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胎盘间充质干细胞激活mtorc1通路修复卵巢功能不全的效果及作用

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胎盘间充质干细胞激活mTORC1通路修复卵巢功能不全的效果及作用

作者：虎娜宁夏医科大学

学位级别：硕士

目的研究胎盘间充质干细胞(placental mesenchymal stem cells,PMSCs)对4-乙稀基环己稀二环氧(4-vinylcyclohexene diepoxide,VCD)诱导卵巢功能不全大鼠(premature ovarian insufficiency,POI)卵巢功能的保护作用,探讨其激活m TORC1通路的可能作用机理,为临床治疗卵巢功能不全提供一个新的思路。方法分离培养并利用流式细胞仪检测间充质干细胞标记物和成脂、成骨和成软骨细胞的诱导分化,鉴定PMSCs。模型制备:将60只SD雌性大鼠随机分为两个组:空白对照组(n=15)腹腔注射给予等量玉米油。POI模型制备组(n=45):腹腔注射VCD(80mg/kg/d),连续用药15天制备POI模型。通过观察大鼠体重、动情周期、性激素,同时各取两组大鼠卵巢做石蜡切片,HE染色观察卵巢组织形态,判断POI模型制备是否成功。根据动情周期、眼眶取血测血清性激素水平,剔除模型不成功的大鼠,然后将剩余大鼠(n=40)随机分组分为Normal组、POI+Saline组、POI+E2+P组、POI+PMSCs组等4组,每组10只。(1)Normal组;等量的溶于生理盐水的羧甲基纤维素钠灌胃;(2)POI+Saline组:等量的溶于生理盐水的羧甲基纤维素钠灌胃;(3)POI+E2+P组:以芬吗通,Femoston(雌二醇(Estradiol,E)0.3 mg/kg/d连续灌胃14天,后地屈孕酮(Progesterone,P)3 mg/kg/d灌胃14天),共灌胃28天;(4)POI+PMSCs组:尾静脉注入PMSCs液1m L(细胞数为1×10个),分别在首日和第7天各注射1次。使用Qdot?655 nm纳米晶体红色荧光标记HPMSs,通过活体成像追踪PMSCs移植后在大鼠及卵巢组织内分布。28天后,HE染色,观察卵巢形态,Western blot检测大鼠卵巢组织PI3K、AKT、p-AKT、m TORC1、p-m TORC1、NF-κB p65、TNF-α、IL-1β、TGF-βI、α-SMA、VEGF和CD34蛋白的表达水平;免疫组织化学染色法检测大鼠卵巢组织上述相关蛋白的定位。剩下的大鼠,与雄性大鼠合笼(雌雄2:1)评估其生殖能力。结果1.模型构建及评价:与空白对照组相比,POI模型制备组大鼠体重明显下降,动情周期紊乱,血清激素水平有显著性差异;HE结果显示,POI模型制备组大鼠卵巢组织略萎缩,各级卵泡减少,颗粒层减少。***对POI模型大鼠卵巢功能治疗效果:(1)使用Qdot?655 nm纳米晶体红色荧光标记PMSCs,PMSCs移植组大鼠卵巢中可见明显的亮斑及PMSCs分布。(2)与POI+Saline组比较,POI+PMSCs开始出现正常动情周期。(3)POI+PMSCs组血清中FSH、LH低于POI+Saline组(P17β-E2和17α-OHP高于POI+Saline组(P1和AKT蛋白表达,与POI+Saline组相比,POI+PMSCs组PI3K、p-m TORC1/m TORC1和p-AKT/AKT蛋白表达量明显升高(P1)。(8)NF-κB p65、IL-1β和TNF-α蛋白广泛存在于卵母细胞、颗粒细胞和黄体细胞中,POI+Saline组免疫组化阳性细胞数明显高于其余三组。与POI+Saline组相比,POI+PMSCs的NF-κB p65、IL-1β和TNF-α蛋白表达量低于于POI+Saline组(P10)干预28天后,将大鼠与性成熟、有生育能力的雄鼠合笼,使其自然受孕,结果提示PMSCs治疗后能够改善POI大鼠产仔率。结论1.腹腔注射VCD可导致POI模型,操作简单,符合POI病理情况。2.卵巢组织间质内发现红色荧光标记的h PMSCs,说明h PMSCs可随循环系统到达卵巢发挥作用。***移植可以恢复POI造成的卵巢形态学损伤,改善激素水平。***移植可以通过激活m TORC1通路,改变血管新生、抗炎、抗纤维化作用相关蛋白表达,进而改善P

