检索结果-南通市图书馆

作者：邵天人河南农业大学

学位级别：硕士

隐孢子虫(Cryptosporidium spp.)是人类和其他脊椎动物中广泛存在的寄生原虫,作为一种致病性寄生虫,隐孢子虫感染能够引起严重的疾病,包括弥漫性感染和器官损伤。细胞凋亡作为多种病理过程中的关键因素之一,在隐孢子虫感染过程中发挥着... 详细信息

隐孢子虫(Cryptosporidium spp.)是人类和其他脊椎动物中广泛存在的寄生原虫,作为一种致病性寄生虫,隐孢子虫感染能够引起严重的疾病,包括弥漫性感染和器官损伤。细胞凋亡作为多种病理过程中的关键因素之一,在隐孢子虫感染过程中发挥着重要作用。近年来,微小RNA(micro RNA,mirNA)在调控细胞凋亡中的作用受到广泛关注,且宿主mirNA在抵御***感染的先天免疫中至关重要。先前的试验数据显示,***感染早期可引起HCT-8细胞中部分mirNA表达显著上调或下调,在***感染12h后mir-125b-5p的表达显著上调,生物信息学网站推测mir-125b-5p与促凋亡因子bak1 3’UTR存在结合位点。本研究使用实时定量聚合酶链反应(RT-qpCR)对***感染HCT-8细胞各个时间点mir-125b-5p的表达水平进行检测。结果显示,在***感染3、6、12和24 h后mir-125b-5p表达显著降低,在48、72 h表达显著升高;利用mir-125b-5p mimics和mir-125b-5p inhibition人工干扰HCT-8细胞中mir-125b-5p的表达,***感染12 h后通过流式细胞仪检测各分组中的细胞凋亡率,结果显示,mir-125b-5p过表达组与其对照组相比,细胞凋亡率显著降低,而抑制组的细胞凋亡率显著升高;在确保mir-125b-5p转染效率的前提下,qpCR检测***在各分组中的感染负荷,感染2 h(hpi)时,未检测到虫体负荷的变化,表明mir-125b-5p的表达不影响***的黏附和入侵;感染12 hpi和24 hpi时,均检测到mir-125b-5p mimics组较mir-125b-5p mimics NC组荷虫量显著升高,mir-125b-5p inhibition组较mir-125b-5p inhibition NC组荷虫量显著降低,该结果表明mir-125b-5p的表达可促进虫体在细胞内的感染负荷。为了确定mir-125b-5p通过何种机制调控***感染诱导的HCT-8细胞凋亡,生物信息学网站对mir-125b-5p的靶基因进行了预测,发现mir-125b-5p与细胞凋亡功能相关的bcl-2蛋白家族成员中的促凋亡分子bak1 3’UTR存在结合位点。为证实bak1基因中与mir-125b-5p的结合位点和功能,在荧光素酶pmir GLO-REpORT载体中下游亚克隆bak1 3’UTR全长,即p mir-bak1-3’UTR,同时生成突变质粒p mir-bak1-3’UTR MUT。在HCT-8细胞中共转染野生型/突变型质粒和mirNA模拟物,双荧光素酶基因报告试验结果显示mir-125b-5p模拟物可显著降低转染野生型质粒p mirbak1-3’UTR的细胞荧光素酶活性,而对转染突变质粒p mir-bak1-3’UTR MUT的细胞荧光素酶活性无影响。此外,在***感染的HCT-8细胞中转染mir-125b-5p模拟物,在m RNA和蛋白水平均可显著降低细胞中bak1的表达,而转染mir-125b-5p抑制剂可显著增加细胞中bak1的表达。总之,这些结果表明mir-125b-5p在转录后水平调节bak1的表达以调控***感染诱导的HCT-8细胞凋亡。使用***处理HCT-8细胞3、6、12、24和48 h,通过RT-qpCR检测到感染3、6、12和24 h时bak1在m RNA水平的表达显著降低,而在48 h其表达显著升高,表明***的感染可引起宿主细胞bak1的差异表达。为了验证bak1在***感染后调节HCT-8细胞凋亡和寄生虫负荷中的作用,我们用构建的bak1过表达载体上调HCT-8细胞中bak1的表达水平,同时设计了3个靶向bak1的si RNA,选择有效的si RNA并筛选出最合适的转染浓度(100 n M)用于下调bak1的表达。将HCT-8细胞暴露于恒定数量的***子孢子中2 h,转染si-bak1的细胞和转染pc DNA3.1-bak1的细胞分别与其对照组相比,均未检测到寄生虫负荷的变化,这些结果提示bak1不影响***的黏附和入侵。在初始感染24 h后,与阴性对照组相比,转染si-bak1的细胞中检测到凋亡率和寄生虫负荷均显著降低,而转染pc DNA3.1-bak1的细胞结果相反。因此,bak1似乎参与了***诱导的HCT-8细胞凋亡和寄生虫负荷的调节。为了确定***感染后HCT-8细胞中mir-125b-5p功能的抑制作用是否由bak1介导,我们在H

