检索结果-南通市图书馆

作者：侯悦上海交通大学

学位级别：硕士

研究目的:探索胃癌中mir-154-3p对SIRT1的调控作用及影响胃癌发展的机制。研究方法:qRT-pCR和Western Blot检测mir-154-3p和SIRT1在胃癌细胞系中的表达水平以及mir-154-3p对SIRT1的调控作用;双荧光素酶报告基因实验验证mir-154-3p与SIRT... 详细信息

研究目的:探索胃癌中mir-154-3p对SIRT1的调控作用及影响胃癌发展的机制。研究方法:qRT-pCR和Western Blot检测mir-154-3p和SIRT1在胃癌细胞系中的表达水平以及mir-154-3p对SIRT1的调控作用;双荧光素酶报告基因实验验证mir-154-3p与SIRT1 3’-UTR的结合作用;在胃癌细胞中过表达或抑制mir-154-3p后,利用CCK-8和细胞平板克隆实验检测细胞的增殖能力变化,细胞划痕和Transwell实验检测细胞的迁移能力变化;qRT-pCR检测mir-154-3p在31例胃癌和癌旁患者组织标本中的表达差异,利用免疫组化染色分析SIRT1在18例上述标本中的表达差异;Western Blot检测在胃癌细胞系中转染mir-154-3p mimics或inhibitor后SIRT1下游蛋白NF-κB p65、ERK1/2和AKT磷酸化水平变化。研究结果:五种胃癌细胞系中,mir-154-3p和SIRT1的表达水平呈相反趋势;mir-154-3p对SIRT1的蛋白表达有负向调控作用,而不影响SIRT1的mRNA表达;双荧光素酶实验结果显示,mir-154-3p能结合SIRT1的3’-UTR;过表达mir-154-3p显著促进胃癌细胞的增殖及迁移能力,抑制mir-154-3p的表达则抑制胃癌细胞的增殖及迁移能力;与对照相比,mir-154-3p在胃癌组织样本中的表达显著上调,而SIRT1显著下调;过表达mir-154-3p能够上调NF-κB p65的磷酸化水平,但不能改变ERK1/2和AKT的磷酸化水平。研究结论:mir-154-3p通过靶向SIRT1的3’-UTR抑制SIRT1的转录后翻译,从而促进NF-κB p65活化来调节胃癌细胞的增殖和迁移。

关键词： mir-154-3p SIRT1 NF-κB 胃癌细胞增殖细胞迁移

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mir-154-3p在非小细胞肺癌转移中的功能及机制

miR-154-3p在非小细胞肺癌转移中的功能及机制

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作者：薛云婧上海交通大学

学位级别：硕士

目的:检测micro RNA-154-3p(mir-154-3p)在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)组织和细胞系中的表达水平,并探讨其在NSCLC转移中的功能及机制。方法:实时荧光定量pCR(quantitive Real Time pCR,q RT-pCR)法检测NSCLC组织和癌旁组织、发生转移和未转移NSCLC组织、NSCLC细胞系(A549/H292/H1975/95D/SpC-A-1)和人胚肺细胞(WI38)中mir-154-3p的表达水平。转染阴性对照RNA(negative control,NC)或mir-154-3p mimics后,划痕愈合实验(wound healing assay)和Transwell侵袭实验(Transwell invasion assay)检测mir-154-3p对NSCLC细胞系A549和H292迁移、侵袭能力的影响。蛋白质印迹(Western blot)法检测转染后上皮间质转化(Epithelial-to-Mesenchymal Transition,EMT)过程标志蛋白E-cadherin/Z0-1和Vimentin/N-cadherin的表达。利用生物信息学软件pic Tar,mirBD,miranda,DIANA-micro T预测mir-154-3p的潜在靶基因,采用双荧光素酶报告基因法(Dual-Luciferase Reporter Assay)和蛋白质印迹法进一步验证预测结果。结果:mir-154-3p在NSCLC组织、转移NSCLC组织、NSCLC细胞系中表达均低于相应对照组,差异具有统计学意义。过表达mir-154-3p后,A549和H292细胞迁移侵袭能力减弱、E-cadherin/Z0-1表达上调,A549细胞中Vimentin表达下调,H292细胞中N-cadherin表达下调。双荧光素酶报告基因和蛋白质印迹结果显示mir-154-3p能直接结合BMI1 3’UTR,负调控BMI1的表达。mRNA及蛋白水平检测发现BMI1在NSCLC细胞系高表达;同样,免疫组化染色结果显示NSCLC组织中BMI1表达水平比正常肺组织中显著升高,统计31例NSCLC组织中48.4%高表达BMI1。结论:mir-154-3p在NSCLC中呈低表达,可以抑制NSCLC细胞迁移侵袭,阻碍NSCLC细胞EMT的发生。BMI1为mir-154-3p靶基因之一,在NSCLC中高表达。

