46±0.14、1.03±0.08,细胞活力分别为100.00%、（72.3±7.5）%、（70.7±9.3）%及（98.4±9.4）%,细胞凋亡率分别为（2.3±0.0）%、（20.3±3.1）%、（23.1±3.2）%及（2.9±0.1）%,Caspase-3相对表达量为（18.6±2.3）%、（43.3±4.5）%、（41.6±3.9）%及（20.0±2.8）%。与对照组相比,高糖组与mir-218阴性抑制组的mir-218和Caspase-3含量升高,细胞活力下降,凋亡增加（P＜0.01）,mir-218抑制组各指标无显著变化（P＞0.05）。结论高浓度葡萄糖能通过mirNA-218诱导rRMECs细胞凋亡,其机制可能与Caspase-3表达上调有关。

关键词：葡萄糖大鼠视网膜微血管内皮细胞 mir-218 Caspase-3 凋亡

mir-218靶向调控HMGB1-RAGE通路抑制胶质瘤发生发展机制研究

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miR-218靶向调控HMGB1-RAGE通路抑制胶质瘤发生发展机制研究

作者：牛亮兰州大学

学位级别：硕士

背景:脑胶质瘤是脑中最常见的恶性肿瘤,具有快速浸润性生长和术后高复发率的特点。低级别胶质瘤患者(世界卫生组织WHO I级和II级)的5年生存率约为30%至70%,而高级别胶质母细胞瘤(IV级)的中位生存期为9至12个月。因此,有必要确定这种恶... 详细信息

背景:脑胶质瘤是脑中最常见的恶性肿瘤,具有快速浸润性生长和术后高复发率的特点。低级别胶质瘤患者(世界卫生组织WHO I级和II级)的5年生存率约为30%至70%,而高级别胶质母细胞瘤(IV级)的中位生存期为9至12个月。因此,有必要确定这种恶性疾病更多的生物标志物和潜在的治疗靶点。微小RNA(microRNA,mirNA)涉及一系列重要的生物过程,如细胞发育,分化,凋亡和增殖。异常mi RNA表达与各种肿瘤的发生和进展相关。此外,表达失调的mi RNA可作为诊断和评估预后的生物标志物。目的:研究mirNA在不同级别胶质瘤中的差异表达情况,探讨mirNA通过靶基因调控胶质发生发展的分子机制。方法:(1)利用生物信息学对NCBI GEO数据库内胶质瘤数据分析得出差异表达mi RNA,对22例胶质瘤组织标本通过PCR Array(内含184mirNA引物预设计的PCR芯片)方法筛选胶质瘤内差异表达mi RNA,选取在胶质瘤内表达差异倍数高的mi RNA探讨其在胶质瘤内的调节机制,并通过生物信息学软件预测所选取mi RNA的靶基因进行下一步研究。(2)对66例胶质瘤组织标本及26例正常脑组织标本中,通过荧光定量PCR检测mi R-218在正常脑组织及胶质瘤内表达量,分析mir-218在不同级别胶质瘤内表达情况及表达差异。(3)应用半定量PCR初步检测HMGB1和RAGE基因水平在不同级别胶质瘤内表达情况,在此基础上通过定量PCR对HMGB1和RAGE基因水平在正常脑组织及胶质瘤内表达情况进行验证,分析HMGB1和RAGE在正常脑组织及不同级别胶质瘤内表达情况及表达差异。(4)利用免疫组织化学方法对HMGB1和RAGE在蛋白水平表达量进行检测,分析其在正常脑组织及胶质瘤中阳性细胞表达情况及表达差异,通过蛋白印迹实验检测HMGB1和RAGE的在正常脑组织及胶质瘤中表达量。(5)收集纳入研究患者临床资料并进行随访。通过Kaplan-Meier方法和Cox回归分析患者的生存曲线,进行单变量及多变量Cox回归分析以检查每个临床协变量及mi R-218、HMGB1、RAGE在胶质瘤内表达强度对患者存活的影响。结果:(1)通过对22例胶质瘤组织标本进行PCR Array分析,筛选出明显具有表达差异(Fold Difference>2)的mirNA 11个,(mir-22-3p、mir-363-3p、mi R-451a、mi R-20b、mir-450、mi R-149-5p、mi R-15b、mir-106b、mir-148a、mi R-93、mir-218-5p)。通过对NCBI GEO数据分析,获取在胶质瘤明显具有表达差异(Fold Difference>4)的mirNA 7个,(mir-7、mir-10b、mir-20b、mi R-551b、mir-455、mi R-218-5p、mir-137)。依据其表达差异选取mir-218为研究对像并利用生物信息学预测mi R-218靶基因HMGB1、RAGE。(2)mir-218在正常脑组织及胶质瘤内均有表达,在不同级别胶质瘤内mi R-218的表达量各不相同。与正常脑组织内mir-218表达量相比较,mir-218表达量与肿瘤等级呈现逆相关。mir-218在高级别(Ⅲ级和Ⅳ级)胶质瘤组织中的表达量明显低于低级别(Ⅰ级和Ⅱ级)(p218表达患者的生存时间显著短于mi R-218高表达的患者,Kaplan-Meier曲线显示HMGB1、RAGE低表达组生存时间长于高表达组。(5)单因素分析显示mir-218低表达与性别(p=0.013),肿瘤大小(p=0.020),WHO分级(p218表达水平(pmir-218的表达(p218的表达(HR=0.32;95%CI 0.11,0.89;p=0.029),切除范围(HR=0.11;95%CI 0.03,0.37;p<0.001),肿瘤大小(HR=0.39;95%CI 0.14,1.11;p=0.029),和WH