关键词： C.parvum mir-125b-5p bak1 细胞凋亡线粒体途径

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基于生物信息学分析肝硬化与mir-125a-5p和mir-125b-5p的相关研究

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生物医学 2024年第1期14卷 110-120页

作者：张一粟侯永慧付亚雯段小钰扈婷婷毕心然赵爽彦蔡宏懿甘肃中医药大学第一临床医学院甘肃兰州甘肃省人民医院放疗一科甘肃兰州

目的:基于生物信息学分析肝硬化与mir-125a-5p和mir-125b-5p的功能富集通路以及关键基因,以期为肝硬化诊断与治疗提供新思路。方法:通过mirDb、mirWalk和TargetScan数据库获得mir-125a-5p和mir-125b-5p的靶基因,从GEO数据库获得肝硬化... 详细信息

目的:基于生物信息学分析肝硬化与mir-125a-5p和mir-125b-5p的功能富集通路以及关键基因,以期为肝硬化诊断与治疗提供新思路。方法:通过mirDb、mirWalk和TargetScan数据库获得mir-125a-5p和mir-125b-5p的靶基因,从GEO数据库获得肝硬化相关数据集GSE14323和GSE25097,筛选正常组织样本和肝硬化组织样本差异表达基因,将GSE25097和GSE14323所得差异表达基因取交集,获得肝硬化数据集的共表达基因,将mir-125a-5p和mir-125b-5p的靶基因与肝硬化数据集GSE14323和GSE25097的共表达基因取交集得到核心基因,对核心基因进行GO和KEGG富集以及构建ppI网络互作图。结果:GO富集分析中主要在糖氧代谢过程和线粒体外膜的活性中富集,KEGG富集分析中主要在脂肪酸生物合成和类固醇生物代谢等中富集,通过构建ppI网络互作图,得到mir-125a-5p和mir-125b-5p与肝硬化相关的4个关键基因NpL、H6pD、KIAA0319L和RFX5。结论:得到的相关通路以及4个关键基因NpL、H6pD、KIAA0319L和RFX5以期为肝硬化发病机制以及肝硬化发生发展过程中相关分子靶点和早期筛查的手段提供新思路,从而指导疾病诊疗计划和管理。

关键词：生物信息学 mir-125a-5p mir-125b-5p 肝硬化

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维持性血液透析患者外周血mir-125b-5p与冠状动脉钙化相关性研究

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中国分子心脏病学杂志 2024年第1期24卷 5844-5852页

作者：董莉萍刘松徐琦杜兴国李承旭李华董骏武田明武汉市第四医院肾病内科武汉430033 武汉市第四医院临床营养科武汉430033 武汉市第四医院影像科武汉430033 武汉市第四医院超声科武汉430033

目的分析外周血mir-125b-5p水平与尿毒症患者冠状动脉钙化严重程度的相关性,并对机制进行探讨。方法选取2021年1月至2023年5月于武汉市第四医院古田院区接受维持性血液透析的患者为研究对象。所有入选者均接受胸部心脏CT检查,并检测... 详细信息