关键词：卵巢功能不全胎盘间充质干细胞 mtorc1通路大鼠

mtorc1在EB病毒LMP1促进DLBCL细胞母细胞化的机制研究

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中国实验血液学杂志 2024年第1期32卷 219-224页

作者：高晶晶朱雄鹏王明泉林兴智庄燕玲林宏峻福建医科大学附属泉州第一医院输血科福建泉州362000 福建医科大学附属泉州第一医院血液内科福建泉州362000 华侨大学医学院福建泉州362000

目的:研究通过mtorc1通路EB病毒LMP1诱导弥漫大B细胞淋巴瘤(DLBCL)细胞母细胞化的可能机制。方法:采用Western blot法分析EBV+及EBV-DLBCL细胞株LMP1蛋白、CD38的表达及p70S6K磷酸化情况。构建过表达LMP1稳转株及RNAi沉默LMP1基因,用RT-... 详细信息

目的:研究通过mtorc1通路EB病毒LMP1诱导弥漫大B细胞淋巴瘤(DLBCL)细胞母细胞化的可能机制。方法:采用Western blot法分析EBV+及EBV-DLBCL细胞株LMP1蛋白、CD38的表达及p70S6K磷酸化情况。构建过表达LMP1稳转株及RNAi沉默LMP1基因,用RT-qPCR验证基因表达,并利用Western blot法检测各组细胞LMP1蛋白、CD38的表达量及较EBV-p70S6K磷酸化水平。结果:相较于EBV-DLBCL细胞,LMP1蛋白在EBV+DLBCL细胞上表达(P=0.0008),EBV+DLBCL细胞p70S6K磷酸化水平更高(P=0.0072)及CD38的表达量更高(P=0.0091)。与空载组对比,LMP1OE组的LMP1蛋白表达及CD38表达量均增高(P=0.0353;P1),且p70S6K磷酸化水平增高(P=0.0065);并验证了LMP1 mRNA表达(P1)。较si-NC组,LMP1KO组不表达LMP1蛋白(P=0.0129),且p70S6K磷酸化消失(P=0.0228);同时,CD38表达量减少,但无显著性差异(P=0.2377)。结论:LMP1通过活化mtorc1通路促进DLBCL细胞浆母细胞化。

关键词： EB病毒潜伏膜蛋1 mtorc1通路 CD38 弥漫大B细胞淋巴瘤浆母细胞化

甲基转移酶样因子3通过调控GLUT4-mtorc1轴影响食管鳞状细胞癌细胞的糖酵解及增殖

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中国肿瘤生物治疗杂志 2022年第12期29卷 1076-1086页

作者：周锡钟晓武高川力李青容程吉兵马强郭晓兰川北医学院检验系四川南充637000 川北医学院检验科四川南充637000 川北医学院转化医学研究中心四川南充637000

目的:探讨甲基转移酶样因子3(METTL3)在食管鳞状细胞癌(ESCC)组织和细胞中的表达水平及其对ESCC细胞糖酵解和增殖能力的影响和潜在的分子机制。方法:基于TCGA数据库分析METTL3在ESCC细胞中的表达及可能的富集通路。收集2021年1月至2021... 详细信息

目的:探讨甲基转移酶样因子3(METTL3)在食管鳞状细胞癌(ESCC)组织和细胞中的表达水平及其对ESCC细胞糖酵解和增殖能力的影响和潜在的分子机制。方法:基于TCGA数据库分析METTL3在ESCC细胞中的表达及可能的富集通路。收集2021年1月至2021年6月间在北川医学院附属医院外科手术切除的34例ESCC组织及相应癌旁组织,采用免疫组化法验证ESCC组织中METTL3的表达。采用CCK-8法和平板克隆形成实验检测干扰METTL3后ESCC细胞增殖能力的变化,利用比色法检测干扰METTL3后ESCC细胞总RNA中m6A的表达水平,采用甲基化RNA免疫沉淀定量PCR(MeRIP-qPCR)检测METTL3对葡萄糖转运蛋白4(GLUT4)基因mRNA的m6A修饰水平的影响,采用WB和qPCR等技术探索METTL3参与ESCC细胞糖酵解的生物学机制。结果:METTL3在ESCC组织以及细胞中均呈高表达(均P通过下调GLUT4的表达抑制葡萄糖的摄取以及乳酸的释放(均Pmtorc1通路活性并抑制ESCC细胞的增殖;在干扰METTL3的ESCC细胞同时联合运用mtorc1通路抑制剂显示有协同的抗癌作用。结论:METTL3介导的m6A修饰通过调控GLUT4-mtorc1信号轴影响ESCC细胞的糖酵解及增殖。