关键词： mir-218 胶质瘤人高迁移率族蛋白B1 晚期糖基化终产物受体

microRNA-218 Inhibits Oxygen-induced Retinal Neovascularization via Reducing the Expression of Roundabout I

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Chinese Medical Journal 2016年第6期129卷 709-715页

作者： Shuang Han Yi-Chun Kong Bei Sun Quan-Hong Han Ying Chen Yu-ChuanWang Clinical College of Ophthalmology Tianjin Medical University Tianjin 300020 China Department of General Ophthalmology Tianjin Eye Hospital Tianjin Eye Institute Tianjin Key Laboratory of Ophthalmology and Visual Science Tianjin 300020 China Key Laboratory of Hormones and Development Ministry of Health Metabolic Diseases Hospital and Tianjin Institute of Endocrinology Tianjin Medical University Tianjin 300020 China Department of Vitreous and Retina Diseases Tianjin Eye Hospital Tianjin Eye Institute Tianjin Key Laboratory of Ophthalmology and Visual Science Tianiin 300020 China Department of Pathology Tianjin Eye Hospital Tianjin Eye Institute l:ianjin Key Laboratory of Ophthalmology and Visual Science Tianjin 300020 China

Background： The mechanisms of pathological retinal neovascularization （RNV） remain unknown. Several microRNAs were reported to be involved in the process of RNV. Oxygen-induced retinopathy （O1R） is a useful model to investigate RNV. Our present work explored the expression and the role of microRNA-128 （mir-218） in oxygen-induced RNV. Methods： OIR was used to establish RNV model. The expression level ofmir-218 in the retina from OIR mice was assessed by quantitative real-time reverse transcriptase polymerase chain reaction. Fluorescein angiography was performed in retinae of OIR mice, and RNV was quantified by hematoxylin and eosin staining to evaluate the effect of pCDH-CMV-mir-218 intravitreal injection on RNV in OIR mice. Roundabout 1 （Robol） expression was detected by Western blotting in mouse retinal vascular endothelial cells expressing a high or low level of mir-218 and retinal tissues from OIR mice. Cell migration was evaluated by scratch wound assay. Results： In OIR mice, the expression level of mir-218 was significantly down-regulated （P = 0.006）. Retinal Robol expression was significantly increased at both mRNA and protein levels （P = 0.001, 0.008： respectively）, mir-218 intravitreal injection inhibited retinal angiogenesis in OIR mice, and the restoration of mir-218 in retina led to down-regulation of Robol. Conelusions： Our experiments showed that restoration ofmir-218 inhibited retinal angiogenesis via targeting Robo 1. mir-218 contributed to the inhibition of retinal angiogenesis and mir-218 might be a new therapeutic target for preventing RNV.

