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鳖甲煎丸调控mir-140对肝癌干细胞致瘤性及干性的影响

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吉林中医药 2024年第1期44卷 90-95页

作者：谭钦文徐健朱荣火杜沅沁吴颖升彭嘉敏梁向娟农耀斌黄晶晶广西中医药大学研究生院南宁530200 广西中医药大学第一附属医院南宁530023 广西高发传染病中西医结合转化医学重点实验室南宁530023

目的探讨鳖甲煎丸对裸鼠皮下成瘤、肝癌干细胞(liver cancer stem cells,LCSCs)干性的抑制作用及其相关机制。方法选取12只BALB/c裸鼠,随机分为4组,即肝癌干细胞皮下成瘤+生理盐水灌胃组(A组)、肝癌干细胞皮下成瘤+鳖甲煎丸灌胃组(B组... 详细信息

目的探讨鳖甲煎丸对裸鼠皮下成瘤、肝癌干细胞(liver cancer stem cells,LCSCs)干性的抑制作用及其相关机制。方法选取12只BALB/c裸鼠,随机分为4组,即肝癌干细胞皮下成瘤+生理盐水灌胃组(A组)、肝癌干细胞皮下成瘤+鳖甲煎丸灌胃组(B组)、mir-140过表达慢病毒肝癌干细胞皮下成瘤+生理盐水灌胃(C组)、mir-140干扰慢病毒肝癌干细胞皮下成瘤+鳖甲煎丸灌胃(D组),将分选出肝癌干细胞种植于裸鼠皮下形成瘤体,记录瘤体体积大小,并进行多组间对比。苏木精-伊红(HE)染色观察瘤体组织的病理学变化。PCR和Western Bolt分别检测肝癌组织中CD133、CD24、EpCAM、AFP的mRNA表达、蛋白表达以及mir-140的基因表达。结果B组、C组瘤体体积均小于A组,D组瘤体体积大于B组;HE染色结果提示瘤体组织呈恶性后进行PCR与Western Bolt检测,结果提示B组、C组的CD133、CD24、EpCAM、AFP的mRNA以及蛋白表达相对含量均小于A组,D组以上检测指标小于B组;予鳖甲煎丸灌胃后,瘤体中mir-140的表达升高。结论鳖甲煎丸能抑制肝癌干细胞的致瘤能力以及降低肝癌组织中CD133、CD24、EpCAM、AFP,其作用机制可能与促进LCSCs中mir-140的表达有关。

关键词：鳖甲煎丸 mir-140 肝癌干细胞皮下成瘤

mir-140 downregulates fatty acid synthesis by targeting transforming growth factor alpha(TGFA)in bovine mammary epithelial cells

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Journal of Integrative Agriculture 2022年第10期21卷 3004-3016页

作者： CHU Shuang-feng ZHAO Tian-qi Abdelaziz Adam Idriss ARBAB YANG Yi CHEN Zhi YANG Zhang-ping College of Animal Science and Technology Yangzhou UniversityYangzhou 225009P.R.China Joint International Research Laboratory of Agriculture&Agri-Product Safety Yangzhou UniversityYangzhou 225009P.R.China Jiangsu Co-innovation Center for Prevention and Control of Important Animal Infectious Diseases and Zoonoses College of Veterinary MedicineYangzhou UniversityYangzhou 225009P.R.China

Fat is an indispensable nutrient and basic metabolite for sustaining life,and milk is particularly rich in fatty acids,including a variety of saturated and unsaturated fatty acids.MicroRNA(mirNA)and mRNA play an important role in the regulation of milk fat metabolism in mammary gland tissue.It has been shown that lipid metabolism has a complex transcriptional regulation,but the mechanism by which milk fat synthesis is regulated through mirNA–mRNA interactions is poorly understood.In this study,we performed transcriptome sequencing with bovine mammary gland tissue in the late lactation(270 and 315 days after parturition)to identify the key gene that regulating milk fat metabolism.A total of 1207 differentially coexpressed genes were selected,828 upregulated genes and 379 downregulated genes were identified.The transforming growth factor alpha(TGFA)gene was selected as the target gene,and luciferase reporter assay,Western blotting and q RT-PCR were used for further study.The results demonstrated that mir-140 was an upstream regulator of TGFA,and mir-140 could inhibit(P140/TGFA regulatory mechanism.Taken together,these results suggest that the mi R-140/TGFA pathway can inhibit(P<0.01)milk fat metabolism and improve milk quality by genetic means.

