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mir-148b-3p通过调控Wnt信号通路对胶质瘤细胞侵袭和迁移的影响

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中华肿瘤杂志 2020年第7期42卷 565-569页

作者：许辉沈杰谢兰军阜阳市人民医院神经内科 236000 首都医科大学附属宣武医院神经外科北京100053 阜阳市人民医院神经外科 236000

目的:探讨mir-148b-3p对胶质瘤细胞侵袭和迁移的影响及其作用机制。方法:体外培养人胶质瘤U251细胞株,采用Lipofectamine 2000转染试剂将mir-148b-3p模拟物或阴性对照转染至U251细胞,分别记为mir-148b-3p组和阴性对照组,同时设置空白对... 详细信息

目的:探讨mir-148b-3p对胶质瘤细胞侵袭和迁移的影响及其作用机制。方法:体外培养人胶质瘤U251细胞株,采用Lipofectamine 2000转染试剂将mir-148b-3p模拟物或阴性对照转染至U251细胞,分别记为mir-148b-3p组和阴性对照组,同时设置空白对照组。实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-pCR)检测转染效果,Transwell实验检测各组U251细胞的侵袭能力,划痕实验检测各组U251细胞的迁移能力,酶联免疫吸附试验检测细胞上清液中基质金属蛋白酶2(MMp-2)和MMp-9的水平,Western blot法检测细胞中Wnt信号通路相关蛋白的表达。结果:qRT-pCR显示,mir-148b-3p组U251细胞中mir-148b-3p的表达水平为2.45±0.25,高于阴性对照组(0.97±0.10)和空白对照组(1.00±0.11),差异均有统计学意义(均pmir-148b-3p组侵袭细胞数为(50.62±5.36)个,与阴性对照组[(108.84±10.14)个]和空白对照组[(113.40±10.06)个]比较,差异均有统计学意义(均pmir-148b-3p组细胞的迁移率为(23.19±2.50)%,与阴性对照组[(51.81±5.25)%]和空白对照组[(52.06±5.33)%]比较,差异均有统计学意义(均pmir-148b-3p能够抑制MMp-2和MMp-9的表达,下调Wnt1和GSK-3β蛋白的表达。结论:mir-148b-3p能够通过抑制Wnt信号通路的激活抑制人胶质瘤U251细胞的侵袭和迁移能力。

关键词： mir-148b-3p Wnt信号通路胶质瘤细胞侵袭迁移

mir-148b-3p调控瘢痕疙瘩来源的成纤维细胞增殖的机制研究

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安徽医科大学学报 2023年第9期58卷 1534-1539页

作者：李心怡李茜张伟李小静安徽医科大学第一附属医院整形外科合肥230022

目的分析mir-148b-3p对瘢痕疙瘩来源的成纤维细胞增殖的影响。方法通过Real-time pCR分析人瘢痕疙瘩来源成纤维细胞(HKF)和正常人成纤维细胞(NFs)中mir-148b-3p和SpARC的表达水平。通过Western blot检测细胞中富含半胱氨酸的酸性分泌蛋... 详细信息

目的分析mir-148b-3p对瘢痕疙瘩来源的成纤维细胞增殖的影响。方法通过Real-time pCR分析人瘢痕疙瘩来源成纤维细胞(HKF)和正常人成纤维细胞(NFs)中mir-148b-3p和SpARC的表达水平。通过Western blot检测细胞中富含半胱氨酸的酸性分泌蛋白(SpARC)蛋白表达水平。利用细胞计数试剂盒8(CCK-8)法和平板克隆形成分析mir-148b-3p和SpARC对HKF增殖的影响。使用在线分析软件预测mir-148b-3p的靶基因,随后构建荧光素酶报告基因质粒,通过荧光素酶报告基因法分析mir-148b-3p与靶基因的靶向结合位点。结果mir-148b-3p在HKF中低表达,SpARC在HKF中高表达。在HKF细胞中转染mir-148b-3p能够下调SpARC的表达,并抑制细胞增殖。在线分析软件预测mir-148b-3p能够靶向结合SpARC的3′-UTR;双荧光素酶报告基因的结果进一步证实mir-148b-3p能够靶向作用于SpARC的3′-UTR。在转染mir-148b-3p的HKF中再转染SpARC真核表达质粒,能够抵消mir-148b-3p的作用,恢复细胞增殖能力。结论mir-148b-3p通过靶向作用于SpARC的3′-UTR,抑制其表达,抑制HKF增殖。

