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长链非编码RNA二磷酸腺苷依赖的葡萄糖激酶反义RNA1通过靶向miR-200b-5p促进视网膜母细胞瘤细胞增殖抑制凋亡

中华肿瘤杂志 2023年第3期45卷 230-237页

作者：邢枫李永明高明敏河南省立眼科医院河南省人民医院眼科郑州450003 河南省人民医院神经外科郑州450003

目的探讨长链非编码RNA二磷酸腺苷依赖的葡萄糖激酶反义RNA1(lnc RNA ADpGK-AS1)对视网膜母细胞瘤细胞增殖及凋亡的影响及其可能的作用机制。方法收集2020年2—6月河南省立眼科医院收治的31例视网膜母细胞瘤患者的肿瘤组织及其相应癌旁... 详细信息

目的探讨长链非编码RNA二磷酸腺苷依赖的葡萄糖激酶反义RNA1(lnc RNA ADpGK-AS1)对视网膜母细胞瘤细胞增殖及凋亡的影响及其可能的作用机制。方法收集2020年2—6月河南省立眼科医院收治的31例视网膜母细胞瘤患者的肿瘤组织及其相应癌旁正常组织,采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-pCR)法检测视网膜母细胞瘤组织和癌旁正常组织中lncRNA ADpGK-AS1、miR-200b-5p的表达水平。体外培养人视网膜上皮细胞ARpE-19、人视网膜母细胞瘤细胞Y-79和WERI-Rb-1,qRT-pCR法检测lncRNA ADpGK-AS1、miR-200b-5p的表达水平。以Y-79细胞为研究对象,随机分组si-con组、si-lncRNA ADpGK-AS1组、mir-con组、miR-200b-5p组、si-lncRNA ADpGK-AS1+anti-mir-con组、si-lncRNA ADpGK-AS1+anti-miR-200b-5p组。四甲基偶氮唑蓝法、平板克隆形成实验与流式细胞术分别检测各组细胞的增殖、克隆及凋亡情况,双荧光素酶报告实验检测lncRNA ADpGK-AS1与miR-200b-5p的靶向关系,Western blot法检测Cleaved-caspase-3蛋白的表达水平。结果视网膜母细胞瘤组织中lncRNA ADpGK-AS1的表达水平高于癌旁正常组织,miR-200b-5p的表达水平低于癌旁正常组织(均p5);Y-79、WERI-Rb-1细胞中lncRNA ADpGK-AS1的表达水平高于ARpE-19细胞,miR-200b-5p的表达水平低于ARpE-19细胞(均p5)。si-lncRNA ADpGK-AS1组细胞吸光度(A)值(0.53±0.05)、细胞克隆形成数[(57.00±4.13)个]低于si-con组[分别为1.06±0.09和(114.00±8.03)个,均p5],细胞凋亡率[(25.43±1.94)%]高于si-con组[(7.93±0.68)%,p5],Cleaved-caspase-3蛋白水平高于si-con组(p5)。miR-200b-5p组细胞A值(0.57±0.05)、细胞克隆形成数[(64.00±5.13)个]低于mir-con组[分别为1.05±0.08和(118.00±10.02)个,均p5],细胞凋亡率[(23.15±1.62)%]高于mir-con组[(7.89±0.71)%,p5],Cleaved-caspase-3蛋白水平高于mir-con组(p5)。lncRNA ADpGK-AS1可靶向调控miR-200b-5p的表达。si-lncRNA ADpGK-AS1+anti-miR-200b-5p组细胞A值(1.25±0.10)、细胞克隆形成数[(125.00±10.03)个]高于si-lncRNA ADpGK-AS1+anti-mir-con组[分别为0.53±0.04和(54.00±4.39)个,均p5],细胞凋亡率[(9.76±0.71)%]低于si-lncRNA ADpGK-AS1+anti-mir-con组[(25.38±1.53)%,p5],Cleaved-caspase-3蛋白水平低于si-lncRNA ADpGK-AS1+anti-mir-con组(p5)。结论抑制lncRNA ADpGK-AS1表达可通过靶向调控miR-200b-5p表达而抑制视网膜母细胞瘤细胞增殖及克隆形成,并可诱导细胞凋亡。

