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mir-122-5p通过CCAR1增强肠上皮细胞放射敏感性进而加重放射性直肠损伤的机制研究

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MiR-122-5p通过CCAR1增强肠上皮细胞放射敏感性进而加重放射性直...

作者：葛玉龙上海交通大学

学位级别：硕士

目的:放射性直肠损伤是盆腔恶性肿瘤患者接受放射治疗的主要副作用之一。目前,关于放射性直肠损伤发生的机制尚不完全清楚。因此,本课题主要探讨照射后microRNA-122-5p（mir-122-5p）表达变化对放射性直肠损伤的影响机制。方法:收集直... 详细信息

目的:放射性直肠损伤是盆腔恶性肿瘤患者接受放射治疗的主要副作用之一。目前,关于放射性直肠损伤发生的机制尚不完全清楚。因此,本课题主要探讨照射后microRNA-122-5p（mir-122-5p）表达变化对放射性直肠损伤的影响机制。方法:收集直肠癌患者在放疗前与放疗后的外周血,并通过qRT-pCR技术检测血清中mir-122-5p的表达变化;进一步在C57BL/6小鼠放射性直肠损伤模型中验证mir-122-5p与放射性直肠损伤之间的关系。体外细胞水平通过转染mir-122-5p mimic以提高HIEC（human intestinal epithelial cell）细胞内mir-122-5p表达,然后通过克隆形成实验、流式细胞检测、线粒体膜电位检测、免疫荧光染色以及Western blot等实验探讨其对细胞放射敏感性及细胞凋亡的影响。进一步通过生物信息学网站预测和双荧光素酶实验验证mir-122-5p的下游靶基因,然后通过转染siRNA抑制靶基因表达,并研究其对放射敏感性和细胞凋亡的影响。体内动物水平首先通过尾静脉注射mir-122-5p antagomir抑制小鼠直肠组织内mir-122-5p表达,进一步通过H＆E、TUNEL以及IHC染色等方法研究其对小鼠放射性直肠损伤的影响。结果:放疗后直肠癌患者血清中mir-122-5p表达水平显著升高。照射后小鼠直肠组织中的mir-122-5p表达水平也显著升高,并且与放射性直肠损伤程度成正相关。细胞实验表明,在照射情况下过表达mir-122-5p可显著增强HIEC细胞DNA损伤,降低克隆形成率,同时促进细胞凋亡。同时,研究结果表明CCAR1是mir-122-5p的下游靶基因,并且抑制CCAR1表达,在照射情况下HIEC细胞DNA损伤增强,克隆率显著降低,同时细胞凋亡增加。机制研究表明,在照射情况下过表达mir-122-5p或抑制CCAR1,p-CHK2的蛋白表达水平明显降低。动物实验表明,抑制小鼠直肠组织内的mir-122-5p表达后,放射导致的直肠损伤明显减轻,并且凋亡相关蛋白cl-caspase-3表达明显减少,而CCAR1和p-CHK2的表达明显升高。结论:照射可显著促进体内mir-122-5p表达。mir-122-5p可能通过调控CCAR1/CHK2信号通路增强HIEC细胞放射敏感性,进而加重放射诱导的直肠损伤。

关键词： mir-122-5p CCAR1 放射敏感性直肠损伤

胞外囊泡mir-122-5p功能及选择性运输机制研究

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胞外囊泡miR-122-5p功能及选择性运输机制研究

作者：秦芳武汉大学

学位级别：硕士

胞外囊泡(extracellular vesicles,EVs)是细胞分泌到胞外的具有膜结构的囊泡,其携带的多种具有生物活性的分子能传递给邻近和远端的细胞,从而激发受体细胞的多种信号级联反应,因而在细胞通讯中发挥重要的作用。越来越多的研究表明,胞外... 详细信息

