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畅脉乐胶囊对MCAO大鼠脑组织保护作用研究及mglur1、GABA_(B)蛋白表达的影响

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福建医药杂志 2022年第5期44卷 124-127,F0004页

作者：翁一玲苏艺萍李煌陈松旺福建中医药大学附属第二人民医院药学部福州350001 福建中医药大学药学院福建省药品审核查验中心

目的探讨畅脉乐胶囊对脑缺血再灌注损伤(MCAO)大鼠脑组织的保护机制.方法采用线栓法制备MCAO大鼠模型,随机分为3组,畅脉乐组采用灌胃方式给药,每日1次,连续给药7天;假手术组和模型组给予等剂量的生理盐水.采用mNSS法进行神经功能缺陷评... 详细信息

目的探讨畅脉乐胶囊对脑缺血再灌注损伤(MCAO)大鼠脑组织的保护机制.方法采用线栓法制备MCAO大鼠模型,随机分为3组,畅脉乐组采用灌胃方式给药,每日1次,连续给药7天;假手术组和模型组给予等剂量的生理盐水.采用mNSS法进行神经功能缺陷评分;TTC染色计算梗死面积和HE染色观察脑损伤情况;采用Real-Time PCR法和Western blot法检测mglur1和GABA_(B) mRNA蛋白表达情况.结果与模型组相比,畅脉乐组神经功能缺损程度评分显著降低,梗死面积显著减少(Pmglur1mRNA和蛋白表达水平明显降低,GABA_(B) mRNA和蛋白表达水平明显升高(Pmglur1和GABA_(B)蛋白水平.

关键词：畅脉乐胶囊脑缺血 mglur1 GABA_(B)

mglur1在单眼形觉剥夺弱视大鼠视皮质17区的表达及神经元超微结构观察

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mGluR1在单眼形觉剥夺弱视大鼠视皮质17区的表达及神经元超微结构...

作者：王宗青新乡医学院

学位级别：硕士

目的研究视觉形成关键期内单眼形觉剥夺弱视大鼠视皮质17区中mglur1的表达规律及神经元超微结构变化,为临床上揭示弱视的病理机制及防治提供理论依据。方法建立大鼠单眼形觉剥夺弱视模型,经图形视觉诱发电位（PVEP）检测证实... 详细信息

目的研究视觉形成关键期内单眼形觉剥夺弱视大鼠视皮质17区中mglur1的表达规律及神经元超微结构变化,为临床上揭示弱视的病理机制及防治提供理论依据。方法建立大鼠单眼形觉剥夺弱视模型,经图形视觉诱发电位（PVEP）检测证实造模成功后,与正常对照组大鼠一起灌注、固定、取材,所得标本分为弱视眼对侧大脑组（EG）、弱视眼同侧大脑组（CG）和正常对照大脑组（NG）。三组分别做石蜡切片,脱蜡后进行尼氏染色,分组对比并定位分层,然后做免疫组织化学染色和电镜观察,摄像显微镜分层照相,计算机图像分析系统进行图像分析,SPSS11.5统计软件进行方差分析。结果①PVEP检测结果:经PVEP检测后可见,与正常组大鼠眼和实验组未形觉剥夺眼PVEP相比,实验组形觉剥夺眼PVEP的P波潜时延长、波幅降低,差异有显著性（P＜0.01）。而正常组大鼠眼PVEP和实验组未形觉剥夺眼PVEP相比,差异无显著性（P＞0.05）。大鼠单眼形觉剥夺弱视模型造模成功。②尼氏染色切片尼氏小体清晰可见,视皮质六层结构分层明显,三组间相同层次对比未见明显区别。③免疫组织化学染色结果:弱视眼对侧大脑视皮质17区Ⅳ层（EG）与正常对照大脑视皮质17区Ⅳ层（NG）和弱视眼同侧大脑视皮质17区Ⅳ层（CG）相比,mglur1阳性着色积分光度和神经元数密度减少,差异有显著性意义（P＜0.01）。其它各层之间三组分别对比差异均无显著性。④电镜观察结果:弱视眼对侧大脑视皮质17区Ⅳ层（EG）可见部分神经元胞质轻度水肿,线粒体嵴和膜融合或消失,排列紊乱,粗面内质网脱颗粒现象明显,核膜皱缩。正常对照大脑视皮质17区Ⅳ层（NG）和弱视眼同侧大脑视皮质17区Ⅳ层（CG）神经元胞核正常,核膜完整,线粒体嵴规则,高尔基体发达,粗面内质网发达。结论①单眼形觉剥夺弱视大鼠弱视眼对侧大脑视皮质17区Ⅳ层（EG）mglur1的表达与正常相比减少。②弱视眼对侧大脑视皮质17区Ⅳ层（EG）部分神经元发生形态改变,可能与视觉神经冲动传入减少致神经元萎缩所致。③形觉剥夺致视觉神经冲动传入减少,视皮质17区Ⅳ层mglur1表达减少,突触发生塑性变化,致神经元发生萎缩可能是弱视发病机理之一。