目的分析外周血mir-125b-5p水平与尿毒症患者冠状动脉钙化严重程度的相关性,并对机制进行探讨。方法选取2021年1月至2023年5月于武汉市第四医院古田院区接受维持性血液透析的患者为研究对象。所有入选者均接受胸部心脏CT检查,并检测外周血mir-125b-5p水平。在小鼠胸主动脉平滑肌细胞中,探索高磷及mir-125b-5p表达对细胞钙化沉积和炎症蛋白表达的影响。结果共有117例患者纳入研究,男性69例(59%),女性48例(41%),平均年龄62岁。依据冠状动脉钙化积分将纳入患者分组:轻度冠状动脉钙化(积分mir-125b-5p水平(OR=0.325,95%CI:0.205~0.517,pmir-125b-5p对严重冠状动脉钙化的预测价值,曲线下面积为0.831(95%CI:0.750~0.894,pb p65蛋白同时上调(pmir-125b-5p可显著减少高磷诱导的钙化沉积及减轻炎症蛋白TLR4及NF-κb p65蛋白表达的上调(pmir-125b-5p的相对表达水平与维持性血液透析患者冠状动脉钙化严重程度呈显著负相关,其机制可能是通过减轻炎性反应而减轻血管钙化。

关键词：尿毒症血液透析冠状动脉钙化 mir-125b-5p

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AbCC4和mir-125b-5p在前列腺癌组织中的表达及意义

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国际外科学杂志 2024年第6期51卷 382-387,I0009页

作者：高建张媛李蕾秦皇岛市中医医院泌尿外科秦皇岛066000

目的检测AbC转运蛋白家族4(AbCC4)、mir-125b-5p在前列腺癌组织中的表达情况,并分析两者与前列腺癌预后的关系。方法选取2019年5月—2021年5月秦皇岛市中医医院收治的经病理组织学诊断确诊的前列腺癌患者60例,前列腺癌新鲜组织标本均在... 详细信息

目的检测AbC转运蛋白家族4(AbCC4)、mir-125b-5p在前列腺癌组织中的表达情况,并分析两者与前列腺癌预后的关系。方法选取2019年5月—2021年5月秦皇岛市中医医院收治的经病理组织学诊断确诊的前列腺癌患者60例,前列腺癌新鲜组织标本均在前列腺癌手术中切取,分为前列腺癌组(癌组织)和对照组(癌旁组织)。采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qpCR)检测前列腺癌组织和癌旁组织中AbCC4 mRNA、mir-125b-5p的表达水平,采用免疫组化法检测组织石蜡切片中AbCC4的表达情况,分析AbCC4、mir-125b-5p表达水平与临床病理特征、前列腺癌患者预后的关系及前列腺癌预后不良的影响因素。计量资料以均数±标准差(x±s)表示,组间比较采用t检验;计数资料组间比较采用χ^(2)检验。采用pearson法分析前列腺癌组织中AbCC4 mRNA和mir-125b-5p水平的相关性;采用Kaplan-Meier法分析AbCC4、mir-125b-5p表达水平与预后的关系,生存率比较采用Log-rank检验;采用单因素和多因素COX回归分析评价前列腺癌预后不良的影响因素。结果RT-qpCR检测结果显示,前列腺癌组AbCC4 mRNA表达水平高于对照组(p5),mir-125b-5p表达水平低于对照组(p5)。免疫组化法检测结果显示,前列腺癌组织中AbCC4阳性率高于癌旁组织(p5)。pearson相关性分析结果显示,AbCC4 mRNA表达水平与mir-125b-5p呈负相关(r=-0.687,p5)。前列腺癌患者中AbCC4、mir-125b-5p表达水平与肿瘤分期、血清前列腺特异性抗原、Gleason评分、肿瘤转移有关(p5)。Kaplan-Meier法分析结果显示,AbCC4阳性患者3年累积生存率低于阴性患者(p5),mir-125b-5p高表达患者3年累积生存率高于低表达患者(p5)。多因素COX回归分析结果显示,mir-125b-5p水平偏低、AbCC4水平偏高是前列腺癌不良预后的危险因素(HR=2.685、3.461,p5)。结论AbCC4在前列腺癌患者癌组织中高表达,mir-125b-5p呈低表达,两者与前列腺癌的多种临床病理及预后有关,是前列腺癌患者预后不良的危险因素。

