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mir-1在心肌细胞生长中的调节作用

第二军医大学学报 2010年第11期31卷 1161-1164页

作者：许旭东宋晓伟秦永文第二军医大学长海医院心血管内科上海200433

目的构建并鉴定microRNA-1(mir-1)的腺病毒表达载体,并探讨其在心肌肥厚中的介导作用。方法 PCR扩增含大鼠mir-1前体的DNA片段,并将其克隆到腺病毒穿梭质粒pAdTrack。pAdTrack经PmeⅠ酶切线性化后与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1在BJ5183菌... 详细信息

目的构建并鉴定microRNA-1(mir-1)的腺病毒表达载体,并探讨其在心肌肥厚中的介导作用。方法 PCR扩增含大鼠mir-1前体的DNA片段,并将其克隆到腺病毒穿梭质粒pAdTrack。pAdTrack经PmeⅠ酶切线性化后与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1在BJ5183菌中进行同源重组。重组质粒pAd-precusor-mir-1线性化后,转染293A细胞,进行病毒包装,得到重组腺病毒颗粒Ad-mir-1。Ad-mir-1与Ad-GFP病毒转染培养的乳鼠心肌细胞,通过实时荧光定量PCR方法检测mir-1的表达效率,并分析心肌细胞表面积及肥厚标志物ANP(Nppa)、β-MHC(myh7)的基因表达变化。结果基因测序及酶切鉴定证实重组Ad-precursor-mir-1腺病毒载体构建成功,腺病毒Ad-mir-1转染心肌细胞后,实时荧光定量PCR方法证实腺病毒Ad-mir-1能够显著提高心肌细胞内mir-1的表达水平,减小心肌细胞表面积及Nppa、myh7的表达。结论利用同源重组方法构建的mir-1腺病毒能够提高心肌细胞内mir-1的表达,抑制心肌细胞生长。

关键词：心肌细胞腺病毒 microRNAs mir-1

mir-1和mir-206在不同饲养方式AA肉仔鸡肌肉组织中的表达分析

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基因组学与应用生物学 2022年第1期41卷 34-40页

作者：吴秋雪张伟伟常鑫张磊邵淑丽孙婴宁齐齐哈尔大学生命科学与农林学院齐齐哈尔161006 抗性基因工程与寒地生物多样性保护黑龙江省重点实验室齐齐哈尔161006

为研究mir-1和mir-206在不同饲养方式下AA肉仔鸡肌肉组织中的表达情况,本试验采用生物信息学方法比对了mir-1、mir-206在不同物种中的同源性,通过茎环结构实时定量RT-PCR法分析mir-1和mir-206在不同饲养方式下AA肉仔鸡的肌肉组织中的表... 详细信息

为研究mir-1和mir-206在不同饲养方式下AA肉仔鸡肌肉组织中的表达情况,本试验采用生物信息学方法比对了mir-1、mir-206在不同物种中的同源性,通过茎环结构实时定量RT-PCR法分析mir-1和mir-206在不同饲养方式下AA肉仔鸡的肌肉组织中的表达,从而初步探究其表达规律。结果表明,gga-mir-1和gga-mir-206成熟序列分别位于鸡基因组20号和3号染色体上;pre-gga-mir-1与eca、ptr、efu、tgu、ola同源性高达86%,pre-gga-mir-206与bta、cfa、hsa、mml、ptr、efu、xtr同源性高达88%;gga-mir-1和gga-mir-206在幼鸡腿肌中表达量高于笼养鸡和散养鸡,且笼养鸡中gga-mir-1和gga-mir-206表达量高于散养鸡,在散养鸡的翅肌和胸肌中表达量高于幼鸡和笼养鸡。表明不同饲养方式下mir-1和mir-206在不同组织表达不同,导致肉品质不同。本研究有助于了解不同饲养方式下mir-1和mir-206表达规律,养殖户可根据不同需求采取相应的饲养方式。