关键词： bovine mammary epithelial cells TGFA transcriptome sequencing mir-140 fatty acid metabolism

清热活血方对胶原诱导关节炎大鼠mir-140、TLR4、NF-κB的影响

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中国中医基础医学杂志 2023年第4期29卷 583-587页

作者：张富渊姜泉夏聪敏崔家康彭秋伟姚传辉徐浩东巩勋唐晓颇中国中医科学院广安门医院北京100053 河南省中医院郑州450053 南京中医药大学附属苏州市中医医院江苏苏州215007

目的探讨清热活血方对胶原诱导关节炎(collagen type Ⅱ-induced arthritis, CIA)大鼠mir-140/Toll样受体4(toll-like receptors 4,TLR4)/核因子κB(nuclear factor kappa-B,NF-κB)信号通路的影响。方法 6周龄SPF级大鼠24只,随机分为正常组、模型组、甲氨蝶呤组(0.2 mg/kg)、清热活血方组(34 g/kg),每组6只,通过对大鼠尾根部注射Ⅱ型胶原乳剂构建类风湿关节炎动物模型,连续给药6周。连续监测大鼠关节肿胀程度,Elisa法测血清肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素1β(interleukin 1β,IL-1β)、IL-6含量白细胞介素6(interleukin 6,IL-6),TRAP染色观察破骨细胞(osteoclast,OC)数量,Western blot法检测大鼠骨组织中TLR4、NF-κB的蛋白表达,实时荧光定量PCR检测大鼠骨组织中mir-140、TLR4、NF-κB的mRNA表达。结果与正常组比较,模型组大鼠造模开始后足趾容积逐渐增加,第21天起逐渐下降。模型组大鼠血清IL-1β、IL-6、TNF-α浓度上升,OC数量明显增多,TLR4、NF-κB的蛋白与mRNA表达增加,mir-140 mRNA表达下降;与模型组比较,甲氨蝶呤组和清热活血方组大鼠血清IL-1β、IL-6、TNF-α浓度下降,OC数量减少,TLR4、NF-κB的蛋白与mRNA表达下降,mir-140 mRNA表达增加;与甲氨蝶呤组比较,清热活血方组大鼠上述指标改善更明显,以上差异均有统计学意义(Pmir-140/TLR4/NF-κB信号通路,进而调控下游靶点分子,调节OC的成熟分化,从而达到延缓RA骨破坏的作用。

关键词：骨破坏 mir-140 TLR4 NF-κB 类风湿关节炎清热活血方

乳腺癌患者血清mir-137、mir-140水平与临床病理特征及化疗疗效的相关性

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中华内分泌外科杂志 2022年第4期16卷 492-496页

作者：张长壮李定安王兵王俊鲍官明黄鹤同济大学附属同济医院桐城分院/桐城市人民医院肿瘤科桐城231400 同济大学附属同济医院桐城分院/桐城市人民医院病理科桐城231400

目的探讨乳腺癌患者血清mir-137、mir-140水平与临床病理特征及术后应用阿霉素+环磷酰胺+多西他赛(ACT)方案化疗后复发转移的关系。方法收集2017年1月至2019年4月于桐城市人民医院接受乳腺癌改良根治术或乳腺癌保乳根治术后行ACT方案化... 详细信息