关键词：前列腺肿瘤癌微RNAs AbC转运蛋白家族4 mir-125b-5p

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mir-125b-5p通过负调控RAb3D基因表达抑制骨肉瘤细胞增殖与迁移

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南方医科大学学报 2023年第1期43卷 68-75页

作者：谈秋瑜吴旭纪方吴少云颜亮皖南医学院活性生物大分子安徽省重点实验室安徽芜湖241002 海军军医大学附属长海医院上海200433 芜湖医药卫生学校安徽芜湖241000

目的探讨mir-125b-5p调控RAb3D在骨肉瘤增殖与迁移中的作用机制。方法通过qRT-pCR检测正常骨细胞hFOb1.19、骨肉瘤细胞系(MG63、HOS)中mir-125b-5p的表达水平。骨肉瘤细胞系中通过脂质体转染升高或降低mir-125b-5p的表达,通过EDU和Tra... 详细信息

目的探讨mir-125b-5p调控RAb3D在骨肉瘤增殖与迁移中的作用机制。方法通过qRT-pCR检测正常骨细胞hFOb1.19、骨肉瘤细胞系(MG63、HOS)中mir-125b-5p的表达水平。骨肉瘤细胞系中通过脂质体转染升高或降低mir-125b-5p的表达,通过EDU和Transwell实验检测骨肉瘤细胞增殖和迁移的变化;通过生物信息学软件预测mir-125b-5p可能调控的靶基因为RAb3D;通过Western blot检测正常骨细胞h FOb1.19、骨肉瘤细胞系(MG63、HOS)中RAb3D的表达水平;骨肉瘤细胞系中通过脂质体转染升高或降低mir-125b-5p的表达,通过Western blot及qRT-pCR实验检测骨肉瘤细胞中RAb3D mRNA及蛋白表达水平;并在骨肉瘤细胞中通过脂质体转染升高或降低RAb3D的表达,通过EDU和Transwell实验检测骨肉瘤增殖和迁移的变化;随后在骨肉瘤细胞中通过脂质体转染同时升高mir-125b-5p和RAb3D的表达量,通过EDU和Transwell实验检测骨肉瘤细胞增殖和迁移的变化。结果 qRT-pCR结果表明在骨肉瘤细胞(MG63、HOS)中mir-125b-5p的表达明显下调(p5)。3种生物信息学软件预测RAb3D是mir-125b-5p可能调控的靶基因。qRT-pCR、Western blot结果显示,mir-125b-5p表达量升高,骨肉瘤细胞(MG63、HOS)中RAb3D的蛋白表达量下降(p5);mir-125b-5p表达量降低,骨肉瘤细胞(MG63、HOS)中RAb3D的蛋白表达量下降(p5),而RAb3D的mRNA水平没有发生变化。细胞增殖及迁移实验结果显示,mir-125b-5p与RAb3D对细胞增殖及迁移的影响相反,而同时在骨肉瘤细胞内升高mir-125b-5p与RAb3D的表达量,RAb3D对骨肉瘤细胞增殖及迁移的影响在重新升高mir-125b-5p表达量时被阻断(p5)。结论 mir-125b-5p在转录后水平通过调控RAb3D的表达抑制了骨肉瘤细胞的增殖和迁移。

关键词： mir-125b-5p RAb3D 骨肉瘤细胞细胞增殖细胞迁移

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mir-125b-5p抑制卵巢癌细胞的迁移和侵袭:基于靶向下调CD147的表达

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南方医科大学学报 2022年第9期42卷 1389-1396页