胞外囊泡(extracellular vesicles,EVs)是细胞分泌到胞外的具有膜结构的囊泡,其携带的多种具有生物活性的分子能传递给邻近和远端的细胞,从而激发受体细胞的多种信号级联反应,因而在细胞通讯中发挥重要的作用。越来越多的研究表明,胞外囊泡微小RNA(microRNAs,mirNAs)在癌症中发挥着重要的作用,它们能被受体细胞摄取,从而对癌细胞的增殖、迁移、血管生成、代谢以及免疫等病理过程产生影响。目前,胞外囊泡mirNAs在肿瘤转移中的作用受到了广泛的关注。通过高通量测序手段,本课题组前期研究发现,非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)患者血浆来源的胞外囊泡microRNAs与正常样本在组成和表达量上具有显著差异。在此基础上,我们在细胞系水平对测序结果进行了验证。实验结果显示mir-451a和mir-122-5p选择性进入胞外囊泡,可作为NSCLC早期诊断的标志物。本工作中,我们对人肺癌细胞A549和人胚肺成纤维细胞IMR-90来源的胞外囊泡的功能进行了比较,发现A549胞外囊泡能够促进正常肝细胞L02的迁移。通过进一步实验证明A549胞外囊泡来源的、肝细胞特异性的mir-122-5p在其中发挥关键作用。于是我们的研究围绕着胞外囊泡mir-122-5p在肺癌发生发展中的功能及其选择性进入胞外囊泡的机制展开。通过检测与上皮间质转化(Epithelial–mesenchymal transition,EMT)相关的蛋白,我们发现胞外囊泡mir-122-5p可能通过促进EMT过程来促进L02的迁移,从而为肺癌向肝脏转移创造有利条件。通过下调与胞外囊泡mirNAs选择性运输相关蛋白的表达量,我们发现了hnRNpA2B1能促进mir-122-5p进入胞外囊泡。而这一促进作用可能是由于mir-122-5p上存在的EXOmotif和hnRNpA2B1识别基序发挥重要作用。综上所述,hnRNpA2B1蛋白在介导mir-122-5p选择性进入胞外囊泡中发挥重要作用,而在NSCLC胞外囊泡中异常高表达的mir-122-5p通过促进转移位点的正常细胞,如L02的迁移从而在肿瘤转移中扮演着重要的角色。本论文以NSCLC胞外囊泡来源的mir-122-5p为研究对象,对其在胞内的作用、借助胞外囊泡选择性运输到细胞外的机制以及在受体细胞中发挥的功能进行了较为详细的研究,为阐明胞外囊泡mirNAs的生物学功能提供了相关的实验证据,为NSCLC的早期诊断提供了新的靶标。

关键词：胞外囊泡非小细胞肺癌 mir-451a mir-122-5p 细胞迁移 hnRNpA2B1 选择性运输

mir-122-5p靶向调控CDK4在氟诱导的人成骨细胞增殖活化中的作用研究

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miR-122-5p靶向调控CDK4在氟诱导的人成骨细胞增殖活化中的作用研...

作者：李晨贵州医科大学

学位级别：硕士

目的:地方性氟中毒是人群在长期过量摄入氟而导致的慢性全身性疾病,是我国重点防治的地方病之一。过量摄入氟化物可造成骨转换障碍,从而导致氟骨症。成骨细胞的异常增殖和活化在氟骨症的骨转换障碍中起到关键作用。本研究在既往发现CDK... 详细信息

