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shRNA干扰mpges-1基因对K562细胞在裸鼠体内成瘤的影响

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中国实验血液学杂志 2017年第1期25卷 55-60页

作者：陈娇婷李益清尹松梅聂大年谢双锋王秀菊吴裕丹肖洁马丽萍中山大学附属孙逸仙纪念医院血液内科广东广州510120

目的:探讨抑制前列腺素E2合酶1(mpges-1)表达对人急性白血病K562细胞在裸鼠体内成瘤的影响及其可能的机制。方法:通过shRNA干扰技术下调K562细胞中mpges-1表达,实验设立了如下研究小组:①干扰组(KD),②阴性细胞(NC)非特异序列shRNA干扰... 详细信息

目的:探讨抑制前列腺素E2合酶1(mpges-1)表达对人急性白血病K562细胞在裸鼠体内成瘤的影响及其可能的机制。方法:通过shRNA干扰技术下调K562细胞中mpges-1表达,实验设立了如下研究小组:①干扰组(KD),②阴性细胞(NC)非特异序列shRNA干扰组;③未处理组(CON组);应用Western blot法检测β-catenin和cyclin D1在3组细胞中的表达;构建K562细胞人-裸鼠移植瘤模型,观察移植瘤的生长情况;应用HE染色观察各组肿瘤组织的结构;应用免疫组织化学法检测β-catenin和cyclin D1的表达水平。结果:与CON组和NC组比较,细胞体外实验结果显示KD组β-catenin和cyclin D1表达量减少(P1);HE染色显示,KD组细胞排列相对松散,间质较多,肿瘤细胞核小,细胞质较少;免疫组织化学检测显示,KD组β-catenin和cyclin D1表达量明显下降(Pmpges-1表达能显著抑制人急性白血病K562细胞在裸鼠体内成瘤,其机制可能与抑制β-catenin和cyclinD1表达相关。

关键词： mpges-1 K562细胞 BALB/C裸鼠 cyclin D1 β-catenin

mpges-1抑制剂MK886对白血病HL-60/A细胞凋亡及耐药性的影响

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中国实验血液学杂志 2012年第4期20卷 829-834页

作者：李益清尹松梅聂大年谢双锋马丽萍王秀菊吴裕丹中山大学孙逸仙纪念医院血液内科广东广州510120

为了探讨膜结合型前列腺素E2合酶1(mpges-1)抑制剂MK886对耐药白血病HL-60/A细胞诱导凋亡的作用及对其耐药性的影响,采用QT-PCR及Western blot法检测HL-60/A细胞mpges-1的表达,CCK-8法观察药物对HL-60/A细胞增殖的影响,流式细胞术检测... 详细信息

为了探讨膜结合型前列腺素E2合酶1(mpges-1)抑制剂MK886对耐药白血病HL-60/A细胞诱导凋亡的作用及对其耐药性的影响,采用QT-PCR及Western blot法检测HL-60/A细胞mpges-1的表达,CCK-8法观察药物对HL-60/A细胞增殖的影响,流式细胞术检测细胞凋亡,ELISA法检测PGE2的合成,Western blot法检测Akt、P-Akt表达,并观察低浓度(10μmol/L)MK886对HL-60/A细胞耐药性及多药耐药基因表达的影响。结果表明,HL-60/A细胞高表达mpges-1,MK886可时间、浓度依赖性地抑制HL-60/A细胞增殖,诱导其凋亡(r=-0.83,Pmpges-1表达及PGE2合成减少,P-Akt表达明显下降。低浓度MK886可下调多药耐药基因mdr-1及蛋白P170表达,增强对化疗的敏感性。结论:MK886可抑制耐药白血病HL-60/A细胞增殖,诱导其凋亡,增强其化疗敏感性,其机制与下调mpges-1/PGE2合成、抑制P-Akt蛋白及多药耐药基因表达有关。

关键词： mpges-1 HL-60/A细胞凋亡耐药

利用组织芯片研究COX-2和mpges-1在肝细胞癌中的表达及意义

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中国肿瘤临床 2007年第16期34卷 905-908页