目的探讨乳腺癌患者血清mir-137、mir-140水平与临床病理特征及术后应用阿霉素+环磷酰胺+多西他赛(ACT)方案化疗后复发转移的关系。方法收集2017年1月至2019年4月于桐城市人民医院接受乳腺癌改良根治术或乳腺癌保乳根治术后行ACT方案化疗的60例女性乳腺癌患者作为研究对象,并纳入同期本院的健康体检者60例为健康对照组。于术前及化疗结束后1周抽取所有患者的空腹外周静脉血2 ml,应用定量实时聚合酶联反应法测定血清中mir-137、mir-140的相对表达水平。收集患者临床病理资料,包括年龄、绝经状态、病理类型、TNM分期、雌激素受体(estrogen receptor,ER)状态、孕激素受体(progesterone receptor,PR)状态及人表皮生长因子受体-2(human epidermal growth factor receptor-2,HER2)状态。所有乳腺癌患者术后均进行随访3年,根据患者病历和随访结果记录术后复发、远处转移及死亡时间。结果乳腺癌患者血清mir-137及mir-140相对表达量均显著低于健康对照组(0.89±0.15)&(1.34±0.21)(t=4.99,Pmir-137水平与TNM分期、ER状态和HER2状态有关(t=2.56、2.06、2.24,P=0.003,0.007、0.004),mir-140水平与TNM分期和HER2状态有关(t=1.95、2.11,P=0.008、0.006)。化疗结束后,乳腺癌患者的血清mir-137及mir-140相对表达量为(1.05±0.16)及(0.97±0.18),相较于术前均显著升高(t=2.69、3.05,P=0.004、0.002)。共17例患者3年内出现复发或远处转移,患者3年无进展生存率为71.67%(43/60)。复发转移患者的mir-137及mir-140水平均显著低于未发生复发转移患者(0.74±0.14)&(0.94±0.13)及(0.73±0.10)&(0.87±0.13),差异有统计学意义(t=4.15,Pmir-137及mir-140表达水平预测乳腺癌患者复发转移的灵敏度和特异度分别为82.4%、79.1%和82.4%和69.8%。Kaplan-Meier生存曲线分析显示,低水平mir-137组患者的3年无进展生存率显著低于高水平mir-137组(P=0.025);低水平mir-140组与高水平mir-140组患者的3年无进展生存率比较差异无统计学意义(P=0.282)。结论血清mir-137、mir-140水平与临床病理特征及术后应用ACT方案化疗后疗效有关,血清mir-137高水平与患者预后不良有关。

关键词：乳腺癌 mir-137 mir-140 化疗无进展生存期

mir-140抑制卵巢癌细胞增殖促进卵巢癌细胞凋亡及靶向抑制CMTM6表达

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中国组织化学与细胞化学杂志 2022年第6期31卷 582-591页

作者：杨俊祝徳段智慧张子月巴中市中心医院巴中636000 西部战区总医院老年科四川610036

目的探讨mir-140能否通过调控趋化素样因子超家族6(CMTM6)表达对卵巢癌细胞增殖、凋亡及程序性死亡配体1(PD-L1)表达产生影响。方法将人源SKOV3卵巢癌细胞分为:对照组、inhibitor-NC组、mir-140 inhibitor组、mimic-NC组、mir-140 mi... 详细信息

目的探讨mir-140能否通过调控趋化素样因子超家族6(CMTM6)表达对卵巢癌细胞增殖、凋亡及程序性死亡配体1(PD-L1)表达产生影响。方法将人源SKOV3卵巢癌细胞分为:对照组、inhibitor-NC组、mir-140 inhibitor组、mimic-NC组、mir-140 mimic组、mir-140mimic+pcDNA3.0-CMTM6组。MTT法、EdU染色和流式细胞仪、TUNEL染色分别检测细胞增殖和凋亡的发生情况。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测CMTM6、PD-L1 mRNA表达水平。Western blot检测细胞CMTM6、PD-L1、增殖与凋亡相关蛋白表达水平。双荧光素酶报告基因实验验证CMTM6与mir-140的靶向关系。结果与对照组相比,下调mir-140表达可增加SKOV3细胞存活率和EdU阳性率,上调c-Myc、cyclin D1、Bcl-2、CMTM6、PD-L1表达水平,抑制细胞凋亡和Bax、Caspase-3表达水平,而mir-140过表达可抑制SKOV3细胞存活率和EdU阳性率,下调c-Myc、cyclin D1、Bcl-2、CMTM6、PD-L1表达水平,促进细胞凋亡和Bax、Caspase-3表达;CMTM6过表达可逆转mir-140过表达对SKOV3细胞增殖的抑制、对凋亡的促进和对PD-L1表达的抑制。双荧光素酶报告基因实验结果显示,CMTM6是mir-140的靶基因。结论 mir-140可能通过下调CMTM6表达抑制卵巢癌细胞的增殖、促进卵巢癌细胞凋亡。

