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mir-200c-3p对肾母细胞瘤SK-NEp-1细胞增殖与凋亡的影响

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中华实用儿科临床杂志 2020年第22期35卷 1731-1737页

作者：曹娟杨国城张欢何潇潇缪秋玲陈永先何鹏文飞球深圳市儿童医院病理科 518038 深圳市儿童医院血液肿瘤科 518038

目的探讨mir-200c-3p对肾母细胞瘤SK-NEp-1细胞株增殖与凋亡的调控作用。方法收集2015年1月至2019年8月深圳市儿童医院收治肾母细胞瘤患儿新鲜的瘤组织和瘤旁肾组织30例。实验分为模拟物阴性对照组、mir-200c-3p组及mir-200c-3p抑制剂... 详细信息

目的探讨mir-200c-3p对肾母细胞瘤SK-NEp-1细胞株增殖与凋亡的调控作用。方法收集2015年1月至2019年8月深圳市儿童医院收治肾母细胞瘤患儿新鲜的瘤组织和瘤旁肾组织30例。实验分为模拟物阴性对照组、mir-200c-3p组及mir-200c-3p抑制剂组。采用实时荧光定量pcR法检测30例配对的肾母细胞瘤肿瘤组织、瘤旁肾组织及肾母细胞瘤SK-NEp-1细胞和人胚肾293FT细胞系中mir-200c-3p的表达情况。采用细胞计数盒8(ccK-8)细胞增殖实验测定mir-200c-3p抑制SK-NEp-1细胞增殖的效果,流式细胞术检测mir-200c-3p对SK-NEp-1细胞周期及凋亡的影响。裸鼠原位移植实验检测mir-200c-3p过表达对体内成瘤的影响,对瘤体组织进行HE染色并病理形态的观察、免疫组织化学染色检测移植瘤组织中核增殖指数Ki-67的增殖情况;Western blot法检测3组裸鼠移植瘤组织中B细胞淋巴瘤2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)及活性半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-3(cleaved caspase-3)的表达水平。结果30例患儿mir-200c-3p的表达水平在肾母细胞瘤组织(0.420±0.587)中明显低于配对的瘤旁肾组织(1.500±0.504)(t=8.613,pmir-200c-3p的表达水平在SK-NEp-1细胞中(0.363±0.006)与人胚肾293FT细胞(0.807±0.186)比较也显著下降(t=4.136,pccK-8法表明按照组间和时间交互效应mir-200c-3p可抑制SK-NEp-1细胞体外增殖(F=16.81,pmir-200c-3p能使SK-NEp-1细胞阻滞在G0/G1期及S期(t=-7.770,ppppmir-200c-3p组肿瘤体积[(2.469±0.914)cm^3比(0.419±0.16)cm^3]明显缩小(t=5.407,pmir-200c-3p抑制剂组[(1.627±0.189)cm^3]差异不明显(t=2.209,p=0.052)。Western blot实验示mir-200c-3p上调了凋亡蛋白cleaved caspase-3和Bax的表达水平(t=-47.000、-82.730,均pcl-2的表达水平(t=53.740,pmir-200c-3p能抑制SK-NEp-1细胞增殖及促进细胞凋亡,抑制裸鼠移植瘤的生长并起到抑癌基因的作用。

关键词： mir-200c-3p 肾母细胞瘤增殖凋亡

mir-200c-3p靶向FOSL1增加乳腺癌细胞化疗敏感性

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中国生物化学与分子生物学报 2016年第12期32卷 1360-1365页

作者：卢敏莹贾小婷罗利云邱惠思郑国沛贺智敏广州医科大学附属肿瘤医院肿瘤研究所广州510095

化疗耐受是乳腺癌复发转移率居高不下、综合治疗效果难以提高的主要瓶颈。前期研究证实,mir-200c-3p在乳腺癌敏感细胞McF-7中的表达量显著高于耐药细胞McF-7/5Fu,提示mir-200c-3p可能参与乳腺癌化疗增敏,但是具体机制不详。生物信息学... 详细信息