目的:地方性氟中毒是人群在长期过量摄入氟而导致的慢性全身性疾病,是我国重点防治的地方病之一。过量摄入氟化物可造成骨转换障碍,从而导致氟骨症。成骨细胞的异常增殖和活化在氟骨症的骨转换障碍中起到关键作用。本研究在既往发现CDK4高表达参与氟骨症成骨细胞增殖活化基础上,结合课题组前期高通量测序结果,采用生物信息学软件预测氟暴露人群中差异表达并靶向调控CDK4的mirNA,在人群和体外两个水平分析筛选出的mir-122-5p与CDK4表达、氟暴露、成骨细胞增殖活化之间的关联,探讨mir-122-5p靶向调控CDK4在氟诱导人成骨细胞增殖活化中的作用。这项研究旨在探讨mirNA在氟骨症发生发展中的作用,并为预防和治疗地方性氟中毒提供新的思路与方向。方法:1.依据地方性氟中毒病区划分标准(GB 17018-2011),选择贵州省燃煤污染型氟中毒病区织金县荷花村为调查点,非氟中毒地区安顺市双堡镇张官村作为对照点。依据病例及对照纳入标准,追踪既往调查对象共248人,并在知情同意原则下收集调查对象血样、尿样及发样。采用氟离子选择电极法测定尿氟(UF)及发氟(HF)含量,根据所测得的UF浓度,将调查对象分为3组:(1)UF5例;(3)UF>3.92 mg/g Cr组,66例。根据所测得的HF含量,将调查对象分为4组:(1)HFmirWalk3.0数据库的四种不同算法(mirwalk、mirDB、mirTar Base和Target Scan)预测靶向CDK4的mirNA。结合课题组前期的mirNA-seq结果,基于三个标准选择了候选的mirNA:mirNA测序结果中下调且差异表达的mirNA(p≤0.05 and|log2FC|≥1);候选mirNA至少是由两种算法中取交集得到;结合位点为3’UTR。采用微量酶标法和免疫吸附试验法(ELISA)法分别检测248例调查对象碱性磷酸酶(ALp)活力和骨钙素(BGp)含量。采用实时荧光定量pCR(q RT-pCR)检测mirNA表达;采用q RT-pCR检测CDK4m RNA表达;采用ELISA法检测CDK4蛋白表达。2.酶消法分离人原代成骨细胞,通过形态观察、碱性磷酸酶及茜素红染色鉴定人原代成骨细胞。以0、200、400、600、800、1000、1200、1400及1600μmol/L氟化钠(Na F)处理人成骨细胞24、48、72及96小时,CCK-8法检测染氟人成骨细胞代谢活力,根据CCK-8实验结果选择0、600、1200μmol/L Na F三个剂量组处理人成骨细胞72小时进行后续试验;流式细胞术检测细胞周期分布;微量酶标法检测ALp活性;ELISA法检测BGp含量;q RT-pCR检测mirNA的表达及CDK4 m RNA表达;采用免疫印迹法(Western-blotting)检测CDK4蛋白表达。3.双荧光素酶报告基因实验验证mir-122-5p与CDK4的靶向结合;mir-122-5p mimic和mimic NC转染人成骨细胞24小时后,使用1200μmol/L Na F处理人成骨细胞72小时,采用q RT-pCR检测mirNA表达及CDK4 m RNA表达;Western blotting检测CDK4蛋白表达;CCK-8法检测人成骨细胞细胞代谢活力;流式细胞术检测细胞周期分布;微量酶标法和ELISA法分别检测ALp活性和BGp含量。结果:1.基于课题组前期mirNA-seq结果和筛选标准,利用生物信息学软件在下调的mirNA中获得了靶向CDK4的mir-122-5p来进行后续实验。结果显示在燃煤型氟暴露人群中,分别与低UF组和低HF组比较,高UF组和高HF组ALp活力和BGp含量增加(p均5),提示在本研究氟暴露人群中观察到了氟诱导的成骨细胞活化;分别与低UF组和低HF组比较,高UF组和高HF组mir-122-5p表达降低(p5),CDK4 m RNA转录及蛋白表达增加(p均5)。同时,研究对象mir-122-5p与CDK4表达呈负相关(r=-0.379,p5;r=-0.630,p5),提示mir-122-5p可能参与了CDK4的上调。2.在氟化钠处理的人成骨细胞体外实验中,随着染氟剂量的增加,处于S期和G2/M期的原代人成骨细胞比例增加,G0/G1期的细胞比例减少,增殖指数(pI)、ALp活力及BGp含量逐渐升高(p均5),表明Na F促进成骨细胞周期由G1期进入S期,导致成骨细胞异常增殖和活化。随染氟剂量的增加,mir-122-5p

关键词：燃煤污染型氟中毒成骨细胞活化 mir-122-5p CDK4

mir-122-5p通过靶向Sprouty2在IL-22介导角质形成细胞增殖中的作用

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miR-122-5p通过靶向Sprouty2在IL-22介导角质形成细胞增殖中的作用

作者：江萌山东大学

学位级别：硕士

目的：本研究利用mirNA以及mRNA表达谱芯片技术检测IL-22介导的角质形成细胞中mirNAs及mRNAs的表达差异,从表观遗传学角度进一步探究IL-22在诱导角质形成细胞增殖中的分子机制。方法：(1)以人永生化角质形成细胞(HaCaT细胞株)作为研究对... 详细信息