关键词： mir-140 趋化素样因子超家族6 卵巢癌程序性死亡受体-配体1

mir-140心肌条件性敲除小鼠构建及其改善DOX心肌毒性损伤的初步验证

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miR-140心肌条件性敲除小鼠构建及其改善DOX心肌毒性损伤的初步验...

作者：王飒河北大学

学位级别：硕士

目的阿霉素(Doxorubicin,DOX)是一种广谱抗癌药物,广泛用于肿瘤的临床治疗,但长期应用DOX可能会导致心肌毒性,甚至引发严重的心脏疾病。已有研究发现微小RNA(micro RNA,mirNAs)参与并调节多种心脏疾病的病理生理过程。既往研究发现,DOX... 详细信息

目的阿霉素(Doxorubicin,DOX)是一种广谱抗癌药物,广泛用于肿瘤的临床治疗,但长期应用DOX可能会导致心肌毒性,甚至引发严重的心脏疾病。已有研究发现微小RNA(micro RNA,mirNAs)参与并调节多种心脏疾病的病理生理过程。既往研究发现,DOX在诱导心肌细胞损伤的同时上调mir-140的表达,为了进一步探究mir-140在DOX诱导心肌损伤中的作用,我们拟构建mir-140心脏条件性敲除小鼠。在此基础上,复制DOX诱导小鼠心肌损伤模型,观察心脏条件性敲除mir-140后心肌损伤的变化。通过研究,旨在获取mir-140心脏条件性敲除小鼠,并初步验证其抵抗DOX诱导的心肌损伤,从而为下一步深入探究mir-140如何介导DOX诱导的心肌损伤提供稳定的模型体系。方法1.构建mir-140心肌条件性敲除(Conditional knockout,CKO)小鼠和稳定繁殖体系:利用CRISPR/Cas9技术将loxp位点插入到mir-140基因的上、下游区,完成mir-140小鼠的构建。将mir-140小鼠与心肌条件性表达的Cre的小鼠杂交,通过琼脂糖凝胶电泳和q RT-PCR实验对其后代进行基因型的鉴定,并获得(mir-140;Myh6-Cre)实验可用性小鼠,即mir-140心肌条件性敲除小鼠。每三个月,选用CKO小鼠再与实验室野生型C57BL/6J小鼠进行繁殖,获得稳定繁殖体系,避免近交衰退。2.复制DOX诱导的慢性心肌毒性模型:实验分为四组,分别为野生对照组、DOX组、CKO对照组和CKO+DOX组,DOX组、CKO+DOX组连续三周给小鼠注射5mg/kg剂量的DOX,野生对照组、CKO对照组注射同等剂量的0.9%生理盐水,继续饲养三周,共造模六周。q RT-PCR实验检测四组小鼠心脏组织的mir-140 m RNA表达量;超声心动图检测评估小鼠心脏功能;H&E染色观察心肌组织的变化;天狼星红染色观察心肌组织纤维化。3.复制DOX诱导的急性心肌毒性模型:实验分为四组,分别为野生对照组、DOX组、CKO对照组、CKO+DOX组,DOX组、CKO+DOX组小鼠一次腹腔注射15mg/kg剂量的DOX,野生对照组、CKO对照组小鼠注射同等剂量的0.9%生理盐水,每日测量动物体重,观察动物一般情况,共造模7日。于注射DOX后第七日在麻醉状态下进行三导联心电图记录。结果1.前期通过CRISPR/Cas9技术进行小鼠mir-140基因心肌条件性敲除,获得mir-140小鼠。然后将mir-140小鼠与Myh6-Cre的小鼠杂交,得到F1代小鼠后自交,剪趾编号后提取DNA进行基因型鉴定;F1代小鼠自交得到F2代小鼠,待新生小鼠出生后剪趾进行基因型鉴定,通过琼脂糖凝胶电泳和q RT-PCR实验对其后代进行基因型的鉴定获得(mir-140;Myh6-Cre)实验可用性小鼠,即CKO小鼠。并筛选出flox杂合,Cre阳性鼠(简写为:mir-140;Cre)、flox杂合,Cre阴性鼠(简写为:mir-140;Cre)和flox纯合,Cre阴性鼠(简写为:mir-140;Cre),将筛选出的小鼠饲养至性成熟后建立自交繁殖体系,扩繁子代小鼠,要求小鼠基因型一方为(mir-140;Cre)基因与(mir-140;Cre)或(mir-140;Cre)的鼠杂交,在扩繁中只能有一方亲本表现Cre阳性,防止子代鼠出现Cre纯合致死。如此反复,可以稳定得到可用性的心肌条件性敲除mir-140的小鼠品系。2.用获得的CKO小鼠与野生型小鼠,复制DOX慢性心肌毒性模型。q RT-PCR实验分析在野生型小鼠的慢性心肌毒性模型中小鼠心脏mir-140表达水平升高(Pmir-140表达水平无变化(P>0.05)。选择DOX组与CKO+DOX组做小鼠超声心动图检测,造模前及造模后分别测量小鼠心脏超声,造模前腹腔注射的两组小鼠左心室功能参数比较,无统计学差异(P>0.05)。但是腹腔注射DOX后,CKO+DOX组小鼠与DOX组小鼠左心室功能比较发现,CKO+DOX组小鼠左心室射血分数明显高于DOX组(Pmir-140可以明显改善DOX引起的慢性心肌损伤。3.进一步复制DOX急性心肌毒性模型,结果显示:注射0.9%生理盐水后,CKO对照组与野生对照组的体重和三导联心电图结果比较均无明显的统计学差异(P>