化疗耐受是乳腺癌复发转移率居高不下、综合治疗效果难以提高的主要瓶颈。前期研究证实,mir-200c-3p在乳腺癌敏感细胞McF-7中的表达量显著高于耐药细胞McF-7/5Fu,提示mir-200c-3p可能参与乳腺癌化疗增敏,但是具体机制不详。生物信息学预测联合双荧光素酶报告基因实验证实,mir-200c-3p靶向调控FOSL1,且在多种肿瘤中mir-200c-3p与FOSL1表达负相关。实时荧光定量pcR技术和Western印迹技术证实,FOSL1在耐药细胞McF-7/5Fu中的表达量显著高于亲本细胞McF-7。在McF-7细胞中,过表达FOSL1能够显著提高该细胞对5-Fu的化疗耐受;在McF-7/5Fu中,使用siRNA技术沉默FOSL1,将提高该细胞对5-Fu的化疗敏感性。此外,MTT实验还发现,mir-200c-3p抑制剂能够显著上调McF-7细胞对5-Fu的耐受,但是在此细胞中干扰FOSL1的表达,又可以增加其对5-Fu的化疗敏感性;mir-200c-3p mimics显著增加McF-7/5Fu细胞的化疗敏感性,上调FOSL1表达后又可逆转mir-200c-3p mimics的化疗增敏作用。总之,mir-200c-3p能够通过靶向FOSL1增加乳腺癌细胞对5-fluorouridine化疗敏感性。

关键词： mir-200c-3p FOS样抗原1 化疗敏感性乳腺癌

mir-200c-3p靶向调控ZEB2抑制前列腺癌细胞增殖和迁移的实验研究

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中华全科医学 2021年第11期19卷 1846-1850页

作者：李虎朱永士王宁宁郭绍永陈志军安徽皖北煤电集团总医院泌尿外科安徽宿州234000 蚌埠医学院第一附属医院泌尿外科安徽蚌埠233004

目的前列腺癌的进展与多种因素有关,本研究旨在探索mir-200c-3p对前列腺癌细胞系的影响,并分析mir-200c-3p与ZEB2的潜在机制。方法通过qRT-pcR检测mir-200c-3p在前列腺癌细胞系pc-3、DU145、前列腺上皮细胞RWpE-1的表达量。DU145转染mir... 详细信息

目的前列腺癌的进展与多种因素有关,本研究旨在探索mir-200c-3p对前列腺癌细胞系的影响,并分析mir-200c-3p与ZEB2的潜在机制。方法通过qRT-pcR检测mir-200c-3p在前列腺癌细胞系pc-3、DU145、前列腺上皮细胞RWpE-1的表达量。DU145转染mir-200c-3p后,通过ccK-8、划痕修复实验以及Transwell实验探究增殖与迁移能力。沉默ZEB2后分析DU145增殖和迁移能力的变化,采用双荧光素酶报告法蛋白免疫印迹实验测定mir-200c-3p与E盒结合锌指蛋白2(zinc finger E-box binding homeobox 2,ZEB2)的潜在关系。结果 qRT-pcR结果显示RWpE-1中mir-200c-3p表达量是DU145的2.5倍左右。DU145转染mir-200c-3p mimics后ccK-8实验组的增殖能力明显弱于对照组,划痕修复实验实验组[(20.33±1.45)%]与对照组[(46.67±2.40)%]相比愈合能力明显减弱(p30±5.21)与对照组(212.00±6.49)相比迁移能力显著下降(ppmir-200c-3p在DU145中过表达降低了ZEB2的蛋白表达(pmir-200c-3p通过介导ZEB2抑制DU145的增殖和迁移。

关键词：前列腺癌 mir-200c-3p E盒结合锌指蛋白2 增殖迁移

mir-200c-3p靶向ScD2通过调节脂质合成影响间充质干细胞衰老的作用

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miR-200c-3p靶向SCD2通过调节脂质合成影响间充质干细胞衰老的作用

作者：于晓吉林大学

学位级别：硕士

间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MScs)是一类具有多谱系分化潜能和免疫抑制特性的成体干细胞,是组织工程、再生医学和临床疾病治疗的理想种子细胞。然而,由于个体老化或疾病状态,MScs功能特性受损,严重影响其应用效能。此外,体外... 详细信息