目的：本研究利用mirNA以及mRNA表达谱芯片技术检测IL-22介导的角质形成细胞中mirNAs及mRNAs的表达差异,从表观遗传学角度进一步探究IL-22在诱导角质形成细胞增殖中的分子机制。方法：(1)以人永生化角质形成细胞(HaCaT细胞株)作为研究对象,实验组给予IL-22 (100 ng/ml)刺激24h,对照组不予刺激,分别进行2次独立实验。Trizol法提取细胞总RNA,采用Invitrogen公司microRNA芯片4.0技术及mRNA表达谱芯片2.0技术,筛选差异表达的mirNAs及]mRNAs分子;(2)采用实时荧光定量pCR (RT-qpCR)进行mirNA芯片结果验证,以U6作为内参照,所得数据以2--ct表示;RT-qpCR法检测6例寻常型银屑病患者皮损及6例正常对照者皮肤组织中该mirNA分子的表达情况;(3)两芯片结果中呈负相关的交集基因即为mirNA可能调控的下游靶基因,进一步通过生物信息学分析及查阅文献的方法寻找该mirNA的下游靶基因。将预测的靶基因采用RT-qpCR方法,在IL-22刺激24h后的HaCaT细胞中进行差异验证,以β-actin作为内参照;免疫组织化学染色法检测靶基因在6例寻常型银屑病患者皮损及正常对照者皮肤组织石蜡切片中的表达变化;(4)为验证该差异mirNA分子的生物学功能,在HaCaT细胞中,通过分别转染其模拟物、抑制物以及各自的对照组进行CCK8细胞增殖实验;(5)通过双荧光素酶报告基因实验以及Western Blot实验,进行靶基因的验证。结果：(1)mirNA及mRNA表达谱芯片结果显示：表达上调2倍及以上的mirNAs共15个,表达下调2倍及以上的mirNAs共5个,预测mirNA-122-5p的靶基因共7个;(2) RT-qpCR结果显示：与对照组相比,IL-22刺激HaCaT细胞24h后mir-122-5p表达显著上调(约3.50倍,p5),在6例寻常型银屑病患者皮损中mir-122-5p同样表达上调(约2.26倍,p5);(3)靶基因表达情况验证：结合生物信息学分析方法,我们确定Sprouty2 (Spry2)作为下游靶基因进行验证。RT-qpCR结果显示,与对照组相比,IL-22刺激HaCaT细胞24h后Spry2蛋白表达下调(约1.72倍,p5)。免疫组织化学染色结果显示,与对照组相比,6例寻常型银屑病患者皮损中Spry2蛋白表达降低(p5);(4)CCK-8细胞增殖实验结果：与对照组相比,转染niR-122-5p模拟物组,HaCaT细胞增殖能力明显增强(p5),而转染mir-122-5p抑制物组,细胞增殖能力则受到明显的抑制(p5)。(5)靶基因Spry2验证结果：分别将构建好的携带有Spry2基因3’UTR区野生型或突变型的报告基因载体,与mir-122-5p模拟物或对照物共同转染HaCaT细胞,结果显示,与对照组相比,转染Spry2野生型报告基因载体及mir-122-5p模拟物组,其荧光素酶活性显著降低(p5),而转染突变型报告基因载体与mir-122-5p模拟物组,其荧光素酶活性未见明显变化(p>0.05)。Western Blot结果显示,与对照组相比,转染mir-122-5p模拟物组,Spry2蛋白表达显著降低,而转染mir-122-5p抑制物组Spry2蛋白表达增加(p5),以上结果提示Spry2是mir-122-5p的直接靶基因。结论: mir-122-5p在IL-22刺激后的角质形成细胞中以及寻常型银屑病患者皮损中均表达上调;过表达mir-122-5p在HaCaT细胞中有促进细胞增殖的作用,而抑制mir-122-5p的表达,则HaCaT细胞的增殖能力明显减弱;Spry2是mir-122-5p调控的直接靶基因。

关键词：银屑病 IL-22 mir-122-5p Spry2

有氧运动通过增加循环mir-122-5p促进血管新生

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有氧运动通过增加循环miR-122-5p促进血管新生

作者：吴洁中国人民解放军空军军医大学

学位级别：硕士

运动裨益身体健康,其在心血管疾病的预防和治疗中的作用日益受到关注。运动对心血管的保护作用很大程度上有赖于改善器官的血液灌注和增加血管密度。而运动如何促进组织中的血管生成,其机制尚未完全阐明。外泌体是一种由细胞主动分泌的... 详细信息