作者：臧盛兵黄爱民高凌云刘景丰陈水平福建医科大学基础医学院病理学系福建医科大学肿瘤研究室福州市350004 福建医科大学附属第一医院肝脏外科

目的:检测COX-2和mpges-1在肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)组织中的表达,探讨其在HCC发生、发展中的意义。方法:构建含HCC、癌旁肝硬化、癌旁慢性肝炎及正常肝组织的组织芯片,应用免疫组化和图像分析技术检测COX-2和mpges-1蛋... 详细信息

目的:检测COX-2和mpges-1在肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)组织中的表达,探讨其在HCC发生、发展中的意义。方法:构建含HCC、癌旁肝硬化、癌旁慢性肝炎及正常肝组织的组织芯片,应用免疫组化和图像分析技术检测COX-2和mpges-1蛋白的相对表达量,进行半定量分析。结果:COX-2和mpges-1在HCC中表达均高于正常肝组织(P1),随着病理学分级的升高,COX-2相对表达量明显下降(P1),但mpges-1表达量逐渐增高,包膜侵犯组中mpges-1表达量高于包膜无侵犯组(P1),转移组高于无转移组(P1)。在HCC组织中,COX-2与mpges-1的表达无明显相关(r=-0.13,P>0.05)。结论:COX-2和mpges-1与HCC的发生密切相关,mpges-1可能在HCC进展期发挥重要作用,选择性抑制mpges-1有可能成为治疗HCC新的靶点。

关键词：肝细胞癌 COX-2 mpges-1 组织芯片

AH6809干预的单纯性脑震荡大鼠海马mpges-1的表达变化

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神经解剖学杂志 2016年第5期32卷 579-585页

作者：李智豪李恒希丁江波李颖南杨静辉王启阳于建云李坪昆明医科大学昆明650500 昆明医科大学人体解剖学与组织胚胎学系昆明650500 昆明医科大学法医学院昆明650500 昆明医科大学脑损伤研究室昆明650500

目的：观察单纯性脑震荡（pure cerebral concussion,PCC）致伤后大鼠海马膜结合型前列腺素E2-合酶1（membrane-associated prostaglandin E synthase-1,mpges-1）在EP2受体抑制剂（AH6809）干预后的表达变化,探讨AH6809对mpges-1的干预调控作用。方法：采用金属单摆闭合式脑损伤打击装置制备PCC模型,分别于致伤后即刻和12 h腹腔注射AH6809,然后随机分为1、2、3 d和7 d组（n=5）,另设相应生理盐水对照组（n=5）。采用免疫组织化学染色和Western Blot方法,观察PCC＋AH6809组和生理盐水对照组大鼠海马（CA1~4和上、下齿状回）内m PGES-1的表达情况。结果：免疫组化实验结果显示：在AH6809干预前后均可观察到mpges-1阳性产物表达于海马CA1~4和上、下齿状回的神经元胞体,呈圆形或卵圆形,胞核不着色,胞浆为棕黄色。与生理盐水对照组相比,AH6809干预后2 d组均出现mpges-1阳性表达相对减弱,染色渐浅且细胞轮廓不清,3 d组下调最为明显,其中3 d组和7 d组的差异具有显著性（P〈0.05）。Western Blot实验结果显示：mpges-1蛋白出现相似的规律性变化,下降的低峰出现在7 d组,其中2、3、7 d组与对照组相比差异具有显著性（P〈0.05）。结论：AH6809对PCC大鼠海马mpges-1的表达具有一定的干预抑制作用。

关键词：单纯性脑震荡 AH6809 mpges-1 海马大鼠

RNA干扰mpges-1基因对K562/A细胞增殖及凋亡的影响

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中山大学学报（医学科学版） 2020年第2期41卷 233-242页

作者：邱梦聂大年谢双锋肖洁吴裕丹王秀菊杨文娟李益清中山大学孙逸仙纪念医院血液内科//广东省恶性肿瘤表观遗传学和基因调控重点实验室广东广州510120

[目的]探讨RNA干扰膜结合型前列腺素E2合酶1(mpges-1)对阿霉素耐药的人红白血病细胞株K562/A细胞增殖、凋亡及耐药性的影响及其可能的机制.[方法]通过RNA干扰技术抑制K562/A细胞中mpges-1表达.分组:①未处理组(K562/A),②干扰后的阴性... 详细信息

