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mir-214调控FGF9的表达参与结核分枝杆菌感染肺泡Ⅱ型细胞中PI3K/AKT信号通路的免疫调控作用研究

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中国比较医学杂志 2021年第11期31卷 48-54,61页

作者：苏维娜李晓晶张丽丽包志伟山东师范大学校医院检验科济南250014 山东中医药研究院济南250014 山东省临沂市沂水人民医院检验科山东临沂276400 江汉大学医院内科武汉430056

目的探究mir-214对结核分枝杆菌感染肺泡Ⅱ型细胞中免疫调控的作用机制。方法培养肺泡Ⅱ型细胞系A549,分别使用结核分枝杆菌疫苗株BCG和结核分枝杆菌标准株H37Rv感染A549细胞。对A549细胞进行分组,并进行H37Rv感染。qRT-PCR检测各组细胞... 详细信息

目的探究mir-214对结核分枝杆菌感染肺泡Ⅱ型细胞中免疫调控的作用机制。方法培养肺泡Ⅱ型细胞系A549,分别使用结核分枝杆菌疫苗株BCG和结核分枝杆菌标准株H37Rv感染A549细胞。对A549细胞进行分组,并进行H37Rv感染。qRT-PCR检测各组细胞中mir-214和FGF9的表达情况,Western blot检测各组细胞中FGF9蛋白的表达。ELISA检测细胞中免疫相关因子SP-A、SP-D、TLR2和TLR4,炎症因子IL-10、TNF-α、TNF-γ、IL-1β和IL-8的含量。Western blot检测PI3K/AKT信号通路成员PI3K、AKT、p-AKT的表达。结果和BCG相比,H37Rv感染后的A549细胞中mir-214表达升高,FGF9表达降低。和NC mimic+oe-NC组相比,mir-214 mimic+oe-NC组细胞SP-A、SP-D、IL-10含量显著降低,TLR2、TLR4、TNF-α、TNF-γ、IL-1β、IL-8含量显著升高,PI3K、AKT/p-AKT表达显著升高。NC mimic+oe-FGF9组SP-A、SP-D、IL-10含量显著升高,TLR2、TLR4、TNF-α、TNF-γ、IL-1β、IL-8含量显著降低,PI3K、AKT/p-AKT表达显著升高降低。和mir-214 mimic+oe-NC组相比,mir-214 mimic+oe-FGF9组SP-A、SP-D、IL-10含量显著升高,TLR2、TLR4、TNF-α、TNF-γ、IL-1β、IL-8含量显著降低,PI3K、AKT/p-AKT表达显著降低。结论 mir-214通过抑制FGF9的表达,进而激活PI3K/AKT信号通路,导致结核分枝杆菌感染肺泡Ⅱ型细胞过度免疫反应,从而导致炎症发展。

关键词： mir-214 FGF9 PI3K/AKT信号通路结核分枝杆菌肺泡Ⅱ型细胞免疫调控

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mir-214对骨代谢调控作用的研究进展

重庆医科大学学报 2019年第9期44卷 1109-1113页

作者：郭健民陈熙邹军上海体育学院运动科学学院上海200438 温州医科大学体育科学学院温州325035

骨骼中各种细胞受到严格调控以维持骨骼的动态平衡,调控异常会导致骨质疏松、骨关节炎、骨折愈合迟缓等疾病的发生。MicroRNA是一种非编码RNA,作为骨代谢的关键调控因子,可参与调控骨髓间充质干细胞、成骨细胞、骨细胞、破骨细胞和软骨... 详细信息

骨骼中各种细胞受到严格调控以维持骨骼的动态平衡,调控异常会导致骨质疏松、骨关节炎、骨折愈合迟缓等疾病的发生。MicroRNA是一种非编码RNA,作为骨代谢的关键调控因子,可参与调控骨髓间充质干细胞、成骨细胞、骨细胞、破骨细胞和软骨细胞的增殖、分化和功能,进而影响骨代谢的平衡。研究表明mir-214可通过其靶基因β-连环蛋白、激活转录因子4、成纤维细胞生长因子受体、c-Jun氨基末端激酶、p38、锌指结构转录因子、同源性磷酸酶-张力蛋白等影响骨代谢,同时在骨肉瘤、骨质疏松等骨代谢疾病中mir-214也可通过细胞粘附因子1、亮氨酸拉链推定肿瘤抑制因子1以及相关的骨代谢调控因子影响疾病发展进程和预后。此外最新研究表明自噬相关基因12和γ-氨基丁酸A型受体也是mir-214的靶基因,mir-214也可能通过调控骨细胞自噬来影响骨代谢。因此本文通过综述国内外有关mir-214与骨代谢的相关报道,旨在阐明mir-214的调控机制。