作者：黄珍沈浩明邓红玉孙丽莎屈斌湖南省人民医院血液科湖南长沙410005 湖南省肿瘤医院2检验科湖南长沙410009 湖南省肿瘤医院输血科湖南长沙410009

目的探讨mir-125b-5p靶向调控细胞外基质金属蛋白诱导因子(CD147)表达对卵巢癌细胞生物学行为的影响及作用机制。方法应用荧光实时定量pCR技术(RT-qpCR)检测卵巢癌组织和癌细胞株中mir-125b-5p和CD147 mRNA的表达;构建过表达mir-125b-5p... 详细信息

目的探讨mir-125b-5p靶向调控细胞外基质金属蛋白诱导因子(CD147)表达对卵巢癌细胞生物学行为的影响及作用机制。方法应用荧光实时定量pCR技术(RT-qpCR)检测卵巢癌组织和癌细胞株中mir-125b-5p和CD147 mRNA的表达;构建过表达mir-125b-5p的SKOV3细胞或低表达mir-125b-5p的HO8910细胞。CCK-8实验、克隆形成实验、Transwell实验检测过表达或低表达mir-125b-5p对卵巢癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力的影响;使用Starbase(http://***/)生信软件预测mir-125b-5p与CD147之间的潜在互补结合位点并使用双荧光素酶报告基因实验进行验证其靶向关系;体外培养SKOV3细胞,分别转染mimic NC、mir-125b-5p mimic、mir-125b-5p mimic和pcDNA3.1、mir-125b-5p mimic和pcDNA3.1-CD147,转染后分为mimic NC组、mir-125b-5p mimic组、mir-125b-5p mimic组+pcDNA3.1组、mir-125b-5p mimic+pcDNA3.1-CD147组,应用RT-qpCR和Westemblot实验检测各组中mir-125b-5p水平,CD147蛋白和mRNA水平;应用CCK-8实验、Transwell实验检测各组卵巢癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力。结果RT-qpCR技术证实mir-125b-5p在癌组织和卵巢癌细胞株中均低表达,而CD147在癌组织和卵巢癌细胞株中均高表达(pmir-125b-5p后的卵巢癌细胞增殖、迁移、侵袭的能力均被抑制(pbase生信软件预测及双荧光素酶报告基因实验证实mir-125b-5p和CD147存在一个靶向调控关系;在SKOV3细胞中转染过表达质粒和对照质粒,转染成功后,过表达mir-125b-5p组中mir-125b-5p的表达升高,而CD147的mRNA和蛋白表达明显下降(pmir-125b-5p后再转染pcDNA3.1-CD147,CD147的mRNA和蛋白表达明显升高(pmir-125b-5p后卵巢癌细胞的增殖、侵袭和迁移受到明显抑制,而过表达mir-125b-5p后再过表达CD147,卵巢癌细胞的增殖、侵袭和迁移的能力得到增强。结论mir-125b-5p通过负向调控CD147的表达,从而抑制卵巢癌细胞的迁移与侵袭。

关键词：卵巢癌 mir-125b-5p CD147 迁移侵袭

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mir-125b-5p靶向ΔNp63α对角质形成细胞分化的影响及其机制

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解放军医学杂志 2022年第2期47卷 128-135页

作者：丁毅李敏陈龙张美林冯树梅新疆医科大学基础医学院组织学与胚胎学教研室乌鲁木齐830011 新疆第二医学院基础医学院解剖组胚教研室乌鲁木齐830011 新疆医科大学基础医学院技能中心乌鲁木齐830011 新疆乌鲁木齐市中心血站乌鲁木齐830011

目的探讨mi R-125b-5p靶向ΔNp63α对角质形成细胞分化的影响及其机制。方法用1.8 mmol/L氯化钙诱导角质形成细胞Ha Ca T,于氯化钙处理0、1、5、7 d,采用q RT-pCR检测mi R-125b-5p、ΔNp63α、细胞角蛋白10(CK10)、外皮蛋白(Inv)、谷氨... 详细信息