关键词： mir-1 mir-206 肌肉组织骨骼肌饲养方式

mir-1-5p修饰的脐带间充质干细胞对MRL/lpr狼疮小鼠的治疗作用研究

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中国免疫学杂志 2022年第13期38卷 1550-1556,1563页

作者：胡明智丁丽丽张晶莹庞春艳张伟王永福孙晓林(指导) 包头医学院第一附属医院风湿免疫科包头014010

目的:探讨mir-1-5p修饰的脐带间充质干细胞对MRL/lpr狼疮小鼠的治疗作用及可能的机制。方法:选取年龄和性别相匹配的系统性红斑狼疮(SLE)患者和健康体检者各26例,实时荧光定量PCR检测两组外周血单个核细胞中的mir-1-5p表达水平;15只MRL/... 详细信息

目的:探讨mir-1-5p修饰的脐带间充质干细胞对MRL/lpr狼疮小鼠的治疗作用及可能的机制。方法:选取年龄和性别相匹配的系统性红斑狼疮(SLE)患者和健康体检者各26例,实时荧光定量PCR检测两组外周血单个核细胞中的mir-1-5p表达水平;15只MRL/lpr狼疮小鼠随机分为5组,分别为MRL/lpr狼疮小鼠未处理组(Control组)、PBS治疗组(PBS组)、UC-MSCs治疗组(UC-MSCs组)、mirNA negative control转染UC-MSCs治疗组(UC-MSCs+mir-NC组)、mir-1-5p转染UC-MSCs治疗组(UC-MSCs+mir-1组)。治疗结束1周后处死小鼠,采用HE染色观察各组小鼠肾组织和肺组织的病理改变;ELISA检测各组小鼠血清抗炎因子IL-10的浓度;流式细胞术检测小鼠胸腺T淋巴细胞亚群的分化情况。结果:①与健康对照组相比,mir-1-5p在SLE患者中的表达显著下调(Pmir-1-5p修饰的UC-MSCs可以有效改善MRL/lpr小鼠狼疮性肾炎和间质性肺炎的病理变化;③mir-1-5p修饰的UC-MSCs可抑制MRL/lpr小鼠脾脏肿大;④与Control组相比,UC-MSCs+mir-1组血清IL-10表达水平显著升高(Pmir-1组小鼠胸腺Treg细胞比例显著升高,且差异有统计学意义(P17细胞比例及Th17/Treg,差异均无统计学意义(P>0.05);与Control组相比,UC-MSCs+mir-1组小鼠胸腺Th2细胞比例显著升高,且差异有统计学意义(P1细胞比例及Th1/Th2,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:mir-1-5p修饰的UC-MSCs可能通过促进MRL/lpr小鼠胸腺Treg细胞和Th2细胞分化以及IL-10的表达,减轻MRL/lpr小鼠肾组织和肺组织损害,起到治疗作用。

关键词：脐带间充质干细胞 mir-1 系统性红斑狼疮 T淋巴细胞免疫调节

mir-1改善异丙肾上腺素诱导的小鼠心力衰竭

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第三军医大学学报 2019年第14期41卷 1357-1364页

作者：何芮丁畅何丽石毓君苏立重庆医科大学附属第二医院心血管内科重庆400014 四川大学华西医院病理研究室成都610041

目的探讨mir-1对异丙肾上腺素(isoproterenol, ISO)诱导的小鼠心力衰竭的作用。方法 60 mg/kg ISO连续腹腔注射28 d建立C57BL/6小鼠心力衰竭模型,生理盐水连续腹腔注射28 d作为对照,第29天行超声心动图评估心力衰竭模型。模型建立后对mi... 详细信息