关键词： mir-214 骨细胞骨代谢

mir-214在老年急性心肌梗死患者血清中的表达及其临床意义

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中国急救医学 2018年第4期38卷 341-344页

作者：陈劲松刘访遥刘运阳田国平曾高峰南华大学附属第二医院心血管内科湖南衡阳421200

目的研究mir-214在老年急性心肌梗死（AMI）患者血清中的表达，并探究其表达的临床意义。方法随机选取2016-01-2018-01我院收治的AMI患者73例，不稳定型心绞痛（UA）患者49例，并选择同期在我院体检的健康老人29例作为对照，对比三组... 详细信息

目的研究mir-214在老年急性心肌梗死（AMI）患者血清中的表达，并探究其表达的临床意义。方法随机选取2016-01-2018-01我院收治的AMI患者73例，不稳定型心绞痛（UA）患者49例，并选择同期在我院体检的健康老人29例作为对照，对比三组研究对象血清mir-214的相对表达量，采用Pearson法分析老年AMI血清mir-214表达与血清天门冬氨酸氨基转移酶（AST）、乳酸脱氢酶（LDH）和肌酸激酶同工酶（CK-MB）及心肌肌钙蛋白I（cTnI）的相关性。结果老年AMI、UA患者和健康体检老人血清mir-214相对表达量分别为14.16±4.13、4.51±2.02和2.07±0.99；在老年AMI患者血清中，mir-214相对表达量与mir-214相对表达量与血清AST（r=0.429，P〈0.05）、CK-MB（r=0.844，P〈0.05），cTnI（r=0.779，P〈0.05）及LDH含量均呈正相关（r=0.562，P〈0.05）。结论 mir-214在老年AMI患者血清中高表达，其高表达可能与心肌损伤或者坏死有关。

关键词： mir-214 老年急性心肌梗死(AMI) 相关性

mir-214在肥胖小鼠软骨损伤修复中的作用研究

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中国细胞生物学学报 2020年第9期42卷 1578-1587页

作者：曹红吴伟周绪昌邹军刘向云王淼上海体育学院运动科学学院上海200438

该研究探究了mir-214在肥胖小鼠软骨损伤修复中的作用机制。从小鼠5周龄开始,进行为期20周的对照组(C组)普通饲料喂养,以及肥胖组(O组)与肥胖+运动组(OE组)高脂饲料喂养,当小鼠17周龄时,对OE组行8周的跑台运动,并于干预结束48 h后取材... 详细信息

该研究探究了mir-214在肥胖小鼠软骨损伤修复中的作用机制。从小鼠5周龄开始,进行为期20周的对照组(C组)普通饲料喂养,以及肥胖组(O组)与肥胖+运动组(OE组)高脂饲料喂养,当小鼠17周龄时,对OE组行8周的跑台运动,并于干预结束48 h后取材。饲养期间每周测量体质量,取材后行Micro-CT扫描、石蜡切片染色评分、RT-PCR。结果表明,O组、OE组小鼠体质量显著高于C组,跑台期间OE组较O组体质量呈下降趋势;O组染色评分显著高于C组,OE组Mankin’s评分较O组有显著性降低;O组胫骨平台内侧骨密度相关参数显著低于C组,OE组同等部位Tb.N显著高于O组,然而仅O组的胫骨平台外侧骨密度较C组显著降低;O组中炎症分解指标IL-6、ADAMTS5表达增高,合成指标COL2表达下降,同时mir-214表达增加,较C组均具有显著差异,OE组经过跑台干预后一定程度逆转了O组上述基因的表达情况。研究得出,跑台运动可抑制mir-214的表达,进而降低肥胖小鼠的软骨损伤退变风险,抑制炎症表达,促进软骨修复。

关键词：肥胖骨关节炎软骨损伤跑台运动 mir-214

缺氧诱导的mir-214通过促进Warburg效应进而影响胃癌细胞增殖迁移能力的机制研究

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缺氧诱导的miR-214通过促进Warburg效应进而影响胃癌细胞增殖迁移...

