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mir-151a-5p对结直肠癌细胞增殖和转移的影响及其机制探讨

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现代肿瘤医学 2023年第17期31卷 3139-3144页

作者：刘献菊谢亚亚曹丽君马田田杨彩娜张行行陈金联安徽理工大学医学院安徽淮南232000 锦州医科大学辽宁锦州121001 上海交通大学附属第六人民医院南院消化内科上海201499

目的:研究mir-151a-5p在结直肠癌(colorectal cancer,CRC)细胞中的生物学功能及其潜在机制。方法:采用qRT-pCR检测mir-151a-5p在不同CRC细胞株中的表达情况;使用Lipofectamine^(TM)2000将mir-151a-5p mimics/inhibitor和对照寡核苷酸分别转染至HCT116和SW480细胞中;通过CCK-8、细胞克隆形成实验和Transwell侵袭与迁移实验以及蛋白免疫印迹实验证明mir-151a-5p过表达组和敲低组对CRC细胞功能的影响及机制。结果:qRT-pCR结果显示,mir-151a-5p在HCT116细胞中低表达,在SW480细胞中高表达;CCK-8和细胞克隆形成实验结果显示,HCT116细胞过表达mir-151a-5p后细胞增殖能力明显高于对照组,而SW480细胞敲低mir-151a-5p后结果相反;Transwell实验结果显示,与相应的对照组相比,HCT116-mimics组细胞迁移和侵袭能力均增强,而SW480-inhibitor组细胞迁移和侵袭能力均降低;蛋白免疫印迹结果显示,与对照组相比,HCT116-mimics组E-cadherin和ZO-1蛋白表达水平降低,N-cadherin、Vimentin、β-Catenin、MMp2、MMp9蛋白和TGF-β/Smad信号通路相关蛋白表达水平升高,而SW480-inhibitor组呈相反结果。结论:mir-151a-5能够促进CRC细胞的增殖、侵袭和迁移,其机制可能与促进上皮-间充质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)进程相关,而TGF-β/Smad信号通路相关蛋白在EMT发生进程中出现改变,提示TGF-β/Smad信号通路可能参与了该表型的调控。

关键词： mir-151a-5p 结直肠癌上皮-间充质转化 TGF-β/Smad信号通路

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mir-151a-5p对肺癌细胞生物学行为和化疗敏感性的影响

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mir-151a-5p对肺癌细胞生物学行为和化疗敏感性的影响

作者：隆姝孜重庆医科大学

学位级别：硕士

第一部分筛选并构建mir-151a-5p下调的肺癌细胞系目的:首先通过验证mir-151a-5p在肺腺癌组织和不同肺腺癌细胞株中的表达,筛选出表达最高的一株细胞,然后构建mir-151a-5p下调肺癌细胞系。方法:首先将实验分为inhibitor转染组和对照组,... 详细信息

第一部分筛选并构建mir-151a-5p下调的肺癌细胞系目的:首先通过验证mir-151a-5p在肺腺癌组织和不同肺腺癌细胞株中的表达,筛选出表达最高的一株细胞,然后构建mir-151a-5p下调肺癌细胞系。方法:首先将实验分为inhibitor转染组和对照组,其中对照组包含了空白对照和阴性对照。应用RT-q pCR检测mir-151a-5p在16例肺腺癌组织和5株不同肺腺癌细胞中的表达,筛选出mir-151a-5p表达最高的一株细胞,然后用mir-151a-5p-inhibitor转染筛选的细胞株,最后用RT-q pCR验证转染效率。结果:与正常的癌旁组织相比,mir-151a-5p在人肺腺癌组织中的表达明显升高(p549、H1975、H2228五株细胞中,mir-151a-5p在A549细胞株中的表达量最高(ppCR验证inhibitor转染A549细胞后下调情况,与NC对照组相比,mir-151a-5p-inhibitor实验组的mir-151a-5p表达量显著下降(pmir-151a-5p在肺腺癌组织和肺腺癌细胞中表达升高,并成功筛选和构建了mir-151a-5p下调的A549细胞,为后面的生物学功能实验和化疗敏感性研究奠定基础。第二部分mir-151a-5p调节肺癌细胞的生物学功能和化疗敏感性目的:通过下调mir-151a-5p在A549细胞中的表达,研究mir-151a-5p对肺癌细胞的增殖、迁移、侵袭能力以及化疗敏感性的影响,为肺癌治疗提供新的依据。方法:将实验分为inhibitor转染组和NC对照组,用CCK-8实验检测转染inhibitor后A549细胞的增殖能力,Transwell迁移侵袭实验分别检测mir-151a-5p-inhibitor A549细胞的迁移、侵袭能力,然后应用Western blot检测inhibitor转染后EMT相关蛋白:E-cadherin、N-cadherin、Vimentin、Notch1的表达。最后用CCK-8和流式细胞术检测用顺铂处理转染后的A549细胞IC50值和凋亡率的变化。结果:mir-151a-5p inhibitor转染组与NC对照组相比细胞的增殖能力、迁移、侵袭能力都明显降低(p5)。Western blot实验显示mir-151a-5p inhibitor转染组较NC对照组E-cadherin表达明显升高,而N-cadherin、Vimentin、Notch1表达明显下降(pmir-151a-5p inhibitor转染组IC50值低于NC对照组(pmir-151a-5p inhibitor转染组凋亡率高于NC对照组(pmir-151a-5p在A549细胞中的表达,能抑制肺癌细胞的增殖、迁移、侵袭能力,并能增加对顺铂的化疗敏感性。