关键词：食管鳞状细胞癌甲基转移酶样因子3 葡萄糖转运蛋白4 糖酵解 mtorc1通路

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氨基酸调节mtorc1信号通路的研究进展

基础医学与临床 2016年第10期36卷 1446-1449页

作者：郑丽萍牛培广史道华福建省妇幼保健院药剂科福建医科大学教学医院福建福州350001

氨基酸是合成蛋白质的底物,也可作为信号分子激活哺乳动物雷帕霉素靶蛋白复合体1(mtorc1)。氨基酸调控mtorc1活性的关键步骤是将mtorc1定位于溶酶体表面,Rag GTPase、Ragulator、v-ATPase和SLC38A9等溶酶体相关蛋白及GATOR、Sestrins等... 详细信息

氨基酸是合成蛋白质的底物,也可作为信号分子激活哺乳动物雷帕霉素靶蛋白复合体1(mtorc1)。氨基酸调控mtorc1活性的关键步骤是将mtorc1定位于溶酶体表面,Rag GTPase、Ragulator、v-ATPase和SLC38A9等溶酶体相关蛋白及GATOR、Sestrins等胞质蛋白在其中发挥重要的作用。

关键词： mtorc1通路 Rag GTPase Ragulator v-ATPase SLC38A9 GATOR Sestrins

IL-6通过Stat3/mtorc1途径促进BMP9诱导MEFs细胞成骨分化作用研究

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IL-6通过Stat3/mTORC1途径促进BMP9诱导MEFs细胞成骨分化作用研究

作者：王诗雨重庆医科大学

学位级别：硕士

目的：骨形态发生蛋白9（BMP9）是BMP家族中最具有成骨分化潜能的因子之一，其作用受炎症微环境的调节。IL-6作为炎症重要的趋化因子，可能参与调节BMP9诱导的MEFs成骨分化过程。因此，本文旨在研究IL-6调控BMP9诱导MEFs成骨分化作用及... 详细信息

目的：骨形态发生蛋白9（BMP9）是BMP家族中最具有成骨分化潜能的因子之一，其作用受炎症微环境的调节。IL-6作为炎症重要的趋化因子，可能参与调节BMP9诱导的MEFs成骨分化过程。因此，本文旨在研究IL-6调控BMP9诱导MEFs成骨分化作用及机制。　　方法：课题采用实时定量PCR检测RUNX2、OPNmRNA水平，Westernblot检测RUNX2、OPN、STAT3及mTOR等蛋白表达水平;茜素红S染色检测细胞矿化水平，碱性磷酸酶染色测定ALP活性，免疫荧光染色检测mTOR蛋白水平及细胞定位;通过胎肢培养和构建颅骨缺损修复模型，采用Micro-CT、Hamp;E染色、Masson染色分析骨分成及损伤修复质量，探讨IL-6在BMP9诱导MEFs成骨分化中的作用与机制。　　结果：在地塞米松诱导的大鼠骨质疏松模型中，其血清中IL-6水平显著升高，并在多种干细胞系中能检测到IL-6基因表达。BMP9在MEFs细胞中上调IL-6表达，IL-6可增加BMP9诱导的MSCs成骨标志物水平，沉默IL-6可逆转该作用。体内实验表明，BMP9与IL-6可促进颅骨缺损修复。在分子机制上，BMP9和IL-6可协同促进STAT3/mtorc1通路中STAT3、mtorc1蛋白磷酸化及下游蛋白Raptor表达，沉默IL-6可逆转BMP9的促进作用。抑制STAT3或mtorc1降低IL-6对BMP9诱导MSCs成骨分化的促进作用。Raptor的启动子活性可能受STAT3调节。　　结论：IL-6可促进BMP9诱导MEFs成骨分化,机制可能与激活STAT3上调raptor，进而增强mtorc1的活性有关。本研究有利于进一步探索炎症因子与成骨分化之间的联系，为增强BMP9的成骨分化诱导能力提供新的潜在靶点。

关键词： MEFs细胞成骨分化白介素-6 骨形态发生蛋白9 mtorc1通路

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动物氨基酸转运与感知系统研究进展

动物营养学报 2018年第10期30卷 3810-3817页

作者：权素玉南雪梅蒋林树熊本海中国农业科学院北京畜牧兽医研究所动物营养学国家重点实验室北京100193 北京农学院奶牛营养学北京市重点实验室北京102206

氨基酸转运载体既有转运活性,又可作为感受器发挥胞外氨基酸感知功能。细胞膜上的氨基酸转运载体,尤其是转运大中性氨基酸包括亮氨酸的转运载体,能够通过胞内营养信号通路,包括调控细胞生长的哺乳动物雷帕霉素靶蛋白复合物1(mtorc1)通... 详细信息