间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MScs)是一类具有多谱系分化潜能和免疫抑制特性的成体干细胞,是组织工程、再生医学和临床疾病治疗的理想种子细胞。然而,由于个体老化或疾病状态,MScs功能特性受损,严重影响其应用效能。此外,体外连续传代培养过程中MScs发生衰老,其增殖、分化潜能以及免疫抑制能力降低。因此,明确MScs衰老的机制对于维持干细胞数量、延缓衰老以及临床疾病的治疗至关重要。代谢在干细胞的命运决定中起着关键作用。其中,脂质稳态失衡会导致脂毒性、细胞死亡以及动脉粥样硬化、脂肪肝、自身免疫疾病和癌症等多种疾病。脂肪从头合成能增强干细胞快速扩张质膜和细胞器膜的能力,进而影响细胞分裂。课题组前期实验发现衰老MScs的糖代谢水平降低,而关于衰老MScs中脂质代谢的变化研究甚少。因此我们推测,在MScs衰老过程中,某些脂质代谢相关基因发生改变,通过改变这些脂质代谢差异基因调节细胞的脂质代谢水平,能够调控MScs衰老。然而,衰老MScs中哪些脂质代谢基因发生明显改变?通过改变这些差异基因的表达是否能够影响MScs脂质代谢?能否进一步调控MScs衰老?这些差异表达基因参与调控脂质代谢及细胞衰老可能的上游机制又是什么?以上问题均有待阐明。目的:筛选出衰老MScs中变化显著的脂质代谢差异基因,明确差异表达基因的变化对MScs衰老及脂质代谢的影响,进一步探究其机制,为延缓干细胞衰老提供新思路与新靶标。方法:1.以150g-180g健康雄性Wistar大鼠为研究对象,通过全骨髓贴壁法获得年轻MScs,通过体外传代培养获得衰老MScs,并进行细胞表面积、细胞长宽比、SA-β-gal活性及衰老相关因子m RNA表达等衰老相关指标检测。2.利用转录组学与代谢组学分别筛选出变化显著的差异表达基因与差异代谢物,然后联合分析筛选出脂质代谢相关的差异表达基因并进行RT-q pcR验证。3.经分析确定硬脂酰辅酶a去饱和酶-2(Stearoyl-co A desaturase-2,ScD2)为变化最为显著的差异基因。进一步通过慢病毒感染探究过表达ScD2对MScs衰老、成骨分化及脂质合成的影响,分别进行衰老相关指标检测,成骨分化能力检测(茜素红染色,Western Blot检测Runx2蛋白表达)及脂质合成能力(尼罗红染色检测甘油三酯含量)的检测。4.生物信息网站预测ScD2 m RNA上游mirNAs,并进行RT-q pcR验证与筛选,通过双荧光素酶报告基因实验验证mir-200c-3p与ScD2的靶向关系。5.利用mir-200c-3p mimic上调其表达,通过RT-q pcR及Western Blot检测过表达mir-200c-3p对ScD2的表达调控,探究过表达mir-200c-3p对MScs细胞衰老、成骨分化及脂质合成的影响,最后通过功能回复实验阐明mir-200c-3p/ScD2影响MScs衰老的机制。结果:1.与早代次MScs(年轻细胞)相比,晚代次MScs(衰老细胞)出现胞体铺展、边界不清等形态学改变,细胞长宽比降低,表面积增加,衰老细胞阳性率及衰老相关因子p16 m RNA表达升高。2.转录组学分析结果显示,与年轻MScs相比,衰老MScs中共有590个(上调279个,下调311个)差异表达基因。GO和KEGG pathway富集分析结果显示,伤口愈合等生物进程和Wnt等信号通路在衰老MScs中上调,而脂肪酸代谢、不饱和脂肪酸合成等通路在衰老MScs中下调。代谢组学分析结果显示,与年轻MScs相比,衰老MScs中共有23种代谢物发生显著变化。通过转录组学与代谢组学关联分析发现,甘油磷脂代谢等途径变化最为显著,进一步利用RT-q pcR验证,确定ScD2为衰老MScs中下调最为明显的脂质代谢相关基因。3.过表达ScD2后,衰老MScs中SA-β-gal阳性率及衰老相关因子p16m RNA表达降低,骨基质钙盐沉积增多,Runx2蛋白表达水平上调,细胞内甘油三酯含量增加。4.利用生物信息学网站预测出ScD2的上游mirNAs,选出评分最高的2个mirNAs,分别为mir-199a-3p和mir-200c-3p。RT-q pcR验证结果显示,两者在衰老MScs中的表达均上调,其中mir-200c-3p上调尤为显著,故选择mir-200c-3p进行机制探究。通过双荧光素酶报告基因实验进一步确定mir-200c-3p能够靶向抑制ScD2,ScD2是mir-200c-3p的直接靶基因。5.在年轻MScs中,过表达mir-200c-3p使SA-β-gal阳性率及衰老相关因子p16 m RNA的表达升高,骨基质钙盐沉积减少,Runx2蛋白表达水平及细胞内甘油三酯含量降低。mirNA功能回复实验结果显示,在衰老MScs中,ScD2与m