关键词：形觉剥夺弱视 mglur1 视皮质17区突触可塑性

Activation of metabotropic glutamate receptor 1 regulates hippocampal CA1 region excitability in rats with status epilepticus by suppressing the HCN1 channel

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Neural Regeneration Research 2023年第3期18卷 594-602页

作者： Xiao-Dan Luo Tao Xiang Si-Jun Li Mei-Gang Ma Mei-Ling Chen Yuan Wu Department of Neurology First Affiliated Hospital of Guangxi Medical UniversityNanningGuangxi Zhuang Autonomous RegionChina Department of Neurology First Affiliated Hospital of University of South ChinaHengyangHunan ProvinceChina Department of Neurology Affiliated Hospital of Guilin Medical UniversityGuilinGuangxi Zhuang Autonomous RegionChina

Dysregulation of hyperpolarization-activated cyclic nucleotide-gated cation(HCN)channels alters neuronal excitability.However,the role of HCN channels in status epilepticus is not fully understood.In this study,we established rat models of pentylenetetrazole-induced status epilepticus.We performed western blot assays and immunofluorescence staining.Our results showed that HCN1 channel protein expression,particularly HCN1 surface protein,was significantly decreased in the hippocampal CA1 region,whereas the expression of HCN2 channel protein was unchanged.Moreover,metabolic glutamate receptor 1(mglur1)protein expression was increased after status epilepticus.The mglur1 agonist(RS)-3,5-dihydroxyphenylglycine injected intracerebroventricularly increased the sensitivity and severity of pentylenetetrazole-induced status epilepticus,whereas application of the mglur1 antagonist(+)-2-methyl-4-carboxyphenylglycine(LY367385)alleviated the severity of pentylenetetrazole-induced status epilepticus.The results from double immunofluorescence labeling revealed that mglur1 and HCN1 were co-localized in the CA1 region.Subsequently,a protein kinase A inhibitor(H89)administered intraperitoneally successfully reversed HCN1 channel inhibition,thereby suppressing the severity and prolonging the latency of pentylenetetrazole-induced status epilepticus.Furthermore,H89 reduced the level of mglur1,downregulated cyclic adenosine monophosphate(cAMP)/protein kinase A expression,significantly increased tetratricopeptide repeat-containing Rab8b-interacting protein(TRIP8b)(1a-4)expression,and restored TRIP8b(1b-2)levels.TRIP8b(1a-4)and TRIP8b(1b-2)are subunits of Rab8b interacting protein that regulate HCN1 surface protein.

关键词： (RS)-3,5-dihydroxyphenylglycine CA1 region excitability H89 HCN1 channel LY367385 mglur1 pentylenetetrazole status epilepticus

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mglur1在铝致神经毒性机制中的作用

mGluR1在铝致神经毒性机制中的作用

作者：吉秀亮山西医科大学

学位级别：硕士

【目的】从职业接触人群、实验动物、体外神经细胞培养三个方面出发,探讨mglur1在铝致神经毒性机制中的作用【方法】1.人群调查研究:1)从铝厂选取电解车间退休工人35名作为接触组,选取未职业接触铝的该厂退休工人32名为对照组,采用自... 详细信息