氨基酸转运载体既有转运活性,又可作为感受器发挥胞外氨基酸感知功能。细胞膜上的氨基酸转运载体,尤其是转运大中性氨基酸包括亮氨酸的转运载体,能够通过胞内营养信号通路,包括调控细胞生长的哺乳动物雷帕霉素靶蛋白复合物1(mtorc1)通路以及被氨基酸饥饿所激活的一般性调控阻遏蛋白激酶(GCN)通路,调控细胞代谢。鉴于氨基酸转运载体的研究对动物营养学的重要性,本文对氨基酸转运载体的分类、氨基酸转运载体介导的氨基酸感知功能及氨基酸转运载体的组织特异性进行综述,以期更好的协助相关研究的发展。

关键词：氨基酸转运氨基酸感知 mtorc1通路 GCN通路

结节性硬化症并发反常性痤疮1例的临床表现及基因变异分析

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中华皮肤科杂志 2024年第12期57卷 1130-1133页

作者：张帅邵依张守民李振鲁李建国王建波河南省人民医院、郑州大学人民医院、河南大学人民医院皮肤科郑州450003

目的报道1例结节性硬化症并发反常性痤疮及其基因变异情况。方法采集结节性硬化症并发反常性痤疮患者及其弟、父母外周血,采用外显子组测序检测患者基因变异情况,Sanger测序验证,确定致病基因。结果患者皮损表现为面部血管纤维瘤、叶状... 详细信息

目的报道1例结节性硬化症并发反常性痤疮及其基因变异情况。方法采集结节性硬化症并发反常性痤疮患者及其弟、父母外周血,采用外显子组测序检测患者基因变异情况,Sanger测序验证,确定致病基因。结果患者皮损表现为面部血管纤维瘤、叶状白斑、鲨鱼皮样斑及皮肤多发粉刺、结节、脓肿、瘢痕,伴癫痫、多发肾囊肿,初步诊断为结节性硬化症并发反常性痤疮。基因检测发现,患者TSC2基因存在杂合移码变异c.3506dupC(p.A1169fs)和NCSTN基因存在杂合无义变异c.123T>G(p.Y41X),其弟及母亲NCSTN基因存在杂合无义变异c.123T>G(p.Y41X),其父亲及健康对照均未发现上述变异。在ClinVar、ExAC、1000g数据库的对照人群中未检索到上述变异。结论TSC2基因变异c.3506dupC与NCSTN基因变异c.123T>G可能是该患者特殊临床表现的致病原因,并可能通过mtorc1通路导致反常性痤疮表型加重。

关键词：结节性硬化症化脓性汗腺炎 TSC2基因 NCSTN基因 mtorc1通路

腺苷酸核糖基化因子1对奶牛乳腺上皮细胞增殖与泌乳的影响

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中国乳品工业 2017年第7期45卷 18-22,26页

作者：穆莹郑冰张宏伟徐渐东北农业大学食品学院哈尔滨150030 顺德出入境检验检疫局广东佛山528000

以奶牛乳腺上皮细胞为模型,研究了腺苷酸核糖基化因子1(ARF1)对细胞泌乳及增殖的影响。对细胞分别进行ARF1过表达与抑制、mTOR抑制及mTOR抑制后ARF1过表达处理,用MTT法检测细胞增殖,试剂盒检测乳糖和乳脂分泌,蛋白质免疫印迹检测β-酪蛋... 详细信息

以奶牛乳腺上皮细胞为模型,研究了腺苷酸核糖基化因子1(ARF1)对细胞泌乳及增殖的影响。对细胞分别进行ARF1过表达与抑制、mTOR抑制及mTOR抑制后ARF1过表达处理,用MTT法检测细胞增殖,试剂盒检测乳糖和乳脂分泌,蛋白质免疫印迹检测β-酪蛋白(CSN2)及ARF1,mTOR,p-mTOR,Cyclin D1,SREBP1的表达。结果表明:ARF1过表达或抑制后,细胞增殖与泌乳及p-mTOR,Cyclin D1,SREBP1的表达均显著增加或降低;mTOR表达变化不显著。mTOR抑制后,细胞增殖与泌乳及p-mTOR、Cyclin D1、SREBP1的表达均显著降低,ARF1表达变化不显著;并且,在mTOR被抑制的细胞中,过表达ARF1,不能使细胞的细胞增殖与泌乳及p-mTOR,Cyclin D1,SREBP1的表达恢复。实验说明,ARF1是奶牛乳腺上皮细胞中细胞增殖和泌乳的正向调控因子,它通过mtorc1通路调控细胞增殖和泌乳。

关键词：腺苷酸核糖基化因子1 奶牛乳腺上皮细胞细胞增殖泌乳 mtorc1通路

罗伊氏乳杆菌LR1对断奶仔猪生长性能、肠道屏障功能和氨基酸转运的影响

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罗伊氏乳杆菌LR1对断奶仔猪生长性能、肠道屏障功能和氨基酸转运...