运动裨益身体健康,其在心血管疾病的预防和治疗中的作用日益受到关注。运动对心血管的保护作用很大程度上有赖于改善器官的血液灌注和增加血管密度。而运动如何促进组织中的血管生成,其机制尚未完全阐明。外泌体是一种由细胞主动分泌的,广泛分布于各种体液之中的胞外囊泡,作为一种新的细胞间信号传递的形式,参与多种生命活动的调节。在前期的研究中,我们发现长期有氧运动大鼠循环外泌体的量并没有明显差异,但循环外泌体中多种mi RNA含量发生了显著改变,其中循环外泌体中上调的mi R-342-5p可以到达心肌,通过抗心肌凋亡促进生存发挥心肌保护作用。于是本研究拟探索运动来源外泌体中差异表达的mi RNA是否参与了运动引起的血管新生作用。实验目的1.筛选运动来源外泌体中对内皮细胞增殖有促进作用的mi RNA,验证其在运动促血管新生过程中的作用。2.进一步探索筛选出的mi RNA发挥促血管新生作用的机制。实验方法1.采用3天适应性训练联合9天跑台训练构建有氧运动小鼠模型。2.采用WB与免疫荧光的方法评价股四头肌血管密度,Quantity One软件计算条带灰度值,image J图像分析软件量化荧光密度。3.分离培养原代小鼠内皮细胞,通过体外细胞增殖实验筛选有促内皮细胞增殖作用的有氧运动来源外泌体中差异表达的mi RNA。并采用内皮细胞的划痕实验、成管实验、出芽实验评价内皮细胞血管新生能力。4.采用骨骼肌点注射Agomi R上调局部mi RNA的水平,通过尾静脉注射反义链Antagomi R干预运动对循环中该mi RNA的升高作用。5.采用在线数据库靶基因预测联合pCR验证手段,探索筛选出的mi RNA发挥促血管新生作用的可能靶分子。6.si RNA下调特定蛋白的表达水平验证mi RNA的作用机制。7.在体创伤愈合实验与基质胶埋置实验探索该mi RNA作为促血管新生药物的应用潜力。8.两组之间比较采用t检验,三组或三组以上采用单因素方差分析(One-Way ANOVA),Bonferroni校正分析任意两组间统计学差异。实验数据用“均数±标准误”(Mean±SEM)表示,p5认为存在统计学差异。实验结果1.首先,WB与免疫荧光结果显示,3天适应性训练联合9天中高强度跑台训练显著增加小鼠股四头肌血管密度,提高了骨骼肌促血管生成的细胞因子VEGF的表达。2.体外实验筛选了前期测序获得的运动来源外泌体中差异表达的15个mi RNA,筛选出mi R-122-5p可以显著促进内皮细胞增殖,WB结果显示mi R-122-5p可以增加内皮细胞血管内皮生长因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)的表达,内皮细胞迁移实验、成管实验和出芽实验证实mi R-122-5p提高内皮的血管新生能力。3.WB与免疫荧光结果显示,点注射Agomi R-122-5p的股四头肌组织与注射Agomi R-NC的对照组相比,VEGF以及血小板内皮细胞粘附分子-1(platelet endothelial cell adhesion molecule-1,pECAM-1/CD31)的蛋白水平都有所上升,横截面上单位面积下CD31的密度升高,提示骨骼肌点注射Agomi R-122-5p可以增加局部的血管密度。4.pCR结果显示与安静对照组相比,运动对照组小鼠循环中mi R-122-5p水平上升,尾静脉注射反义链Antagomi R-122-5p的运动组与安静组间,循环mi R-122-5p的水平无明显差异。骨骼肌组织的WB结果显示,与安静对照组相比,运动对照组骨骼肌的VEGF与CD31表达水平升高,而给予Antagomi R-122-5p的运动组与安静组相比,骨骼肌的VEGF与CD31表达水平无明显改变。免疫荧光结果显示股四头肌单位面积下CD31的荧光仅在运动对照组中有显著上调。以上结果提示运动发挥的促血管新生作用一定程度上依赖于循环中mi R-122-5p的升高。5.给予内皮细胞mi R-122-5p mimic转染处理,BODIpY游离脂肪酸探针检测结果显示mi R-122-5p mimic处理后内皮细胞BODIpY荧光强度增加,WB结果显示mi R-122-5p可以显著上调CD36和肉碱酯酰转移酶1a(Carnitine palmitoyltransferase 1a,CpT1a)的表达,提示mi R-122-5p增加内皮细胞对脂肪酸的摄取和利用。以棕榈酸钠作为脂肪酸供体培养内皮细胞,细胞实验结果显示升高的脂肪酸促进内皮细胞的增殖、迁移以及出芽能力。si RNA敲低CD36干预内皮细胞的脂肪酸代谢可以一定程度上减弱mi R-122-5p对内皮细胞增殖、迁移、成管和出芽能力的促进作用。以上结果显示脂肪酸可以促进内皮细胞的血管新生作用,而mi R-122-5p的促血管新生能力一定程度上依赖于其对内皮细胞脂肪酸代谢的调节。6.骨骼肌点注射动物