关键词：心肌条件性敲除小鼠 mir-140 阿霉素心肌毒性

血浆mir-140表达水平与地西他滨治疗疗效的关系及其机制研究

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中国实验血液学杂志 2019年第5期27卷 1424-1430页

作者：石培民叶春美吴正东张志超泰兴市人民医院血液内科江苏泰兴225400 湘雅第三医院血液科湖南长沙410013

目的:探讨血浆mir-140表达水平与地西他滨化疗疗效的关系及其具体分子机制是否与对Toll样受体-4(TLR4)表达的调控有关。方法:急性髓系白血病(acute myeloid leukaemia,AML)病人47例,分别用地西他滨联合化疗方案治疗(22例)和用传统治疗... 详细信息

目的:探讨血浆mir-140表达水平与地西他滨化疗疗效的关系及其具体分子机制是否与对Toll样受体-4(TLR4)表达的调控有关。方法:急性髓系白血病(acute myeloid leukaemia,AML)病人47例,分别用地西他滨联合化疗方案治疗(22例)和用传统治疗方案治疗(25例),比较2组病人临床疗效,采用实时荧光定量PCR(real-time PCR)检测病人血浆mir-140的表达水平。以地西他滨、mir-140 mimic、mir-140 inhibitor处理体外培养的AML细胞株HL-60,应用real-time PCR及Western blot分别检测HL-60中mir-140、TLR4、NF-κB的mRNA及蛋白表达水平。结果:与传统治疗方案相比,地西他滨联合化疗组显示出较优的临床有效性(Pmir-140的水平均明显升高,且相对于标准化疗方案治疗组而言,地西他滨联合化疗组病人治疗后血浆mir-140水平升高得更为显著(Pmir-140的显著上调及TLR-4、NF-κB表达的下调,预先以200 nmol/L的niR-140 inhibitor处理HL-60可部分逆转地西他滨的这些作用(Pmir-140高表达可能与其化疗疗效相关,mir-140/TLR4/NF-κB通路可能部分介导了地西他滨的药理作用。

关键词：急性髓性白血病地西他滨 mir-140 TLR4 NF-κB

上调mir-140增强人CML细胞株KBM5R对伊马提尼的敏感性

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基础医学与临床 2022年第9期42卷 1344-1349页