目的探讨mi R-125b-5p靶向ΔNp63α对角质形成细胞分化的影响及其机制。方法用1.8 mmol/L氯化钙诱导角质形成细胞Ha Ca T,于氯化钙处理0、1、5、7 d,采用q RT-pCR检测mi R-125b-5p、ΔNp63α、细胞角蛋白10(CK10)、外皮蛋白(Inv)、谷氨酰胺转移酶1(TG1)、磷脂酰肌醇3-激酶(pI3K)、蛋白激酶b(Akt)和哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(m TOR)的m RNA表达水平。于氯化钙处理0、5 d采用细胞免疫荧光分析ΔNp63α的表达情况。利用bibiserv网站预测mi R-125b-5p与ΔNp63α的结合位点。用mi R-125b-5p模拟物/抑制剂和阴性对照模拟物/抑制剂转染Ha Ca T细胞,培养5 d后,采用q RT-pCR和Western blotting检测ΔNp63α、CK10、Inv、TG1、pI3K、Akt和m TOR的m RNA和蛋白相对表达水平。结果与氯化钙处理0 d时相比,处理1、5、7 d时mi R-125b-5p相对表达水平明显下降(0.17±0.02、0.08±0.01、0.07±0.02 vs.1.00±0.02,pp63α、CK10、Inv、TG1、pI3K、Akt和m TOR m RNA相对表达水平逐渐升高(p5)。细胞免疫荧光分析结果显示,与氯化钙处理0 d时相比,氯化钙处理5d时角质形成细胞中ΔNp63α阳性细胞率增高(96.9%±0.9%vs.43.2%±8.2%,pbibiserv网站预测结果显示,mir-125b-5p可与ΔNp63α的3?-UTR位点相结合。与阴性对照模拟物组相比,mi R-125b-5p模拟物组ΔNp63α、CK10、Inv、TG1、pI3K、Akt和m TOR m RNA相对表达水平明显降低,且ΔNp63α、CK10、Inv、TG1、pI3K、Akt、p-Akt、m TOR和p-m TOR蛋白表达水平也明显降低(p5),而抑制mi R-125b-5p的表达可逆转上述效应(p5)。结论 mir-125b-5p靶向ΔNp63α可通过下调pI3K/Akt/m TOR信号通路抑制角质形成细胞的分化。

关键词： mir-125b-5p ΔNp63α 细胞分化角质形成细胞

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mir-125b-5p对创伤性脑损伤诱发大鼠认知功能障碍的干预作用及其机制

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中国应用生理学杂志 2022年第5期38卷 424-430页

作者：王勇赵伟姜正林陈振华张欢南通大学第二附属医院神经外科江苏南通226001 南通大学特种医学研究院江苏南通226001

目的:研究mir-125b-5p对创伤性脑损伤(TbI)引起的大鼠认知功能障碍的影响及其分子机制。方法:将大鼠随机分为Control组、TbI组(模型组)、NC agomir组(假阴性组)、mir-125b-5p agomir组(高表达组),每组5只。假阴性组和高表达组分别脑室注... 详细信息

目的:研究mir-125b-5p对创伤性脑损伤(TbI)引起的大鼠认知功能障碍的影响及其分子机制。方法:将大鼠随机分为Control组、TbI组(模型组)、NC agomir组(假阴性组)、mir-125b-5p agomir组(高表达组),每组5只。假阴性组和高表达组分别脑室注射NC agomir和mir-125b-5p agomir,除Control组外各组均用改良Feeney法建立脑损伤模型。通过行为学实验对大鼠的运动协调、学习记忆、神经损伤程度等进行评估。通过ELISA和Western blot对各组大鼠海马组织中mir-125b-5p、炎性因子,以及神经相关因子的表达水平进行检测。最后使用生物信息学结合RT-pCR和Western blot对mir-125b-5p的下游靶基因进行预测和验证。结果:与对照组相比,模型组和假阴性组大鼠mir-125b-5p的表达水平显著下调、mNSS评分显著升高、运动协调能力及学习记忆能力显著下降、白介素(IL-1β、IL-6)及肿瘤坏死因子(TNF-α)表达水平显著升高、bDNF和NGF的表达水平显著下降、GFAp的表达水平显著升高(pmir-125b-5p的表达水平显著升高、mNSS评分显著降低、运动协调能力及学习记忆能力明显增高、IL-1β、IL-6及TNF-α表达水平显著下降、bDNF及NGF的表达水平升高、GFAp的表达水平显著下降(pp-15为mir-125b-5p的下游靶标基因,与对照组相比,模型组和假阴性组MMp-15表达显著升高(pp-15的表达显著降低(pmir-125b-5p可改善TbI引起的大鼠认知功能障碍,这可能与其调控MMp-15的表达水平,进而抑制TbI后神经炎症反应,促进神经元再生相关。