关键词：运动血管新生内皮细胞脂肪酸代谢 mir-122-5p

mir-122-5p靶向TRIM44抑制肝细胞癌增殖、侵袭和转移的研究

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miR-122-5p靶向TRIM44抑制肝细胞癌增殖、侵袭和转移的研究

作者：孙光阳扬州大学

学位级别：硕士

目的肝细胞癌（hepatocellularcarcinoma,HCC）是最常见的原发性肝脏恶性肿瘤,在世界癌症相关死亡中位居第三位。HCC早期临床表现不典型,多数患者确诊HCC时已处于疾病中、晚期。肝癌根治性切除是目前治疗HCC的主要手段之一,然而术后肿... 详细信息

目的肝细胞癌（hepatocellularcarcinoma,HCC）是最常见的原发性肝脏恶性肿瘤,在世界癌症相关死亡中位居第三位。HCC早期临床表现不典型,多数患者确诊HCC时已处于疾病中、晚期。肝癌根治性切除是目前治疗HCC的主要手段之一,然而术后肿瘤的复发、转移仍是HCC患者总体预后欠佳的重要原因。因此,寻找并探索HCC侵袭和转移的关键分子及其机制,将为改善HCC患者预后提供新思路。本文拟研究mir-122-5p对HCC增殖、侵袭和转移的影响,并初步探讨其分子机制。方法本研究结合我中心mirNA测序结果及TCGA数据库相关数据分析的结果,确定mir-122-5p为研究对象。通过qRT-pCR检测47例HCC患者肿瘤组织和癌旁组织中mir-122-5p的表达水平,并分析mir-122-5p表达水平与HCC患者临床病理特征、预后之间的关系。然后,上调HCC细胞中mir-122-5p的表达水平,评估mir-122-5p对HCC细胞增殖、迁移和侵袭的影响。再通过公开的mirNA靶基因预测网站,预测mir-122-5p作用的靶基因,荧光素酶报告实验验证选定的靶基因TRIM44与mir-122-5p是否可以直接相互作用。最后,通过细胞转染改变HCC细胞中mir-122-5p表达水平,检测TRIM44的mRNA水平和蛋白表达水平是否随之变化,并设计挽救实验评估TRIM44与mir-122-5p相互作用在HCC细胞增殖、迁移和侵袭中的影响。结果对TCGA数据库中420个样本的mirNA资料进行分析,结果表明mir-122-5p在HCC肿瘤组织中低表达,且其表达水平与HCC患者的OS和DFS均显著相关。结合我中心47对临床样本的qRT-pCR结果表明,mir-122-5p在HCC肿瘤组织中的表达水平显著低于配对的癌旁组织,且mir-122-5p的表达水平与肿瘤大小、AFp水平和淋巴结转移相关（p＜0.05）。细胞功能实验表明,上调mir-122-5p后,HCC细胞的增殖、迁移和侵袭能力均受到显著抑制。包括TRIM44在内,一共有142个基因被预测为mir-122-5p的靶基因,荧光素酶报告实验则证明了该预测的真实性。此外,在HCC细胞中过表达mir-122-5p,TRIM44mRNA水平和蛋白表达水平均表现出与mir-122-5p水平相反的变化趋势。随后成功用mir-122-5p mimics和TRIM44过表达质粒共转染HCC细胞,并通过挽救实验,证明了 mir-122-5p上调对HCC细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用可被表达水平恢复的TRIM44逆转。因此我们确定,mir-122-5p通过靶向TRIM44调控HCC的增殖、侵袭和转移。结论mir-122-5p在HCC中低表达,并与HCC患者的肿瘤大小、AFp水平、淋巴结转移及不良预后相关,上调mir-122-5p可显著抑制HCC细胞的增殖、迁移和侵袭能力。TRIM44是mir-122-5p的靶基因,受mir-122-5p调控,mir-122-5p上调可以通过靶向作用于TRIM44,抑制HCC细胞的增殖、迁移和侵袭。

关键词：肝细胞癌 mir-122-5p TRIM44 侵袭转移

mir-122-5p和mir-326-3p对pLD1的表达调控在镉中毒肾损伤中的作用及机制研究

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miR-122-5p和miR-326-3p对PLD1的表达调控在镉中毒肾损伤中的作用...