作者：杨柳青南京大学

学位级别：硕士

目的:微小核苷酸(microRNA,mirNA)mir-214被证实在黑色素瘤、骨肉瘤、T细胞淋巴瘤、神经胶质瘤、肝细胞癌、宫颈癌、胃癌、直肠癌、膀胱癌、乳腺癌及卵巢癌等恶性肿瘤中发挥着促癌基因的作用,其中就包括胃癌。但是其发挥促癌作用的机制... 详细信息

目的:微小核苷酸(microRNA,mirNA)mir-214被证实在黑色素瘤、骨肉瘤、T细胞淋巴瘤、神经胶质瘤、肝细胞癌、宫颈癌、胃癌、直肠癌、膀胱癌、乳腺癌及卵巢癌等恶性肿瘤中发挥着促癌基因的作用,其中就包括胃癌。但是其发挥促癌作用的机制目前并不明确。肿瘤组织因生长迅速而缺氧和能量供应不足。mir-214的上升是否是由于肿瘤微环境的改变引起并不明确。PRDM16(PR/SET domain 16)在棕色及黄色脂肪组织转化中发挥重要作用,而A2AR(Ado A2A receptor)在抗炎和抗肿瘤方面亦起着不可忽视的作用。本实验旨在探讨PRDM16及A2AR在胃癌发生发展中的作用,以及肿瘤微环境变化是否是引起胃癌细胞mir-214变化的原因,同时研究mir-214是否能通过调控PRDM16及A2AR进而影响肿瘤的代谢及其进展。方法:PCR 用于检测 mir-214 及 PRDM16、A2AR mRNA 水平;Western blotting用于检测 PRDM16、A2AR 及 HIF-1 α 的蛋白水平;Transwell chambers(8-μ M pore size;Costar)用于细胞迁移实验;Cell Counting Kit(Dojindo;Japan)用于检测细胞增殖能力;ATP CellTiter-Glo(?)Luminescent Cell Viability Assay(Promega;USA),Lactate and Glucose(Biovision;USA)Assay Kit用于检测胃癌细胞糖代谢水平。结果:缺氧条件下胃癌细胞mir-214较正常条件下上升并呈现时间依赖性。PRDM16和A2AR在胃癌组织中表达量显著低于癌旁组织,而mir-214在胃癌组织中表达量较高,两者呈现负相关关系。荧光素酶报告基因证实mir-214可以靶向作用于PRDM16和A2AR。实验证实,在缺氧环境或者正常环境中上调mir-214或者下调PRDM16、A2AR可以使胃癌细胞迁移及增殖能力增强、葡萄糖摄取量增加、乳酸及ATP产量增加,而下调mir-214或者上调这两个基因则呈现相反的作用。即缺氧可以通过诱导mir-214高表达,继而靶向作用于A2AR和PRDM16并增强肿瘤细胞Warburg效应,从而发挥促进胃癌细胞迁移及增殖的作用;动物实验证实mir-214可以促进肿瘤生长。结论:缺氧诱导的mir-214可以靶向作用于PRDM16和A2AR mRNA 3'UTR并且下调其蛋白水平。mir-214通过下调PRDM16和A2AR促进胃癌迁移、增殖并增强Warburg效应,这可能为胃癌的诊断及治疗提供新的方向。

关键词：胃癌 mir-214 PRDM16 A2AR 缺氧 Warburg效应增殖迁移

递增负荷跑台运动抑制骨质疏松小鼠mir-214表达进而促进骨生成的作用研究

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中国细胞生物学学报 2019年第11期41卷 2116-2121页

作者：郭健民周绪昌陈熙张苗李慧邹军上海体育学院运动科学学院运动人体科学系上海200438 温州医科大学体育科学学院温州325035

适宜的运动可促进骨生成,抑制骨吸收,提高机体的骨密度和骨强度,进而起到防治骨质疏松的作用,但到目前为止运动防治骨质疏松的作用机制尚未完全明确。mir-214已被证明参与调控骨代谢,然而其是否参与运动防治骨质疏松的过程,尚缺乏相关... 详细信息

适宜的运动可促进骨生成,抑制骨吸收,提高机体的骨密度和骨强度,进而起到防治骨质疏松的作用,但到目前为止运动防治骨质疏松的作用机制尚未完全明确。mir-214已被证明参与调控骨代谢,然而其是否参与运动防治骨质疏松的过程,尚缺乏相关的探究。该研究采用去卵巢手术建立骨质疏松小鼠模型,24只12周龄雌性C57BL/6小鼠,随机分为四组:去卵巢组(OVX,n=6)、去卵巢+运动组(OVX+EX,n=6)、假手术组(SHAM,n=6)和假手术+运动组(SHAM+EX,n=6),术后4周进行为期9周的跑台运动干预,最后一次干预结束48 h后取材。进行骨密度(bone mineral density,BMD)、microCT、骨生物力学以及成熟mi R-214、β连环蛋白(β-catenin)、激活转录因子4(activated transcription factor 4,ATF4)、runt相关转录因子2(runt-related transcription factor 2,Runx2)表达的检测。该研究证实,去除卵巢后小鼠的BMD和骨强度均下降,mir-214的表达显著增加,Runx2的表达显著降低。同时其下游靶基因β-catenin和ATF4的蛋白表达也均显著减少。而跑台运动则可以部分逆转上述现象,显著增加去卵巢(ovariectomized,OVX)小鼠和SHAM小鼠的BMD和骨强度,抑制mir-214的表达。该研究提示跑台运动可显著抑制mir-214的表达,同时使mir-214下游靶基因ATF4和β-catenin的蛋白表达增加,进而提高骨质疏松小鼠的BMD和骨强度,部分逆转雌激素丢失导致的骨质流失。