关键词： mir-151a-5p 肺腺癌 RT-qpCR EMT 生物学功能化疗敏感性

甘草己烷-乙醇提取物通过mir-151a-5p/GABARApL1轴调控前列腺癌细胞增殖、凋亡

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中国免疫学杂志 2022年第20期38卷 2461-2466页

作者：孟庆荣周振鹏张敏王世平孙秀斌徐光玉山东第一医科大学附属济南人民医院泌尿外科济南271199

目的:探讨甘草己烷-乙醇提取物(HEGU)对前列腺癌细胞增殖、凋亡的影响及分子机制。方法:人前列腺癌细胞pC-3分为对照(NC)组、不同剂量HEGU组、anti-con组、anti-mir-151a-5p组、HEGU+mir-con组、HEGU+mir-151a-5p组。MTT检测细胞增殖;... 详细信息

目的:探讨甘草己烷-乙醇提取物(HEGU)对前列腺癌细胞增殖、凋亡的影响及分子机制。方法:人前列腺癌细胞pC-3分为对照(NC)组、不同剂量HEGU组、anti-con组、anti-mir-151a-5p组、HEGU+mir-con组、HEGU+mir-151a-5p组。MTT检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡;Western blot检测细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂1A(p21)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X(Bax)蛋白表达;RT-qpCR检测mir-151a-5p和GABA A型受体相关蛋白样1(GABARApL1)mRNA表达;双荧光素酶报告实验检测mir-151a-5p与GABARApL1的靶向关系。结果:与NC组相比,不同剂量HEGU组前列腺癌细胞活性降低,凋亡率升高,CyclinD1、Bcl-2表达降低,p21、Bax表达升高,mir-151a-5p表达降低,GABARApL1 mRNA表达升高,且呈剂量依赖性(p5)。与anti-con组相比,anti-mir-151a-5p组细胞活性降低,凋亡率升高,CyclinD1、Bcl-2表达降低,p21、Bax表达升高(p5)。mir-151a-5p靶向负调控GABARApL1表达。过表达mir-151a-5p逆转了HEGU对前列腺癌细胞增殖、凋亡的影响。结论:HEGU可能通过调控mir-151a-5p/GABARApL1抑制前列腺癌细胞增殖,促进细胞凋亡。

关键词：甘草己烷-乙醇提取物 mir-151a-5p GABARApL1 前列腺癌增殖凋亡

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mir-151a-5p表达与晚期非小细胞肺癌患者病理特征、化疗效果的相关性及潜在靶基因的探究

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临床和实验医学杂志 2020年第19期19卷 2057-2060页

作者：黄俊谦王鹏徐美华殷玉磊饶小胖山东第一医科大学附属青岛医院呼吸内科山东青岛266109 山东第一医科大学附属青岛医院内分泌科山东青岛266109

目的研究mir-151a-5p表达与晚期非小细胞肺癌(NSCLC)患者病理特征、化疗效果的相关性并探究其潜在靶基因。方法回顾性选择2015年9月至2018年1月期间在山东第一医科大学附属青岛医院被诊断为晚期NSCLC的患者作为研究对象,检测NSLCL组织... 详细信息

目的研究mir-151a-5p表达与晚期非小细胞肺癌(NSCLC)患者病理特征、化疗效果的相关性并探究其潜在靶基因。方法回顾性选择2015年9月至2018年1月期间在山东第一医科大学附属青岛医院被诊断为晚期NSCLC的患者作为研究对象,检测NSLCL组织及癌旁组织中mir-151a-5p及上皮间质转化基因Notch1、N-cadherin、Vimentin的表达水平,观察化疗的近期疗效及远期疗效。结果NSCLC组织中mir-151a-5p的表达水平为(1.64±0.29),明显高于癌旁组织(1.03±0.17),差异有统计学意义(p5)。TNMIV期(1.77±0.31)、低未分化(1.80±0.32)、淋巴结转移(1.83±0.34)的NSCLC组织中mir-151a-5p的表达水平明显高于TNMIII期(1.49±0.23)、中高分化(1.43±0.20)、无淋巴结转移(1.40±0.22)的NSCLC组织,差异有统计学意义(p5)。NSCLC组织中mir-151a-5p高表达患者的客观缓解率为24.13%,疾病控制率为34.48%,均明显低于NSCLC组织中mir-151a-5p低表达患者(55.17%、75.86%),无病生存期(15.23±2.39)个月和总生存期(28.49±5.41)个月,均明显短于NSCLC组织中mir-151a-5p低表达患者[(20.39±3.28)个月、(35.51±7.69)个月],差异有统计学意义(p5)。mir-151a-5p高表达的NSCLC组织中Notch1(1.31±0.18)、N-cadherin(1.44±0.22)、Vimentin(1.49±0.31)的表达水平明显高于mir-151a-5p低表达的NSCLC组织(0.74±0.12、0.70±0.15、0.68±0.13),差异有统计学意义(p5)。结论晚期NSCLC中mir-151a-5p高表达与病理特征恶化、化疗效果不佳有关,靶向上皮间质转化基因可能是其分子机制。