关键词：视网膜母细胞瘤二磷酸腺苷依赖的葡萄糖激酶反义RNA1 miR-200b-5p 细胞增殖细胞凋亡

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miR-200b-5p在人骨肉瘤增殖、迁移、侵袭及凋亡中的作用及其机制研究

miR-200b-5p在人骨肉瘤增殖、迁移、侵袭及凋亡中的作用及其机制...

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作者：陈士伟山西医科大学

学位级别：硕士

目的:探究miR-200b-5p对骨肉瘤增殖、迁移、侵袭及凋亡的影响及其可能的机制。方法:(1)以q RT-pCR检测人种属的软骨细胞系(C28)、骨肉瘤细胞系(Saos2、U2OS)以及收集的本院临床骨肉瘤患者骨肉瘤组织和正常骨组织中的miR-200b-5p、c-Myc... 详细信息

目的:探究miR-200b-5p对骨肉瘤增殖、迁移、侵袭及凋亡的影响及其可能的机制。方法:(1)以q RT-pCR检测人种属的软骨细胞系(C28)、骨肉瘤细胞系(Saos2、U2OS)以及收集的本院临床骨肉瘤患者骨肉瘤组织和正常骨组织中的miR-200b-5p、c-Myc、c-Met的RNA表达量,以Western blot检测C28、Saos2、U2OS细胞中c-Myc、c-Met的蛋白表达量。(2)用miR-200b-5p-mimic慢病毒感染人骨肉瘤Saos2细胞,构建miR-200b-5p过表达的细胞(miR-200b-5p mimic)作为实验组,用不携带mir-135a-5p mimic的空载病毒感染Saos2细胞,构建对应阴性细胞(Control)作为对照组,通过q RT-pCR检测转染效率及相应下游靶基因m RNA变化。通过CCK-8法、集落形成实验来检测miR-200b-5p对骨肉瘤细胞增殖的影响,通过划痕实验和Transwell实验检测miR-200b-5p对骨肉瘤细胞迁移和侵袭能力的影响,通过细胞流式术检测miR-200b-5p对骨肉瘤细胞抗凋亡能力的改变。通过Western blot实验分析miR-200b-5p对靶基因c-Myc、c-Met,血管生成相关蛋白VEGF、MMp2、MMp9及pI3K-AKT-m TOR、NF-κb通路蛋白的影响。(3)以control组和miR-200b-5p-mimic组细胞来构建骨肉瘤裸鼠异体移植瘤模型,通过观察实验组与对照组异体移植瘤的生长情况来探究miR-200b-5p在体内对骨肉瘤生长的作用;异体移植瘤裸鼠的肺组织在HE染色后观察骨肉瘤肺转移灶数目和大小,探究miR-200b-5p在异体移植瘤模型中对骨肉瘤肺转移的作用;通过免疫组化检测miR-200b-5p对异体移植瘤中血管生成相关指标VEGF、MMp2及MMp9表达的作用。