【目的】从职业接触人群、实验动物、体外神经细胞培养三个方面出发,探讨mglur1在铝致神经毒性机制中的作用【方法】1.人群调查研究:1)从铝厂选取电解车间退休工人35名作为接触组,选取未职业接触铝的该厂退休工人32名为对照组,采用自行设计的、统一的调查表,询问调查对象的一般情况:文化程度、工种、工龄、退休年数、吸烟饮酒情况、生活习惯、职业变动史、自觉症状、服药史、神经精神系统疾病史及家族史等;2)采用世界卫生组织推荐的神经行为测试组合(NCTB)和简短精神状态量表(MMSE)对退休工人进行测试;3)Western—blot检测外周血淋巴细胞mglur1蛋白的表达量。2.动物实验研究:1)健康3月龄C57BL小鼠32只,按体重随机分为4组:生理盐水、5mg/kg Al、10mg/kg Al和20mg/kg Al,腹腔注射染毒90天后,采用Morris水迷宫实验法检测小鼠学习记忆能力的改变;2)①断头处死后取各组小鼠脑组织作病理切片观察组织损伤的形态学指标;②应用Annexin V和PI双染法进行海马神经细胞凋亡率的检测;3)用Western-blot和荧光定量PCR检测小鼠脑组织mglur1的表达量。3.体外实验研究:1)选用新生1-3d的C57BL小鼠,取脑,分离大脑皮质和海马进行神经细胞培养。在细胞培养第5天左右,选取生长良好的同批次神经细胞,以铝对神经细胞染毒,分为对照组、低剂量组、中剂量组、高剂量组,使铝的终浓度分别为0mM、0.5mM、1mM、2mM。①继续培养48h后,应用Cell Counting Kit-8检测染毒后各组神经元的细胞活力;②应用Annexin V和PI双染法进行神经细胞凋亡率的检测;2)用Western-blot检测神经细胞mglur1蛋白的表达量。【结果】1.人群调查研究:1)接触组和对照组年龄、性别、工龄、学龄、吸烟、饮酒和退休年数方面均衡,差别没有统计学意义(P>0.05);2)①铝接触组的消极情感愤怒-敌意和疲惫-惰性得分较对照组增加(P0.05);数字广度包括顺序数字广度和倒序数字广度、非利手提转捷度、数字译码数和目标追踪II的正确打点数得分比对照组降低(P0.05);②MMSE总分、计算力、短时记忆和语言能力得分铝接触组低于对照组(P0.05)提示铝对电解铝退休工人的情感状态和神经行为均产生了损害;3)Western–blot结果显示铝接触组mglur1蛋白表达量高于对照组,差异有统计学意义(P1)。2.动物实验研究:1)在Morris水迷宫实验中:①定位航行实验:各组平均潜伏期差异有统计学意义(P1),与生理盐水组相比, 5mg/kgAl、10mg/kgAl、20mg/kgAl组平均潜伏期增加,差异有统计学意义(P1)。②空间搜索实验:各组平台象限停滞时间差异有统计学意义(P1);与生理盐水组相比,10mg/kgAl、20mg/kgAl组平台象限停滞时间增加,差异有统计学意义(P1)。1)①病理组织学结果:常规HE染色,镜下可见生理盐水组小鼠神经细胞形态结构正常,排列整齐,随着铝染毒剂量增加,细胞排列逐渐变零乱,高剂量组可见细胞松解,胞浆浓缩、深染、细胞核体积变小、结构不清呈细胞核固缩,细胞周围出现环状带,有空染区,胞体变小的细胞增多;②流式细胞仪定量检测结果:各组海马细胞凋亡率差异有统计学意义(P1), 10mg/kgAl、20mg/kg Al剂量组海马细胞的凋亡率高于生理盐水组(P1);3)各组mglur1 mRNA及蛋白表达差异有统计学意义(P1, Pmglur1蛋白及mRNA表达增高(P1)。3.体外实验研究:1)①神经细胞活力试验结果:各组神经细胞活力差异有统计学意义(P1)0.5mM Al、1mM Al、2mM Al剂量组神经细胞的活力低于0mM Al组(P1);②流式细胞仪定量检测结果:各组神经细胞凋亡率差异有统计学意义(P1),1mM Al和2mM Al剂量组神经细胞的凋亡率显著高于0mM Al组(P1);2) Western–blot结果显示:各组神经细胞mglur1表达差异有统计学意义(P1),与0 mMAl组相比, 1mMAl组、2mMAl组的mglur1表达升高,差异有统计学意义(P1)。【结论】从职业接触人群、实验动物、体外神经细胞培养三个方面研究发现

关键词：铝学习记忆 mglur1 神经细胞凋亡

mglur1在单眼形觉剥夺性弱视大鼠视网膜的表达及阳性神经节细胞超微结构观察

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mGluR1在单眼形觉剥夺性弱视大鼠视网膜的表达及阳性神经节细胞超...