关键词：非小细胞肺癌 mir-151a-5p 病理特征化疗效果靶基因上皮间质转化

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胍基丁胺酶（AGMAT）在结直肠癌中的作用及机制研究

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胍基丁胺酶（AGMAT）在结直肠癌中的作用及机制研究

作者：谢亚亚安徽理工大学

学位级别：硕士

目的:结直肠癌(Colorectal carcinoma,CRC)是人类最常见的消化道恶性肿瘤之一。胍基丁胺酶(AGMAT)是多胺代谢旁路途径的关键酶,主要分布在线粒体中。作为一种促肿瘤基因,AGMAT在多种肿瘤组织中异常表达,通过调节底物胍基丁胺的水平,影... 详细信息

目的:结直肠癌(Colorectal carcinoma,CRC)是人类最常见的消化道恶性肿瘤之一。胍基丁胺酶(AGMAT)是多胺代谢旁路途径的关键酶,主要分布在线粒体中。作为一种促肿瘤基因,AGMAT在多种肿瘤组织中异常表达,通过调节底物胍基丁胺的水平,影响胍基丁胺在多胺生物合成作用。数据库分析表明AGMAT是mir-151a-5p的靶基因,然而mir-151a-5p靶向调控AGMAT在结直肠癌中的进展尚不清楚,亟待进一步的研究。方法:1、使用GEpIA数据库、Timer数据库和HpA数据库分析CRC患者的AGMAT表达水平。2、使用Starbase数据库和mirmap数据库分析CRC患者的mir-151a-5p和AGMAT之间的靶向结合关系。3、应用RT-q pCR和Western blot检测AGMAT在Caco2,HCT116,HT29,SW480,SW620,DLD1和Lovo等7种CRC细胞株中的表达。4、设计AGMAT敲低/过表达质粒,构建稳转株细胞,设计mir-151a-5p mimics/inhibitor si RNA,空载质粒细胞或si NC作为对照组。5、设计AGMAT报告基因质粒,利用双荧光素酶报告试验证明mir-151a-5p和AGMAT之间的靶向结合关系。6、探究AGMAT的生物学功能:敲低或过表达AGMAT,进行体外细胞生物学功能研究。7、探究AGMAT的作用机制:Western blot检测敲低或过表达AGMAT后,TGF-β/Smad信号中的Smad7、Smad4、p-Smad2/3和TGF-β1等与上皮-间充质转化(EMT)有关的MMp2、MMp9、ZO-1、E-cadherin、N-cadherin、Vimentin和β-Catenin的变化趋势。8、设计mir-151a-5p挽救实验,验证mir-151a-5p靶向调控AGMAT对CRC细胞的生物学功能影响。结果:1、Timer数据库分析表明AGMAT在多种肿瘤组织异常表达;GEpIA数据库和HpA数据库分析表明在CRC组织中的AGMAT表达水平显著升高。2、通过Starbase数据库和mirmap数据库发现CRC组织中mir-151a-5p和AGMAT的3’-UTR端有靶向结合关系,且二者之间呈正相关关系。3、RT-q pCR和Western blot发现在7种CRC细胞株中,AGMAT在SW480细胞中表达最高,在HCT116细胞中表达最低。4、双荧光素酶报告试验表明mir-151a-5p和AGMAT的3’-UTR端有靶向结合关系,且两者之间呈正相关关系5、体外功能实验表明AGMAT促进CRC细胞的增殖、迁移与侵袭。6、Western blot结果显示过表达AGMAT后,HCT116细胞中上皮标志物Ecadherin和ZO-1的表达水平下降,而间充质标志物Vimentin、β-Catenin和Ncadherin的表达水平升高,此外,基质金属蛋白酶MMp2和MMp9的表达水平亦升高。7、Western blot结果显示过表达AGMAT后,HCT116细胞中Smad7、Smad4、p-Smad2/3和TGF-β1的表达水平显著上升,而敲低后的结果与之相反。8、mir-151a-5p挽救实验表明mir-151a-5p靶向调控AGMAT促进CRC细胞的增殖、侵袭与转移结论:综上,AGMAT在结直肠癌组织及细胞中的表达均升高,mir-151a-5p和AGMAT有正性靶向结合关系。mir-151a-5p靶向AGMAT促进结直肠癌细胞的增殖、迁移与侵袭能力;此外,AGMAT通过TGF-β/Smad信号通路激活结直肠癌细胞的EMT。这些结果提示,mir-151a-5p/AGMAT轴可能作为早期诊断和治疗结直肠癌患者的潜在生物标志物靶点。图[15]表[27]参[87]

关键词：结直肠癌胍基丁胺酶 mir-151a-5p 上皮-间充质转化 TGF-β/Smad信号通路