目的探讨mir-1对异丙肾上腺素(isoproterenol, ISO)诱导的小鼠心力衰竭的作用。方法 60 mg/kg ISO连续腹腔注射28 d建立C57BL/6小鼠心力衰竭模型,生理盐水连续腹腔注射28 d作为对照,第29天行超声心动图评估心力衰竭模型。模型建立后对mir-1治疗组、模型组和对照组分别予以agomir-1、agomir对照试剂和生理盐水尾静脉注射,2次/周,第7天再次行超声心动图检查,取小鼠心脏组织行HE染色、天狼星红染色、Masson三色染色、WGA及Ki67免疫荧光染色。酶联免疫法检测血清NT-proBNP水平。Western blot检测与免疫组化染色评估mir-1靶基因线粒体钙单向转运蛋白(mitochondrial calcium uniporter,MCU)的表达。结果 ISO连续腹腔注射28 d成功建立小鼠心力衰竭模型。超声心动图检测结果显示,mir-1治疗组小鼠心功能较模型组明显改善(Pmir-1治疗组小鼠心肌排列紊乱、心肌纤维化、心肌细胞肥大及细胞增殖等心室重构情况较模型组明显改善。mir-1治疗组血清NT-proBNP水平较模型组明显下降(Pmir-1治疗组小鼠MCU的表达较模型组明显减少(Pmir-1可能通过调节MCU的表达来改善ISO诱导的小鼠心力衰竭。

关键词： mir-1 异丙肾上腺素心力衰竭 NT-proBNP 线粒体钙单向转运蛋白

mir-1-5p修饰脐带间充质干细胞对系统性红斑狼疮T淋巴细胞亚群的免疫调节

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中国组织工程研究 2021年第31期25卷 4928-4938页

作者：胡明智张晶莹杨国安庞春艳张伟王永福孙晓林包头医学院第一附属医院风湿免疫科包头医学院风湿免疫研究所内蒙古自治区包头市014010 包头医学院第一附属医院重症医学科内蒙古自治区包头市014010 包头医学院第一附属医院自体免疫学重点实验室内蒙古自治区包头市014010

背景:近年来有很多关于基因修饰间充质干细胞治疗疾病的研究,包括自身免疫性疾病的治疗。已发现多种mirNA在自身免疫性疾病中异常表达,其中mir-1在多发性肌炎中呈低表达,mir-1-3p是与系统性红斑狼疮易感基因相关的mirNA之一。目的:研究m... 详细信息

背景:近年来有很多关于基因修饰间充质干细胞治疗疾病的研究,包括自身免疫性疾病的治疗。已发现多种mirNA在自身免疫性疾病中异常表达,其中mir-1在多发性肌炎中呈低表达,mir-1-3p是与系统性红斑狼疮易感基因相关的mirNA之一。目的:研究mir-1-5p修饰脐带间充质干细胞对系统性红斑狼疮T淋巴细胞亚群的免疫调节作用。方法:选取疾病活动期30-60岁系统性红斑狼疮女性患者和健康体检者各8例,实时荧光定量PCR检测两组外周血单个核细胞中的mir-1-5p表达水平;无菌条件下采集足月顺产或剖宫产新生儿脐带进行脐带间充质干细胞的分离培养,利用脂质体法,按浓度梯度为5,7,10,15 nmol/L的Red Fluorescent Control mirNA分别转染脐带间充质干细胞24,48,72 h,流式细胞术检测不同浓度梯度和时间梯度下mir-1-5p转染效率;密度梯度离心法分离系统性红斑狼疮患者外周血单个核细胞,与mir-1-5p转染的脐带间充质干细胞共培养,分为mir-1转染脐带间充质干细胞与外周血单个核细胞共培养组,mirNA阴性对照转染脐带间充质干细胞与外周血单个核细胞共培养组,未转染脐带间充质干细胞与外周血单个核细胞共培养组,外周血单个核细胞单独培养组。共培养48 h,实时荧光定量PCR检测各组外周血单个核细胞中IL-17A、Foxp3、IFN-γ、IL-4基因的相对表达量;流式细胞术检测各组外周血单个核细胞中Th17、Treg、Th1、Th2细胞的分化情况。结果与结论:①与健康对照组相比,mir-1-5p在系统性红斑狼疮患者外周血单个核细胞中的表达显著下调(Pmir-1-5p浓度为10 nmol/L、转染时间为48 h时,转染效率最高;③与外周血单个核细胞组相比,mir-1-5p转染脐带间充质干细胞与外周血单个核细胞共培养组Foxp3的表达增加,Treg细胞比例显著升高,差异有显著性意义(P0.05);与外周血单个核细胞组相比,mir-1-5p转染脐带间充质干细胞与外周血单个核细胞共培养组Th1/Th2比值在基因表达水平上是下降的,差异有显著性意义(P0.05);④结果显示,mir-1-5p修饰的脐带间充质干细胞对系统性红斑狼疮Treg细胞具有免疫调节作用,过表达mir-1-5p可以促进系统性红斑狼疮患者外周血单个核细胞中Treg细胞的分化和增殖。mir-1-5p通过上调Treg细胞表达调节Th17/Treg的免疫失衡,同时也调节Th1/Th2的免疫失衡。