作者：苑文雅南方医科大学

学位级别：硕士

研究背景及目的镉（cadmium）,是一种常见的环境和职业有毒重金属,生物半衰期长达10-30年。镉可通过饮食和呼吸途径进入人体,对机体各个器官如肾,肝,肺,脑,睾丸及心脏等均可产生毒性作用。肾脏和肝脏可蓄积生物体中镉含量的50-60%,但随... 详细信息

研究背景及目的镉（cadmium）,是一种常见的环境和职业有毒重金属,生物半衰期长达10-30年。镉可通过饮食和呼吸途径进入人体,对机体各个器官如肾,肝,肺,脑,睾丸及心脏等均可产生毒性作用。肾脏和肝脏可蓄积生物体中镉含量的50-60%,但随着时间的推移,肝脏中的镉逐渐释放到循环系统,通过肾小球过滤,被肾近曲小管重吸收,最终蓄积在肾脏并引起肾损伤。微小RNA（mirNA）是大约22个核苷酸的小RNA分子家族。mirNA通过在转录后水平靶向下游基因而发挥关键的调节作用。据报道,超过30%的人类蛋白质编码基因被mirNA靶向调节。mirNA和靶基因的调节呈现出复杂的网络结构。mirNA合成后,部分被释放到细胞间质,以及血浆,血清,尿液,唾液和乳汁等体液中。由于mirNA在生物体液中是稳定的,易于获取,因此可以作为包括肾损伤在内的各种疾病的潜在生物标记物。本课题组前期研究表明,磷脂酶D1（pLD1）在慢性低浓度镉暴露大鼠肾组织中表达下调。pLD1催化磷脂酰胆碱的水解产生磷脂酸（pA）和胆碱。研究表明,pLD1及其代谢产物参与多条与细胞存活相关的信号通路如mTOR,p53,MApK等的调节。本研究通过过表达或抑制mirNAs观察其对pLD1的表达调控以及对细胞存活的影响。同时,我们从mirNAs角度研究镉暴露肾损伤标志物,并为进一步理解镉导致的肾损伤发生发展的机制提供新的角度与思路。研究方法1.CCK-8检测细胞增殖及活性。2.ICp-MS检测细胞内镉含量。3.qRT-pCR法检测基因表达。4.免疫荧光法检测蛋白表达。5.双萤光素酶报告基因检测mirNAs与靶基因的结合作用。6.流式细胞术检测细胞凋亡。7.使用SpSS 19软件进行统计分析。实验数据均用X±SD表示,两组独立样品间比较采用t检验。检验水准为α=0.05。研究结果1.pLD1与镉暴露肾近曲小管细胞损伤的关系镉中毒引起肾小管细胞中pLD1的mRNA和蛋白表达下调,从而促进细胞凋亡,提示pLD1和肾损伤间存在重要关系。2.mirNAs对pLD1的表达调控机制mir-122-5p和mir-326-3p在镉中毒肾小管细胞内表达上调,并通过下调pLD1表达,促进镉中毒肾小管细胞凋亡。3.镉中毒肾损伤早期生物标记物-mirNAs的初步探索与评价mir-122-5p、mir-326和mir-92b-3p在镉暴露细胞,大鼠血液,尿液,肾组织及人血液样品中稳定高表达,提示它们可以作为潜在的镉暴露肾损伤生物标志物。研究结论1.镉中毒诱导肾小管细胞mir-122-5p和mir-326-3p的表达上调,及pLD1的表达下调。2.mir-122-5p和mir-326-3p通过下调pLD1参与镉中毒肾小管细胞的损伤作用。3.镉中毒可诱导动物和人的多种生物样品中mir-122-5p、mir-326-3p、mir-92b-3p表达上调,这些mirNAs有望作为监测镉中毒肾损伤的早期生物标志物。

关键词：慢性镉暴露 pLD1 mir-122-5p mir-326-3p 肾损伤凋亡

LINC01551通过mir-122-5p/ADAM10信号轴促进肝癌发生发展的机制研究

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LINC01551通过miR-122-5p/ADAM10信号轴促进肝癌发生发展的机制研...