关键词：大鼠 mir-125b-5p MMp-15 认知功能障碍创伤性脑损伤炎症因子

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mir-125b-5p and mir-99a-5p downregulate human γδ T-cell activation and cytotoxicity

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Cellular & Molecular Immunology 2019年第2期16卷 112-125页

作者： Yuli Zhu Siya Zhang Zinan Li Huaishan Wang Zhen Li Yu Hu Hui Chen Xuan Zhang Lianxian Cui Jianmin Zhang Wei He Department of Immunology Research Center on Pediatric Development and DiseasesInstitute of Basic Medical SciencesChinese Academy of Medical Sciences and School of Basic MedicinePeking Union Medical CollegeState Key Laboratory of Medical Molecular BiologyBeijing 100005China Institute of blood transfusion Qingdao Blood CenterQingdao 266071China Department of Rheumatology&Clinical Immunology Peking Union Medical College HospitalChinese Academy of Medical Sciences and Peking Union Medical CollegeBeijing 100730China

As an important component of innate immunity,human circulatingγδT cells function in rapid responses to infections and ***(mirNAs)play a critical regulatory role in multiple biological processes and ***,how the functions of circulating humanγδT cells are regulated by mirNAs merits *** this study,we profiled the mirNA expression patterns in human peripheralγδT cells from 21 healthy donors and identified 14 mirNAs that were differentially expressed between peripheralαβT cells andγδT *** the 14 identified genes,7 mirNAs were downregulated,including mir-150-5p,mir-450a-5p,mir-193b-3p,mir-365a-3p,mir-31-5p,mir-125b-5p and mir-99a-5p,whereas the other 7 mirNAs were upregulated,including mir-34a-5p,mir-16-5p,mir-15b-5p,mir-24-3p,mir-22-3p,mir-22-5p and mir-9-5p,inγδT cells compared withαβT *** subsequent functional studies,we found that both mir-125b-5p and mir-99a-5p downregulatedγδT cell activation and cytotoxicity to tumor *** of mir-125b-5p or mir-99a-5p inγδT cells inhibitedγδT cell activation and promotedγδT cell ***,mir-125b-5p knockdown facilitated the cytotoxicity ofγδT cells toward tumor cells in vitro by increasing degranulation and secretion of IFN-γand TNF-α.Our findings improve the understanding of the regulatory functions of mirNAs inγδT cell activation and cytotoxicity,which has implications for interventional approaches toγδT cell-mediated cancer therapy.

关键词： γδT cells mir-125b-5p mir-99a-5p activation cytotoxicity

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mir-125b-5p与SMAD2在多发性骨髓瘤中的表达及临床意义

MiR-125b-5p与SMAD2在多发性骨髓瘤中的表达及临床意义

引用

作者：余玉和桂林医学院

学位级别：硕士

目的:分析mir-125b-5p与SMAD2在多发性骨髓瘤(MM,multiple myeloma)患者中的表达水平与临床数据,研究抑癌基因mir-125b-5p调控MM肿瘤细胞增殖和迁移的初步机制,并探讨SMAD2基因在MM患者中的临床意义。方法:GEO数据库GSE73048(MM 19例,... 详细信息