作者：杨广达华南农业大学

学位级别：硕士

本论文旨在研究一株新的罗伊氏乳杆菌菌株(Lactobacillus reuteri LR1)对断奶仔猪生长性能、肠道形态、肠道屏障功能以及氨基酸转运的影响。试验分成3个部分:第一部分:旨在研究罗伊氏乳杆菌LR1对断奶仔猪生长性能的影响。选取144头21日... 详细信息

本论文旨在研究一株新的罗伊氏乳杆菌菌株(Lactobacillus reuteri LR1)对断奶仔猪生长性能、肠道形态、肠道屏障功能以及氨基酸转运的影响。试验分成3个部分:第一部分:旨在研究罗伊氏乳杆菌LR1对断奶仔猪生长性能的影响。选取144头21日龄杜洛克×长白×大白三元杂交断奶仔猪(初始体重为6.49±0.02 kg),随机分配至三个处理组:对照组(CON),饲喂基础饲粮;抗生素组(OA),饲喂基础饲粮+100mg/kg喹乙醇+75 mg/kg金霉素;罗伊氏乳杆菌组(LR1),饲喂基础饲粮+5×10 cfu/kg罗伊氏乳杆菌LR1,每组8个重复,每个重复6头仔猪,试验期14天。分别计算各阶段猪的日增重(ADG)、采食量(ADFI)和料重比(F:G)。结果显示:试验第14天,与对照组相比,添加罗伊氏乳杆菌组仔猪日增重提高22.73%(P0.05),而抗生素组与罗伊氏乳杆菌组相似,日增重提高29.63%(P0.05)。第二部分:试验结束时每栏随机选择1头仔猪进行屠宰取样,以研究罗伊氏乳杆菌LR1对仔猪肠道形态、免疫反应和肠道屏障功能的影响。结果显示:1)与对照组相比,罗伊氏乳杆菌LR1显著提高了回肠绒毛高度(Pmtorc1信号通路的影响。结果显示:1)添加罗伊氏乳杆菌LR1和抗生素对仔猪血清、空肠和回肠黏膜游离必需氨基酸浓度没有影响(P>0.05),但与对照组相比,罗伊氏乳杆菌可以显著降低血清3-甲基组氨酸和空肠黏膜尿素浓度(P<0.05)。2)与对照组相比,罗伊氏乳杆菌LR1显著提高十二指肠黏膜氨基酸转运载体ATB、CAT1、xCT、SNAT2和SLC38A9的mRNA表达(P<0.05),提高了空肠黏膜ASCT2、4F2hc、ATB、bAT、xCT和SLC38A9的mRNA表达(P<0.05),提高了回肠黏膜rBAT、BAT1、IMINO和SLC38A9的mRNA表达(P<0.05);而抗生素提高了十二指肠黏膜bAT、空肠黏膜ASCT2、rBAT、CAT1、CAT2以及回肠黏膜CAT1、CAT2和SLC38A9的mRNA表达(P<0.05)。3)与对照组相比,罗伊氏乳杆菌LR1显著提高了空肠黏膜Akt、p-S6以及回肠黏膜p-mTOR、Akt、p70S6K和p-S6的蛋白表达量(P<0.05);添加抗生素则显著提高了空肠黏膜Akt、p-Akt、4EBP1和p-4EBP1以及回肠黏膜p-mTOR、p70S6K和p-4EBP1的蛋白表达量(P<0.05)。罗伊氏乳杆菌LR1仔猪空肠黏膜p-Akt/Akt比值显著低于对照组,但p-S6/S6比值显著高于对照组(P<0.05);添加抗生素则显著提高了回肠黏膜p-4EBP1/4EBP1的比值(P<0.05)。综上所述,饲粮中添加5×10 cfu/kg罗伊氏乳杆菌LR1可改善仔猪生长性能、肠道形态和肠道屏障功能,促进肠道氨基酸转运吸收和蛋白质合成,可考虑作为有效的抗生素替代品用于养猪生产。

关键词：断奶仔猪罗伊氏乳杆菌LR1 抗生素肠道屏障功能氨基酸转运载体 mtorc1通路