关键词：病理性瘢痕 mir-148b-3p 富含半胱氨酸的酸性分泌蛋白增殖

猪mir-148b-3p靶基因AGO4的预测及验证

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吉林农业大学学报 2023年

作者：李一宋杰郝林琳李常红高源吉林大学动物科学学院白城师范学院生命科学学院长春生物制品所有限责任公司

microRNAs（mirNAs）是一种长度约为22 nt的非编码RNA，在许多重要的生物过程中发挥着关键作用，其中mir-499-5p、mir-199b等多种mirNAs已被证明在猪骨骼肌的生长发育中发挥重要作用。为分析与猪骨骼肌发育相关的mir-148b-3p的靶基因，... 详细信息

microRNAs（mirNAs）是一种长度约为22 nt的非编码RNA，在许多重要的生物过程中发挥着关键作用，其中mir-499-5p、mir-199b等多种mirNAs已被证明在猪骨骼肌的生长发育中发挥重要作用。为分析与猪骨骼肌发育相关的mir-148b-3p的靶基因，本研究利用在线工具mirDb、mirWalk、Targetscan、Starbase预测候选靶基因。通过qRT-pCR检测不同品种猪背最长肌和肌内脂肪中候选靶基因的表达情况进一步筛选靶基因，双荧光素酶报告基因实验验证靶向关系，qRT-pCR、Western blots检测猪骨骼肌卫星细胞中mir-148b-3p对靶基因表达的影响。结果表明：AGO4与mir-148b-3p呈靶向关系，在猪骨骼肌卫星细胞中mir-148b-3p的过表达抑制了AGO4的mRNA和蛋白质表达水平。综上所述， mir-148b-3p在猪骨骼肌卫星细胞中靶向AGO4并抑制其表达，为进一步研究猪骨骼肌生长的调控机制奠定了基础。

关键词： mir-148b-3p 骨骼肌 AGO4 猪

七氟烷预处理介导mir-148b-3p对大鼠脑缺血再灌注损伤的影响

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中国老年学杂志 2022年第23期42卷 5797-5801页

作者：李前辉谢小娟郭浩翔张宜林河南科技大学第一附属医院麻醉科河南洛阳471023

目的探讨七氟烷(Sevo)预处理介导mir-148b-3p对大鼠脑缺血再灌注损伤的影响。方法将45只SpF级健康成年雄性SD大鼠随机分为5组:Sham组、MCAO组、mir-148b-3p antagomir组、Sevo组和antagomir+Sevo组,使用线栓法建立大脑中动脉闭塞(MCAO)... 详细信息

目的探讨七氟烷(Sevo)预处理介导mir-148b-3p对大鼠脑缺血再灌注损伤的影响。方法将45只SpF级健康成年雄性SD大鼠随机分为5组:Sham组、MCAO组、mir-148b-3p antagomir组、Sevo组和antagomir+Sevo组,使用线栓法建立大脑中动脉闭塞(MCAO)大鼠模型用作脑缺血再灌注(I/R)损伤的体内模型。分别通过real time RT-pCR、Western印迹检测mir-148b-3p和双特异性磷酸酶(DUSp)1在大鼠大脑皮层中的表达情况。Longa法评价大鼠神经功能损伤;Y迷宫实验检测新异臂进入次数;采用2,3,5-三苯基氯化四氮唑(TTC)染色法计算各组脑含水率;苏木素-伊红(HE)染色检测大脑皮层组织损伤。利用Western印迹检测大鼠皮层缺血区活化的胱天蛋白酶(cleaved caspase)-3和cleaved caspase-9的表达。荧光素酶报告实验用于证实mir-148b-3p和DUSp1之间的靶向关系。结果与Sham组比较,MCAO组大脑皮层区mir-148b-3p表达明显上调,DUSp1表达明显下调,犯错次数、神经功能评分,脑含水量和细胞凋亡率均明显升高,新异臂进入次数明显降低,cleaved caspase-3、-9表达水平明显升高。与MCAO组比较,mir-148b-3p antagomir组、Sevo组、antagomir+sevo组mir-148b-3p表达明显下调,DUSp1表达明显上调,犯错次数、神经功能评分、脑含水量和细胞凋亡率均明显降低,新异臂进入次数明显增加,cleaved caspase-3、-9表达水平明显降低。mir-148b-3p通过与皮质神经元中DUSp1的3′UTR结合而抑制DUSp1的表达,而Sevo介导的DUSp1表达增加被mir-148b-3p过表达所抵消。结论Sevo预处理可能通过抑制mir-148b-3p对大鼠脑I/R损伤产生保护作用。

