检索结果-南通市图书馆

检索条件"主题词=mTPOF473-A800"

共 1 条记录，以下是1-10 订阅

全选清除本页清除全部题录导出标记到"检索档案"

详细简洁

排序：

小鼠甲状腺过氧化物酶Phe473-Ala800多肽的表达与纯化

小鼠甲状腺过氧化物酶Phe473-Ala800多肽的表达与纯化

引用

作者：李仁宏河北医科大学

学位级别：硕士

自身免疫性甲状腺炎（autoimmune thyroditis）又称桥本氏甲状腺炎（Hashimoto’s thyroiditis, HT）是常见的器官特异性自身免疫病。甲状腺过氧化物酶（thyroid peroxidase, TPO）是甲状腺激素合成的关键催化酶,也是建立HT的小鼠模型... 详细信息

自身免疫性甲状腺炎（autoimmune thyroditis）又称桥本氏甲状腺炎（Hashimoto’s thyroiditis, HT）是常见的器官特异性自身免疫病。甲状腺过氧化物酶（thyroid peroxidase, TPO）是甲状腺激素合成的关键催化酶,也是建立HT的小鼠模型—实验性自身免疫性甲状腺炎（experimental autoimmune thyroiditis, EAT）的抗原。EAT模型是诱导动物甲状腺的炎症,模拟人的自身免疫性甲状腺炎,最常用的是小鼠模型,尤其是H-2k和H-2s单元型小鼠等有较重的甲状腺浸润,能更好的反应甲状腺炎的状况。甲状腺过氧化物酶（TPO）是一种糖基化血红素蛋白,跨于甲状腺细胞顶缘的细胞膜上,是甲状腺激素合成的关键酶,也是引起自身免疫性甲状腺炎的一个重要自身抗原,TPO表位的异常表达或TPO和TPO抗体（TPOAb）的免疫反应,常是引起HT患者甲状腺细胞损伤的重要机制。本实验旨在通过原核表达系统,表达和纯化小鼠甲状腺过氧化物酶Phe-Ala多肽(mouse thyroid peroxidase,mtpof)。目的:构建重组小鼠过氧化物酶多肽(mtpof)原核表达载体,在Rosseta菌中诱导表达,纯化mtpof蛋白。方法:1提取甲状腺组织RNA。取6只C57BL/6小鼠的甲状腺组织,约60mg,液氮冷冻,研钵研磨组织,提取总RNA。2扩增目的基因。RT-PCR法扩增mtpof基因3克隆载体的构建。mtpof基因与pEASY-T3克隆载体连接,将连接产物转化DH5a感受态细胞,加入含80ug/ml氨苄青霉素的LB培养基,37℃过夜培养,次日取1ul菌液做菌液PCR,初步筛选阳性菌株。将阳性菌液作质粒小提,质粒经EcoRI/XhoI双酶切鉴定,挑选阳性的重组克隆载体10ul送华大基因公司测序。4重组表达载体的构建。pEASY-T3-mtpof载体、pET28a、pET32a和pGEX-6p-1做EcoRI/XhoI双酶切,后胶回收所需要的片段,经DNA连接酶做连接反应,将连接产物转化DH5α感受态细胞,次日取1ul菌液做菌液PCR,初步筛选阳性菌株。将阳性菌液作质粒小提,质粒经EcoRI/XhoI双酶切鉴定,挑选阳性的重组表达载体转化*** Rosseta感受态细胞,做诱导表达,筛选表达量高的重组表达载体,后进行表达条件的优化。5 pGEX-6p-1- mTPO的表达和GST柱纯化。在最优化的条件诱导表达GST-mTPO融合蛋白,经GST柱纯化,得到mTPO蛋白。结果:1提取总RNA,RT-PCR PCR扩增目的基因(mTPO基因),后连接到pEASY-T3克隆载体,测序结果显示扩增的mTPO基因序列正确。2重组表达载体的构建与表达条件的优化。通过双酶切鉴定,mTPO基因成功连接3个表达载体。构建成功的重组表达载体转化*** Rosseta感受态细胞,经诱导表达,pGEX-6p-1- mTPO高效表达mTPO蛋白,且可溶性较高。最佳诱导条件是:30℃、1mM IPTG。3 pGEX-6p-1- mTPO大量表达和纯化。采用Western blotting鉴定蛋白表达产物,经GST柱纯化,SDS-PAGE电泳显示清晰的GST条带和mTPO条带。结论:构建pGEX-6p-1-mTPO原核表达载体,并在Rosseta菌诱导表达了GST- mTPO融合蛋白,GST柱纯化获得mTPO蛋白。

关键词：自身免疫性甲状腺炎 mtpof473-a800 原核表达 GST柱纯化 pGEX-6p-1

来源：

同方学位论文库评论

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

全选清除本页清除全部题录导出标记到“检索档案”

共1页 << < 1 > >>

回到顶部

执行限定条件

欢迎您,

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

在线全文

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：

通借通还

欢迎您,

建议与咨询 留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

在线全文

请选择保存的检索档案： 新增检索档案 确定 取消

请选择收藏分类： 新增自定义分类 确定 取消

通借通还

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：