关键词：骨质疏松骨密度 mir-214 β连环蛋白激活转录因子4

mir-214及mir-135b在多发性骨髓瘤骨病中的研究进展

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肿瘤研究与临床 2017年第1期29卷 70-72页

作者：骈晓琴高大内蒙古医科大学研究生学院呼和浩特010110 内蒙古医科大学附属医院血液科呼和浩特010059

多发性骨髓瘤（MM）是起源于浆细胞的恶性肿瘤，超过80%的MM患者会出现多发的溶骨性骨质破坏，已有相关报道阐述微RNA（mirNA）参与多发性骨髓骨病的发生。然而，mirNA作为骨髓瘤骨病的诊断及预后生物标记物还没有定论。mir-214和mir-1... 详细信息

多发性骨髓瘤（MM）是起源于浆细胞的恶性肿瘤，超过80%的MM患者会出现多发的溶骨性骨质破坏，已有相关报道阐述微RNA（mirNA）参与多发性骨髓骨病的发生。然而，mirNA作为骨髓瘤骨病的诊断及预后生物标记物还没有定论。mir-214和mir-135b可能参与骨髓骨病的发生，并且对于其预后有一定的指导意义。现就mir-214和mir-135b与骨髓瘤骨病的关系进行简单介绍。

关键词：多发性骨髓瘤骨病 mir-214

mir-214通过靶定Plexin-B1抑制肿瘤细胞的运动和增殖能力

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miR-214通过靶定Plexin-B1抑制肿瘤细胞的运动和增殖能力

作者：强冉天津医科大学

学位级别：硕士

目的: MicroRNA（mirNA）是一类新发现的能够调控其靶基因表达水平的小RNA分子家族。近几年已经发现并确定了上千种mirNA,目前mirNA的功能研究正日益成为生物学一个非常活跃的研究领域。本研究旨在结合生物信息学、基因芯片及报告... 详细信息

目的: MicroRNA（mirNA）是一类新发现的能够调控其靶基因表达水平的小RNA分子家族。近几年已经发现并确定了上千种mirNA,目前mirNA的功能研究正日益成为生物学一个非常活跃的研究领域。本研究旨在结合生物信息学、基因芯片及报告基因技术预测和确定mir-214在人类肿瘤细胞中的靶基因,并对mir-214通过调控靶基因而在肿瘤细胞中发挥的生物学功能进行进一步研究。方法: 利用mirNA芯片技术对几种不同组织来源肿瘤细胞系中mir-214的表达水平进行比较,随后在使用mir-214反义寡聚核苷酸特异性抑制细胞内mir-214功能后,利用MTT法和软琼脂克隆形成实验筛选分析mir-214对肿瘤细胞活性和增殖能力的影响。在此基础上结合靶基因预测程序和mRNA表达谱芯片以及半定量RT-PCR的结果对mir-214的靶基因进行预测和筛选,并通过检测GFP报告基因的方法进行验证。随后根据已知的该靶基因功能,应用肿瘤细胞运动能力实验和测定生长曲线的方法确定mir-214对肿瘤细胞运动能力和增殖能力的调控作用。结果: 通过对mirNA芯片结果的分析发现在人类肿瘤细胞系HT-29,HeLa,MCF-7,A549,K562,ES-2中mir-214的表达都保持在较一致的水平。随后利用MTT法和软琼脂克隆形成实验对mir-214的功能进行筛选分析,发现在HeLa细胞中mir-214功能受到抑制后肿瘤细胞的活性和增殖能力均明显增强。在此基础上利用长寡聚核苷酸基因芯片（共7267个人类基因,包含凋亡相关基因、肿瘤相关基因、信号转导相关基因、肝酶代谢相关基因、细胞因子相关基因）分析抑制mir-214的功能后mRNA表达谱的变化,选取部分表达有差异基因经过半定量RT-PCR验证,最终得到与芯片结果相符的基因有四个:Plexin-B1,MDH1,COX5A和RAC1。其中Plexin-B1是靶基因预测程序分析后认定的mir-214可能靶位点,在mir-214的功能被抑制后表达升高,我们通过检测GFP报告基因的方法确定了mir-214可以通过与Plexin-B1 3’UTR预测靶位点区域的直接相互作用抑制报告基因GFP的表达。随后,根据已知的该靶基因功能,一方面通过测定生长曲线确定了mir-214对肿瘤细胞增殖能力的抑制作用,另一方面利用肿瘤细胞趋化性运动能力实验,证明了mir-214可以通过靶定Plexin-B1而抑制肿瘤细胞的运动能力。结论: 本文预测并首次确定了Plexin-B1是mir-214在人类肿瘤细胞内的直接靶基因,mir-214可以介导Plexin-B1 mRNA的降解。通过实验首次证实了mir-214可以通过调控靶基因Plexin-B1的表达而抑制肿瘤细胞的运动和增殖能力。对mir-214调控功能及其相关调控机制的研究有助于我们深化对于肿瘤细胞的生长,运动能力等生物学特性及其调控机制的理解,同时也为肿瘤的治疗提供一条可能的新途径。