关键词：七氟烷 mir-148b-3p 缺血再灌注损伤双特异性磷酸酶1

mir-148b-3p通过调节脂代谢基因对肝癌细胞恶性生物学行为的影响

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贵州医科大学学报 2023年第10期48卷 1129-1136,1144页

作者：王迪迪黄玉荣王建君左常茜何磊杨杰贵州医科大学附属医院消化内科贵州贵阳550025 贵州医科大学六盘水市人民医院消化内科贵州六盘水553000

目的探讨mir-148b-3p通过调节脂代谢基因对肝癌细胞增殖、转移及侵袭能力等恶性生物学行为的影响。方法通过癌症和肿瘤基因图谱(TCGA)数据库寻找mir-148b-3p、肝癌及脂代谢三者的交集基因,筛选mir-148b-3p治疗肝癌的潜在靶点基因;采用... 详细信息

目的探讨mir-148b-3p通过调节脂代谢基因对肝癌细胞增殖、转移及侵袭能力等恶性生物学行为的影响。方法通过癌症和肿瘤基因图谱(TCGA)数据库寻找mir-148b-3p、肝癌及脂代谢三者的交集基因,筛选mir-148b-3p治疗肝癌的潜在靶点基因;采用荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RT-pCR)检测mir-148b-3p在正常肝脏细胞LO2和肝癌细胞Huh7、Hep1中的表达水平,选取mir-148b-3p表达量最低的细胞Huh7作为研究对象;Huh7肝癌细胞分为对照组(转染mir-148b-3p NC)和实验组(转染mir-148b-3p mimics),CCK8实验和克隆形成实验、划痕实验、Transwell实验、以及油红O染色分别检测两组肝癌细胞的增值、迁移、侵袭能力及脂滴形成情况,采用RT-pCR和Western blot检测交集基因及脂肪生成指标基因FASN、ppAR-γ及SCD1的mRNA和蛋白表达水平。结果mir-148b-3p在Huh7细胞中mRNA相对表达量显著低于Hep1细胞(pppppppRKAG2、INSIG2的mRNA水平的表达量明显升高(pppppAR-γ、SCD1基因的mRNA水平明显降低(ppppRKAG2、INSIG2蛋白水平的表达量升高(pppppAR-γ、SCD1基因蛋白水平的表达量均明显降低(pmir-148b-3p可抑制肝癌细胞的增殖、转移和侵袭能力,其机制可能与mir-148b-3p抑制了肝癌细胞的脂代谢有关。

关键词：肝癌脂代谢 mir-148b-3p 增殖迁移侵袭

靶向激活mir-148b-3p对缺血性脑卒中小鼠脑功能的影响及机制

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成都医学院学报 2020年第4期15卷 432-437页

作者：李明刘勇董海王彪阎登富刘磊何仲春成都医学院第一附属医院神经内科成都610500

目的观察激活mir-148b-3p对小鼠缺血性脑卒中的影响,探讨硫氧还蛋白互作蛋白(TXNIp)/核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRp3)轴在该影响中的作用。方法将50只健康雄性C57bL/6小鼠按照随机数字表法分为假手术组(Sham组)、栓塞模型组(M... 详细信息

目的观察激活mir-148b-3p对小鼠缺血性脑卒中的影响,探讨硫氧还蛋白互作蛋白(TXNIp)/核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRp3)轴在该影响中的作用。方法将50只健康雄性C57bL/6小鼠按照随机数字表法分为假手术组(Sham组)、栓塞模型组(MCAO组)、NLRp3抑制剂组(MCC950组)、mir阴性对照转染组(NC agomir组)、mir-148b-3p激动剂转染组(mir-148b-3p agomir组),每组10只。假手术组仅做手术损伤;其他各组小鼠采用线栓致大脑中动脉阻塞(MCAO)法建立小鼠缺血性脑卒中模型,使小鼠接受脑缺血1 h和再灌注72 h。MCC950组于手术后即刻腹腔注射50 mg/kg体重的NLRp3抑制剂MCC950。Sham组和MCAO组于手术后即刻腹腔注射同等容积的磷酸缓冲盐溶液(pbS)。NC agomir组、mir-148b-3p agomir组在手术前60 min通过侧脑室注射30 pmol/g体重的agomir阴性对照品或mir-148b-3p agomir。再灌注72 h后评估小鼠脑功能缺陷程度,氯化三苯基四氮唑染色法检测脑梗死灶体积百分数,RT-pCR法检测脑组织mir-148b-3p表达量,蛋白质印迹技术检测脑组织TXNIp、NLRp3蛋白表达量。另外,在小鼠神经瘤母细胞N2a细胞系上,采用双荧光素酶实验验证mir-148b-3p对TXNIp mRNA的靶向调节作用。结果与Sham组比较,MCAO组小鼠脑功能缺陷评分和脑梗死灶体积百分数均明显增大,缺血区脑组织mir-148b-3p表达量减少,TXNIp、NLRp3蛋白表达量增多;与mir转染阴性对照组比较,mir-148b-3p激动剂转染组小鼠脑功能缺陷评分和脑梗死灶体积百分数均明显降低,缺血区脑组织mir-148b-3p表达量增多,TXNIp、NLRp3蛋白表达量减少;与MCAO组比较,MCC950组小鼠脑功能缺陷评分和脑梗死灶体积百分数均明显降低。荧光素酶实验显示,TXNIp是mir-148b-3p的1个直接调节靶。结论内源性mir-148b-3p的表达下调可能与小鼠缺血性脑卒中发生相关;激活mir-148b-3p则对小鼠缺血性脑卒中有一定保护性作用,其机制与其抑制促炎性TXNIp/NLRp3信号轴有关。