作者：王晓艳新乡医学院

学位级别：硕士

目的研究视觉形成关键期内单眼形觉剥夺弱视大鼠视网膜中mglur1的表达规律及神经节细胞超微结构变化,为临床上揭示弱视的病理机制及防治提供理论依据。方法随机对照取同期实验动物,建立大鼠单眼形觉剥夺弱视模型,经图形视觉诱发... 详细信息

目的研究视觉形成关键期内单眼形觉剥夺弱视大鼠视网膜中mglur1的表达规律及神经节细胞超微结构变化,为临床上揭示弱视的病理机制及防治提供理论依据。方法随机对照取同期实验动物,建立大鼠单眼形觉剥夺弱视模型,经图形视觉诱发电位（PVEP）检测证实造模成功后,与正常对照组大鼠一起灌注、固定、取材,所得标本分为实验组未形觉剥夺眼、实验组形觉剥夺眼和正常对照眼组。三组分别做石蜡切片,脱蜡后进行HE染色,免疫组织化学染色,取电镜标本进行观察,摄像显微镜分层照相,计算机图像分析系统进行图像分析,SPSS12.0统计软件进行方差分析。结果①PVEP检测结果:经PVEP检测后可见,与正常组大鼠眼和实验组未形觉剥夺眼PVEP相比,实验组形觉剥夺眼PVEP的P波潜时延长、波幅降低,差异有显著性（P＜0.01）。而正常组大鼠眼PVEP和实验组未形觉剥夺眼PVEP相比,差异无显著性（P＞0.05）。大鼠单眼形觉剥夺弱视模型造模成功。②HE结果:正常组大鼠眼和实验组未形觉剥夺眼视网膜结构清晰,神经节细胞体积较大。实验组形觉剥夺眼视网膜各层普遍变薄,尤以内核层和内网状丛最为明显,各层细胞排列稀疏,胞体变小,排列稍紊乱。节细胞数量减少。③免疫组织化学结果:实验组形觉剥夺眼视网膜与正常眼视网膜和实验组非形觉剥夺眼视网膜相比mglur1阳性着色平均光密度和平均灰度值进行统计分析,两者差异有显著性意义（p＜0.01）。正常眼视网膜和实验组非形觉剥夺眼视网膜相比mglur1阳性着色平均光密度和平均灰度值,两者差异无显著性意义（p＞0.01）。④电镜观察结果:实验组形觉剥夺眼视网膜可见神经节细胞胞质轻度水肿,线粒体嵴和膜融合或消失,排列紊乱,粗面内质网脱颗粒现象明显。突触小泡明显减少,突触区线粒体肿胀,嵴间腔扩大,嵴紊乱。正常对照组视网膜和实验组非形觉剥夺眼视网膜神经元胞核正常,核膜完整,线粒体嵴规则,高尔基体发达,粗面内质网发达。突触小泡清晰可辨,量多均匀分布。结论①.单眼形觉剥夺弱视大鼠弱视眼视网膜的病理改变説明单眼形觉剥夺的发病机制与视网膜损伤有关。②弱视眼视网膜神经元发生形态改变,可能与视觉神经冲动传入减少致视网膜神经节细胞过早凋亡有关。③形觉剥夺致神经冲动传入减少,视网膜的mglur1表达减少,突触可塑性变化,致神经元发生萎缩可能是弱视发病机理之一。④.通过对正常及弱视大鼠视网膜神经细胞的超微结构观察,证实了出生后早期不正常的视觉经历（形觉剥夺）可以导致视网膜神经节细胞发生不同程度的组织病理学损害。

关键词：形觉剥夺弱视 mglur1 视网膜突触可塑性

mglur1对染铝PC12细胞PKC和NMDAR表达的调控作用

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mGluR1对染铝PC12细胞PKC和NMDAR表达的调控作用

作者：王翡山西医科大学

学位级别：硕士

目的:探讨代谢型谷氨酸受体1(mglur1)对麦芽酚铝[Al(mal)]染毒的大鼠肾上腺髓质嗜铬瘤分化细胞株(PC12)蛋白激酶C(PKC)及N-甲基-D-天冬氨酸受体(N-methyl-D-aspartate receptor,NMDAR)表达的影响。方法:第一部分:取对数生长期PC12细胞,... 详细信息