关键词：干细胞脐带间充质干细胞 mir-1 系统性红斑狼疮 T淋巴细胞 Treg细胞 Th1 Th2 免疫调节

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mir-1对牛骨骼肌卫星细胞增殖的影响

畜牧与兽医 2016年第1期48卷 4-9页

作者：魏瑶佟慧丽张伟伟王亚辉严云勤东北农业大学生命科学学院细胞生物学室黑龙江哈尔滨150030

探讨mir-1对牛骨骼肌卫星细胞增殖的影响,为改善牛肉品质提供重要的理论基础。首先构建mir-1的过表达载体并进行牛骨骼肌卫星细胞的转染,然后采用Ed U法检测发现mir-1抑制牛骨骼肌卫星细胞的增殖。双荧光素酶报告表明PAX3为mir-1的靶基... 详细信息

探讨mir-1对牛骨骼肌卫星细胞增殖的影响,为改善牛肉品质提供重要的理论基础。首先构建mir-1的过表达载体并进行牛骨骼肌卫星细胞的转染,然后采用Ed U法检测发现mir-1抑制牛骨骼肌卫星细胞的增殖。双荧光素酶报告表明PAX3为mir-1的靶基因。最后检测出mir-1过表达后PAX3在mRNA和蛋白表达水平均下降。试验结果提示:mir-1能够通过抑制PAX3的表达而抑制牛骨骼肌卫星细胞的增殖。

关键词： mir-1 PAX3 牛骨骼肌卫星细胞

mir-1靶向调控VEGFA肺癌干细胞侵袭和转移的影响

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中国免疫学杂志 2020年第10期36卷 1240-1245页

作者：罗继文陈光明岑小波西南医科大学附属中医医院胸心外科泸州646000 绵阳市中心医院胸心外科绵阳621000

目的:研究mir-1在肺癌干细胞(CSCs)中的表达水平,并探讨mir-1靶向调控VEGFA对肺癌CSCs侵袭和转移的影响。方法:收集肺癌患者新鲜肿瘤组织,分离培养原代肺癌细胞,经无血清悬浮培养形成肿瘤细胞球,磁珠分选肿瘤细胞球中CD133阳性的细胞。W... 详细信息

目的:研究mir-1在肺癌干细胞(CSCs)中的表达水平,并探讨mir-1靶向调控VEGFA对肺癌CSCs侵袭和转移的影响。方法:收集肺癌患者新鲜肿瘤组织,分离培养原代肺癌细胞,经无血清悬浮培养形成肿瘤细胞球,磁珠分选肿瘤细胞球中CD133阳性的细胞。Western blot检测CD133阳性细胞中Nanog、SOX2、OCT4干性标志蛋白及mir-1在CSCs中的表达水平;经脂质体分别转染mir-1 mimic和对照48 h后,Boyden实验检测各组CSCs侵袭能力,Transwell实验检测各组CSCs转移能力。TranScan7.1预测软件及双荧光素酶报道基因试验检测mir-1对VEGFA基因的靶向作用,qRT-PCR检测mir-1 mimic对CSCs中VEGFA mRNA表达的影响。在转染mir-1 mimic的CSCs中转染vector和过表达VEGFA(oe-VEGFA)质粒,Boyden实验检测各组CSCs侵袭能力,Transwell实验检测各组CSCs转移能力。结果:Nanog、SOX2、OCT4干细胞标志蛋白在CSCs中表达增加;mir-1在CSCs中表达显著下降;转染mir-1 mimic后,CSCs侵袭和转移能力均下降(P1预测软件和双荧光素酶报道基因试验证实VEGFA为mir-1的靶基因,mir-1 mimic组VEGFA mRNA的表达减少(Pmir-1 mimic和vector组相比,转染mir-1 mimic和oe-VEGFA组的CSCs侵袭和转移均增加(Pmir-1在肺癌CSCs中低表达,通过负调控VEGFA抑制CSCs侵袭和转移。