目的:分析mir-125b-5p与SMAD2在多发性骨髓瘤(MM,multiple myeloma)患者中的表达水平与临床数据,研究抑癌基因mir-125b-5p调控MM肿瘤细胞增殖和迁移的初步机制,并探讨SMAD2基因在MM患者中的临床意义。方法:GEO数据库GSE73048(MM 19例,对照组3例)数据集筛查MM中异常表达相关基因,检测mir-125b-5p的差异表达;通过pITA、mirmap和Target Scan 3个数据库筛查收集mir-125b-5p预测靶向基因,在线网站STRING获取蛋白质相互作用数据构建ppI网络,根据ppI拓扑参数高低筛选关键基因SMAD2,对mir-125b-5p与SMAD2基因进行GO和KEGG富集分析分析,在GSE17306数据集(MM 52例,对照组2例)初步验证mir-125b-5p与SMAD2基因靶向关系。从TCGA MMRF-COMMpASS数据库下载787例MM患者基因表达信息及临床信息,根据mir-125b-5p与SMAD2基因表达水平分组与临床指标进行相关性分析、K-M生存分析、单因素及多因素COX风险回归分析阐述临床意义。收集20例MM患者(实验组)及10例健康志愿者(对照组)的骨髓样本,传代培养腺病毒转染的mir-125b inhibitor、mir-125b NC、对照组等MM细胞,通过RT-q pCR在组织水平验证mir-125b-5p和SMAD2基因在MM表达水平,相关性分析两者之间关系、基因表达与临床指标相关性。结果:在GSE73048数据集,上调表达mirNAs基因20个,mir-125b-5p表达水平在MM中表达升高,具有统计学差异(FC>1.5,p5);pITA、mirmap和Target Scan 3个数据库交集存在293个mir-125b-5p的预测m RNA靶基因,从STRING数据库中获取互作靶基因(FDR p5),构建ppI网络,剔除既往已研究基因后根据ppI拓扑参数选择选关键基因SMAD2(Degree=20,第4顺位基因)。mir-125b-5p与SMAD2靶基因进行GO富集分析涉及通路参与基因基因沉默的mirNA磷酸酶结合、细胞通讯的负调节、细胞蛋白质修饰过程,KEGG富集分析通路分布在癌症中的微小RNA、m RNA监控途径、Th17细胞分化、胰腺癌、细胞衰老、内质网中的蛋白质加工上。在GSE17306数据集mir-125b-5p和SMAD2的表达水平呈负相关,具有统计学差异(p=0.007,r=-0.424)。TCGA MMRF-COMMpASS数据库787例患者中,mir-125b-5p高表达组(>0.825)生存的中位时间为48.535(95%CI:44.402-52.662)个月,比低表达组(≤0.825)55.827(95%CI:51.625-60.030)个月的中位时间短,两组的总体生存时间分布的差异不具有统计学意义(Log rank:x2=0.7753 p=0.53)。高表达SMAD2基因组(>3.025)的中位生存时间57.806(95%CI:57.806-60.787)个月比低表达SMAD2基因组(≤3.025)患者中位生存时间62.111(95%CI:59.490-64.731)个月缩短,具有统计学意义(Log rank:x2=4.273 p=0.039,breslow:x2=5.891 p=0.015)。Cox回归模型分析表明,SMAD2基因表达水平是影响MM的独立因素(p=0.040),高表达SMAD2基因患者的死亡风险高于低表达SMAD2基因患者(HR=1.538)。临床收集MM骨髓标本单个核细胞RT-q pCR检测mir-125b-5p表达水平显著升高(p51),SMAD2的表达水平则显著降低(p5531),mir-125b-5p和SMAD2的表达水平呈负相关(p=0.0373,r=0.2193),具有统计学差异(p5)。体外实验mir-125b-5p inhibitor细胞系中,mir-125b-5p低表达(p=0.002),SMAD2基因的表达(p=0.011),具有统计学差异。对临床收集数据与SMAD2基因表达水平分析发现SMAD2基因表达水平与患者性别、β2-微球蛋白水平及ISS分期显著相关(p5),而与贫血程度、血清白蛋白、血钙水平、乳酸脱氢酶、骨质破坏、FISH异常相关性无统计学差异(p≥0.05)。结论:在MM中,抑癌基因mir-125b-5p可能通过靶向结合SMAD2基因抑制瘤细胞增殖。SMAD2基因高表达与MM患者瘤负荷及预后相关。

关键词：多发性骨髓瘤 mir-125b-5p SMAD2 瘤负荷生存预后

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