关键词： mir-218 Oxygen-induced Retinopathy Retinal Neovascularization Roundabout 1

mir-218对山羊PBMCs中SLAM受体表达调控的研究

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miR-218对山羊PBMCs中SLAM受体表达调控的研究

作者：王婷西北农林科技大学

学位级别：硕士

小反刍兽疫(Peste des Petits Ruminants,PPR)是由副黏病毒科(Paramyxoviridae)麻疹病毒属(Morbillivirus)小反刍兽疫病毒(Peste des Petits Ruminants virus,PPRV)引起的一种急性、热性、高度接触性传染病。PPRV与其他麻疹病毒属成员均对淋巴细胞和上皮细胞具有较强嗜性。PPRV因其淋巴细胞嗜性导致机体在感染后表现出持久的免疫抑制。现已证实,信号淋巴细胞活化分子(Signaling lymphocyte activation molecule,SLAM),也称作CD150,是麻疹病毒属MV、CDV、RPV、PPRV在淋巴细胞的受体,可以在活化的以及记忆性的T细胞、B细胞,单核细胞,NKT细胞以及成熟的DC细胞中表达。因此,关于SLAM受体表达调控机制研究对深入阐明PPRV对宿主动物,特别在山羊等易感动物的致病机制具有重要意义。近年来,越来越多的证据表明宿主细胞microRNA(mirNA)是宿主-病原体相互作用复杂网络中不可或缺的调节因子。本研究旨在探索PPRV体外感染山羊外周血单个核细胞(Peripheral blood mononuclear cells,PBMCs)后,细胞源mirNA调节SLAM受体的作用机制及其对PPRV复制的影响,获得的主要研究结果如下:1)通过深度测序检测PPRV N75-1疫苗株感染对山羊PBMCs中mirNA表达谱的影响发现:与对照组相比,PPRV感染PBMCs 24 h后能够诱导316种显著差异表达的mirNAs,其中包括103种已知mirNAs与213种未知的mirNAs。通过对差异表达mirNAs进行靶向基因预测及功能分析发现,它们主要对细胞TLR信号通路、PI3K-Akt信号通路、细胞内吞作用、病毒致癌作用以及JAK-STAT信号通路等有调控作用。2)PPRV感染山羊PBMCs引起细胞肿胀、聚集成团,随着感染时间延长,细胞病变程度渐进性增强。以不同MOI(0.1、1、10)PPRV感染PBMCs,通过qRT-PCR及Western blot检测mir-218及SLAM的表达水平发现,mir-218和SLAM表达水平分别呈现病毒感染剂量依赖性的降低和升高。此外,mir-218表达随PPRV感染时间的延长呈现先降低后升高的变化趋势,SLAM mRNA及蛋白表达水平随病毒感染时间延长呈先升高后降低的变化趋势,表明PPRV感染山羊PBMCs中mir-218和SLAM表达水平始终呈负相关。为进一步研究mir-218对PPRV感染山羊PBMCs中SLAM受体表达水平的调控作用,通过转染不同剂量浓度的mir-218 mimic,mir-218 inhibitor及其相应的Control序列发现,mir-218对PPRV感染PBMCs中SLAM受体表达水平的负调控作用具有剂量依赖性。此外,双荧光素酶报告基因实验表明mir-218可直接靶向SLAM基因的3’UTR。通过Western blot及ELISA检测转染并接毒处理后山羊PBMCs中不同细胞因子的蛋白表达及分泌水平,发现mi R-218通过调节SLAM通路介导的Th1型免疫反应影响PPRV的复制水平。3)通过使用紫外灭活PPRV(UV-PPRV)感染山羊PBMCs,qRT-PCR、Western blot及流式检测发现PPRV的复制能力是影响mir-218介导SLAM表达水平调节的重要因素。综上所述,本研究通过PPRV N75-1疫苗株感染山羊PBMCs,证实了细胞源mir-218对PPRV感染山羊PBMCs中SLAM受体表达的转录后水平调控作用及其对病毒复制的影响。

关键词： PPRV 山羊PBMCs mirNA表达谱 mir-218 SLAM受体

mir-218/Slit-Robo信号轴对肝血窦内皮细胞生物学行为及表型影响的研究

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MiR-218/Slit-Robo信号轴对肝血窦内皮细胞生物学行为及表型影响...