[目的]探讨RNA干扰膜结合型前列腺素E2合酶1(mpges-1)对阿霉素耐药的人红白血病细胞株K562/A细胞增殖、凋亡及耐药性的影响及其可能的机制.[方法]通过RNA干扰技术抑制K562/A细胞中mpges-1表达.分组:①未处理组(K562/A),②干扰后的阴性对照组(K562/A-NC),③干扰组(K562/A-KD),④干扰后加入外源性PGE2组(K562/A-KD+PGE2);CCK-8法检测细胞活力;流式细胞术检测细胞凋亡;ELISA法检测PGE2浓度;Western blot检测蛋白水平.[结果]RNA干扰可明显下调K562/A细胞mpges-1表达,抑制PGE2合成(P1).RNA干扰后,K562/A细胞增殖受抑,凋亡增加,对各化疗药物敏感性均有不同程度的增强(P1的表达量减少(P1).外源性PGE2可逆转RNA干扰对K562/A增殖、凋亡水平、药物敏感性的影响(P1的表达上调(P1);β-catenin抑制剂XAV939可浓度依赖性抑制β-catenin、MDR1蛋白的表达(Pmpges-1基因可抑制K562/A细胞增殖、诱导细胞凋亡、增强细胞对化疗的敏感性,其机制与减少PGE2的合成进而下调β-catenin、MDR1的表达有关.Wnt/β-catenin通路可能参与了mpges-1/PGE2对MDR1的调控.

关键词： mpges-1 PGE2 白血病耐药 β-catenin

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单纯性脑震荡大鼠海马mpges-1的表达

神经解剖学杂志 2013年第6期29卷 666-670页

作者：王嘉南康丽赵龙卜吴明郝云姜加彩李旭于建云李坪昆明医科大学2010级临床医学本科生昆明650500 昆明医科大学人体解剖学与组织胚胎学系昆明650500 昆明医科大学法医学院昆明650500 昆明医科大学脑损伤研究室昆明650500

目的:观察单纯性脑震荡(pure cerebral concussion,PCC)大鼠脑内海马区膜结合型前列素E合酶1(membrane-associated prostaglandin E synthase-1,mpges-1)的表达变化,探讨mpges-1是否通过前列腺素代谢途径参与PCC的病理变化及其变化规律。方法:采用清醒状态下自制金属单摆闭合式脑损伤打击装置制备PCC模型,致伤后随机分为3 h、12 h、1 d、2 d、3 d、7 d组(n=5),另设正常对照组(n=5)。采用mpges-1多克隆抗体进行免疫组织化学法和Western blot技术,检测PCC组和正常组大鼠海马CA1-4区mpges-1的定位及定量情况。结果:正常状态下,海马CA1-4区mpges-1阳性细胞极少,轮廓不清,致伤后3 h海马各区的mpges-1表达水平开始增高,至3 d达高峰,与正常组比较有显著性差异(Pmpges-1蛋白的变化规律和免疫组化结果相似。结论:PCC损伤早期海马区出现mpges-1表达增强,提示mpges-1通过前列腺素代谢途径参与PCC致伤后的病理变化。

关键词：单纯性脑震荡海马 mpges-1 大鼠

The Expression and Significance of CyclinD2,mpges-1,Bcl2 in Diffuse Large B-cell Lymphoma

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Proceedings of Anticancer Research 2021年第2期5卷 53-56页

作者： Qiushuang Ma Peng Lin Bingjuan Zhou Yafei Zhao Ling Li Jinku Zhang Jirui Sun Department of Pathology Baoding First Central HospitalBaoding 071000Hebei provinceChina Department of Hematology Baoding First Central HospitalBaoding 071000Hebei provinceChina Department of Orthopedics Baoding First Hospital of Traditional Chinese MedicineBaoding 071000Hebei provinceChina Department of Dermatology Baoding First Central HospitalBaoding 071000Hebei provinceChina

