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lpa-mir-nov-66通过调控cAMP路径抑制α-MSH介导的羊驼黑色素生成

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中国生物化学与分子生物学报 2015年第11期31卷 1206-1212页

作者：姬凯元石占全刘彧杨姗姗胡帅鹏张俊珍范瑞文山西农业大学动物科技学院山西太谷030801

α-黑素细胞刺激素(α-MSH)和lpa-mir-nov-66在羊驼黑色素细胞产生黑色素过程中均起重要的调控作用,但二者之间的关系尚未报道.本研究在体外培养的羊驼黑色素细胞中通过转染lpamir-nov-66和添加α-MSH处理,用实时定量PCR和Western印迹... 详细信息

α-黑素细胞刺激素(α-MSH)和lpa-mir-nov-66在羊驼黑色素细胞产生黑色素过程中均起重要的调控作用,但二者之间的关系尚未报道.本研究在体外培养的羊驼黑色素细胞中通过转染lpamir-nov-66和添加α-MSH处理,用实时定量PCR和Western印迹检测黑色素细胞内基因表达水平,ELISA法检测c AMP和cGMP的产量,RTCA实时无标记细胞功能分析黑色素细胞增殖以及紫外分光光度法检测黑色素产量,证实二者在调控羊驼黑色素细胞产生黑色素颗粒过程中的关系.结果显示,与单纯α-MSH处理相比,lpa-mir-nov-66转染结合α-MSH处理组中,小眼转录因子(MITF)和酪氨酸酶(TYR)在转录水平和翻译水平的表达均降低,而酪氨酸酶相关蛋白2(TYRP2)在转录和翻译水平的表达均升高;cGMP的产量升高,cAMP的产量下降;黑色素细胞增殖没有显著变化;黑色素细胞内黑色素产量下降.与单纯转染lpa-mir-nov-66相比,lpa-mir-nov-66转染结合α-MSH处理组中,MITF、TYR和TYRP2在转录水平和翻译水平的表达均升高;cGMP的产量下降,cAMP的产量升高;黑色素细胞增殖没有显著变化;黑色素细胞内黑色素产量升高.上述结果证明,lpa-mir-nov-66通过调控羊驼黑色素细胞中毛色形成的c AMP路径,抑制α-MSH对黑色素细胞产生黑色素的促进作用.

关键词： α-黑素细胞刺激素(α-MSH) lpa-mir-nov-66 黑色素细胞 c AMP路径

lpa-mir-nov-66拮抗IGF1促羊驼黑色素细胞黑色素生成及细胞迁移作用

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中国生物化学与分子生物学报 2016年第9期32卷 1033-1039页

作者：姬凯元胡帅鹏刘学贤刘彧杨姗姗张俊珍范瑞文董常生山西农业大学动物科技学院山西太谷030801

胰岛素样生长因子1(IGF1)能够促进细胞迁移。我们最近的研究发现,一种新发现的mirNA(lpa-mir-nov-66)可通过靶向抑制可溶性腺苷酸环化酶(soluble guanylate cyclase,s GC)抑制黑色素细胞产生黑色素。然而,当二者联合作用于黑色素细胞时... 详细信息

胰岛素样生长因子1(IGF1)能够促进细胞迁移。我们最近的研究发现,一种新发现的mirNA(lpa-mir-nov-66)可通过靶向抑制可溶性腺苷酸环化酶(soluble guanylate cyclase,s GC)抑制黑色素细胞产生黑色素。然而,当二者联合作用于黑色素细胞时,究竟如何影响黑色素细胞的黑色素产生及细胞迁移尚未见报道。本研究证明,lpa-mir-nov-66可拮抗IGF1的促黑色素细胞的黑色素生成及促细胞迁移作用。ELISA法检测结果揭示,与单纯IGF1处理比较,过表达lpa-mir-nov-66或过表达lpa-mir-nov-66联合IGF1处理可明显降低IGF1诱导羊驼黑色素细胞的c AMP生成水平。实时定量PCR和Western印迹证明,与单纯IGF1处理比较,过表达lpa-mir-nov-66或联合处理可明显降低毛色生成相关基因——MITF、TYR、和TYRP1在黑色素细胞的表达。此外,细胞增殖和细胞划痕实验显示,与单纯IGF1处理比较,过表达lpa-mir-nov-66或联合处理可显著抑制黑色素细胞的迁移。上述结果表明,lpa-mir-nov-66可以减少c AMP产生,抑制IGF1的促黑色素细胞产生黑色素的作用,并抑制IGF1对黑色素细胞增殖和迁移的促进作用。

关键词：胰岛素样生长因子1 lpa-mir-nov-66 黑色素细胞 cAMP路径

lpa-mir-nov-66在羊驼黑色素细胞中的作用研究

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Lpa-miR-nov-66在羊驼黑色素细胞中的作用研究