关键词：微小RNA mir-214 Plexin-B1 肿瘤细胞靶基因运动能力增殖能力

桂枝茯苓丸加味治疗子宫肌瘤的临床观察及对mir-214基因表达的影响

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桂枝茯苓丸加味治疗子宫肌瘤的临床观察及对miR-214基因表达的影响

作者：刘津源北京中医药大学

学位级别：硕士

目的1.探讨桂枝茯苓丸加味治疗子宫肌瘤的临床疗效,为中医药治疗子宫肌瘤提供更加客观的依据。2.通过探讨桂枝茯苓丸加味对mir-214及其调控的下游信号分子PIK3R1、AKT3基因表达的影响,完成对前期基因芯片结果的验证,并探讨该药治疗子宫... 详细信息

目的1.探讨桂枝茯苓丸加味治疗子宫肌瘤的临床疗效,为中医药治疗子宫肌瘤提供更加客观的依据。2.通过探讨桂枝茯苓丸加味对mir-214及其调控的下游信号分子PIK3R1、AKT3基因表达的影响,完成对前期基因芯片结果的验证,并探讨该药治疗子宫肌瘤的分子机制,为中医药治疗子宫肌瘤提供实验室依据。方法选择2016年9月至2018年12月于中国中医科学院广安门医院妇科门诊就诊,经妇科检查及超声或核磁确诊的,符合纳入及排除标准的子宫肌瘤患者,按照腔内超声下子宫肌瘤三维径线最大值(多发肌瘤者,以最大者为准)分为小肌瘤组(0mir-214及其调控的下游PI3KR1、AKT3的基因表达。对结果进行统计学分析。结果1.本研究共纳入患者100例,完成96例,其中小肌瘤组44例,中肌瘤组42例,大肌瘤组10例。2.与治疗前相比,治疗后96例患者肌瘤月增长体积显著降低(P0.05);大肌瘤组肌瘤体积及肌瘤月增长体积均有减小趋势,但无明显差异(P>0.05)。3.治疗前,小肌瘤组和中肌瘤组肌瘤月增长体积均明显小于大肌瘤组(P0.05)。治疗后,三组间肌瘤月增长体积无明显差异(P>0.05)。4.对96例肌瘤患者月经量多、经行有块等月经情况,痛经、经期小腹凉和经前乳胀等经期症状进行频数统计,计算症状存在率,分析结果显示,治疗后各症状存在率均较治疗前明显下降(P0.05)。5.对畏寒肢冷、神疲乏力、手足心热、口干、腹胀、闷闷不乐、性急易怒等7个非经期常见症状存在率的分析结果显示,治疗后96例患者所有症状的存在率均较疗前降低(Pmir214表达上调(2>1);经桂枝茯苓丸加味治疗后,该基因表达下调(2>1),与前期基因芯片研究结果一致。对mir214调控的下游基因PIK3R1、AKT3的检测结果显示,与正常人相比,子宫肌瘤患者二者表达有上调趋势(21)。结论1.桂枝茯苓丸加味可有效缩小小肌瘤体积,减缓中、大肌瘤增长速度,改善患者月经情况及临床症状。2.桂枝茯苓丸加味可以下调mir214的基因表达,与既往研究结果一致;mir214-PI3K-AKT途径是其阻断肌瘤生长的作用途径之一。

关键词：子宫肌瘤桂枝茯苓丸加味临床观察 mir-214