Objective:To study the expression and significance of cell cycle proteins CyclinD2,mpges-1,Bcl2 in diffuse large B-cell lymphoma.Methods:Choose lymphoma and sexually hyper-plastic lymphoid tissues as control.Immunohistoc-hemical methods were used to detect the expression of CyclinD2,mpges-1,and Bcl2,and to compare the positive expression rates of CyclinD2,mpges-1 and Bcl2 in diffuse large B-cell lymphoma and reactive proliferative lymphoid tissues to compare their diffusion formation.B-cell lymphoma was analyzed for its clinicopathological features.Results:The positive expression rate of CyclinD2,mpges-1 and Bcl2 in diffuse large B-cell lymphoma is higher than that in reactive proliferative lymphoid tissue,and the difference between the two is statistically significant.There was no statistical difference in CyclinD2,mpges-1 and Bcl2 in diffuse large B-cell lymphoma between patients according to the age,sex,location,tissue type and degree of differentiation.Conclusion:CyclinD2,mpges-1 and Bcl2 are highly expressed in patients with diffuse large B-cell lymphoma,and can be used as reference indicators for evaluating the malignant degree and efficacy of dysplasia.

关键词： CyclinD2 mpges-1 Bcl2 Diffuse large B-cell lymphoma Clinicopathology

mpges-1和COX-2在前列腺癌中的检测以及姜黄素对其的影响

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mPGEs-1和COX-2在前列腺癌中的检测以及姜黄素对其的影响

作者：尚芳芳青岛大学

学位级别：硕士

背景前列腺素E(prostaglandin E,PGE)是体内含量最多的类花生四烯酸家族的成员,其生成随年龄的增长而逐渐增多。近年显示由AA代谢生成前列腺素的限速酶——环氧合酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)在多种肿瘤包括前列腺癌中表达增高,膜结合... 详细信息

背景前列腺素E(prostaglandin E,PGE)是体内含量最多的类花生四烯酸家族的成员,其生成随年龄的增长而逐渐增多。近年显示由AA代谢生成前列腺素的限速酶——环氧合酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)在多种肿瘤包括前列腺癌中表达增高,膜结合型前列腺素E合酶-1(membrane-associated PGEsynthase,mpges-1)是继COX-2之后PGE生成的终末酶,主要与COX-2偶联,共同参与包括炎症、肿瘤在内的多种生理及病理生理过程,mpges-1在前列腺癌中的表达和作用,国内外均未见报道。从姜黄中提取的姜黄素被肿瘤学家们认为是一种潜在的第3代抗肿瘤药,其抗肿瘤机制是多方面的,其一是通过抑制COX-2活性实现的,姜黄素是否同样会通过抑制mPGE-1的活性来抑制前列腺癌细胞的增殖还未有报道。目的探讨PGE生成途径中两个重要的诱导酶——PGE生成初始步骤中的COX-2和终末步骤中的mpges-1在前列腺癌组织中的表达,并分析这两种炎性诱导酶在前列腺癌组织中表达的相关性,并探讨姜黄素对COX-2和mpges-1的影响,为探讨前列腺素代谢途径在前列腺癌发生发展中的作用及药物治疗靶点提供理论依据。方法分别采用免疫组化法检测30例人前列腺癌、20例前列腺增生(benignprostatic hyperplasia,BPH)石蜡组织中mpges-1和COX-2蛋白的表达;用实时荧光RT-PCR法检测前列腺癌细胞PC3中mpges-1和COX-2 mRNA的表达及姜黄素对mRNA表达的影响。用细胞免疫组化法验证前列腺癌细胞中mpges-1和COX-2蛋白的表达及姜黄素对其影响。结果用SPSS统计软件,分别采用T检验、Q检验和直线相关进行统计分析。结果BPH组织中mPGE-1和COX-2呈阴性(14/20)或弱阳性(6/20);PCa组织中mPGE-1和COX-2均呈现阳性表达(30/30)。在PCa中,mPGE-1和COX-2的阳性面积表达水平与Gleason评分呈正相关(P＜0.01);mPGE-1和COX-2之间也呈正相关(P＜0.01)。实时荧光PCR检测的mRNA表达结果显示姜黄素作用的PC3细胞中COX-2的mRNA表达水平较空白对照降低(P＜0.01),mPGE-1的mRNA表达水平未见显著变化(P＞0.05)。细胞免疫组化结果显示COX-2蛋白在姜黄素处理组中阳性面积百分比明显低于未处理组,两者差异有显著性(P＜0.01);mpges-1蛋白在姜黄素处理组中阳性面积百分比与未处理组比较差异无显著性(P＞0.05)。结论mpges-1和COX-2在前列腺癌组织中均高表达,而且与前列腺癌的Gleason分级呈正相关,mpges-1和COX-2之间也呈正相关。说明mpges-1和COX-2在前列腺癌发生发展中可能起偶联作用。姜黄素具有下调前列腺癌细胞中COX-2表达的作用,无明显抑制mPGE-1的作用。