关键词： mir-148b-3p 缺血性脑卒中硫氧还蛋白互作蛋白核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3

长链非编码核糖核酸LINC00261通过mir-148b-3p/pTEN途径对高糖环境中HK-2细胞的保护作用

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中华肾病研究电子杂志 2022年第1期11卷 22-28页

作者：贾丽芳张玉萍白文英周培一王甲正北京市大兴区人民医院肾内科 102600

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)LINC00261在糖尿病肾病中的表达,及其可能通过微小核糖核酸mir-148b-3p/pTEN途径对高糖环境中HK-2细胞的保护作用。方法选择2016年3月至2018年5月本院的19例糖尿病肾病患者和23例健康对照者,采集血样,通... 详细信息

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)LINC00261在糖尿病肾病中的表达,及其可能通过微小核糖核酸mir-148b-3p/pTEN途径对高糖环境中HK-2细胞的保护作用。方法选择2016年3月至2018年5月本院的19例糖尿病肾病患者和23例健康对照者,采集血样,通过实时定量pCR(qRT-pCR)测定LINC00261和mir-148b-3p的表达。在细胞实验中,将HK-2肾小管上皮细胞分为7组:正常葡萄糖组(5.5 mmol/L培养,NG组)、高葡萄糖糖组(30.0 mmol/L培养,HG组)、其余5组也均为高葡萄糖培养:空质粒转染pcDNA(HG+pcDNA组)、转染LINC00261(HG+pcDNA-LINC00261组)、转染阴性对照anti-mir-NC(HG+anti-mir-NC组)、转染抑制剂anti-mir-148b-3p(HG+anti-mir-148b-3p组)、LncRNA和mirNA同时转染(HG+pcDNA-LINC0026+mir-148b-3p组)。应用Western印迹、细胞计数试剂盒8和流式细胞术分别检测pTEN蛋白表达、细胞增殖与凋亡。测超氧化物歧化酶(SOD)试剂盒和丙二醛(MDA)试剂盒分别检测SOD活性和MDA含量。双荧光素酶报告实验用于LINC00261、mir-148b-3p、pTEN的相互关系鉴定。结果与健康对照者比较,糖尿病肾病患者的LINC00261表达明显降低,而mir-148b-3p表达则明显增高(pmir-148b-3p后,高糖环境中HK-2细胞的mir-148b-3p表达、细胞凋亡及MDA含量均下降,而pTEN蛋白表达、细胞增殖及SOD活性均增高(pmir-148b-3p/pTEN途径,促进高糖环境中HK-2肾小管上皮细胞增殖、降低氧化应激、减少细胞凋亡。

关键词：糖尿病肾病肾小管上皮细胞 LINC00261 mir-148b-3p pTEN 氧化应激

老年急性缺血性脑卒中患者血清mir-150-5p及mir-148b-3p的表达及其临床意义

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国际神经病学神经外科学杂志 2020年第2期47卷 116-120页

作者：郝玉青刘艳丽王芳芳王巧改张盼中国人民解放军联勤保障部队第九八〇医院检验科河北石家庄050000

目的探讨老年急性缺血性脑卒中(AIS)患者血清mir-150-5p及mir-148b-3p的表达水平及其临床意义。方法选取本院收治的178例老年AIS,按照美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)评分分为:轻度组(52例,NIHSS评分 20分)。另选择65例健康体检正常... 详细信息