作者：高俊南昌大学

学位级别：硕士

目的:本研究的目的是确定基因间长链非编码RNA 01551(LINC01551)在HCC发生发展中的作用,并探索LINC01551/mir-122-5p/ADAM10信号轴在HCC中的具体作用机制。方法:通过生物信息学技术筛选出在HCC中差异表达的lncRNAs,并预测LINC01551、mir... 详细信息

目的:本研究的目的是确定基因间长链非编码RNA 01551(LINC01551)在HCC发生发展中的作用,并探索LINC01551/mir-122-5p/ADAM10信号轴在HCC中的具体作用机制。方法:通过生物信息学技术筛选出在HCC中差异表达的lncRNAs,并预测LINC01551、mir-122-5p和ADAM10之间的调控关系。通过免疫组化(immunohistochemistry,IHC)和实时荧光定量pCR(real-time fluorescence quantitative pCR,RT-qpCR)检测LINC01551、mir-122-5p和ADAM10在HCC组织和细胞中的表达。采用荧光原位杂交技术(fluorescence in situ hybridization,FISH)、荧光素酶报告基因实验、RNA pull-down实验、RNA结合蛋白免疫沉淀技术(RNA-binding protein immunoprecipitation,RIp)、RTqpCR等实验方法验证LINC01551、mir-122-5p和ADAM10之间的调控关系。EDU增殖实验、划痕实验、Transwell侵袭实验、流式细胞术、Western blot等实验方法验证LINC01551介导mir-122-5p/ADAM10信号轴对HCC细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡能力的影响。所有实验结果均采用统计学软件进行分析。结果:LINC01551和ADAM10在HCC组织和细胞中表达升高,而mir-122-5p表达降低。过表达mir-122-5p能够抑制ADAM10的表达。生物信息学分析和FISH实验证实,LINC01551主要表达于细胞质中。下调LINC01551能够抑制HCC细胞的增殖、迁移和侵袭能力而诱导凋亡。上调LINC01551能够增加其竞争性结合mir-122-5p的能力,通过mir-122-5p上调ADAM10的表达,从而促进HCC细胞的增殖、迁移和侵袭能力而诱导凋亡。结论:LINC01551通过mir-122-5p/ADAM10信号轴促进HCC的发生发展,有望为HCC的治疗提供了一个有前景的新靶点。

关键词： LINC01551 mir-122-5p ADAM10 肝细胞癌增殖侵袭迁移

mir-122-5p对滑膜肉瘤细胞株SW982增殖及放疗敏感性的影响

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巴楚医学 2021年第2期4卷 50-56页

作者：庞李贺杨华瑞周耀君鲍同柱骨外科湖北宜昌443003

目的:探讨mirNA-122-5p对人滑膜肉瘤细胞株SW982增殖及放疗敏感性的影响。方法:采用脂质体法分别转染mir-122-5p mimic和inhibitor至SW982细胞。流式细胞术检测细胞周期及凋亡率,MTT法检测细胞活力。通过γ-射线干预细胞,分析其对放疗... 详细信息

目的:探讨mirNA-122-5p对人滑膜肉瘤细胞株SW982增殖及放疗敏感性的影响。方法:采用脂质体法分别转染mir-122-5p mimic和inhibitor至SW982细胞。流式细胞术检测细胞周期及凋亡率,MTT法检测细胞活力。通过γ-射线干预细胞,分析其对放疗的敏感性。结果:与癌旁组织相比,滑膜肉瘤mir-122-5p明显低表达,而且在转移者及低分化型中水平最低,而甲基化CpG结合蛋白2(MeCp2)的表达与之呈显著负相关(均p5)。与对照组相比,mir-122-5p mimic可上调mir-122-5p水平,下调MeCp2蛋白表达,抑制SW982细胞增殖,并增加SW982细胞对射线的放疗敏感性(均p5);而过表达MeCp2却能阻断mir-122-5p的作用,增加细胞对放疗的抵抗(均p5)。结论:mir-122-5p在滑膜肉瘤中低表达,mir-122-5p/MeCp2轴参与调控肿瘤细胞增殖以及肿瘤细胞对γ-射线的放疗敏感性。

关键词：滑膜肉瘤 mir-122-5p 甲基化CpG结合蛋白2 放疗敏感性