结果:(1)相比于人软骨细胞系(C28),人骨肉瘤细胞系(Saos2,U2OS)中miR-200b-5p的表达均降低,c-Myc与c-Met表达升高。临床获取的骨肉瘤组织相比于正常骨组织其miR-200b-5p表达降低,c-Myc与c-Met表达升高。West blot结果显示人骨肉瘤细胞系(Saos2,U2OS)中c-Myc、c-Met蛋白相比于人软骨细胞系(C28)表达升高。(2)慢病毒miR-200b-5p mimic与相应对照阴性病毒分别转染Saos2及U2OS细胞后,荧光倒置显微镜下观察到两组细胞中带荧光的细胞数量占比都超过90%,经q RT-pCR验证,miR-200b-5p-mimic组的miR-200b-5p表达量显著高于Control组,其相关下游指标c-Myc、c-Met及血管生成相关指标VEGF、MMp2和MMp9的表达降低。CCK-8实验结果显示miR-200b-5p-mimic组细胞的增殖曲线低于Control组细胞,集落形成实验结果显示miR-200b-5p-mimic组细胞形成的集落数及集落大小均低于Control组细胞,表明OS细胞高表达miR-200b-5p后增殖能力减弱。划痕实验结果显示miR-200b-5p-mimic组细胞迁移距离少于Control组细胞,表明OS细胞高表达miR-200b-5p后迁移能力变弱。Transwell实验结果显示miR-200b-5p-mimic组细胞穿膜到达下层小室的细胞明显少于Control组细胞,表明OS细胞高表达miR-200b-5p后侵袭能力减弱。细胞流式术检测细胞凋亡结果显示miR-200b-5p-mimic组细胞凋亡数量相比于Control组明显增加,表明OS细胞高表达miR-200b-5p后抗凋亡能力明显减弱。Western blot实验结果显示miR-200b-5p-mimic组相比于Control组细胞c-Myc、c-Met蛋白表达减少,pI3K-AKT-m TOR与NF-κb通路蛋白表达降低。(3)在体实验结果表明,相比于Control组,miR-200b-5p-mimic组裸鼠的异体移植瘤生长被抑制。异体移植瘤造模裸鼠的肺组织HE染色结果示miR-200b-5p-mimic组裸鼠肺转移灶的数目少于Control组。裸鼠异体移植瘤的免疫组化结果显示miR-200b-5p-mimic组瘤体的血管生成相关指标VEGF、MMp2及MMp9表达量降低。结论:(1)骨肉瘤细胞系和临床骨肉瘤患者骨肉瘤组织中miR-200b-5p低表达,c-Myc与c-Met异常高表达。(2)在体外过表达miR-200b-5p抑制Saos2细胞的增殖,负向调控其迁移、侵袭和抗凋亡能力;降低血管生成相关指标VEGF、MMp2以及MMp9表达量的同时也抑制HUVEC细胞血管生成;过表达miR-200b-5p在骨肉瘤中负向调节c-Myc、c-Met的表达,同时也作用于pI3K-AK