作者：杨姗姗山西农业大学

学位级别：硕士

microRNAs (mirNAs)在调控哺乳动物黑色素生成和毛色方面具有重要的作用,在不同毛色羊驼皮肤mirNA的表达谱分析中,发现一个新的mirNA(命名为lpa-mir-nov-66),并呈差异表达。经预测,soluble guanylate cyclase (sGC)是lpa-mir-nov-66的靶基因之一。本实验为了研究lpa-mir-nov-66与羊驼黑色素细胞产生黑色素之间的相关性,通过构建lpa-mir-nov-66表达载体,用双荧光报告载体验证了lpa-mir-nov-66的靶基因(sGC);将lpa-mir-nov-66转染羊驼黑色素细胞,应用实时荧光定量PCR、Western blotting、ELASA等方法对转染后黑色素细胞内相关基因和蛋白的表达水平进行检测,主要实验结果如下： 1实时荧光定量PCR技术检测sGC, MITF, TYR, TYRP1基因mRNA表达水平。结果显示：sGC基因在lpa-mir-nov-66转染组中的mRNA表达水平是对照组的5.83倍,MITFmRNA在转染组和对照组中的差异不显著,TYR在转染组中的mRNA表达水平是对照组的0.75倍,TYRP1在转染组中的mRNA表达水平是对照组的0.53倍(Plpa-mir-nov-66转染组sGC,MITF,TYR和TYRP1蛋白表达量分别是对照组的3.15倍,0.50倍,0.187倍,0.621倍(Plpa-mir-nov-66转染组的黑色素含量为对照组的0.70倍(Plpa-mir-nov-66转染组的cAMP含量为对照组的0.57倍,cGMP含量为对照组的2.05倍(Plpa-mir-nov-66表达载体共转染293T细胞,发现与对照组相比,报告基因的活性为对照组的0.69倍。上述结果揭示了lpa-mir-nov-66通过与靶基因sGC结合,通过参与cAMP路径,从而调控黑色素细胞内黑色素的合成,为研究lpa-mir-nov-66调控哺乳动物毛色形成的分子机制提供了有力的依据。

关键词：黑色素细胞 lpa-mir-nov-66 cAMP sGC 黑色素

黑色素细胞中过量表达lpa-mir-nov-66对TYRP2的影响

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中国兽医杂志 2017年第10期53卷 24-27页

作者：杨姗姗范瑞文焦丁兴董常生山西农业大学动物科技学院山西太谷030801 河北省清河县农业局河北清河054000

本研究旨在探讨lpa-mir-nov-66对黑色素生成相关基因TYRP2的影响。采用细胞转染技术,在羊驼黑色素细胞中过表达lpa-mir-nov-66,运用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)、实时荧光定量聚合酶链反应(quantitative real-time polymerase chain rea... 详细信息

本研究旨在探讨lpa-mir-nov-66对黑色素生成相关基因TYRP2的影响。采用细胞转染技术,在羊驼黑色素细胞中过表达lpa-mir-nov-66,运用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)、实时荧光定量聚合酶链反应(quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR)技术和免疫印迹法(western blotting)技术分别检测转染lpa-mir-nov-66后黑色素细胞内TYRP2在mRNA和蛋白水平的表达差异。RT-PCR结果显示:TYRP2的部分片段扩增,扩增片段长度为151 bp。qRT-PCR和免疫印迹(western blotting)结果显示:与对照组相比,实验组TYRP2在mRNA表达水平显著降低,降低0.44倍;蛋白表达水平也显著降低,降低0.78倍。结果表明,lpa-mir-nov-66可以影响TYRP2的表达,可能参与了动物毛色的形成过程。

关键词： mircoRNA lpa-mir-nov-66 黑色素细胞 TYRP2

α-MSH和lpa-mir-nov-66在羊驼黑色素细胞内的作用研究

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α-MSH和lpa-miR-nov-66在羊驼黑色素细胞内的作用研究

作者：姬凯元山西农业大学

学位级别：硕士

lpa-mir-nov-66是羊驼皮肤中发现的新mirNA,在黑色素生成过程中起重要的调控作用。a-MSH是一种重要的神经内分泌激素,通过调控MC1R影响皮肤黑色素的生成和分布。本实验通过在黑色素细胞内转染lpa-mir-nov-66和外源性添加一定浓度的a-MSH... 详细信息

lpa-mir-nov-66是羊驼皮肤中发现的新mirNA,在黑色素生成过程中起重要的调控作用。a-MSH是一种重要的神经内分泌激素,通过调控MC1R影响皮肤黑色素的生成和分布。本实验通过在黑色素细胞内转染lpa-mir-nov-66和外源性添加一定浓度的a-MSH,分析二者在羊驼黑色素细胞内对黑色素生成的影响,以探讨二者的相互作用。主要实验结果如下：1用实时细胞检测仪监测细胞增殖,实验35小时后,与对照组相比,各实验组表现出不同的增殖情况,但没有显著差异。2用qRT-PCR技术和Western blotting检测基因情况和和蛋白表达量,结果如下：添加a-MSH后.lpa-mir-nov-66表达量是正常羊驼黑色素细胞的0.24±0.012倍,并呈差异极显著(Plpa-mir-nov-66和a-MSH协同作用,通过调控羊驼黑色素细胞中毛色形成的cAMP路径,从而影响黑色素的产生。

关键词：黑色素细胞 lpa-mir-nov-66 cAMP α-MSH 黑色素

lpa-mir-nov-66通过调控cAMP路径抑制α-MSH介导的羊驼黑色素生成

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