关键词：衰老间充质干细胞硬脂酰辅酶a去饱和酶-2 脂质合成 mir-200c-3p

血清mir-200c-3p表达水平对判断新生儿呼吸窘迫综合征严重程度和预后的价值

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临床儿科杂志 2020年第4期38卷 250-254页

作者：古裕鸟霍开明庄秀娟蒋家敏吴小红黄旭芳海南医学院第二附属医院儿科海南海口570311

目的探讨血清mir-200c-3p表达水平对判断新生儿呼吸窘迫综合征(NRDS)严重程度和预后的价值。方法选取2016年6月-2019年6月收治的102例NRDS新生儿,应用新生儿急性生理学评分围生期补充II(SNAppE-II)评分进行评估。根据患儿生存情况分为... 详细信息

目的探讨血清mir-200c-3p表达水平对判断新生儿呼吸窘迫综合征(NRDS)严重程度和预后的价值。方法选取2016年6月-2019年6月收治的102例NRDS新生儿,应用新生儿急性生理学评分围生期补充II(SNAppE-II)评分进行评估。根据患儿生存情况分为生存组(n=73)和死亡组(n=29),按照X线结果和病情严重程度分为轻度组(Ⅰ、Ⅱ级,67例)和重度组(Ⅲ、Ⅳ级,35例),采用实时荧光定量pcR检测各组血清mir-200c-3p表达水平。应用ROc曲线分析mir-200c-3p表达水平及SNAppE-II评分预测NRDS患儿死亡的价值。结果死亡组血清mir-200c-3p表达水平及SNAppE-II评分均明显高于生存组,重度组mir-200c-3p表达水平、SNAppE-II评分及病死率高于轻度组,差异均有统计学意义(pc曲线分析显示,血清mir-200c-3p表达水平联合SNAppE-II评分预测NRDS死亡的曲线下面积(AUc)为0.93(95%cI:0.87~0.98),明显高于单项mir-200c-3p(0.84,95%cI:0.78~0.90)及SNAppE-II评分(0.80,95%cI:0.75~0.86),差异有统计学意义(pmir-200c-3p表达水平与SNAppE-II评分呈显著正相关(r=0.84,pmir-200c-3p表达水平升高与NRDS病情严重程度及预后相关,mir-200c-3p联合SNAppE-II评分对NRDS预后判断具有较高价值。

关键词：新生儿呼吸窘迫综合征 mir-200c-3p 预后判断

海七鳃鳗pma-mir-200c-3p对斑马鱼心脏发育的作用研究

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大连海洋大学学报 2016年第5期31卷 510-515页

作者：刘云王丛丛郭亚南许强华上海海洋大学海洋科学学院上海201306 大洋渔业资源可持续开发省部共建教育部重点实验室上海201306 国家远洋渔业工程技术研究中心上海201306 远洋渔业协同创新中心上海201306

为研究海七鳃鳗petromyzon marinus pma-mir-200c-3p在心脏发育过程中的生物学功能,采用显微注射技术,将pma-mir-200c-3p模拟体注射到斑马鱼Danio rerio胚胎,过表达pma-mir-200c-3p后,使用qRT-pcR及Western blot法检测了一些与心脏发育相关的标志性基因的表达水平,以及BMp/Smad通路重要基因蛋白水平的变化,并利用生物信息学预测、GFp荧光表达分析了pma-mir-200c-3p的生物学作用。结果表明:过表达pma-mir-200c-3p的斑马鱼胚胎中,与心脏发育相关的标志性bmp4、bmp5、smad1、gata5、tbx2b和notch1a基因的表达水平极显著上调(pp/Smad通路中BMp4、Smad1、GATA5蛋白表达水平也明显升高;细胞试验表明,cdx1b基因可能是pma-mir-200c-3p的一个靶基因。研究表明,pma-mir-200c-3p可能通过抑制cdx1b基因的表达,参与BMp/Smad通路以促进心脏发育。