目的:探讨代谢型谷氨酸受体1(mglur1)对麦芽酚铝[Al(mal)]染毒的大鼠肾上腺髓质嗜铬瘤分化细胞株(PC12)蛋白激酶C(PKC)及N-甲基-D-天冬氨酸受体(N-methyl-D-aspartate receptor,NMDAR)表达的影响。方法:第一部分:取对数生长期PC12细胞,分为空白对照组(正常PC12细胞)、激动剂组(100μmol/L mglur1激动剂)、抑制剂组(100μmol/L mglur1抑制剂)、麦芽酚铝染毒组(200μmol/L麦芽酚铝)、染铝+激动剂组(100μmol/L mglur1激动剂+200μmol/L麦芽酚铝)、染铝+抑制剂组(100μmol/L mglur1抑制剂+200μmol/L麦芽酚铝),染毒时间为24h。采用实时荧光定量PCR法测定各组PC12细胞中PKC及NMDAR亚基的mRNA表达水平;采用Western Blot法测定各组PC12细胞中PKC及NMDAR亚基的蛋白表达水平;采用ELISA法测定各组PC12细胞的PKC酶活性。第二部分:1.取对数生长期PC12细胞分为空白对照组、阴性转染组和3个阳性转染组,空白对照组不做任何处理,阴性转染组转染不含目的siRNA的空质粒,阳性转染组分别转染含有001-siRNA、002-siRNA、和003-siRNA的质粒,孵育24h后用RT-PCR检测各组PC12细胞mglur1 mRNA表达水平,从而筛选最佳干扰序列。2.取对数生长期PC12细胞分为空白对照组、阴性转染组和4个阳性转染组,空白对照组不做任何处理,阴性转染组转染不含目的siRNA的空质粒,阳性转染组转染含有003-siRNA的质粒,分别孵育12h、24h、36h和48h后用RT-PCR检测各组PC12细胞mglur1 mRNA表达水平,用Western Blot法检测各组PC12细胞mglur1蛋白表达水平,从而筛选最佳干扰时间。3.取对数生长期PC12细胞,分为空白对照组(正常PC12细胞)、溶剂对照组(转染试剂对照)、阴性对照组(空白质粒对照)、阳性对照组(100nmol/L mglur1-siRNA)、麦芽酚铝染毒组(200μmol/L麦芽酚铝)和染铝+siRNA组(100nmol/L mglur1-siRNA+200μmol/L麦芽酚铝),染毒时间为24h。采用实时荧光定量PCR法测定各组PC12细胞PKC及NMDAR各亚基的mRNA表达水平;采用Western Blot法测定各组PC12细胞PKC及NMDAR各亚基的蛋白表达水平;采用ELISA法测定各组PC12细胞PKC酶活性。结果:第一部分:1.mglur1激动和拮抗对染铝PC12细胞PKC表达的影响:(1)mglur1激动和拮抗对染铝PC12细胞PKC mRNA表达的影响:与空白对照组相比,麦芽酚铝染毒组、染铝+激动剂组和染铝+抑制剂组的PKC mRNA表达分别下降39%、45%和38%(均Pmglur1激动和拮抗对染铝PC12细胞PKC蛋白表达的影响:与空白对照组相比,麦芽酚铝染毒组、染铝+激动剂组和染铝+抑制剂组的PKC蛋白表达分别下降39%、48%和51%(均Pmglur1激动和拮抗对染铝PC12细胞PKC酶活性的影响:麦芽酚铝染毒组和染铝+抑制剂组的PKC酶活性低于空白对照组,差异有统计学意义(P12细胞PKC酶活性上调116%(Pmglur1激动和拮抗对染铝PC12细胞NMDAR表达的影响:(1)mglur1激动和拮抗对染铝PC12细胞NMDAR mRNA表达的影响:与空白对照组相比,麦芽酚铝染毒组和染铝+激动剂组的NMDAR1 mRNA表达分别下降了21%和32%(P1 mRNA表达上调(P1%和35%(Pmglur1激动和拮抗对染铝PC12细胞NMDAR蛋白表达的影响:与空白对照组相比,麦芽酚铝染毒组和染铝+激动剂组的NMDAR1蛋白表达均下降了31%(P1蛋白表达上调36%(P1%、39

关键词：麦芽酚铝 mglur1 PKC NMDAR 学习记忆

mglur1负向变构剂JNJ16259685对大鼠蛛网膜下腔出血神经元的保护研究

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mGluR1负向变构剂JNJ16259685对大鼠蛛网膜下腔出血神经元的保护...