关键词：非小细胞肺癌转移上皮间质转化 mir-154-3p

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氯喹自噬抑制剂通过mir-154-3p/ERBB4对胰腺癌细胞生长影响的研究

氯喹自噬抑制剂通过miR-154-3p/ERBB4对胰腺癌细胞生长影响的研究

引用

作者：玉巧广西医科大学

学位级别：硕士

背景胰腺癌是世界范围内癌症导致死亡的主要原因之一。早期诊断困难,复发率高,生存率低是胰腺癌的主要特点。即使术后辅助化疗,胰腺癌患者的生存率仍未明显改善。目前研究发现自噬与癌症密切相关,将自噬抑制与其他传统治疗方法(化疗或放... 详细信息

背景胰腺癌是世界范围内癌症导致死亡的主要原因之一。早期诊断困难,复发率高,生存率低是胰腺癌的主要特点。即使术后辅助化疗,胰腺癌患者的生存率仍未明显改善。目前研究发现自噬与癌症密切相关,将自噬抑制与其他传统治疗方法(化疗或放疗)在不同肿瘤类型、不同分期的最佳结合,可以成为提高抗癌治疗效果的成功途径。mirNAs可能在自噬发生过程中发挥作用,但他们之间的复杂关系及作用机制尚不明确。本研究前期实验发现氯喹作为自噬抑制剂处理胰腺癌细胞后,mir-154-3p表达下调,ERBB4表达上调,mir-154-3p与ERBB4存在潜在靶向关系。本研究旨在探索氯喹自噬抑制剂及mir-154-3p对胰腺癌的影响,为寻求治疗胰腺癌的方法提供新思路。材料与方法1.从广西医科大学第一附属医院病理科收集76例胰腺癌石蜡样本组织及39例胰腺癌癌旁石蜡样本组织,运用实时定量逆转录聚合酶链反应(RTqpCR)的方法检测石蜡组织中mir-154-3p、ERBB4及自噬相关基因ATG5、LC3B、p62的表达;筛选GEO、TCGA、ArrayExpress、Oncomine等公共数据库的数据后进行整合分析mir-154-3p、ERBB4及自噬相关基因在胰腺癌组织中的表达。此外,还运用免疫组化方法检测ERBB4蛋白在胰腺癌及癌旁组织中的表达。2.采用RT-qpCR的方法检测panc-1、SW1990胰腺癌细胞系中mir-154-3p、ERBB4及自噬相关基因的表达,再检测使用氯喹(chloroquine,CQ)处理胰腺癌细胞后mir-154-3p、ERBB4及自噬相关基因的表达,验证前期实验的芯片结果;采用免疫印迹(Western blot,WB)的方法检测CQ处理胰腺癌细胞后ERBB4及自噬相关基因的表达;同时进行CCK-8细胞增殖、细胞划痕、细胞凋亡实验检测CQ对细胞增殖、迁移及凋亡的影响。3.细胞划痕实验、transwell小室迁移及侵袭实验检测mir-154-3p对胰腺癌细胞迁移及侵袭能力的影响。双荧光素酶报告实验验证mir-154-3p与ERBB4的靶向关系;RT-qpCR检测抑制及过表达mir-154-3p后,ERBB4的表达变化。结果***-154-3p/ERBB4与自噬相关基因在胰腺癌中的表达及意义mir-154-3p在胰腺癌蜡块组织中平均表达水平高于癌旁组织,ERBB4在胰腺癌蜡块组织中平均表达水平低于癌旁组织,自噬相关基因ATG5、LC3B在胰腺癌蜡块组织中具有高表达趋势,p62在胰腺癌蜡块组织中具有低表达趋势,但表达差异均不具有统计学意义。整合GEO、TCGA、ArrayExpress、Oncomine及本研究RT-qpCR的数据进行荟萃分析,发现mir-154-3p表达差异不具有统计学意义;ERBB4的表达下调,自噬相关基因ATG5、LC3B和p62的表达上调,差异均具有统计学意义。值得注意的是在GSE60980基因芯片中,mir-154-3p在胰腺癌组织中高表达,ERBB4为低表达,并且二者ROC曲线下面积大于70%。免疫组化结果显示,ERBB4蛋白在胰腺癌组织中既有阴性表达又有阳性表达,差异不具统计学意义。2.氯喹对胰腺癌细胞mir-154-3p/ERBB4和自噬相关基因表达及细胞增殖、迁移的影响mir-154-3p在panc-1细胞系中高表达,而ERBB4为低表达,ATG5、LC3B均为高表达,p62为低表达,差异均具有统计学意义。CQ处理胰腺癌细胞后RT-qpCR检测mir-154-3p以及ERBB4的表达变化,发现与前期芯片结果一致,即mir-154-3p表达下调,ERBB4表达上调;本研究还发现ATG5、LC3B、p62均表达下调。在WB的检测中,CQ处理后ERBB4蛋白水平同样地表达升高;同时,LC3B的蛋白表达水平降低,而p62蛋白的表达水平升高。除此之外,加入CQ自噬抑制剂处理胰腺癌细胞后,细胞增殖、迁移能力明显降低,凋亡率升高。***-154-3p对胰腺癌细胞迁移、侵袭的影响及与ERBB4靶向调控关系的验证抑制mir-154-3p表达后,细胞划痕实验、transwell小室迁移及侵袭实验显示胰腺癌细胞系panc-1的迁移和侵袭能力受到抑制。双荧光素酶报告显示,mir-154-3p与ERBB4存在直接靶向关系。在胰腺癌细胞系panc-1中抑制mir-154-3p表达后,ERBB4表达升高;过表达mir-154-3p后,ERBB4表达降低。结论CQ在胰腺癌中可能发挥抑癌的作用,mir-154-3p在胰腺癌中可能发挥促癌作用,CQ可能通过mir-154-3p靶向ERBB4在胰腺癌中发挥抑癌作用。