关键词：海七鳃鳗 mir-200c-3p 斑马鱼心脏发育 cdx1b

增强子调节器mir-200c-3p在三阴性乳腺癌中的潜在临床意义及初步研究

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增强子调节器miR-200c-3p在三阴性乳腺癌中的潜在临床意义及初步...

作者：邹文广西医科大学

学位级别：硕士

研究背景:随着社会的高速发展,女性承担着日益重要的社会角色,然而生活方式及环境的变化使肿瘤发生率不断提高,乳腺癌(breast cancer,BRcA)已一跃成为目前全球女性发生率最高的恶性肿瘤,发病率不但逐年提升且有年轻化趋势。三阴性乳腺癌... 详细信息

研究背景:随着社会的高速发展,女性承担着日益重要的社会角色,然而生活方式及环境的变化使肿瘤发生率不断提高,乳腺癌(breast cancer,BRcA)已一跃成为目前全球女性发生率最高的恶性肿瘤,发病率不但逐年提升且有年轻化趋势。三阴性乳腺癌(triple negative breast cancer,TNBc)向来被认为是最“毒”的乳腺癌,占乳腺癌总数的10%5%,具有发病年龄轻、肿瘤体积大、病理分级高、转移时间早、生存率低等特征,目前无特异有效的治疗方法。因此找寻新的具有诊断及临床治疗意义的分子靶标十分迫切。Micro RNA(mi RNA)在肿瘤学里已经研究近20年,作为真核生物内一类长度约18-25nt的非编码RNA,它参与转录后基因表达的调控,与肿瘤的增殖、迁移、凋亡等生物学过程息息相关,目前普遍认为其与基因表达间呈负相关。但有研究表明mi RNA还具有激活基因的作用,这具有颠覆性的发现又重新掀起了一番“micro”热潮,研究表明这类mi RNA可能与超级增强子(SEs)区域密切相关,并且可激活增强子RNA(e RNA)的表达,促进基因转录,已有研究证实多种癌症的基因组变异区存在SEs的富集。H3K27ac是H3组蛋白第27位赖氨酸乙酰化,它主要富集在增强子和启动子区域,所以H3K27ac常作为增强子的潜在标志物,并与增强子的活性相关。近年国内一项重大研究利用H3K27ac标记出许多可充当增强子调节器的mi RNA,证明其可以正向调控邻近基因的表达。这一发现给肿瘤发生机制研究指出了一条新道路,然而在三阴性乳腺癌中这种mi RNA正向调控基因转录的相关研究尚缺乏。本研究运用公共数据库数据进行统计学分析,利用H3K27ac的标记作用,意在探讨mi RNA充当增强子调节器正向调控三阴性乳腺癌基因转录的可行性,并对找到的上调基因行计算SMD、s ROc和HR综合分析,意在找到三阴性乳腺癌潜在的诊断指标和治疗靶点。研究目的:探索增强子调节器mi R-200c-3p在三阴性乳腺癌中使下游基因表达上调的可行性,并验证这一途径在三阴性乳腺癌发生发展中的作用及其临床意义。研究方法:1.挖掘TcGA、GEO、Array Express、SRA和ONcOMINE数据库中的乳腺癌mi RNA成熟体表达谱,将所下载的数据分成TNBc vs normal、non-TNBc vs normal以及TNBc vs non-TNBc三个亚组,整理分析后分别得到各亚组的差异mi RNA。相互取交集后,得到TNBc特异性高表达的mi RNA,并运用mi Rbase数据库查找上述mi RNA的前体。2.运用cistrome Data Browser数据库搜索H3K27ac在三阴性乳腺癌细胞系中的表达情况,使用UcSc浏览器筛选出距离H3K27ac富集峰10kb内的特异性mi RNA。利用计算生物学方法在已下载的公共数据中,对结果理想的mi RNA在三阴性乳腺癌中的表达情况进行验证,并分析其临床意义。3.利用UcSc浏览器和GEpIA数据库,找出该理想mirNA下游100kb范围内的高表达基因。运用统计学软件对高表达基因计算SMD、s ROc和HR,并探究其对三阴性乳腺癌预后的影响。4.对高表达基因进行GO功能注释、KEGG通路分析和ppI网络构建。验证ppI网络中关系紧密的共表达基因在三阴性乳腺癌中的表达情况,结合文献报道,分析它们的临床意义。研究结果:1.通过挖掘公共数据库,总共从TcGA、GEO、Array Express、SRA和ONcOMINE数据库下载得到38个乳腺癌mi RNA成熟体表达谱,整理分析后得到8个在TNBc中特异性高表达的mi RNA。2.通过cistrome Data Browser数据库筛选出5个存在H3K27ac富集的mi RNA,选择mi R-200c-3p为最理想的mi RNA,并在所下载的公共数据集中证实mi R-200c-3p在三阴性乳腺癌中的表达水平高于正常对照组织(SMD=0.56,95%cI:0.00-1.13)。但其表达水平与患者年龄、肿瘤分级、淋巴结转移、远处转移和临床分期间的差异未发现统计学意义(p>0.05),并且mi R-200c-3p的高表达与三阴性乳腺癌的预后情况也未发现统计学意义(p>0.05)。3.对mi R-200c-3p下游100kb内的2个高表达基因pHB2和EMG1行计算SMD,pHB2在三阴性乳腺癌中的表达无统计学差异(p>0.05),EMG1在三阴性乳腺癌中的表达高于正常对照组织(SMD=0.52,95%cI:0.19-0.84),同时也高于非三阴性乳腺癌组织(SMD=0.49,95%cI:0.33-0.65),生存分析结果表明EMG1与三阴性乳腺癌的预后差异无统计学意义(p>0.0