关键词：肺癌肿瘤干细胞 mir-1 VEGFA 侵袭转移

mir-1 are involved in the Japanese flonder(paralichthys olivaceus)development by targeting the mRNA of HDAC4

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MiR-1 are involved in the Japanese flonder(paralichthys oliv...

不同品种猪肌肉组织mir-1和mir-133基因的表达分析

遗传学与表观遗传学前沿暨第三届中国青年遗传学家论坛

作者：张红梅 Shanghai Ocean University

MicroRNAs(mirNAs)refer to a category of small non-coding RNAs that down-regulate gene expression by binding to target mRNA for degradation or translational repression,and play important roles in differentiation,development,homeostasis,cell proliferation,apoptosis and *** studies on mir-l’s roles in the Japanese flonder(paralichthys olivaceus)development and its targets have been reported so *** bioinformatic analysis indicated that one of mir-l’s putative targets is HDAC4,a known gene related to transcriptional repressor of muscle gene *** some of genes have been predicted to be mirNA targets by bioinformatic analysis during Japanese flonder development,few of them have been verified by *** objective of our study is to identify the mirNAs targeting *** initially cloned the 3’UTR of HDAC4 and analysised the putative mirNAs in the 3’*** the predictive mirNAs,mir-l is the mirNAs predicted by the three used *** our study,the results of luciferase reporter assay,realtime-PCR demonstrated that mir-1 directly targeted on the 3’UTR of hdac4 and down-regulate the expression of HDAC4 at mRNA ***,TH stimulating assay showed that mir-1promote the metamorphosis of flounder by targeting HDAC4 in *** our research,we concluded that by targeting the HDAC4,mir-1 can be involved in the flounder development.

关键词： mir-1 Japanese flonder development HDAC4

来源： cnki会议评论

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畜牧兽医学报 2012年第6期43卷 843-848页

作者：习欠云周莲莲李虹仪韩东束刚王松波高萍朱晓彤王修启江青艳张永亮华南农业大学动物科学学院广州510642 吉林大学畜牧兽医学院长春130062

本研究旨在探讨猪mir-1和mir-133基因在不同品种猪肌肉组织中的表达情况。试验以180日龄的蓝塘猪、长白猪以及大花白猪的背最长肌为材料,采用Stem-loop实时定量RT-PCR法检测mir-1和mir-133在长白猪、大花白猪及蓝塘猪背最长肌组织中的... 详细信息

本研究旨在探讨猪mir-1和mir-133基因在不同品种猪肌肉组织中的表达情况。试验以180日龄的蓝塘猪、长白猪以及大花白猪的背最长肌为材料,采用Stem-loop实时定量RT-PCR法检测mir-1和mir-133在长白猪、大花白猪及蓝塘猪背最长肌组织中的表达情况。结果表明,在蓝塘猪中,mir-1的表达量分别为长白猪和大花白猪的4.7和6.4倍,前者与后两者之间表达水平有显著的差异(P0.05);同样,mir-133在蓝塘猪中的表达量最高,其次为长白猪,两者分别是大花白猪的7.2和5.7倍,且差异显著(P0.05)。mir-1和mir-133在不同品种猪中存在特异性表达,提示可能与肌肉发育性状相关。

关键词： stem-loop RT-PCR 肉质性状 mir-1 mir-133 表达分析