关键词：胰腺癌氯喹自噬 mir-154-3p ERBB4

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mir-154-3p靶向Smad7对人脐静脉内皮细胞生长、运动及免疫的影响

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广东药科大学学报 2021年第3期37卷 123-129页

作者：袁晓丽江莉黄莉莉胡斌绵阳市中心医院心血管内科四川绵阳621000 西南医科大学附属医院心血管内科四川泸州646000

目的探究mir-154-3p通过靶向Smad7对人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVEC)的生长、运动及免疫的影响。方法体外培养HUVEC,将HUVEC转染mir-154-3p mimic后采用RT-pCR检测mir-154-3p和Smad7的mRNA表达水平,采用生物学信息预测结合荧光素酶实验确定mir-154-3p和Smad7的靶向关系;HUVEC单独转染mir-154p、Smad7,采用Western-blot检测Smad7蛋白的表达情况,采用克隆形成检测细胞生长情况;采用Transwell实验检测细胞侵袭情况;采用微管形成实验结合蛋白质印迹法检测血管内皮生长因子C(VEGFC)表达情况;采用酶联免疫吸附试验结合RT-pCR检测诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、白细胞介素-6(IL-6)和白细胞介素-4(IL-4)水平。结果荧光素酶实验发现,mir-154-3p上存在Smad7的结合位点。相比Control组,mir-154-3p组mir-154-3p、IL-10 mRNA和血清IL-10含量水平显著升高(p>0.05),Smad7蛋白、克隆形成率、单位面积细胞侵袭数、VEGF蛋白、微管形成节点数、iNOS mRNA、血清iNOS含量、IL-6 mRNA和血清IL-6含量水平显著降低(p>0.05);相比Control组,Smad7组mir-154-3p组mir-154-3p、IL-10 mRNA和血清IL-10含量水平显著降低(p>0.05),Smad7蛋白、克隆形成率、单位面积细胞侵袭数、VEGF蛋白、微管形成节点数、iNOS mRNA、血清iNOS含量、IL-6 mRNA和血清IL-6含量水平显著升高(p>0.05)。相比Smad7组,mir-154-3p+Smad7组mir-154-3p、IL-10 mRNA和血清IL-10含量水平显著升高(p>0.05),Smad7蛋白、克隆形成率、单位面积细胞侵袭数、VEGF蛋白、微管形成节点数、iNOS mRNA、血清iNOS含量、IL-6 mRNA和血清IL-6含量水平显著降低(p>0.05)。结论mir-154-3p过表达可以靶向下调Smad7表达,有效抑制HUVEC的增殖和运动能力。

关键词：人脐静脉内皮细胞 mir-154-3p Smad同源物7 细胞侵袭

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