关键词：三阴性乳腺癌 H3K27ac mir-200c-3p EMG1 核糖体生物合成

mir-200c-3p通过靶向KRAS调控ERK/AKT信号通路对肾癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响

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广东医学 2024年第12期45卷 1549-1558页

作者：陈烈钳严秋霞黄栋强岳巍巍谢进东惠州市第一人民医院泌尿外科广东惠州516000

目的研究mir-200c-3p通过靶向Kirsten大鼠肉瘤病毒癌基因同源物(Kirsten rats arcomaviral oncogene homolog,KRAS)调控细胞外调节蛋白激酶(extracellular regulated protein kinase,ERK)/蛋白激酶B(protein kinase B,AKT)信号通路对肾癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响。方法以实时荧光定量pcR(qRT-pcR)和免疫印迹法测定人肾上皮细胞系HREpic和人肾癌细胞系786-O、769-p、caki-2中mir-200c-3p、KRAS、ERK/AKT信号通路相关蛋白表达。体外培养786-O细胞并随机分为对照组、mir-200c-3p mimics组、si-KRAS组、Nc-mir-200c-3p+Nc-KRAS组、mir-200c-3p mimics+pUc57-KRAS组,分组转染后以qRT-pcR和免疫印迹法检测细胞mir-200c-3p、KRAS表达、ERK/AKT信号通路相关蛋白;以Edu染色、克隆形成实验检测细胞增殖;以流式细胞术检测各组细胞凋亡;以Transwell实验检测细胞迁移侵袭;以免疫印迹法检测细胞增殖(cyclin D1)、凋亡(caspase-3、cleaved caspase-3、Bax)及上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)相关蛋白[钙黏蛋白E(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)]表达。以上述分组转染后的各组786-O细胞构建移植瘤裸鼠,检测其肿瘤生长情况。以双荧光素酶报告基因实验对786-O细胞中mir-200c-3p对KRAS的靶向调节进行验证。结果与HREpic细胞相比,786-O、769-p及caki-2细胞mir-200c-3p表达降低(pp-ERK1/2/ERK1/2、p-AKT/AKT升高(pmir-200c-3p mimics组、si-KRAS组细胞凋亡率、caspase-3、cleaved caspase-3、Bax、E-cadherin蛋白表达升高(pp-ERK1/2/ERK1/2、p-AKT/AKT、增殖率、克隆形成比例、迁移与侵袭数量、裸鼠肿瘤质量与体积、cyclin D1与Vimentin蛋白表达降低(pc-mir-200c-3p+Nc-KRAS组细胞各指标无明显变化(p>0.05)。与mir-200c-3p mimics组相比,mir-200c-3p mimics+pUc57-KRAS组细胞凋亡率、caspase-3、cleaved caspase-3、Bax、E-cadherin蛋白表达降低(pp-ERK1/2/ERK1/2、p-AKT/AKT、增殖率、克隆形成比例、迁移与侵袭数量、裸鼠肿瘤质量与体积、cyclin D1与Vimentin蛋白表达升高(pmir-200c-3p可通过下调KRAS表达而降低ERK/AKT信号通路传导活性,进而抑制肾癌细胞增殖、侵袭、体内生长、EMT和迁移,并促使其凋亡。