目的探讨老年急性缺血性脑卒中(AIS)患者血清mir-150-5p及mir-148b-3p的表达水平及其临床意义。方法选取本院收治的178例老年AIS,按照美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)评分分为:轻度组(52例,NIHSS评分3例,5分≤NIHSS评分≤20分),重度组(43例,NIHSS评分> 20分)。另选择65例健康体检正常者作为对照组。采用实时荧光定量pCR检测各组血清mir-150-5p及mir-148b-3p表达水平。应用ROC曲线分析血清mir-150-5 p及mir-148 b-3 p表达水平对老年AIS诊断的价值。采用多因素logistic回归分析影响老年AIS的危险因素。结果 AIS组血清mir-125b-5p及mir-148b-3p水平明显低于对照组(p mir-125b-5p及mir-148 b-3 p水平均明显低于中度组和轻度组(p mir-150-5 p及mir-148 b-3 p表达水平诊断老年AIS的最佳临界值分别为2. 82、1. 46,两项联合诊断老年AIS的AUC (95%CI)为0. 927 (0. 868~0. 991),其敏感度和特异度为93. 0%和86. 5%。多因素logistic回归分析显示,mir-150-5 p (OR=3. 107,95%CI:2. 194~6. 715)及mir-148 b-3 p (OR=2. 602,95%CI:1. 713~4. 350)低表达是老年AIS发生的独立危险因素。结论血清mir-150-5 p及mir-148 b-3 p表达水平在老年AIS患者中明显降低,是老年AIS发生的独立危险因素,有望作为老年AIS诊断的生物学标志物。

关键词：急性缺血性脑卒中 mir-150-5p mir-148b-3p

mir-148 b-3 p/FOXO 4轴对乳腺癌细胞自噬及生长的影响

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临床与病理杂志 2023年第9期43卷 1621-1630页

作者：郭玲陈敬信咸阳市第一人民医院病理科陕西咸阳712000 陕西省森工医院病理科西安710300

目的:mir-148b-3p通过调节叉头框蛋白O4(forkhead box O4,FOXO4)在乳腺癌(breast cancer,bC)进展中的作用还未完全阐明。本研究探究mir-148b-3p调节FOXO4表达对bC细胞增殖、凋亡和自噬的影响。方法:采用实时反转录聚合酶链反应(real-tim... 详细信息

目的:mir-148b-3p通过调节叉头框蛋白O4(forkhead box O4,FOXO4)在乳腺癌(breast cancer,bC)进展中的作用还未完全阐明。本研究探究mir-148b-3p调节FOXO4表达对bC细胞增殖、凋亡和自噬的影响。方法:采用实时反转录聚合酶链反应(real-time reverse transcription polymerase chain reaction,real-time RT-pCR)检测bC患者的癌组织标本(bC组织)和邻近的非肿瘤组织标本(正常组织)、人正常乳腺上皮细胞MCF-10A和人bC细胞(MCF7、SKbR3、MDA-Mb-231细胞)中mir-148b-3p和FOXO4的表达情况。对MDA-Mb-231细胞进行转染并将其分为对照组(Ctrl组)、inhibitor-NC组、mir-148b-3p inhibitor组、si-NC组、si-FOXO4组、mir-148b-3p inhibitor+si-NC组、mir-148b-3p inhibitor+si-FOXO4组。采用细胞计数试剂盒8(cell counting kit 8,CCK-8)法检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡;透射电镜观察细胞自噬;蛋白质印迹法检测细胞FOXO4、增殖、凋亡和自噬相关蛋白表达;双荧光素酶报告基因检测(double luciferase reporter gene assay,DLR)和mirNA下拉实验验证mir-148b-3p与FOXO4的靶向作用关系。结果:与正常组织比较,bC组织中mir-148b-3p表达升高,FOXO4 mRNA表达降低(ppearson相关性分析结果显示bC患者癌组织中mir-148b-3p的表达水平与FOXO4 mRNA的水平呈负相关(r=−0.774,pbR3细胞和MDA-Mb-231细胞中mir-148b-3p表达均升高,FOXO4蛋白和mRNA表达均降低(均pb-231细胞中升高或降低更多。mir-148b-3p靶向负调控FOXO4的表达。敲减mir-148b-3p后MDA-Mb-231细胞活力、增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,pCNA)蛋白水平降低,凋亡率、自噬小体数量、FOXO4蛋白和mRNA水平、cleaved-caspase-3、cleaved-pARp-1、LC3-II/LC3-I、beclin-1蛋白水平均升高(均pmir-148b-3p对MDA-Mb-231细胞增殖、凋亡和自噬的影响。结论:mir-148b-3p可能通过靶向FOXO4促进MDA-Mb-231细胞增殖,抑制其凋亡和自噬。

关键词： mir-148b-3p 叉头框蛋白O4 乳腺癌增殖凋亡自噬

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