作者：张程山东第一医科大学

学位级别：硕士

蛛网膜下腔出血(Subarachnoid Hemorrhage,SAH)是一种有着非常高的致死性和高致残率的出血性疾病,SAH后引起的早期脑损伤(Early barin injury,EBI)是造成不良预后的关键因素,涉及颅内压、脑血流量的自主调节异常,离子稳态及能量失衡,谷... 详细信息

蛛网膜下腔出血(Subarachnoid Hemorrhage,SAH)是一种有着非常高的致死性和高致残率的出血性疾病,SAH后引起的早期脑损伤(Early barin injury,EBI)是造成不良预后的关键因素,涉及颅内压、脑血流量的自主调节异常,离子稳态及能量失衡,谷氨酸兴奋性毒性作用、神经炎症、神经元凋亡,微循环障碍等很多方面,其具体作用和彼此之间的影响机制并不十分明确,而在这些改变中,脑水肿、血脑屏障破坏和神经元凋亡被认为是关键的病理生理改变。兴奋性毒性(Excitoxicity)是指脑内兴奋性氨基酸(主要是谷氨酸)通过作用于其受体,引起的突触后神经毒性效应。谷氨酸稳态是维持机体正常生理功能所必须,有研究表明临床SAH患者和实验SAH模型的脑脊液早期即有谷氨酸浓度增高,谷氨酸的过度释放,大量激活谷氨酸受体(如NMDAR NR 2B受体和m Glu R1受体),引起脑损伤。脑血管内皮细胞膜表面表达有活性的代谢性谷氨酸受体1(m Glu R1),m Glu R 1活化后可激活磷脂酶C(PLC),使其作用于磷脂酰肌醇二磷酸(PIP2),生成两种第二信使,一种是三磷酸肌醇(IP3+),另一种为甘油二酯(DAG),IP3+激活神经保护作用的PI3K/AKT信号通路,引起内质网库钙内Ca2离子的大量释放,影响内源谷氨酸释放并调节、易化NMDA受体的结合作用。谷氨酸过度释放引起Ca2超载,激活钙调蛋白激酶,使m Glu R1活化,加重神经兴奋性毒性,高度刺激细胞内质网库存Ca2释放,与NMDA受体通过互相补偿增强作用介导Ca2内流,级联激活凋亡通路。JNJ16259685是一种高效并非竞争性抑制作用于m Glu R 1,选择性结合谷氨酸受体所携带的氨酰基变构位点,抑制受体活性,降低谷氨酸浓度,并且能够跨越血-脑屏障。选择性结合受体变构位点的变构剂能避免配体干扰,且能区分不同亚型的受体,具有十分良好的临床应用前景。本研究拟采用JNJ16259685干预SAH后高浓度谷氨酸引起的m Glu R 1过度激活,检测和分析JNJ16259685对SAH后高浓度谷氨酸诱导的大鼠模型脑水肿、血脑屏障破坏及神经元凋亡的保护作用及作用机理,通过SAH后神经功能缺损评分、SAH grade分级、脑组织含水率及水通道蛋白AQP4的变化、血脑屏障的通透性变化、TUNEL染色、免疫荧光分析等来评价JNJ16259685的神经保护作用,探讨其在SAH后EBI阶段发挥脑损伤保护作用的机制,发现临床治疗的新靶点。研究目的:(1)采用颅内血管内穿刺法制作SAH模型,研究探讨JNJ16259685对SAH后大鼠神经功能缺损的改善情况;(2)研究JNJ16259685对大鼠EBI发生时内皮细胞m Glu R1表达变化、内皮细胞损伤、血脑屏障及脑水肿发挥作用的效应及机制;(3)研究大鼠SAH后减轻细胞凋亡及其作用机制,以及发挥神经保护作用的机理。研究方法:(1)选取SPF级雄性SD大鼠(体质量270-320 g,9-10周龄),饲养室温23-25°C,相对湿度(60-65),分笼饲养,环境通风良好,食物及水分按时摄入,昼夜节律规律。将实验动物随机分为3组:假手术组(sham group)(n=18),蛛网膜下腔出血组(SAH group),SAH组根据时相点分为2个亚组:24h和72h组:SAH+Vehicle组(n=36),SAH+JNJ16259685组(n=36)。采用颈内动脉穿刺法建立SAH实验动物模型,SAH组均行血管内穿刺法造模,假手术组导入线栓至有阻力感停止,其余手术流程均与上述方法相一致。随机分配实验动物入组,每组6只,分别进行个体化实验,根据实验动物造模具体情况及术后死亡情况进行补充。造模成功后2h给予腹腔注射DMSO或JNJ16259685(1mg/Kg)。(2)SAH后24h采用改良Garcia量表进行神经功能评分,并断头取脑进行SAH grade分级评定蛛网膜下腔出血严重程度,判断出血严重程度分级和神经功能评分分数是否相关,选取符合入组标准大鼠模型进行个体化实验。(3)造模成功后24h、72h评估SAH grade出血严重程度分级及采用Garcia量表评估大鼠神经功能缺损,干湿重法测定脑水肿,Evans blue及白蛋白-FITC法评估血脑屏障破坏程度,应用Western blot检测水通道蛋白(AQP4)及血脑屏障紧密连接蛋白(ZO-1、Occludin、Claudin-5)及凋亡相关信号分子,免疫荧光观察血脑屏障、基底皮质神经元及内皮细胞损伤情况,以进一步证实m Glu R1在EBI中的具体作用及相关机制,为临床治疗提供可靠的依据。结果1、JNJ16259685可以明显改善大鼠蛛网膜下腔出血24h、72h后SAH神经功能缺损。2、JNJ16259685可以明显改善大鼠蛛网膜下腔出血24h、72h后血脑屏障、脑水肿情况。3、JNJ162