作者：蒋子剑中国人民解放军空军军医大学

学位级别：硕士

【研究背景】肝脏是人体最大的消化器官,在新陈代谢的过程中发挥了重要作用。急慢性肝炎、肝纤维化等肝损伤,经常会引发严重的代谢紊乱,甚至会危及生命。同时,肝脏是具备再生能力的器官,其自身强大的再生能力可以代偿一定程度的肝实质... 详细信息

【研究背景】肝脏是人体最大的消化器官,在新陈代谢的过程中发挥了重要作用。急慢性肝炎、肝纤维化等肝损伤,经常会引发严重的代谢紊乱,甚至会危及生命。同时,肝脏是具备再生能力的器官,其自身强大的再生能力可以代偿一定程度的肝实质损伤。长期以来,人们从未停止过对肝脏损伤与修复的研究工作。肝血窦内皮细胞是种肝脏特有的血管内皮细胞,其在肝脏血管生理及病理损伤的过程中扮演重要角色。既往研究已证实Notch信号通路是调控血管发育、血管新生的重要信号通路。血管特异性Notch信号对维持肝脏血管稳态、急性肝损伤后的血管重塑以及调节血管旁分泌功能均产生了重大影响。对mir-218/Slit-Robo信号通路的研究最早只局限于神经突触的选择性伸展,随着技术的进步,Slit-Robo信号通路还被发现在炎症反应?细胞迁移?器官发育、血管生成以及肿瘤发生等多过程中发挥关键作用?【目的】明确mir-218/Slit-Robo信号通路是否在肝损伤模型中与Notch信号相互联系,研究mir-218/Slit-Robo信号轴对肝血窦内皮细胞的生物学行为和表型影响。【方法】1.分离小鼠原代肝血窦内皮细胞并鉴定,为后续检测单细胞水平的分子表达和细胞转染做准备;2.通过RT-PCR、western blot以及免疫荧光染色等方式,检测C57小鼠和NICD小鼠在部分肝切除模型和CCl肝纤维化模型中mir-218/Slit-Robo信号通路相关分子在肝血窦内皮细胞中的表达情况;3.通过对C57小鼠肝血窦内皮细胞进行细胞转染,干预mir-218表达,观察mir-218/Slit-Robo信号通路对肝血窦内皮细胞细胞形态、细胞增殖、细胞迁移等功能和生物学行为的影响。【结果】1.分离获得的肝血窦内皮细胞数量多,活性好,纯度高,细胞窗孔清晰明显,具有很强的内吞功能,且表达特征性的内皮细胞表面标志物;2.不管是在单细胞层面还是组织层面,肝血窦内皮细胞作为肝脏组织特异性的血管内皮细胞,其中的mir-218/Slit-Robo信号通路均显示出显著的变化特点。在血管特异性激活Notch信号的情况下,mir-218及其宿主基因Slit2的表达会显著上调,导致其靶基因Robo1和Robo2显著下调;3.在肝血窦内皮细胞上调mir-218后细胞窗孔、细胞骨架染色及细胞迁移能力无明显差异,细胞增殖能力增强,且肝再生启动因子IL-6表达量上调。【结论】1.mir-218很可能是Notch信号通路下游的一个关键性分子,通过介导Slit-Robo信号通路在肝损伤修复过程中发挥了重要作用。2.mir-218可以促进肝血窦内皮细胞增殖,通过上调IL-6影响肝再生过程。