作者：郑研李岚高秋英牛奔张维华陕西省人民医院血液内科陕西西安710068

目的探究mir-140对伊马替尼(IM)耐药慢性髓系白血病(CML)细胞株KBM5R的IM敏感性的影响及其机制。方法分别用RT-qPCR和Western blot检测CML细胞系KBM5和KBM5R细胞中mir-140和Bcl-2的表达水平。将mir-NC或mir-140 mimic转染入KBM5R细胞,然后用25~100 nmol/L的IM处理细胞24 h,CCK-8法检测细胞活力。用100 nmol/L的IM处理已转染mir-NC或mir-140 mimic的KBM5R细胞24 h,流式细胞测量术检测细胞凋亡,JC-1染色检测线粒体膜电位,Western blot检测cleaved caspase-3表达。用生物信息学与荧光酶活性分析法验证mir-140与Bcl-2之间的靶向关系。结果与KBM5细胞比较,KBM5R细胞中mir-140表达水平明显降低(Pmir-NC组比较,mir-140 mimic转染组的细胞活力明显降低(Pmir-140的靶标。结论mir-140可能通过抑制靶基因Bcl-2来增加KBM5R细胞对IM的敏感性。

关键词： mir-140 Bcl-2 KBM5细胞伊马替尼敏感性

肝硬化上消化道出血患者血清mir⁃210、mir⁃140水平与病情严重程度及预后的关系

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临床检验杂志 2023年第11期41卷 844-849页

作者：张萍叶晓敏王云唐雯娟西昌市人民医院检验科四川西昌615000 西昌市人民医院消化内科四川西昌615000

目的探讨肝硬化上消化道出血患者血清mir-210、mir-140水平与患者病情严重程度及预后的关系。方法选取2018年2月至2022年6月在西昌市人民医院就诊的203例肝硬化患者作为研究对象,依据是否伴随上消化道出血分为出血组96例,非出血组107例... 详细信息

目的探讨肝硬化上消化道出血患者血清mir-210、mir-140水平与患者病情严重程度及预后的关系。方法选取2018年2月至2022年6月在西昌市人民医院就诊的203例肝硬化患者作为研究对象,依据是否伴随上消化道出血分为出血组96例,非出血组107例,选择同期体检健康的100例健康志愿者作为健康人对照组。采用qRT-PCR对各组mir-210、mir-140的表达水平进行检测;Spearman相关性分析血清mir-210、mir-140与患者肝功能分级、出血严重程度及血液指标的相关性;多因素COX回归分析肝硬化上消化道出血患者预后的影响因素,采用Kaplan-Meier法分析肝硬化上消化道出血患者血清mir-210、mir-140水平与预后的关系。结果与健康人对照组相比,出血组与非出血组患者国际标准化比值(INR)、纤维蛋白原(Fib)、凝血酶时间(TT)、活化部分凝血酶时间(APTT)、凝血酶原时间(PT)及血清mir-210水平显著升高,清蛋白(Alb)及血清mir-140水平显著下降(Pmir-210水平显著上升,Alb及血清mir-140水平显著下降(Pmir-210、mir-140水平比较差异均有统计学意义(Pmir-210水平与肝功能分级及出血严重程度呈显著正相关,mir-140水平与肝功能分级及出血严重程度呈显著负相关(Pmir-210水平降低,血清mir-140水平升高(Pmir-210、mir-140是肝硬化上消化道出血患者预后的影响因素(Pmir-210高表达患者6个月内总生存率(73.21%,41/56)显著低于低表达患者(90.00%,36/40),差异有统计学意义(χ^(2)=4.516,P=0.034);mir-140高表达患者6个月内总生存率(92.11%,35/38)显著高于低表达患者(72.41%,42/58),差异亦有统计学意义(χ^(2)=5.984,P=0.014)。结论肝硬化上消化道出血患者血清mir-210、mir-140水平与病情严重程度密切相关,检测血清mir-210、mir-140水平有助于评估患者的预后。

关键词：肝硬化上消化道出血 mir-210 mir-140 预后