关键词：蛛网膜下腔出血 mglur1 JNJ16259685 神经元凋亡血脑屏障脑水肿

甲基苯丙胺及HIV-Tat蛋白协同致大鼠相关脑区mglur1和mglur5表达变化的研究

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甲基苯丙胺及HIV-Tat蛋白协同致大鼠相关脑区mGluR1和mGluR5表达...

作者：汪瑞林昆明医科大学

学位级别：硕士

目的：通过研究甲基苯丙胺(MA)及HIV-Tat蛋白共同作用致大鼠前额叶皮质(PFC)、纹状体(CPu)和海马(CA)中代谢型谷氨酸受体第1亚型(mglurl)和代谢型谷氨酸受体第5亚型(mglur5)含量的变化,探讨MA与HIV-Tat蛋白的协同神经毒性机制。方法：... 详细信息

目的：通过研究甲基苯丙胺(MA)及HIV-Tat蛋白共同作用致大鼠前额叶皮质(PFC)、纹状体(CPu)和海马(CA)中代谢型谷氨酸受体第1亚型(mglurl)和代谢型谷氨酸受体第5亚型(mglur5)含量的变化,探讨MA与HIV-Tat蛋白的协同神经毒性机制。方法：将50只健康成年雄性SD大鼠,随机分成对照组20只和实验组30只：对照组又分为两个亚组：生理盐水腹腔注射组(n=10)和生理盐水纹状体内注射组(n=10);实验组又分为三个亚组：MA组(n=10)、HIV-Tat蛋白组(n=10)和MA+Tat组(n=10)。MA组大鼠给予10mg/kg的MA腹腔注射,生理盐水腹腔注射组大鼠给予同样剂量的生理盐水,每天注射两次,注射时间为8：00、20：00,连续注射四天;HIV-Tat蛋白组大鼠利用脑立体定位仪向其纹状体内注射浓度为5μg/μl的HIV-Tat蛋白,注射剂量为2μl,注射时间为1分钟,生理盐水纹状体内注射组大鼠给予同样剂量的生理盐水,以同样方法注射入其纹状体内：MA+Tat组大鼠首先建立MA中毒模型(实验方法同MA组),再利用脑立体定位仪向其纹状体内注射浓度为5μg/μlHIV-Tat蛋白,注射剂量为2μl的,注射时间为1分钟。各组大鼠分别在给完药物后的第2天和第7天处死。麻醉后用多聚甲醛灌注,取脑后固定,石蜡包埋,作冠状切面,用免疫组织化学技术对中毒大鼠前额叶皮质、纹状体及海马区中mglurl与mglur5的表达进行观察,并进行图像分析,测量其平均光密度值;与对照组比较并进行统计学分析。结果：MA组与生理盐水腹腔注射组比较,各相关脑区mglur1和mglur5的阳性表达显著增强,均存在显著差异(Pmglur1和mglur5的阳性表达有不同程度的增强,但都无统计学意义(P>0.05);MA+Tat组与生理盐水腹腔注射组、生理盐水纹状体内注射组、MA组和HIV-Tat蛋白组比较,各相关脑区mglurl和mglur5的阳性表达显著增强,均存在显著差异(Pmglur1和mglur5的表达,提示mglurl和mglur5参与了MA与HIV-Tat蛋白的协同神经毒性机制。