关键词： mir-218 Slit-Robo通路肝血窦内皮细胞肝损伤

mir-218通过靶向TNFR1抑制破骨细胞分化并预防骨质疏松症

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西部医学 2021年第2期33卷 198-204页

作者：张建业张卫华韩俊陈东武汉科技大学附属汉阳医院·武汉市汉阳医院骨科湖北武汉430050

目的探讨mir-218通过靶向TNFR1在破骨细胞分化中的影响及作用机制。方法采用双侧卵巢切除法制备骨质疏松症模型并进行验证,qRT-PCR检测骨质疏松症小鼠的骨髓单核细胞(BMMs)中mir-218的表达水平;qRT-PCR检测正常小鼠的BMMs在破骨细胞分... 详细信息

目的探讨mir-218通过靶向TNFR1在破骨细胞分化中的影响及作用机制。方法采用双侧卵巢切除法制备骨质疏松症模型并进行验证,qRT-PCR检测骨质疏松症小鼠的骨髓单核细胞(BMMs)中mir-218的表达水平;qRT-PCR检测正常小鼠的BMMs在破骨细胞分化过程中NFATc1、TRAF6、mir-218的表达变化,并用TRAP染色观察破骨细胞的生成情况;mir-218模拟物(mir-218 mimics)和mir-218抑制剂(mir-218 inhibitor)转染入BMMs中,qRT-PCR检测NFATc1、TRAF6、mir-218的表达水平,并用TRAP染色观察破骨细胞的生成情况;生物信息学分析和荧光素酶报告基因分析,预测和鉴定mir-218靶标;Western blot检测TNFR1蛋白的表达。结果骨质疏松症小鼠的BMMs中mir-218的表达水平较低(Pmir-218的表达水平下调(Pmir-218抑制BMMs在体外分化为破骨细胞,且NFATc1、TRAF6的表达减弱(Pmir-218的直接靶标,上调mir-218时,TNFR1蛋白表达减少。结论mir-218通过靶向TNFR1在破骨细胞形成中具有重要作用。因此,mir-218在骨质疏松症的治疗中具有治疗潜力。

关键词： mir-218 TNFR1 破骨细胞骨质疏松症

mir-218靶向SFMBT1影响肺癌细胞凋亡的研究

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现代肿瘤医学 2018年第15期26卷 2330-2335页

作者：冯永海李宏云余春华吴拥军张国俊郑州大学第五附属医院呼吸内科河南郑州450052 郑州大学公共卫生学院劳动卫生学教研室与毒理学教研室河南郑州450052 郑州大学第一附属医院呼吸内一科河南郑州450000

目的:探讨mir-218对肺癌细胞凋亡的影响。方法:qRT-PCR检测肺癌细胞A549、SPC-A1、H322和支气管黏膜上皮细胞16HBE中mir-218表达水平。以A549细胞为研究对象,预测mir-218的靶基因可能为含有4个mbt的Scm相关蛋白(SFMBT1),双荧光素酶报告... 详细信息

目的:探讨mir-218对肺癌细胞凋亡的影响。方法:qRT-PCR检测肺癌细胞A549、SPC-A1、H322和支气管黏膜上皮细胞16HBE中mir-218表达水平。以A549细胞为研究对象,预测mir-218的靶基因可能为含有4个mbt的Scm相关蛋白(SFMBT1),双荧光素酶报告基因鉴定靶基因,细胞转染mir-218模拟物、模拟物阴性序列、SFMBT1小干扰RNA、小干扰RNA阴性序列,以不处理的细胞为对照,qRT-PCR和Western blot检测转染后细胞中mir-218和SFMBT1表达,流式细胞术检测细胞凋亡情况。结果:mir-218在肺癌细胞中表达水平明显低于支气管黏膜上皮细胞16HBE,并且A549细胞中mir-218水平最低。mir-218模拟物和野生型的SFMBT1共转染后细胞荧光素酶活性降低。转染mir-218模拟物后细胞中mir-218水平升高,细胞凋亡率升高,细胞中SFMBT1 mRNA和蛋白水平降低。转染SFMBT1小干扰RNA后细胞中SFMBT1 mRNA和蛋白水平降低,细胞凋亡率升高。结论:mir-218可以负调控靶基因SFMBT1的表达促进肺癌细胞凋亡。

关键词：肺癌 mir-218 凋亡 SFMBT1