关键词：骨肉瘤 miR-200b-5p 增殖凋亡血管生成

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宫颈癌组织miR-200b-5p、mir-424-5p表达与临床病理特征、pI3K/AKT/mTOR信号通路和预后的关系研究

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现代生物医学进展 2023年第19期23卷 3714-3718页

作者：王燕高婉王聪李亚萍李冰琳张淑会西安市中心医院妇产科陕西西安710003 陕西省蒲城县医院妇产科陕西渭南715500

目的:探讨宫颈癌组织微小核糖核酸(mirNA)-200b-5p、mir-424-5p表达与临床病理特征、磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶b/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(pI3K/AKT/mTOR)信号通路和预后的关系。方法:选取2016年7月~2019年6月西安市中心医院收治的123... 详细信息

目的:探讨宫颈癌组织微小核糖核酸(mirNA)-200b-5p、mir-424-5p表达与临床病理特征、磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶b/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(pI3K/AKT/mTOR)信号通路和预后的关系。方法:选取2016年7月~2019年6月西安市中心医院收治的123例宫颈癌患者,采用定量聚合酶链式反应(qpCR)检测癌组织与癌旁组织中miR-200b-5p、mir-424-5p、pI3K信使RNA(mRNA)、AKT mRNA、mTOR mRNA表达。分析miR-200b-5p、mir-424-5p表达与pI3K mRNA、AKT mRNA、mTOR mRNA表达的相关性及与临床病理特征的关系。采用K-M法绘制不同miR-200b-5p、mir-424-5p表达宫颈癌患者生存曲线。结果:与癌旁组织比较,宫颈癌组织中miR-200b-5p、mir-424-5p表达降低,pI3K mRNA、AKT mRNA、mTOR mRNA表达升高(ppearson相关性分析显示,宫颈癌组织中miR-200b-5p、mir-424-5p表达与pI3K mRNA、AKT mRNA、mTOR mRNA表达均呈负相关,pI3K mRNA、AKT mRNA、mTOR mRNA表达呈两两相关(pmiR-200b-5p、mir-424-5p表达与宫颈癌分化程度、国际妇产科联盟(FIGO)分期和淋巴结转移有关(pmiR-200b-5p、mir-424-5p高表达组累积生存率分别高于miR-200b-5p、mir-424-5p低表达组(pmiR-200b-5p、mir-424-5p低表达,与分化程度、FIGO分期、淋巴结转移、pI3K/AKT/mTOR信号通路和预后有关。

关键词：宫颈癌 miR-200b-5p mir-424-5p 病理特征 pI3K/AKT/mTOR信号通路预后

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miR-200b-5p靶向ATAD2调控p13K/AKT信号通路参与宫颈癌血管生成的作用机制

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中国性科学 2019年第7期28卷 42-46页

作者：朱晓志王冬梅王丽蓉日照市妇幼保健院产科山东日照276826 中国人民解放军火箭军特色医学中心妇产科北京100088

目的探究miR-200b-5p靶向调控ATAD2基因介导p13K/AKT信号通路对宫颈癌血管生成的作用机制。方法采集2016年3月至2018年3月间日照市妇幼保健院诊治的90例宫颈癌手术切除患者的术中标本作为研究对象。将采集到的标本行免疫组化检测,qRT-pC... 详细信息

目的探究miR-200b-5p靶向调控ATAD2基因介导p13K/AKT信号通路对宫颈癌血管生成的作用机制。方法采集2016年3月至2018年3月间日照市妇幼保健院诊治的90例宫颈癌手术切除患者的术中标本作为研究对象。将采集到的标本行免疫组化检测,qRT-pCR检测组织miR-200b-5p、ATAD2表达,Western blot检测组织中ATAD2蛋白表达。细胞转染并分组,qRT-pCR检测各组细胞中miR-200b-5p、ATAD2、pI3K、AKT mRNA表达水平;Western blot检测ATAD2、pI3K、AKT、VEGF蛋白表达水平。体外管腔形成实验比较各组管腔数目。结果宫颈癌组织中miR-200b-5pmRNA低表达,ATAD2 mRNA表达水平及蛋白表达均呈高表达,差异均具有统计学意义(均p5);并伴随高VEGF阳性表达率和MVD。细胞转染实验提示与blank组和NC组相比,miR-200b-5p mimic组miR-200b-5p表达量显著升高,ATAD2、pI3K、AKT表达显著下降,差异均具有统计学意义(均p5);miR-200b-5p mimic组和ATAD2siRNA组VEGF、ATAD2、pI3K、AKT蛋白表达水平均显著下降,差异均具有统计学意义(均p5);且miR-200b-5p mimic+ATAD2siRNA组表达趋势相比miR-200b-5p mimic组更显著,差异均具有统计学意义(均p5);而miR-200b-5p inhibitor组差异与之相反,差异均具有统计学意义(均p5)。体外管腔形成实验提示管腔数目变化miR-200b-5p inhibitor组显著上升,miR-200b-5p mimic+ATAD2siRNA组显著下降,差异均具有统计学意义(均p5)。结论促进miR-200b-5p表达,抑制ATAD2基因,抑制pI3K、AKT表达,从而抑制p13K/AKT信号通路,最终实现对人宫颈癌细胞血管生成的抑制。

关键词： miR-200b-5p ATAD2 p13K/AKT信号通路宫颈癌血管生成

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