关键词： mir-200c-3p Kirsten大鼠肉瘤病毒癌基因同源物 ERK/AKT 肾癌增殖侵袭迁移

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mir-200c-3p靶向XIAp调控缺氧复氧诱导的心肌细胞凋亡

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中国动脉硬化杂志 2020年第7期28卷 572-577页

作者：厉广洲徐继蕊张丽丽日照心脏病医院心血管内科山东省日照市276800 枣庄矿业集团枣庄医院心血管内科山东省枣庄市277100

目的探讨mir-200c-3p对缺氧复氧心肌细胞凋亡的影响及作用机制。方法构建缺氧复氧(H/R)H9c2细胞。运用实时荧光定量反转录聚合酶链反应(qRT-pcR)法检测细胞中mir-200c-3p、X连锁凋亡抑制蛋白(XIAp)信使核糖核酸(mRNA)的表达。将H9c2细... 详细信息

目的探讨mir-200c-3p对缺氧复氧心肌细胞凋亡的影响及作用机制。方法构建缺氧复氧(H/R)H9c2细胞。运用实时荧光定量反转录聚合酶链反应(qRT-pcR)法检测细胞中mir-200c-3p、X连锁凋亡抑制蛋白(XIAp)信使核糖核酸(mRNA)的表达。将H9c2细胞分为H/R+anti-mir-Nc组(转染anti-mir-Nc)、H/R+anti-mir-200c-3p组(转染anti-mir-200c-3p)、H/R+pcDNA组(转染pcDNA)、H/R+pcDNA-XIAp组(转染pcDNA-XIAp)、H/R+anti-mir-200c-3p+si-Nc组(共转染anti-mir-200c-3p和si-Nc)、H/R+anti-mir-200c-3p+si-XIAp组(共转染anti-mir-200c-3p和si-XIAp),用脂质体法转染至H9c2细胞,再进行缺氧复氧处理。免疫印迹(Western blot)、噻唑蓝(MTT)、流式细胞术检测细胞中XIAp、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(caspase-3)、裂解的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(cleaved caspase-3)、B细胞淋巴瘤/白血病2 X蛋白(Bax)、B细胞淋巴瘤/白血病2(Bcl-2)的表达、细胞增殖、细胞凋亡;双荧光素酶报告基因检测实验检测细胞中mir-200c-3p与XIAp的结合力。结果成功构建缺氧复氧H9c2细胞;与正常培养的H9c2细胞比较,H/R组H9c2细胞中mir-200c-3p表达明显上调,XIAp表达明显下调;抑制mir-200c-3p、过表达XIAp均可抑制H/R H9c2细胞的凋亡,下调cleaved caspase-3、Bax,上调Bcl-2;mir-200c-3p可显著抑制XIAp 3′UTR野生型报告基因活性,并负向调控XIAp的表达;敲减XIAp可逆转抑制mir-200c-3p对H/R H9c2细胞的凋亡抑制作用。结论mir-200c-3p可诱导缺氧复氧心肌细胞的凋亡,其机制与靶向XIAp有关,可为心血管疾病的治疗提供新靶点。

关键词： mir-200c-3p XIAp 心肌细胞凋亡缺氧复氧