关键词：甲基苯丙胺 HIV-Tat蛋白 mglur1 mglur5 神经毒性

不同脑区内mglur1和mglur5甲基化对产前应激子代大鼠抑郁样行为的影响及其机制

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不同脑区内mGluR1和mGluR5甲基化对产前应激子代大鼠抑郁样行为的...

作者：林天炜西北大学

学位级别：硕士

研究背景:越来越多的流行病学调查和动物模型研究表明,产前应激(PS)可能导致抑郁症样行为的后代,并且具有性别特异性。然而,其基本机制尚未阐明。本研究旨在探讨mglur1和mglur5基因启动子区甲基化对PS诱导的子鼠抑郁样行为的影响。研究... 详细信息

研究背景:越来越多的流行病学调查和动物模型研究表明,产前应激(PS)可能导致抑郁症样行为的后代,并且具有性别特异性。然而,其基本机制尚未阐明。本研究旨在探讨mglur1和mglur5基因启动子区甲基化对PS诱导的子鼠抑郁样行为的影响。研究目的:本研究采用束缚应激模型,同时给予5-azaD(5-氮-2′脱氧胞苷,5-aza-2′-deoxy-cytidine,5-azaD,即地西他滨,DNA甲基化转移酶抑制剂),检测一月龄子代大鼠海马体和前额叶皮层mglurs(mglur1和mglur5)及启动子区DNA甲基化的变化,和雌雄子代大鼠之间差异来探讨表观遗传在产前应激对子代抑郁行为影响中的作用机制,为以后的理论研究提供实验依据和理论基础。研究方法:本实验采用成年Sprague-Dawley大鼠(雌性180-230g,雄性230-280g),按雌雄3:1于每晚20:00合笼,第二日早上8:00对交配雌鼠进行阴道涂片检测,在阴道检测到精子反应后将其放入单笼喂养。将怀孕的母代随机分成两组:对照组与产前应激组,在孕晚期即临产前七天举行束缚应激。子鼠产出后第21天母子分离并且依性别分笼。子鼠分组如下;对照组(Control,CON)、产前应激组(Prenatal stress,PS)、产前应激+5-azaD组(PS-5-azaD)产前应激+生理盐水组(PS-Saline),行为学前三天,每天3D立体脑定位对PS子鼠注射等量的5-azaD或Saline。子代大鼠生长到第30天进行行为学测验,采用糖水偏好和强迫游泳检测抑郁样行为,旷场实验检测子代焦虑样行为。运用实时定量PCR方法检测子代大鼠海马体和前额叶皮质mglur1和mglur5的mRNA的表达;采取western-blotting的方式检测子代大鼠海马体和前额叶皮质mglur1和mglur5的蛋白表达;采用BSP方法检测子代大鼠海马体和前额叶皮质mglur1和mglur5的DNA甲基化程度。研究结果:(1)产前应激子代大鼠的抑郁样行为水平较对照组显著升高,而给予5-azaD的产前应激的子代大鼠抑郁样行为水平较应激组显著降低,雌雄子代无明显差异。(2)产前应激子代大鼠的海马和前额叶皮层的mglur1和mglur5的mRNA和蛋白表达显著高于对照组,雌雄子代之间有性别差异(pmglur1和mglur5启动子区甲基化修饰升高而引起的。而5-azaD的抗抑郁效应伴随着mglur1和mglur5的mRNA表达和蛋白表达的减少和启动子区DNA甲基化的降低,进一步说明了DNA甲基化修饰可能是参与抑郁症发病的重要表观遗传学组成部分。

关键词：产前应激甲基化抑郁海马 mglur1 mglur5