关键词：前列腺肿瘤 mpges-1 COX-2 姜黄素

HBx通过EGR1上调mpges-1表达在促肝细胞炎性反应中的作用

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HBx通过EGR1上调mPGES-1表达在促肝细胞炎性反应中的作用

作者：刘冲福建医科大学

学位级别：硕士

目的：乙肝病毒（HBV）的X基因表达产物X蛋白（HBx）在肝脏炎性进展过程中发挥多方面的功能，包括调节信号转导、细胞周期、细胞生长和凋亡，细胞的侵袭和转移等。许多肿瘤细胞在体内外均能使前列腺素类物质尤其是前列腺素E2（PGE2）合... 详细信息

目的：乙肝病毒（HBV）的X基因表达产物X蛋白（HBx）在肝脏炎性进展过程中发挥多方面的功能，包括调节信号转导、细胞周期、细胞生长和凋亡，细胞的侵袭和转移等。许多肿瘤细胞在体内外均能使前列腺素类物质尤其是前列腺素E2（PGE2）合成增加，而过度增高的PGE2具有促进肿瘤细胞增殖、迁移，以及抑制肿瘤细胞凋亡和宿主免疫功能的能力。近年来关于COX-2调节通路的研究也越来越多，COX-2特异性抑制剂的使用也越来越多，但是抑制COX-2也影响COX-2通路上其它产物的合成，如PGI2和TxA2是天然的抗凝血物，而血栓素TxA2具有血管收缩和血小板聚集作用。选择性的抑制COX-2会改变这两种介质的比率，向TxA2倾斜，导致血管疾病的发生，如突发性心肌梗塞和血栓形成。最新研究显示DMC可以通过下调mpges-1启动子活性而有效抑制mpges-1的表达，同时即使其在高浓度时也无COX酶的抑制活性，表明它是比COX-2抑制剂更好的化合物，有望开发成治疗炎症和癌症的药物，针对mpges-1的研究已成为最近几年来的热点问题。方法：Western blot和qRT-PCR检测mpges-1在表达HBx蛋白的HL7702-HBx细胞株和不表达HBx蛋白的HL7702细胞株中RNA及蛋白表达情况;构建mpges-1启动子不同长度的短截荧光报告基因及运用基因定点突变技术构建突变型mpges-1启动子荧光报告基因探寻HBx影响转录的启动子区域;凝胶迁移阻滞实验（EMSA）和染色质免疫共沉淀（ChIP）验证HBx通过EGR1影响mpges-1启动子转录活性;构建该EGR1的真核表达载体以及运用RNA干扰技术探讨该转录因子EGR1对mpges-1启动子转录的效果;ELISA法检测HBx及EGR1转录因子对于肝细胞分泌炎性因子PGE2的作用效果。结果：HL7702-HBx细胞株中mpges-1的RNA及蛋白表达明显高于HL7702(P＜0.05);HBx通过作用mpges-1启动子其实转录位点上游-177bp内的EGR1位点调控mpges-1基因的转录;上调和干扰EGR1的表达均影响mpges-1的转录和蛋白表达(P＜0.05);HBx及EGR1均可以促进HL7702细胞分泌PGE2(P＜0.05)。结论：1.HBx通过影响转录因子EGR1使得mpges-1启动子转录活性升高并促进蛋白的表达;2.上调EGR1在细胞内的表达可以促进mpges-1启动子的转录活性及蛋白表达，但上调EGR1在细胞内的表达对COX-2的转录活性及蛋白表达的影响无显著性差异;下调EGR1在细胞内的表达可以抑制mpges-1启动子的转录活性及蛋白表达，但下调EGR1在细胞内的表达对COX-2的转录活性及蛋白表达的影响无显著性差异3.HBx及EGR1均可以上调HL7702细胞株分泌PGE2。

关键词： HBx mpges-1 EGR1 PGE2 promoter